CN102864103A - 烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料及其在重组烟叶中的应用 - Google Patents

烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料及其在重组烟叶中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料及其在重组烟叶中的应用。该植生拉乌尔菌菌株名为Raoultella planticola VP4-4,保藏号为CCTCC M 2012005,其16SrRNA序列全长1408bp,其16S rRNA序列与Raoultella planticola的相似度达到99.563%。该方法是利用该菌株,通过菌种活化、制备种子培养液、发酵培养、转化发酵液,以得到烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿提取物复合发酵浸膏。原料为卷烟产品本源烟叶、能应用于卷烟中的葫芦巴香料、来源广泛的甜椒、西红柿,有工业化使用前景。

Description

烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料及其在重组烟叶中的应用
技术领域
本发明涉及重组烟叶添加剂技术领域,具体是指一种烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料及其在重组烟叶中的应用
背景技术
重组烟叶又称再造烟叶或均质烟叶,主要由烟末、碎片、烟梗或低次烟叶加入胶粘剂和其他添加剂等组成。国内现有的造纸法薄片生产工艺将烟叶和烟梗中的水溶性物质用水萃取,经固液分离后,固体部分经制浆后再制成纸基,而液体部分则浓缩后回涂到纸基上。用该方法所得到的重组烟叶与作为原料的烟叶、烟梗化学组分差别不大,导致重组烟叶存在杂气重、刺激性大和口感不适等吸味缺陷,影响了重组烟叶在卷烟产品中的使用效果和添加量。国内通常的做法是采用加料的办法来改善部分不足之处。烟用较多的烟草、天然植物类提取物一般采用传统方法制得,即采用单体烟叶或复配的叶组为原料通过水、醇提取或分子蒸馏得到,添加后对卷烟的改善有一定局限,改善程度有限,仍有刺激性大、杂气多的缺陷。
葫芦巴(Trigonella foenum-graecum L.)为一种药食两用植物,葫芦巴籽及葫芦巴草都具有特殊的风味。食品、烟草工业中,葫芦巴籽去杂,破碎后用水蒸气蒸馏或用超临界二氧化碳抽提即得葫芦巴油。产品具有令人愉快的焦糖样烤香,微甜微苦味。常用于配制可可、咖啡、坚果、枫槭和焦糖香韵中。
甜椒(Capsicum annuum)是一种蔬菜,果肉厚而脆嫩,富含维生素C,还含有阿魏酸等物质。青果含水分93.9%左右、碳水化合物约3.8%,富含维生素C;红熟果含维生素C最高可达460毫克;它能增强人的体力,缓解因工作、生活压力造成的疲劳;含有丰富的维生素C、维生素K,可以防治坏血病,对牙龈出血、贫血、血管脆弱有辅助治疗作用;其特有的味道和所含的辣椒素有刺激唾液分泌的作用,能增进食欲,帮助消化,促进肠蠕动,防止便秘。
西红柿(Solanum lycopersicum)果实营养丰富,具特殊风味,含有丰富的胡萝卜素、维生素C、B族维生素。其中苹果酸、柠檬酸、糖类有助消化;果酸能降低胆固醇含量;番茄红素具有很强的抗氧化性;蛋白质、纤维素、烟酸、叶酸、维生素E、维生素A、核黄素、阿魏酸、多种微量元素等。
通过传统回流提取所制备的烟叶提取物浸膏,具有烟草固有特殊自然气息,香气纯正而留长,具有烟膏香,起增补烟香,增强口感提高品质的作用;葫芦巴提取物浸膏,具有焦糖样烤香;甜椒、西红柿提取物,增加甜润感、丰富烟香;但同时,也具有增加刺激性、增加残留的负面效果。
微生物在增殖过程中可产生庞大的高活性酶系,如多糖水解酶类、蛋白酶类、酯化酶类、氧化还原酶类及裂合酶类等,在酶促作用、化学作用及微生物体内复杂代谢的协同作用下,以烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合提取液为原料发生分解、降解、氧化、还原、聚合、偶联、转化等作用,形成复杂的低分子化合物,其中包括各种香味化合物,如醇类、醛类、酮类、酸类、脂类、酚类、吡喃类、吡啶类和萜烯类等,这些香气物质是烟草或用于烟草的添加剂的香气组分,对重组烟叶烟气进行特征强化、改善口感。采用微生物发酵技术生产天然烟用生物香料,天然绿色环保无害,工艺过程简单易操作,不产生有毒副产品、无污染等。
将烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿提取后通过微生物发酵技术制备能提升烟气质、丰富烟香、增加甜润感、掩盖杂气、减小刺激的天然复合发酵香料及其在重组烟叶中的应用,还未见报道。
发明内容
本发明针对目前重组烟叶存在杂气重、刺激性大、烟气薄弱和口感不适等吸味缺陷,提供了一种烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料及其在重组烟叶中的应用。本发明制成的由植生拉乌尔菌生物转化生成烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料,从而改善了重组烟叶刺激大、口感不适的吸味缺陷,能与其它烟用香精香料混合调配使用。
本发明提供一种植生拉乌尔菌,该菌株名为Raoultella planticolaVP4-4,于2012年1月11日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCC M 2012005,植生拉乌尔菌Raoultella planticola VP4-4 CCTCC M 2012005的生物学特征是:革兰氏阴性菌,能产酸、使牛奶液化并生成吲哚产生、赖氨酸脱羧酶实验呈阳性;鸟氨酸脱羧酶实验、H2S产生、明胶液化呈阴性;能以单糖,多糖、酯类和氨基酸为唯一碳源生长,
所述植生拉乌尔菌Raoultella planticola VP4-4的分子鉴定特征为:其16SrRNA序列全长1408bp,16S rRNA序列与Raoultella planticola的相似度达到99.563%。
本发明提供了一种烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料的制备方法,包括以下步骤:
1)烟叶提取液的制备:将烟叶粉碎至50~100目,再将烟末和水按质量比1∶30~50混合,回流提取1~3h后过滤,重复1~3次回流提取滤液,合并滤液,即得烟叶提取液,并灭菌备用;
2)葫芦巴提取液的制备:将葫芦巴粉与水按质量比1∶20~40混合,磁力搅拌、回流提取1~3h后过滤,重复回流提取1~3次,过滤后合并滤液,即得葫芦巴提取液,并灭菌备用;
3)西红柿、甜椒混合提取液的制备:将西红柿、甜椒切片,按质量比1∶0.5~2混合,再与水按质量比1∶20~40混合,回流提取1~3h过滤,重复1~3次回流提取滤液,合并滤液,即得西红柿、甜椒混合提取液,并灭菌备用;
4)将步骤1)、步骤2)和步骤3)中得到的烟叶提取液、葫芦巴提取液和西红柿、甜椒混合提取液按1∶0.5~1∶0.5~1的体积比进行混合,即得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿混合提取液;
5)菌种活化:将植生拉乌尔菌 Raoultella planticola VP4-4CCTCC M 2012005接种到斜面培养基上,在25~38℃,静置培养24~72h后得到活化菌种,置于冰箱中;
6)制备种子培养液:将步骤5)中所得的斜面培养物,接种到种子培养基,在25~38℃条件下,100~150r/min振荡培养24h~72h,连续转接1~3次,制得种子培养液;
7)发酵:将种子培养液按体积比10~20%接种到上述步骤4)中的灭菌的烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿混合提取液,接种后的滤液的装罐量为30~40%,pH5~8,温度30~38℃,转速150~200r/min,不避光条件下发酵3~8天,得到发酵液;
8)将发酵液和95%乙醇按体积比1∶3~6,沉淀过夜,5000~10000r/min离心10~20min,过滤后减压浓缩至相对密度为1.0859~1.1241的浸膏,即得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿提取物复合发酵浸膏。
作为优选方案,所述步骤5)中,所述斜面培养基为:麦芽糖:120mL,蔗糖:20g/L,琼脂:15g/L。
作为优选方案,所述步骤6)中,所述种子液培养基组成为:木糖醇:50g/L,黄豆饼粉:10g/L,氯化钠:5g/L。
本发明还提供了一种所得烟叶、可可提取物复合发酵香料的应用,其特征在于:所述烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料作为天然烟草添加剂加入重组烟叶中,加入重组烟叶中该天然复合发酵香料的质量比为0.1~0.3%。
微生物在增殖过程中可产生庞大的高活性酶系,如多糖水解酶类、蛋白酶类、酯化酶类、氧化还原酶类及裂合酶类等,在酶促作用、化学作用及微生物体内复杂代谢的协同作用下,以烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合提取液为原料发生分解、降解、氧化、还原、聚合、偶联、转化等作用,形成复杂的低分子化合物,其中包括各种香味化合物,如醇类、醛类、酮类、酸类、脂类、酚类、吡喃类、吡啶类和萜烯类等,这些香气物质无疑也是烟草或用于烟草的添加剂的香气组分。
本发明的优点是:
1、本发明以天然烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合提取液为碳源、氮源、以及底物,营养丰富天然,容易让微生物酶体系利用来复合发酵产香,所得天然复合发酵香料具有天然环保无害优点。
2、采用植生拉乌尔菌 Raoultella planticola VP4-4 CCTCC M2012005来发酵生产使重组烟叶提升烟气质、丰富烟香、增加焦糖样烤香、余味甜润、掩盖杂气、减小刺激的烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料,改善了重组烟叶刺激大、口感不适的吸味缺陷,能与其它烟用香精香料混合调配使用。
3、本发明方法工艺过程简单,原料为卷烟产品本源烟叶、能应用于卷烟中的葫芦巴香料、来源广泛的甜椒、西红柿,有工业化使用前景。
具体实施方式
下面列举一部分实施例对本发明的有关技术问题作进一步详细的描述,有必要在此指出以下具体实施例只是对本发明的进一步说明,不代表对本发明保护范围的限制。其他人根据本发明做出的一些非本质的修改和调整,仍属于本发明的保护范围。
实施例1
本发明的微生物植生拉乌尔菌Raoultella planticolaVP4-4 CCTCCM 2012005生物转化生产烟叶、可可提取物复合发酵香料的制备方法如下:
1)烟叶提取液的制备:将烟叶粉碎至100目,再将烟末和水按质量比1∶30混合,回流提取3h后过滤,重复1次回流提取滤液,合并滤液,即得烟叶提取液,并灭菌备用;
2)葫芦巴提取液的制备:将葫芦巴粉与水按质量比1∶40混合,磁力搅拌、回流提取3h后过滤,重复回流提取1次,过滤后合并滤液,即得葫芦巴提取液,并灭菌备用;
3)西红柿、甜椒混合提取液的制备:将西红柿、甜椒切片至1厘米长宽,按质量比1∶2混合,再与水按质量比1∶20混合,回流提取3h过滤,重复1次回流提取滤液,合并滤液,即得西红柿、甜椒混合提取液,并灭菌备用;
4)将步骤1)、步骤2)和步骤3)中得到的烟叶提取液、葫芦巴提取液和西红柿、甜椒混合提取液按1∶1∶1的体积比进行混合,即得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿混合提取液;
5)菌种活化:将植生拉乌尔菌 Raoultella planticola VP4-4CCTCC M 2012005接种到斜面培养基上,在25℃,静置培养72h后得到活化菌种,置于4℃冰箱中;
所述斜面培养基为:麦芽糖:120mL,蔗糖:20g/L,琼脂:15g/L。
6)制备种子培养液:将步骤5)中所得的斜面培养物,接种到种子培养基,在25℃条件下,100r/min振荡培养72h,连续转接3次,制得种子培养液;
所述种子液培养基组成为:木糖醇:50g/L,黄豆饼粉:10g/L,氯化钠:5g/L。
7)发酵:将种子培养液按体积比10%接种到上述步骤4)中的灭菌的烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿混合提取液,接种后的滤液的装罐量为40%,pH5,温度38℃,转速150r/min,不避光条件下发酵3天,得到发酵液;
8)将发酵液和95%乙醇按体积比1∶3,沉淀过夜,10000r/min离心10min,过滤后减压浓缩至相对密度为1.1241的浸膏,即得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿提取物复合发酵浸膏。
实施例2
本发明的微生物植生拉乌尔菌Raoultella planticolaVP4-4 CCTCCM 2012005生物转化生产烟叶、可可提取物复合发酵香料的制备方法如下:
1)烟叶提取液的制备:将烟叶粉碎至50目,再将烟末和水按质量比1:50混合,回流提取3h后过滤,重复3次回流提取滤液,合并滤液,即得烟叶提取液,并灭菌备用;
2)葫芦巴提取液的制备:将葫芦巴粉与水按质量比1∶20混合,磁力搅拌、回流提取1h后过滤,重复回流提取3次,过滤后合并滤液,即得葫芦巴提取液,并灭菌备用;
3)西红柿、甜椒混合提取液的制备:将西红柿、甜椒切片至1厘米长宽,按质量比1∶0.5混合,再与水按质量比1∶40混合,回流提取1h过滤,重复3次回流提取滤液,合并滤液,即得西红柿、甜椒混合提取液,并灭菌备用;
4)将步骤1)、步骤2)和步骤3)中得到的烟叶提取液、葫芦巴提取液和西红柿、甜椒混合提取液按1∶0.5∶0.5的体积比进行混合,即得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿混合提取液;
5)菌种活化:将植生拉乌尔菌 Raoultella planticola VP4-4CCTCC M 2012005接种到斜面培养基上,在38℃,静置培养24h后得到活化菌种,置于4℃冰箱中;
所述斜面培养基为:麦芽糖:120mL,蔗糖:20g/L,琼脂:15g/L。
6)制备种子培养液:将步骤5)中所得的斜面培养物,接种到种子培养基,在38℃条件下,150r/min振荡培养24h,连续转接1次,制得种子培养液;
所述种子液培养基组成为:木糖醇:50g/L,黄豆饼粉:10g/L,氯化钠:5g/L。
7)发酵:将种子培养液按体积比20%接种到上述步骤4)中的灭菌的烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿混合提取液,接种后的滤液的装罐量为30%,pH8,温度30℃,转速200r/min,不避光条件下发酵8天,得到发酵液;
8)将发酵液和95%乙醇按体积比1∶6,沉淀过夜,10000r/min离心20min,过滤后减压浓缩至相对密度为1.0859的浸膏,即得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿提取物复合发酵浸膏。
实施例3
本发明的微生物植生拉乌尔菌Raoultella planticolaVP4-4 CCTCCM 2012005生物转化生产烟叶、可可提取物复合发酵香料的制备方法如下:
1)烟叶提取液的制备:将烟叶粉碎至80目,再将烟末和水按质量比1:40混合,回流提取3h后过滤,重复2次回流提取滤液,合并滤液,即得烟叶提取液,并灭菌备用;
2)葫芦巴提取液的制备:将葫芦巴粉与水按质量比1∶30混合,磁力搅拌、回流提取2h后过滤,重复回流提取3次,过滤后合并滤液,即得葫芦巴提取液,并灭菌备用;
3)西红柿、甜椒混合提取液的制备:将西红柿、甜椒切片至1厘米长宽,按质量比1∶1混合,再与水按质量比1∶30混合,回流提取1h过滤,重复3次回流提取滤液,合并滤液,即得西红柿、甜椒混合提取液,并灭菌备用;
4)将步骤1)、步骤2)和步骤3)中得到的烟叶提取液、葫芦巴提取液和西红柿、甜椒混合提取液按1∶0.5∶1的体积比进行混合,即得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿混合提取液;
5)菌种活化:将植生拉乌尔菌 Raoultella planticola VP4-4CCTCC M 2012005接种到斜面培养基上,在30℃,静置培养48h后得到活化菌种,置于4℃冰箱中;
所述斜面培养基为:麦芽糖:120mL,蔗糖:20g/L,琼脂:15g/L。
6)制备种子培养液:将步骤5)中所得的斜面培养物,接种到种子培养基,在30℃条件下,120r/min振荡培养36h,连续转接2次,制得种子培养液;
所述种子液培养基组成为:木糖醇:50g/L,黄豆饼粉:10g/L,氯化钠:5g/L。
7)发酵:将种子培养液按体积比15%接种到上述步骤4)中的灭菌的烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿混合提取液,接种后的滤液的装罐量为35%,pH6,温度33℃,转速180r/min,不避光条件下发酵8天,得到发酵液;
8)将发酵液和95%乙醇按体积比1∶5,沉淀过夜,6000r/min离心20min,过滤后减压浓缩至相对密度为1.0956的浸膏,即得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿提取物复合发酵浸膏。
实施例4
本发明的微生物植生拉乌尔菌Raoultella planticola VP4-4 CCTCC M 2012005生物转化生产烟叶、可可提取物复合发酵香料的制备方法如下:
1)烟叶提取液的制备:将烟叶粉碎至50目,再将烟末和水按质量比1:30混合,回流提取3h后过滤,重复3次回流提取滤液,合并滤液,即得烟叶提取液,并灭菌备用;
2)葫芦巴提取液的制备:将葫芦巴粉与水按质量比1∶20混合,磁力搅拌、回流提取2h后过滤,重复回流提取2次,过滤后合并滤液,即得葫芦巴提取液,并灭菌备用;
3)西红柿、甜椒混合提取液的制备:将西红柿、甜椒切片至1厘米长宽,按质量比1∶2混合,再与水按质量比1∶20混合,回流提取3h过滤,重复3次回流提取滤液,合并滤液,即得西红柿、甜椒混合提取液,并灭菌备用;
4)将步骤1)、步骤2)和步骤3)中得到的烟叶提取液、葫芦巴提取液和西红柿、甜椒混合提取液按1∶0.7∶0.5的体积比进行混合,即得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿混合提取液;
5)菌种活化:将植生拉乌尔菌 Raoultella planticola VP4-4CCTCC M 2012005接种到斜面培养基上,在28℃,静置培养48h后得到活化菌种,置于4℃冰箱中;
所述斜面培养基为:麦芽糖:120mL,蔗糖:20g/L,琼脂:15g/L。
6)制备种子培养液:将步骤5)中所得的斜面培养物,接种到种子培养基,在30℃条件下,120r/min振荡培养24h,连续转接3次,制得种子培养液;
所述种子液培养基组成为:木糖醇:50g/L,黄豆饼粉:10g/L,氯化钠:5g/L。
7)发酵:将种子培养液按体积比20%接种到上述步骤4)中的灭菌的烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿混合提取液,接种后的滤液的装罐量为35%,pH5,温度30℃,转速150r/min,不避光条件下发酵4天,得到发酵液;
8)将发酵液和95%乙醇按体积比1∶4,沉淀过夜,7000r/min离心15min,过滤后减压浓缩至相对密度为1.1056的浸膏,即得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿提取物复合发酵浸膏。
实施例5
本发明的微生物植生拉乌尔菌Raoultella planticolaVP4-4 CCTCCM 2012005生物转化生产烟叶、可可提取物复合发酵香料的制备方法如下:
1)烟叶提取液的制备:将烟叶粉碎至700目,再将烟末和水按质量比1:40混合,回流提取2h后过滤,重复3次回流提取滤液,合并滤液,即得烟叶提取液,并灭菌备用;
2)葫芦巴提取液的制备:将葫芦巴粉与水按质量比1∶40混合,磁力搅拌、回流提取3h后过滤,重复回流提取3次,过滤后合并滤液,即得葫芦巴提取液,并灭菌备用;
3)西红柿、甜椒混合提取液的制备:将西红柿、甜椒切片至1厘米长宽,按质量比1∶2混合,再与水按质量比1∶30混合,回流提取3h过滤,重复3次回流提取滤液,合并滤液,即得西红柿、甜椒混合提取液,并灭菌备用;
4)将步骤1)、步骤2)和步骤3)中得到的烟叶提取液、葫芦巴提取液和西红柿、甜椒混合提取液按1∶1∶0.6的体积比进行混合,即得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿混合提取液;
5)菌种活化:将植生拉乌尔菌 Raoultella planticola VP4-4CCTCC M 2012005接种到斜面培养基上,在35℃,静置培养48h后得到活化菌种,置于4℃冰箱中;
6)制备种子培养液:将步骤5)中所得的斜面培养物,接种到种子培养基,在32℃条件下,150r/min振荡培养72h,连续转接3次,制得种子培养液;
所述种子液培养基组成为:木糖醇:50g/L,黄豆饼粉:10g/L,氯化钠:5g/L。
7)发酵:将种子培养液按体积比15%接种到上述步骤4)中的灭菌的烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿混合提取液,接种后的滤液的装罐量为30%,pH7,温度35℃,转速200r/min,不避光条件下发酵5天,得到发酵液;
8)将发酵液和95%乙醇按体积比1∶5,沉淀过夜,10000r/min离心10min,过滤后减压浓缩至相对密度为1.1139的浸膏,即得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿提取物复合发酵浸膏。
实施例6
烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料感官评吸
发明人将上述烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料按重组烟叶量0.1%、0.2%、0.3%,分别添加到重组烟叶上。将重组烟叶装入密封袋中,放置烘箱中80℃恒温30 min,至重组烟叶水分合适,卷制成烟支,放入恒温恒湿箱内22℃+1、相对湿度为60%+2%平衡48h,请专家评吸小组评吸。对照为喷加相同量由烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合提取物的重组烟叶卷制的卷烟。经专家评吸小组反复评吸,认为:本烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料,与重组烟叶量比例为0.1%、0.2%时,具有使重组烟叶烟气质提升,提升烟气质、丰富烟香、增加焦糖样烤香、余味甜润、掩盖杂气、减小刺激的优点,改善了重组烟叶刺激大、口感不适的吸味缺陷。
表1.烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料添加到重组烟叶中的感官评吸
Figure BDA0000210044041

Claims (5)

1.一种植生拉乌尔菌,该菌株名为Raoultella planticola VP4-4,保藏号为CCTCC M 2012005,植生拉乌尔菌Raoultella planticolaVP4-4 CCTCC M 2012005的生物学特征是:革兰氏阴性菌,能产酸、使牛奶液化并生成吲哚产生、赖氨酸脱羧酶实验呈阳性;鸟氨酸脱羧酶实验、H2S产生、明胶液化呈阴性;能以单糖,多糖、酯类和氨基酸为唯一碳源生长,其16SrRNA序列全长1408bp,其16S rRNA序列与Raoultella planticola的相似度达到99.563%。
2.一种烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料的制备方法,包括以下步骤:
1)烟叶提取液的制备:将烟叶粉碎至50~100目,再将烟末和水按质量比1∶30~50混合,回流提取1~3h后过滤,重复1~3次回流提取滤液,合并滤液,即得烟叶提取液,并灭菌备用;
2)葫芦巴提取液的制备:将葫芦巴粉与水按质量比1∶20~40混合,磁力搅拌、回流提取1~3h后过滤,重复回流提取1~3次,过滤后合并滤液,即得葫芦巴提取液,并灭菌备用;
3)西红柿、甜椒混合提取液的制备:将西红柿、甜椒切片,按质量比1∶0.5~2混合,再与水按质量比1∶20~40混合,回流提取1~3h过滤,重复1~3次回流提取滤液,合并滤液,即得西红柿、甜椒混合提取液,并灭菌备用;
4)将步骤1)、步骤2)和步骤3)中得到的烟叶提取液、葫芦巴提取液和西红柿、甜椒混合提取液按1∶0.5~1∶0.5~1的体积比进行混合,即得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿混合提取液;
5)菌种活化:将植生拉乌尔菌 Raoultella planticola VP4-4CCTCC M 2012005接种到斜面培养基上,在25~38℃,静置培养24~72h后得到活化菌种,置于冰箱中;
6)制备种子培养液:将步骤5)中所得的斜面培养物,接种到种子培养基,在25~38℃条件下,100~150r/min振荡培养24h~72h,连续转接1~3次,制得种子培养液;
7)发酵:将种子培养液按体积比10~20%接种到上述步骤4)中的灭菌的烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿混合提取液,接种后的滤液的装罐量为30~40%,pH5~8,温度30~38℃,转速150~200r/min,不避光条件下发酵3~8天,得到发酵液;
8)将发酵液和95%乙醇按体积比1∶3~6,沉淀过夜,5000~10000r/min离心10~20min,过滤后减压浓缩至相对密度为1.0859~1.1241的浸膏,即得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿提取物复合发酵浸膏。
3.根据权利要求2所述的一种烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料的制备方法,其特征在于:所述步骤5)中,所述斜面培养基为:麦芽糖120mL,蔗糖20g/L,琼脂15g/L。
4.根据权利要求2所述的一种烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料的制备方法,其特征在于:所述步骤6)中,所述种子液培养基组成为:木糖醇:50g/L,黄豆饼粉:10g/L,氯化钠5g/L。
5.一种根据权利要求2所得烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料的应用,其特征在于:所述烟叶、葫芦巴、甜椒、西红柿复合发酵香料作为天然烟草添加剂加入重组烟叶中,加入重组烟叶中该天然复合发酵香料的质量比为0.1~0.3%。
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