CN102863631B - 外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶及其制备方法。该凝胶是透明质酸钠碱性溶液与含环氧基的长链烷烃及含环氧基的交联剂，于35℃～50℃反应2～5小时形成交联透明质酸钠，再经洗涤、凝胶化、灭菌制得的，其中，透明质酸钠：含环氧基的交联剂：含环氧基的长链烷烃的摩尔比为10：4～1：1～4；所述含环氧基的长链烷烃的碳原子数目为6～18个。本发明的凝胶一方面可以有效提高抗酶解的能力，更加稳定，同时也能维持透明质酸钠本身优异的生物相容性，不影响可注射性。

Description

外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶及其制备方法。
背景技术
透明质酸（又名玻璃酸，以下简称HA）或者其钠盐是一种天然高分子粘多糖类物质，广泛分布于哺乳动物的结缔组织、鸡冠和链球菌的夹膜等处，由于不具有种属及脏器特异性，由透明质酸制得的透明质酸凝胶作为填充物移植或注入肌体都显示良好的肌体相容性，起到抗皱、丰乳、充垫等作用，而且对人体无副作用，因此，广泛用于医疗、美容。以HA或者其钠盐为原料制造的皮肤填充剂在美容外科整形中最受欢迎。这些用于注射的组织填充剂与胶原蛋白相似，其疗效更长久，过敏反应风险更低。但是，HA或者其钠盐在生物体内易因酶如透明质酸水解酶和自由基的作用而发生降解，因此在生物体内的滞留时间短。为了提高HA或者其钠盐在体内的滞留时间，通常采用对HA或者其钠盐进行交联，使HA或者其钠盐高分子链中的羟基基团与交联剂形成化学键合制得交联HA或者其钠盐凝胶。为了不影响凝胶的生物相容性，交联剂的使用浓度不宜过高。但当交联剂用量少时，所得凝胶衍生物抵抗体内酶解的能力低，在体内停留的时间就比较短，停留时间大约在1～6个月左右。如果交联剂用量过大时，在体内的停留时间相应延长了，但粘度较高，凝胶硬度增加，不容易通过30G乃至27G的针头，可注射性下降。此外，交联剂用量高，会使过量交联剂残留于产物中，且很难纯化清洗。这样，使得交联HA或者其钠盐凝胶的细胞毒性较大，容易对人体产生副作用。而现有HA或者其钠盐的交联反应均是在均相的碱性水溶液中只加入交联剂对HA或者其钠盐进行交联，而且均是通过提高交联度的方法来提高抗生物降解能力，延长皮肤填充剂在体内停留时间。这样，一方面会破坏交联HA或者其钠盐凝胶的生物相容性，另一方面又会使凝胶产品的粘弹性下降，硬度增加，可注射性下降。
发明内容
本发明的第一个目的是:提供一种可以有效提高抗酶解的能力，同时也能维持透明质酸钠本身优异的生物相容性的外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶。
实现本发明第一个目的的技术方案是：一种外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶，其特征在于，它是透明质酸钠碱性溶液与含环氧基的长链烷烃及含环氧基的交联剂，于35℃～50℃反应2～5小时形成交联透明质酸钠，再经洗涤、凝胶化、灭菌制得的，其中，透明质酸钠 ：含环氧基的交联剂：含环氧基的长链烷烃的摩尔比为10 ：（4～1 ）（1～4）；
所述含环氧基的长链烷烃的碳原子数目为6～18个；
所述含环氧基的交联剂为1,4-丁二醇二缩水甘油醚、分子量为500～6000的聚乙二醇二缩水甘油醚、 1，2，7，8-二环氧辛烷、 1，2，3，4-二环氧丁烷中的一种；
所述透明质酸钠碱性溶液是由透明质酸钠干粉溶解于由0.2～0.5M的氢氧化钠水溶液和二甲亚砜组成的混合溶液后形成的，其中，透明质酸钠的浓度为4wt%～8wt%；0.2～0.5M的氢氧化钠水溶液与二甲亚砜的体积比为10 ：(7～1)。
上述交联透明质酸钠凝胶的化学结构中包含化学键合的具有自黏附自聚集功能的疏水基团，该疏水基团的碳原子数目为6～18个。
本发明的第二个目的是:提供一种制备可以有效提高抗酶解的能力，同时也能维持透明质酸钠本身优异的生物相容性的外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶的方法，该方法便于操作，所得产品质量稳定。
实现本发明第二个目的的技术方案是：一种上述外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶的制备方法，其特征在于，具体制备步骤如下：
①将透明质酸钠干粉溶解于由0.2～0.5M的氢氧化钠水溶液和二甲亚砜组成的混合溶液后获得透明质酸钠碱性溶液，然后向透明质酸钠碱性溶液中加入含环氧基的长链烷烃及含环氧基的交联剂，搅拌状态下加热至35℃～50℃并保温2～5小时后， 冷却至室温，在搅拌下滴加丙酮生成白色粉末形成固－液混合物料，加入盐酸将固－液混合物料的pH值调节至6.5～7.4，滤除液体后，所得固体物料用异丙醇和丙酮分别洗涤3～5次，再真空干燥至挥发物质含量低于2ppm，所得白色干粉即为交联透明质酸钠粉末；
其中，透明质酸钠：含环氧基的交联剂：含环氧基的长链烷烃的摩尔比为10 ：（4～1） ：（1～4）；含环氧基的长链烷烃的碳原子数目为6～18个；0.2～0.5M的氢氧化钠水溶液与二甲亚砜的体积比为10 ：7～1；透明质酸钠碱性溶液中，透明质酸钠的浓度为4wt%～8wt%；氢氧化钠水溶液与滴加的丙酮的体积比为1：4～2∶3；透明质酸钠的平均分子量为50万～200万；所述含环氧基的交联剂为1,4-丁二醇二缩水甘油醚、分子量为500～6000的聚乙二醇二缩水甘油醚、 1，2，7，8-二环氧辛烷、 1，2，3，4-二环氧丁烷中的一种；
②在步骤①得到的交联透明质酸钠粉末中，加入注射用水溶胀形成交联透明质酸钠凝胶，收集的凝胶颗粒中加入注射用水，在15℃～35℃下搅拌洗涤2～5小时后，滤除注射用水，收集凝胶颗粒，再用注射用水洗涤，按上述过程反复洗涤共4～5次后，收集的凝胶颗粒即为交联透明质酸钠凝胶；
③向步骤②收集的凝胶颗粒中加入等渗生理盐水，在15℃～35℃下搅拌洗涤2～5小时后，滤除等渗生理盐水，收集凝胶颗粒，再用等渗生理盐水洗涤，按上述过程反复洗涤共4～5次后，经筛网分筛收集平均粒径为150μm～350μm的凝胶；
④将步骤③收集的凝胶颗粒灌装于事先灭菌的一次性注射器中，在121℃～125℃蒸汽中灭菌15～25分钟，即可得到外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶。
上述交联透明质酸钠凝胶的制备方法中，制得的交联透明质酸钠凝胶的化学结构中包含化学键合的具有自黏附自聚集功能的疏水基团，该疏水基团的碳原子数目为6～18个。
本发明的技术效果是：本发明技术方案采用含环氧基的交联剂，例如1,4-丁二醇二缩水甘油醚对透明质酸钠进行交联时，同时引入适量含环氧基的长链烷烃（长链烷烃的碳原子数目在6～18），由于该长链烷烃为疏水基，它成为交联透明质酸钠凝胶网状分子结构中的一部分，调整了交联透明质酸钠凝胶的亲水性，避免酶的进入而导致交联透明质酸钠降解，延长了其在体内留存时间，也即填充剂能维持组织容积填充更长时间的效果，另外，引入的长链烷烃通过强大的疏水缔合产生自黏附自聚集功能，在交联透明质酸钠凝胶中会形成很多物理团簇，因而可以达到增加抗酶解的效果，并且不影响凝胶的生物相容性和其他物理性能，达到了高交联度情况下相同的抗酶解稳定性，甚至稳定性更高；与相同交联度的凝胶相比，由于本发明透明质酸钠凝胶具有上述自黏附自聚集功能，使得本发明透明质酸钠凝胶在体外抗酶解的能力可以增加2～3倍，在体内的停留时间会大大延长，因此，凝胶的长效稳定性提高。本发明同时发现，由于本发明凝胶的溶胀度不会由于疏水链的引入而降低，因此，能保持凝胶的柔软性，不需要额外添加润滑剂，就可以通过30G的注射针头(见表2)。
附图说明
图1为本发明交联透明质酸钠凝胶的化学结构示意图；
图2为FT-IR图谱
其中：1为用作本发明原料的透明质酸钠的FT-IR图谱；2为本发明交联透明质酸钠凝胶的FT-IR图谱； 
图3为用作本发明原料的透明质酸钠的标准1H-NMR图谱；
图4为本发明方法单独用含环氧基的长链烷烃处理后的透明质酸钠的1H-NMR图谱；
图5为本发明方法单独用1,4-丁二醇二缩水甘油醚交联后的透明质酸钠的1H-NMR图谱；
图6为本发明方法用含环氧基的长链烷烃及交联剂1,4-丁二醇二缩水甘油醚处理后得到的交联透明质酸钠凝胶的1H-NMR图谱。
具体实施方式
以下结合实施例及附图对本发明做进一步描述，但不局限于此。
实施例所用原材料除另有说明外均为市售医药级用品，可通过商业渠道购得。
实施例1制备外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶
具体步骤如下：
①将10g透明质酸钠干粉（平均分子量为200万）溶解于由200ml 0.5M的氢氧化钠水溶液和50ml二甲亚砜组成的混合溶液后获得透明质酸钠碱性溶液，然后向透明质酸钠碱性溶液中加入0.5ml含环氧基的长链烷烃1,2-环氧十二烷（分子量184.32，纯度98%， Sigma公司产品）及1ml含环氧基的交联剂1,4-丁二醇二缩水甘油醚（分子量202.25，纯度98%，），搅拌状态下加热至40℃并保温5小时后， 冷却至室温（15～30℃），在搅拌下滴加丙酮直至出现白色粉末，形成固－液混合物料（丙酮的滴加量为800ml），加入5M盐酸调节固－液混合物料的pH值至7，滤除液体后，所得固体粉末用异丙醇洗涤3次，然后丙酮洗涤5次（异丙醇和丙酮每次用量均为100ml），再真空干燥至挥发物质含量低于2ppm，所得白色干粉即为交联透明质酸钠粉末，其化学结构式见附图1；
其中，透明质酸钠 ：1,4-丁二醇二缩水甘油醚 ：1,2-环氧十二烷的摩尔比为10 ：2 ：1；含环氧基的长链烷烃的碳原子数目为12个；0.2～0.5M的氢氧化钠水溶液与二甲亚砜的体积比为4 ：1，透明质酸钠碱性溶液中，透明质酸钠的浓度为4.0wt%；氢氧化钠水溶液与滴加的丙酮的体积比为1 ：4；
②在步骤①得到的交联透明质酸钠粉末中加入1L注射用水，25℃溶胀8小时形成交联透明质酸钠凝胶，收集的凝胶颗粒中加入注射用水1L，在25℃下搅拌洗涤2小时后，滤除注射用水，收集凝胶颗粒，再用注射用水洗涤，按上述过程反复洗涤共4次后，收集的凝胶颗粒即为交联透明质酸钠凝胶；
③向步骤②收集的凝胶颗粒中加入500ml等渗生理盐水，在25℃下搅拌洗涤2小时后，滤除等渗生理盐水，收集凝胶颗粒，再用等渗生理盐水洗涤，按上述过程反复洗涤共4次后，经筛网分筛收集平均粒径为250μm的凝胶颗粒；
④将步骤③收集的凝胶颗粒灌装于事先灭菌的一次性注射器中，在121℃蒸汽中灭菌25分钟，即可得到外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶。
实施例2～实施例7制备外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶
具体步骤与实施例1基本相同，不同之处在于：实施例1的步骤①中，透明质酸钠 ：1,4-丁二醇二缩水甘油醚 ：1,2-环氧十二烷的投料量及三者的摩尔比分别按表1所示添加，获得交联剂1,4-丁二醇二缩水甘油醚和1,2-环氧十二烷用量不同的交联透明质酸钠凝胶。
表1
Figure 396252DEST_PATH_IMAGE002
检测实施例1至实施例7制得的凝胶的颗粒大小、可注射性、细胞毒性、酶降解率及溶胀度，同时，检测单独用BDDE交联的透明质酸钠凝胶商业化产品，检测结果见表2。
表2
Figure 313392DEST_PATH_IMAGE004
由表2可以看出，通过单独增加BDDE交联剂的用量（如实施例2、4、7），溶胀度会降低，抗酶解性也会提高，但在一定的比例下（实施例7），凝胶硬度增加，可注射性下降，必须通过利用润滑剂提高其可注射性，另外细胞毒性也增加。而本发明通过引进含环氧基长链烷烃（如实施例1、5和6）不会影响原来透明质酸的亲水能力，凝胶的溶胀度没有下降，但抗酶解性却得到提高，同时细胞毒性能通过生物相容性的检验标准。
表2注1 ：体外细胞毒性测试  根据EN ISO 10993-5：2009《医疗器械的生物学评价--第5部分：体外细胞毒性试验》标准，检测细胞增值率，交联透明质酸钠作为三类医疗器械进行体外细胞毒性测试。
 具体检测方法如下：
①先将待测交联透明质酸钠凝胶与RPMI1640培养液按0.2g/ml混合，置于37℃，5%二氧化碳孵箱中浸提72小时，用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，得到浸提液；
②将1×105个/mL的L929细胞悬浮液接种于96孔细胞培养板，置于37℃二氧化碳培养箱中培养24小时，待细胞贴壁生长后，去除上清液，分成对照组和实验组两组；
③对照组加入RPMI1640培养液；实验组加入含50%上述浸提液的RPMI1640培养液；将对照组和实验组分别置于37℃二氧化碳培养箱中继续培养，于2天后取出，培养板每孔加入MTT溶液（5mg/ml）20μL，于37℃继续培养4小时，终止培养；
④小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入200μL DMSO，振荡10分钟混匀后，用酶联免疫检测仪在630nm下分别测定其吸光度值；
⑤根据下面的公式计算细胞相对增值率（RCR），RCR（%）=（实验组平均吸光度值/对照组平均吸光度值）×100%；
⑥细胞相对增值率RCR与细胞毒性分级关系如下：
RCR不小于100%，细胞毒性分级为0级；
RCR为75～99%，细胞毒性分级为1级；
RCR为50～74%, 细胞毒性分级为2级；
RCR为25～49%，细胞毒性分级为3级；
RCR为1～24%，细胞毒性分级为4级；
RCR为0%，细胞毒性分级为5级；
用按上述上方法测得的细胞相对增值率判断交联透明质酸钠凝胶的生物相容性。RCR越高，表明待测交联透明质酸钠凝胶的生物相容性越好；
表2注2 酶降解率
具体检测方法如下：
①取待测交联透明质酸钠凝胶样品，用PBS稀释至样品的交联透明质酸钠浓度为4mg/ml作为供试品；
②    取1.0g供试品，加50U 1ml透明质酸酶液震荡1min，于37℃水浴中 24小时，然后在100℃煮沸 10min灭活；
③滤液经0.45μm微孔滤膜抽滤，然后用PBS定容至10ml；
④采用改良咔脞显色法（参考文献：Bitter .T，Muir H.M，(1962) A modified uronic acid carbarbazole reation .Anal.Biochem.4,330-333.）测定糖醛酸含量，乘以2.07后折算为加入酶液的样品中交联透明质酸钠的含量C1；未加酶液样品中的交联透明质酸钠含量为C2，计算酶降解率= C1/ C2 × 100% ； 
用按上述方法测得的酶降解率判断交联透明质酸钠凝胶的抗酶解性。酶降解率越低，表明待测交联透明质酸钠凝胶的抗酶解性越好，交联透明质酸钠凝胶在体内的停留时间越长，凝胶的长效稳定性好。
表2注3 溶胀度
具体检测方法如下：
将凝胶成膜后真空烘干得凝胶膜，将所得干凝胶膜精确称量，其重量为Wd，然后加到PBS中，常温下放置24小时，把充分膨胀的凝胶膜取出，用吸水纸去除凝胶膜表面的游离水后，称量凝胶膜重量为Wg,  计算膨胀度（%）=(Wg/Wd )×100%；
用按上述方法测得的溶胀度可以间接判断交联透明质酸钠凝胶的可注射性。溶胀度越高表明待测交联透明质酸钠凝胶亲水性越好，凝胶越柔软，可注射性提高。
表2注4 凝胶颗粒大小
具体检测方法是利用英国Malvern公司的Mastersizer 2000型粒度测定仪检测颗粒大小D[4,3]。
表2注5 可注射性
具体检测方法如下：
在一次性使用的1ml无菌注射针管内，先装入已经消毒灭菌的凝胶，再装上30G注射针头，然后按照正常注射挤压的办法挤出凝胶，用手感判断可注射难易程度。
实施例8～9
本实施例的制备交联透明质酸钠凝胶的方法与实施例1基本相同，不同之处在于透明质酸钠的分子量为150万，透明质酸钠 ：BDDE ：1,2-环氧十二烷的摩尔比分别是10 ：3：1和10 ：3 ：2。 
按照上述方法检测实施例8～9制备的凝胶的酶降解率分别为30.20% 和32.5%，表明透明质酸钠的分子量为150万，透明质酸钠 ：BDDE ：1,2-环氧十二烷的摩尔比在10：3：1 就可以满足耐酶解性的要求。
对本发明交联透明质酸钠凝胶进行红外光谱检测
①采用传统FT-IR傅立叶变换红外光谱仪
②检测方法如下：
采用传统方法将用作原料的透明质酸钠和实施例1制得的交联透明质酸钠凝胶冷冻干燥样品和溴化钾压片在FT-IR上扫描检测红外结构，得到的图谱见附图2，其中：1为用作本发明原料的透明质酸钠的FT-IR图谱；2为本发明交联透明质酸钠凝胶的FT-IR图谱；
分析附图2中的图谱1和2可以看出二者的红外结构谱图一致，均存在以下波峰： 3395 cm-1  【ν (NH), ν (OH) OH 和NHCO】，2916 cm-1  【ν (CH) C-CH2-C】， 1615 cm-1 δ (NH) 【酰胺（ II ）和羧酸基团】，1411 cm-1 【ν (CN)和 δ (NH) 酰胺 III】，1377 cm-1 【ν (C=O)  -COOH】，1044 cm-1 【ν (C-O) C-O-C】，945cm-1 【δ (O-H) 和ν (C-C) C-O-C (环) 和OH，612 cm-1 ω (N-H) 酰胺 I。证明本发明对透明质酸钠进行交联改性并未改变透明质酸钠的基本化学结构，这样就确保交联透明质酸钠凝胶的生物相容性不受影响。
对本发明交联透明质酸钠凝胶进行 1 H-NMR分析
检测检测方法
①用NMR仪器（300HZ，Bruker，Switzerland ）；
②检测方法如下：
1）原料透明质酸钠溶解在D2O中，进行NMR检测，其检测图谱见附图3；
2）本发明交联透明质酸钠凝胶（实施例1制得）用NaOH调整到pH=8，高压121℃灭菌30分钟，形成液体，然后冷冻干燥得粉末，溶解于D2O/DMSO中进行NMR检测，其检测图谱见附图6；
3）采用本发明方法分别制得单独用含环氧基的长链烷烃处理后的透明质酸钠及单独用1,4-丁二醇二缩水甘油醚交联后的透明质酸钠用NaOH调整到pH=8，高压121℃灭菌30分钟，形成液体，然后冷冻干燥得粉末，溶解于D2O/DMSO中进行NMR检测，其检测图谱见附图4和5； 
在附图3的1H-NMR图谱中，透明质酸钠的乙酰胺基团N-Acetyl（NHCOCH3）的位置在1.9～2.2ppm, 葡萄糖醛酸（10H）的位置在3.0～4.0ppm, 葡萄糖单元异头碳氢（2H）的位置在4.35～4.45ppm；
在附图4的1H-NMR图谱中，除附图3的上述峰值外，还在位置1.2～1.4ppm和0.65～0.85ppm出现了峰，它们分别代表亚甲基CH2峰和长链碳端基CH3，证明用本发明方法可以将含环氧基的长链烷烃与透明质酸钠化学键合；
在附图5的1H-NMR图谱中，除附图3的上述峰值外，还在位置1.5～1.7ppm出现了O- CH2CH2 的峰，它代表交联剂BDDE与透明质酸钠的交联键，证明用本发明方法含环氧基的交联剂BDDE可以将透明质酸钠交联； 
在附图6的1H-NMR图谱中，除附图3的上述峰值外，还同时出现三个峰，即：位置在0.65～0.85ppm 出现的代表含环氧基的长链烷烃的长链碳端基CH3，1.2～1.4ppm 代表环氧烷烃的亚甲基CH2以及1.5～1.7ppm代表交联剂BDDE与透明质酸钠的的交联键O- CH2CH2 ，证明制备本发明交联透明质酸钠凝胶的方法可以确保含环氧基的交联剂1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）与透明质酸钠进行交联而且可以确保1,2-环氧十二烷与透明质酸钠化学键合。
采用分子量为500～6000的聚乙二醇二缩水甘油醚、 1，2，7，8-二环氧辛烷或 1，2，3，4-二环氧丁烷作为含环氧基的交联剂与含环氧基的长链烷烃（长链烷烃的碳原子数6～18个）配合，可以获得性能相同的交联透明质酸钠凝胶，故不再赘述。

Claims (4)

1.一种外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶，其特征在于，它是透明质酸钠碱性溶液与含环氧基的长链烷烃及含环氧基的交联剂，于35℃～50℃反应2～5小时形成交联透明质酸钠，再经洗涤、凝胶化、灭菌制得的，其中，透明质酸钠 ：含环氧基的交联剂 ：含环氧基的长链烷烃的摩尔比为10 ：4～1 ：1～4；
所述含环氧基的长链烷烃的碳原子数目为6～18个；
所述含环氧基的交联剂为1,4-丁二醇二缩水甘油醚、分子量500～6000的聚乙二醇二缩水甘油醚、 1，2，7，8-二环氧辛烷、 1，2，3，4-二环氧丁烷中的一种；
所述透明质酸钠碱性溶液是由透明质酸钠干粉溶解于由0.2～0.5M的氢氧化钠水溶液和二甲亚砜组成的混合溶液后形成的，其中，透明质酸钠的浓度为4wt%～8wt%；0.2～0.5M的氢氧化钠水溶液与二甲亚砜的体积比为10 ：7～1。
2.根据权利要求1所述的交联透明质酸钠凝胶，其特征在于，交联透明质酸钠凝胶的化学结构中包含化学键合的具有自黏附自聚集功能的疏水基团，该疏水基团的碳原子数目为6～18个。
3.一种权利要求1的外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶的制备方法，其特征在于，具体制备步骤如下：
①将透明质酸钠干粉溶解于由0.2～0.5M的氢氧化钠水溶液和二甲亚砜组成的混合溶液后获得透明质酸钠碱性溶液，然后向透明质酸钠碱性溶液中加入含环氧基的长链烷烃及含环氧基的交联剂，搅拌状态下加热至35℃～50℃并保温2～5小时后， 冷却至室温，在搅拌下滴加丙酮生成白色粉末形成固－液混合物料，加入盐酸将固－液混合物料的pH值调节至6.5～7.4，滤除液体后，所得固体物料用异丙醇和丙酮分别洗涤3～5次，再真空干燥至挥发物质含量低于2ppm，所得白色干粉即为交联透明质酸钠粉末；
其中，透明质酸钠 ：含环氧基的交联剂 ：含环氧基的长链烷烃的摩尔比为10 ：4～1 ：1～4；含环氧基的长链烷烃的碳原子数目为6～18个；0.2～0.5M的氢氧化钠水溶液与二甲亚砜的体积比为10 ：7～1；透明质酸钠碱性溶液中，透明质酸钠的浓度为4wt%～8wt%；氢氧化钠水溶液与滴加的丙酮的体积比为1：4～2∶3；透明质酸钠的平均分子量为50万～200万；所述含环氧基的交联剂为1,4-丁二醇二缩水甘油醚、分子量为500～6000的聚乙二醇二缩水甘油醚、 1，2，7，8-二环氧辛烷、 1，2，3，4-二环氧丁烷中的一种；
②在步骤①得到的交联透明质酸钠粉末中，加入注射用水溶胀形成交联透明质酸钠凝胶，收集的凝胶颗粒中加入注射用水，在15℃～35℃下搅拌洗涤2～5小时后，滤除注射用水，收集凝胶颗粒，再用注射用水洗涤，按上述过程反复洗涤共4～5次后，收集的凝胶颗粒即为交联透明质酸钠凝胶；
③向步骤②收集的凝胶颗粒中加入等渗生理盐水，在15℃～35℃下搅拌洗涤2～5小时后，滤除等渗生理盐水，收集凝胶颗粒，再用等渗生理盐水洗涤，按上述过程反复洗涤共4～5次后，经筛网分筛收集平均粒径为150μm～350μm的凝胶；
④将步骤③收集的凝胶颗粒灌装于事先灭菌的一次性注射器中，在121℃～125℃蒸汽中灭菌15～25分钟，即可得到外科整形用组织填充剂交联透明质酸钠凝胶。
4.根据权利要求3所述的交联透明质酸钠凝胶的制备方法，其特征在于，制得的交联透明质酸钠凝胶的化学结构中包含化学键合的具有自黏附自聚集功能的疏水基团，该疏水基团的碳原子数目为6～18个。
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