CN106520376A - 烟用葫芦巴浸膏的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种烟用葫芦巴浸膏的制备方法，该方法是使葫芦巴籽原料充分膨胀，然后即刻泄压，使原料膨化破裂；向处理后的原料中加入纯净水，浸泡后加热，回流提取，提取结束后过滤，向滤液中依次加入蜂王浆、灰树花提取液和荔枝核提取液，充分搅拌均匀，得到混合液；将混合菌液按体积比0.5～2％接种到上述混合液中，得到发酵液；向得到的发酵物加入其重量2～4倍的95％乙醇并不断搅拌，静置24～36h后过滤，对滤液减压浓缩至半流动膏状，然后向浓缩物中加入其重量5％～12％的丙二醇，混合均匀即得到的烟用葫芦巴浸膏。本发明高效快速、节能环保，不涉及有机溶剂；制得的浸膏香气逼真、得率较高，在卷烟中的应用效果非常理想。
Description
技术领域
本发明涉及一种烟用浸膏的制备方法，具体地说是一种烟用葫芦巴浸膏的制备方法。
背景技术
葫芦巴浸膏在卷烟中能抑制烟叶的辛辣刺激和掩盖杂气的作用，并能矫正吃味，增加烟香，在烟用香精香料领域受到越来越广泛的应用。从当前的文献报道可知，葫芦巴目前主要制备工艺有微波提取黄法酮类成分，酶解和酸化法提取薯蓣苷元，这些方法都在不同程度上存在着工序复杂、耗时较长，且葫芦巴浸膏得率较低，香气损失，在卷烟中的应用效果不理想。公开号为CN200610021144.0的中国发明专利公开了一种葫芦巴籽的自然酶解法，该法中葫芦巴籽吸水阶段耗时长，且自然酶解效果较差，不适合大规模生产。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术中存在的不足，提供了一种烟用葫芦巴浸膏的制备方法，该法不仅高效快速、节能环保，而且制得的浸膏香气逼真、得率较高，在卷烟中具有理想的应用效果。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种烟用葫芦巴浸膏的制备方法，包括以下步骤：
1)将葫芦巴籽原料在18～30MPa、35～80℃条件下保持5～15min，使其充分膨胀，然后即刻泄压，使原料膨化破裂；
2)向步骤1)处理后的原料中加入其重量4～7倍的纯净水，浸泡8～16h后加热至60～90℃，回流提取2～5h，提取结束后过滤，得到过滤液；向滤液中依次加入其重量2～5％的蜂王浆、1～3％的灰树花提取液和5～20％的荔枝核提取液，充分搅拌均匀，得到混合液；
3)植生拉乌尔菌菌种活化：将植生拉乌尔菌VP4-4 Raoultella planticola VP4-4 CCTCC NO:M 2012005接种到植生拉乌尔菌斜面培养基上，在25～38℃，静置培养24～72h后得到活化菌种，置于冰箱中；
4)制备植生拉乌尔菌种子培养液：将步骤3)中所得的活化菌种，接种到植生拉乌尔菌种子培养基，在25～38℃条件下，100～150r/min振荡培养24h～72h，连续转接1～3次，制得植生拉乌尔菌种子培养液；
5)食甲醇芽孢杆菌斜面培养：将食甲醇芽孢杆菌VJ4-1 Bacillusmethylotrophicus VJ4-1 CCTCC NO:M 2012004接种到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，在25～35℃、pH5～9条件下，静置培养24～72h；
6)制备食甲醇芽孢杆菌种子培养液：用步骤5)所得的斜面培养物，接种到食甲醇芽孢杆菌种子培养基，在25～35℃条件下，100～150rpm振荡培养24h～72h，连续转接1～4次，制得食甲醇芽孢杆菌种子培养液；
7)将植生拉乌尔菌种子培养液和食甲醇芽孢杆菌种子培养液按重量比1∶1～3混合，得到混合菌液；
8)发酵：将混合菌液按体积比0.5～2％接种到步骤2)所得混合液中，接种后的混合提取液的装罐量为20～40％，pH4～10，温度25～40℃，转速100～200rpm，不避光条件下发酵7～14天，得到发酵液；
9)向步骤8)得到的发酵物加入其重量2～4倍的95％乙醇并不断搅拌，静置24～36h后过滤，
10)对步骤9)得到滤液减压浓缩至半流动膏状且相对密度为1.15～1.30，然后向浓缩物中加入其重量5％～12％的丙二醇，混合均匀即得到的烟用葫芦巴浸膏。
进一步地，向滤液中依次加入其重量3～4％的蜂王浆、2～3％的灰树花提取液和8～15％的荔枝核提取液.
再进一步地，所述步骤2)中，混合提取液由60份的烟叶提取液、30份的灰树花提取液和10份的荔枝核提取液组成。
再进一步地，所述步骤3)中，所述植生拉乌尔菌斜面培养基为：麦芽汁：120mL，蔗糖：20g/L，琼脂：15g/L。
再进一步地，所述步骤4)中，所述植生拉乌尔菌种子液培养基组成为：麦芽糖：50g/L，蛋白胨：10g/L，氯化钠：5g/L。
再进一步地，所述步骤5)中，马铃薯葡萄糖斜面培养基：马铃薯浸液200mL/L，葡萄糖20g/L，琼脂13g/L；
再进一步地，所述步骤6)中，食甲醇芽孢杆菌种子液培养基组成为：麦芽糖50g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L。
上述食甲醇芽孢杆菌，该菌株名为Bacillus methylotrophicus VJ4-1，于2012年1月11日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO:M 2012004，其生物学特征是：是革兰氏阳性菌，能在10％NaCl中生长，有精氨酸双水解酶、鸟氨酸脱羧酶活性，能产酸、使牛奶液化；能以N-乙酰葡萄糖胺、甘露醇、葡萄糖、水杨素、D-蜜二糖、D-核糖、肌醇、蔗糖、麦芽糖、D-山梨醇、L-阿拉伯糖、DL-乳酸盐、L-丙氨酸糖原、L-脯氨酸组氨酸、柠檬酸盐为碳源的培养基上生长，其16S rRNA序列与Bacillus methylotrophicus的16S rRNA序列比对相似性达到100％。
上述植生拉乌尔菌，该菌株名为Raoultella planticola VP4-4，于2012年1月11日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2012005，植生拉乌尔菌Raoultella planticola VP4-4 CCTCC NO:M 2012005的生物学特征是：革兰氏阴性菌，能产酸、使牛奶液化并生成吲哚产生、赖氨酸脱羧酶实验呈阳性；鸟氨酸脱羧酶实验、H2S产生、明胶液化呈阴性；能以单糖，多糖、酯类和氨基酸为唯一碳源生长，
植生拉乌尔菌VP4-4Raoultella planticola VP4-4的分子鉴定特征为：其16SrRNA序列全长1408bp，16S rRNA序列与Raoultella planticola的相似度达到99.563％。
本发明的有益效果在于：
1、本发明高效快速、节能环保，不涉及有机溶剂；制得的浸膏香气逼真、得率较高，在卷烟中的应用效果非常理想。
2、采用食甲醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus VJ4-1 CCTCC NO：M2012004和植生拉乌尔菌Raoultella planticola共同来发酵生产协调烟气、增加奶油甜香、花香、使烟气柔和舒适、改善吸味的葫芦巴浸膏，能与其它烟用香精香料混合调配使用。
具体实施方式
为了更好地解释本发明，以下结合具体实施例进一步阐明本发明的主要内容，但本发明的内容不仅仅局限于以下实施例。
实施例1
一种烟用葫芦巴浸膏的制备方法，包括以下步骤：
1)将葫芦巴籽原料在25MPa、60℃条件下保持15min，使其充分膨胀，然后即刻泄压，使原料膨化破裂；
2)向步骤1)处理后的原料中加入其重量4倍的纯净水，浸泡16h后加热至90℃，回流提取2h，提取结束后过滤，得到过滤液；向滤液中依次加入其重量3％的蜂王浆、2％的灰树花提取液和10％的荔枝核提取液，充分搅拌均匀，得到混合液；
3)菌种活化：将植生拉乌尔菌Raoultella planticola VP4-4CCTCC NO:M2012005接种到植生拉乌尔菌斜面培养基上，在38℃，静置培养24h后得到活化菌种，置于4℃冰箱中；其中，植生拉乌尔菌斜面培养基为：麦芽汁：120mL，蔗糖：20g/L，琼脂：15g/L。
4)制备植生拉乌尔菌种子培养液：将步骤3)中所得的活化菌种，接种到植生拉乌尔菌种子培养基，在25℃条件下，100r/min振荡培养72h，连续转接3次，制得植生拉乌尔菌种子培养液；其中，植生拉乌尔菌种子液培养基组成为：麦芽糖：50g/L，蛋白胨：10g/L，氯化钠：5g/L。
5)食甲醇芽孢杆菌斜面培养：将食甲醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicusCCTCC NO:M 2012004接种到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，在30℃、pH7条件下，静置培养48h；其中，马铃薯葡萄糖斜面培养基：马铃薯浸液200mL/L，葡萄糖20g/L，琼脂13g/L；
6)制备食甲醇芽孢杆菌种子培养液：用步骤5)所得的斜面培养物，接种到食甲醇芽孢杆菌种子培养基，在30℃条件下，100rpm振荡培养48h，连续转接2次，制得食甲醇芽孢杆菌种子培养液；其中，食甲醇芽孢杆菌种子液培养基组成为：麦芽糖50g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L；
7)将植生拉乌尔菌种子培养液和食甲醇芽孢杆菌种子培养液按重量比1∶1混合，得到混合菌液；
8)发酵：将混合菌液按体积比2％接种到上述混合液中，接种后的滤液的装罐量为40％，在pH 4，温度40℃，转速100rpm，不避光条件下发酵14天；得到发酵液；
9)向步骤8)得到的发酵物加入其重量2倍的95％乙醇并不断搅拌，静置24h后过滤，
10)对步骤9)得到滤液减压浓缩至半流动膏状且相对密度为1.15～1.30，然后向浓缩物中加入其重量10％的丙二醇，混合均匀即得到的烟用葫芦巴浸膏1。
实施例2
一种烟用葫芦巴浸膏2的制备方法，包括以下步骤：
1)将葫芦巴籽原料在18MPa、80℃条件下保持12min，使其充分膨胀，然后即刻泄压，使原料膨化破裂；
2)向步骤1)处理后的原料中加入其重量6倍的纯净水，浸泡12h后加热至80℃，回流提取4h，提取结束后过滤，得到过滤液；向滤液中依次加入其重量4％的蜂王浆、3％的灰树花提取液和20％的荔枝核提取液，充分搅拌均匀，得到混合液；
3)菌种活化：将植生拉乌尔菌Raoultella planticola VP4-4 CCTCC NO:M2012005接种到植生拉乌尔菌斜面培养基上，在30℃，静置培养72h后得到活化菌种，置于4℃冰箱中；其中，植生拉乌尔菌斜面培养基为：麦芽汁：120mL，蔗糖：20g/L，琼脂：15g/L；
4)制备植生拉乌尔菌种子培养液：将步骤3)中所得的活化菌种，接种到植生拉乌尔菌种子培养基，在32℃条件下，100r/min振荡培养48h，连续转接3次，制得植生拉乌尔菌种子培养液；其中植生拉乌尔菌种子液培养基组成为：麦芽糖：50g/L，蛋白胨：10g/L，氯化钠：5g/L；
5)食甲醇芽孢杆菌斜面培养：将食甲醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicusCCTCC NO:M 2012004接种到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，在25℃、pH9条件下，静置培养24h；其中，马铃薯葡萄糖斜面培养基：马铃薯浸液200mL/L，葡萄糖20g/L，琼脂13g/L；
6)制备食甲醇芽孢杆菌种子培养液：用步骤5)所得的斜面培养物，接种到食甲醇芽孢杆菌种子培养基，在25℃条件下，100rpm振荡培养72h，连续转接4次，制得食甲醇芽孢杆菌种子培养液；其中，食甲醇芽孢杆菌种子液培养基组成为：麦芽糖50g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L；
7)将植生拉乌尔菌种子培养液和食甲醇芽孢杆菌种子培养液按重量比1∶3混合，得到混合菌液；
8)发酵：将混合菌液按体积比1％接种到上述混合液，接种后的滤液的装罐量为30％，在pH 8，温度30℃，转速150rpm，不避光条件下发酵10天，得到发酵液；
9)向步骤8)得到的发酵物加入其重量4倍的95％乙醇并不断搅拌，静置36h后过滤，
10)对步骤9)得到滤液减压浓缩至半流动膏状且相对密度为1.15～1.30，然后向浓缩物中加入其重量12％的丙二醇，混合均匀即得到的烟用葫芦巴浸膏2。
实施例3
一种烟用葫芦巴浸膏3的制备方法，包括以下步骤：
1)将葫芦巴籽原料在30MPa、50℃条件下保持5min，使其充分膨胀，然后即刻泄压，使原料膨化破裂；
2)向步骤1)处理后的原料中加入其重量7倍的纯净水，浸泡8h后加热至60℃，回流提取4.5h，提取结束后过滤，得到过滤液；向滤液中依次加入其重量5％的蜂王浆、1％的灰树花提取液和5％的荔枝核提取液，充分搅拌均匀，得到混合液；
3)菌种活化：将植生拉乌尔菌Raoultella planticola VP4-4 CCTCC NO:M2012005接种到斜面培养基上，在25℃，静置培养24h后得到活化菌种，置于冰箱中；其中，斜面培养基为：麦芽汁：120mL，蔗糖：20g/L，琼脂：15g/L。
4)制备植生拉乌尔菌种子培养液：将步骤3)中所得的活化菌种，接种到种子培养基，在25℃条件下，100r/min振荡培养72h，连续转接1次，制得植生拉乌尔菌种子培养液；其中，植生拉乌尔菌种子液培养基组成为：麦芽糖：50g/L，蛋白胨：10g/L，氯化钠：5g/L。
5)食甲醇芽孢杆菌斜面培养：将食甲醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicusCCTCC NO:M 2012004接种到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，在35℃、pH5条件下，静置培养24h；其中，马铃薯葡萄糖斜面培养基：马铃薯浸液200mL/L，葡萄糖20g/L，琼脂13g/L；
6)制备食甲醇芽孢杆菌种子培养液：用步骤5)所得的斜面培养物，接种到食甲醇芽孢杆菌种子培养基，在35℃条件下，150rpm振荡培养24h，连续转接2次，制得食甲醇芽孢杆菌种子培养液；其中，食甲醇芽孢杆菌种子液培养基组成为：麦芽糖50g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L；
7)将植生拉乌尔菌种子培养液和食甲醇芽孢杆菌种子培养液按重量比1∶2混合，得到混合菌液；
8)发酵：将种子培养液按体积比0.5％接种到上述混合液中，接种后的滤液的装罐量为40％，在pH10，温度25℃，转速200rpm，不避光条件下发酵7天；得到发酵液；
9)向步骤8)得到的发酵物加入其重量3倍的95％乙醇并不断搅拌，静置30h后过滤，
10)对步骤9)得到滤液减压浓缩至半流动膏状且相对密度为1.15～1.30，然后向浓缩物中加入其重量12％的丙二醇，混合均匀即得到的烟用葫芦巴浸膏3。
Claims (7)
1.烟用葫芦巴浸膏的制备方法，包括以下步骤：
1)将葫芦巴籽原料在18～30MPa、35～80℃条件下保持5～15min，使其充分膨胀，然后即刻泄压，使原料膨化破裂；
2)向步骤1)处理后的原料中加入其重量4～7倍的纯净水，浸泡8～16h后加热至60～90℃，回流提取2～5h，提取结束后过滤，得到过滤液；向滤液中依次加入其重量2～5％的蜂王浆、1～3％的灰树花提取液和5～20％的荔枝核提取液，充分搅拌均匀，得到混合液；
3)植生拉乌尔菌菌种活化：将植生拉乌尔菌Raoultella planticola VP4-4CCTCC M2012005接种到植生拉乌尔菌斜面培养基上，在25～38℃，静置培养24～72h后得到活化菌种，置于冰箱中；
4)制备植生拉乌尔菌种子培养液：将步骤3)中所得的活化菌种，接种到植生拉乌尔菌种子培养基，在25～38℃条件下，100～150r/min振荡培养24h～72h，连续转接1～3次，制得植生拉乌尔菌种子培养液；
5)食甲醇芽孢杆菌斜面培养：将食甲醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus CCTCCM 2012004接种到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，在25～35℃、pH5～9条件下，静置培养24～72h；
6)制备食甲醇芽孢杆菌种子培养液：用步骤5)所得的斜面培养物，接种到食甲醇芽孢杆菌种子培养基，在25～35℃条件下，100～150rpm振荡培养24h～72h，连续转接1～4次，制得食甲醇芽孢杆菌种子培养液；
7)将植生拉乌尔菌种子培养液和食甲醇芽孢杆菌种子培养液按重量比1∶1～3混合，得到混合菌液；
8)发酵：将混合菌液按体积比0.5～2％接种到步骤2)所得的混合液中，接种后的混合提取液的装罐量为20～40％，pH4～10，温度25～40℃，转速100～200rpm，不避光条件下发酵7～14天，得到发酵液；
9)向步骤8)得到的发酵物加入其重量2～4倍的95％乙醇并不断搅拌，静置24～36h后过滤，
10)对步骤9)得到滤液减压浓缩至半流动膏状且相对密度为1.15～1.30，然后向浓缩物中加入其重量5％～12％的丙二醇，混合均匀即得到的烟用葫芦巴浸膏。
2.根据权利要求1所述烟用葫芦巴浸膏的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，向滤液中依次加入其重量3～4％的蜂王浆、2～3％的灰树花提取液和8～15％的荔枝核提取液。
3.根据权利要求2所述烟用葫芦巴浸膏的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，混合提取液由60份的烟叶提取液、30份的灰树花提取液和10份的荔枝核提取液组成。
4.根据权利要求2或3所述烟用葫芦巴浸膏的制备方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述植生拉乌尔菌斜面培养基为：麦芽汁：120mL，蔗糖：20g/L，琼脂：15g/L。
5.根据权利要求2或3所述烟用葫芦巴浸膏的制备方法，其特征在于：所述步骤4)中，所述植生拉乌尔菌种子液培养基组成为：麦芽糖：50g/L，蛋白胨：10g/L，氯化钠：5g/L。
6.根据权利要求2或3所述烟用葫芦巴浸膏的制备方法，其特征在于：所述步骤5)中，马铃薯葡萄糖斜面培养基：马铃薯浸液200mL/L，葡萄糖20g/L，琼脂13g/L。
7.根据权利要求2或3所述烟用葫芦巴浸膏的制备方法，其特征在于：所述步骤6)中，食甲醇芽孢杆菌种子液培养基组成为：麦芽糖50g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L。
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