CN103499658B - 一种烟草中Amadori化合物的同时测定方法 - Google Patents
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Abstract
一种烟草中Amadori化合物的同时测定方法。本发明涉及一种烟草重要成分测定方法，具体涉及利用液相色谱-串联质谱法同时测定烟草中9种Amadori化合物。其步骤包括：①样品萃取：将烟草样品粉碎，以甲醇-水溶液萃取，过滤，收集滤液；②净化：滤液中加入正己烷萃取多次，除去色素等杂质，再将甲醇-水相浓缩至干，用甲醇-水溶液定容，过有机滤膜，制得试样；③测定：采用HPLC-MS/MS进行分析，正离子电离模式，多反应监测扫描。本发明方法可以有效萃取分析烟草这种复杂体系中的Amadori化合物，并且实现此类化合物的共检出，其灵敏度高，抗干扰性强，具有推广应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种烟草重要成分测定方法，具体涉及利用液相色谱-串联质谱法同时测定烟草中9种Amadori化合物。
背景技术
氨基酸与葡萄糖形成的Amadori化合物是烟草非酶促棕色化反应的中间产物，是烟草在调制、陈化以及加工过程中形成的一种重要的非挥发性香味前体物质。相关研究表明，此类物质在烟草中含量对烟草的吸味品质有重要影响，研究考察此类物质在烟草中的分布状况，对卷烟配方、烟草加工等具有指导意义。
由于对烟草的Amadori化合物的提取和分离较为困难，是较难准确测定的烟草化学成分之一。目前烟草中Amadori化合物的分析方法主要有高效液相色谱-示差折光检测(HPLC-RID)、高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)和高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）分析法。高效液相色谱法定性不够准确，并且很难实现此类物质的共检出。
发明内容
本发明正是针对现有技术中所存在的不足之处，提供一种烟草中Amadori化合物的同时测定方法，该方法利用液相色谱-串联质谱法来同时测定烟草中9种Amadori化合物，能够完全萃取烟草中的Amadori化合物，并有效去除色素等杂质，实现此类物质的共检出。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：测定烟草中Amadori化合物的方法依次包括以下步骤。
①样品萃取：将烟草样品粉碎，以甲醇-水溶液萃取，过滤，收集滤液；
②净化：滤液中加入正己烷萃取多次，除去色素等杂质，再将甲醇-水相浓缩至干，用甲醇-水溶液定容，过有机滤膜，制得试样；
③测定：采用HPLC-MS/MS进行分析，正离子电离模式，多反应监测扫描，同时测定烟草中多种Amadori化合物，并且仪器条件如下，
液相色谱参考条件为，色谱柱﹍1.7μm，2.1mm×50mm C18柱或等效柱；流速﹍0.2～0.4mL/min；柱温﹍25～35℃；进样量﹍2～10μL；流动相为A甲醇，流动相B为体积比0.05～0.2%的甲酸溶液；
梯度洗脱条件见表1。
表1快速型高效液相色谱梯度洗脱条件
| 时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 5 | 95 |
| 4 | 50 | 50 |
| 6 | 50 | 50 |
| 6.1 | 20 | 80 |
| 8 | 20 | 80 |
| 8.1 | 5 | 95 |
| 10 | 5 | 95 |
上述步骤①中的甲醇-水溶液质量比例为50%～80%，烟草样品与溶液的固液比(g/mL)为1:20～50。
上述步骤②中全部滤液对应的正己烷用量为20～50mL，萃取2～5次。
上述步骤②中用甲醇-水溶液定容到10～50mL。
上述步骤③中所用分析仪器为质谱仪，其参考条件为，离子源﹍电喷雾离子源（ESI）；扫描方式﹍正离子扫描；检测方式﹍多反应监测（MRM）；喷雾电压﹍3200V；离子源温度﹍110℃；雾化气﹍550L/hr；气帘气﹍50L/hr；碰撞池压力﹍0.0035mbar；扫描时间﹍50ms。
各分析物的定量离子对、定性离子对以及质谱参数见表2。
表2各化合物特征离子对选择表
注：*为定量离子对
本发明的突出优点在于：能够有效萃取烟草中的Amadori化合物，并实现此类物质的共检出，高效便捷，定性准确，抗干扰能力强。
附图说明
附图为本发明方法的高效液相色谱-质谱图。
具体实施方式
本发明以下将结合实施例作进一步描述，但并不限制本发明：
实施例1
a.将烟叶样品粉碎，过40目筛，称取0.5～2g样品，置于具塞锥形瓶中，加入10～50mL甲醇-水溶液（50%～70%）萃取，过滤，收集滤液；
b.净化：滤液中加入10～30mL正己烷萃取2～5次，除去色素等杂质，再将甲醇-水相浓缩至干，用甲醇-水溶液定容到10～50mL，过0.22μm有机滤膜，制得试样；
c.测定：采用HPLC-MS/MS进行分析，正离子电离模式，多反应监测扫描，操作条件如同以上技术方案。
实施例2
a.将卷烟样品撕开，倒出烟丝并粉碎，过40目筛，称取0.5～2g样品，置于具塞锥形瓶中，加入10～50mL甲醇-水溶液（50%～70%）萃取，过滤，收集滤液；
b.净化：滤液中加入10～30mL正己烷萃取2～5次，除去色素等杂质，再将甲醇-水相浓缩至干，用甲醇-水溶液定容到10～50mL，过0.22μm有机滤膜，制得试样；
c.测定：采用HPLC-MS/MS进行分析，正离子电离模式，多反应监测扫描，操作条件如同以上技术方案。
Claims (5)
1.一种烟草中Amadori化合物的同时测定方法，其特征在于：包括以下操作步骤：
①样品萃取：将烟草样品粉碎，以甲醇-水溶液萃取，过滤，收集滤液；
②净化：滤液中加入正己烷萃取多次，除去色素杂质，再将甲醇-水相浓缩至干，用甲醇-水溶液定容，过有机滤膜，制得试样；
③测定：采用HPLC-MS/MS进行分析，正离子电离模式，多反应监测扫描，同时测定烟草中多种Amadori化合物，并且仪器条件如下，
液相色谱参考条件为，色谱柱1.7μm，2.1mm×50mm C18柱；流速0.2～0.4mL/min；柱温25～35℃；进样量2～10μL；流动相为A甲醇，流动相B为体积比0.05～0.2％的甲酸溶液；
梯度洗脱条件为，
2.根据权利要求1所述的烟草中Amadori化合物的同时测定方法，其特征在于：步骤①中的甲醇-水溶液质量比例为50％～80％，烟草样品与溶液的固液比g/mL为1:20～50。
3.根据权利要求1所述的烟草中Amadori化合物的同时测定方法，其特征在于：所述步骤②中全部滤液对应的正己烷用量为20～50mL，萃取2～5次。
4.根据权利要求1所述的烟草中Amadori化合物的同时测定方法，其特征在于：所述步骤②中用甲醇-水溶液定容到10～50mL。
5.根据权利要求1所述的烟草中Amadori化合物的同时测定方法，其特征在于：所述步骤③中HPLC-MS/MS分析采用了质谱仪，其参考条件为，离子源电喷雾离子源ESI；扫描方式正离子扫描；检测方式多反应监测MRM；喷雾电压3200V；离子源温度110℃；雾化气550L/hr；气帘气50L/hr；碰撞池压力0.0035mbar；扫描时间50ms。
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