CN102846866B - 一种用于防治猪圆环病毒病的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于防治猪圆环病毒病的中药组合物及其制备方法，属兽用中药领域，是由金银花、柴胡、鱼腥草、板蓝根、黄芪、甘草、连翘、枸杞子、陈皮、黄芩、淫羊藿、白术、地黄瓜、苍术、大青叶、猪苓、当归、党参、茯苓、黄连二十味中药组成，经粉碎、煎煮、酶解、絮凝沉降、浓缩、过滤、灌封、灭菌制得注射液。本发明采用纯天然中草药，安全可靠，无毒副作用，诸药按君臣佐使原则配伍，安全、无毒副作用，具有清热解毒，抗菌消炎，提高机体免疫力的的功效，制得的注射液生物利用度高，性状稳定，能有效提高机体的免疫力，对猪圆环病毒病具有良好的治疗功效。

Description

一种用于防治猪圆环病毒病的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种兽用中药，具体涉及一种用于防治猪圆环病毒病的中药组合物及其制备方法。

背景技术

猪圆环病毒病（PCV）是由猪圆环病毒Ⅱ型（PCV Ⅱ）引起的猪传染性疾病，是继猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）之后新发现的又一重要疫病。感染猪可自鼻液、粪便等废物中排出病毒，经口腔、呼吸道等途径感染。猪圆环病毒病临床表现为渐进性消瘦或生长迟缓，并可引起免疫抑制，患病猪死亡率高达25%～40%。1997年Clark等人首次分离到猪圆环病毒Ⅱ型（PCV Ⅱ）。然而该病由于传播广泛，已给全世界养猪业造成了巨大的经济损失。2008年第20届国际猪病大会（IPVS 20^th）上，人们将其列为当前危害养猪业发展的头号疫病。

目前，对于猪圆环病毒病主要采取预防为主，治疗为辅的防治手段。然而，用于预防猪圆环病毒病的疫苗大多效果不理想且存在散毒的危险。目前，治疗猪圆环病毒病普遍采用抗菌药如氟苯尼考、庆大霉素、磺胺类等药物，但这些药物容易产生耐药性或引起药物残留。而抗病毒药如利巴韦林、金刚烷胺等已被农业部禁用，新型抗病毒药物如干扰素、免疫球蛋白和转移因子等又存在成本高、效果不理想、具有潜在风险等缺陷。因此，中草药制剂无疑为防治猪圆环病毒病提供了一条新的思路。中国专利2010年3月3日（CN101658551A）公开的一种抗猪病毒病的金银花组合物，含金银花、黄芩、甘草、柴胡、蒲公英五味中药提取物，与饲料混合后饲喂，能够有效防治由猪圆环病毒病引起的病毒性疾病。中国专利2009年11月25日（CN 101584747 B）公开的一种抗菌抗病毒兽用中药组合物，由金银花、黄芩、甘草、板蓝根四味中药提取物组成，对防治由圆环病毒引起的疾病具有见效快、疗效显著的特点。然而，上述中药组合物尚存在生物利用度低、临床效果不佳等缺点。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于防治猪圆环病毒病的中药组合物。

同时，本发明还提供一种用于防治猪圆环病毒病的中药组合物的制备方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种用于防治猪圆环病毒病的中药组合物，主要由以下重量份数的原料组成：金银花25～30份，柴胡25～30份，鱼腥草25～30份，板蓝根20～25份，黄芪20～25份，甘草20～25份，连翘15～20份，枸杞子15～20份，陈皮15～20份，黄芩15～20份，淫羊藿15～20份，白术10～20份，地黄瓜10～20份，苍术10～20份，党参8～15份，茯苓8～15份，大青叶30～35份，猪苓15～25份，当归15～18份，黄连5～10份。

一种用于防治猪圆环病毒病的中药组合物，其优选为，主要由以下重量份数的原料组成：金银花25份，柴胡25份，鱼腥草30份，板蓝根25份，黄芪25份，甘草20份，连翘15份，枸杞子18份，陈皮15份，黄芩18份，淫羊藿15份，白术12份，地黄瓜15份，苍术12份，党参8份，茯苓8份，大青叶35份，猪苓15份，当归15份，黄连8份。

本发明中各原料药的功效简述如下：

金银花：性甘寒，气芳香，具有抗菌，抗炎，解热，增强免疫力和抗内毒素等功效，用于清热解毒，利尿解表；

柴胡：性微寒、味苦、辛，归肝、胆经。具有透表泄热，疏肝解郁，升举阳气，抗炎抗辐射，提高免疫力等功能，用于感冒发热、寒热往来、疟疾，肝郁气滞，胸肋胀痛等；

鱼腥草：性微寒，味苦，归肺经、膀胱、大肠经。具有提高机体免疫力，抗菌抗病毒，抗炎抗肿瘤，利尿防辐射等功能，主要用于肺痈吐脓，痈肿疮毒，热痢，热淋等；

板蓝根：苦、寒、凉、无毒，归肝，胃经，具有清热，抗菌，抗病毒，凉血，利咽功效，主治风热感冒，咽喉肿痛，疮黄肿毒，大头瘟疫等；

黄芪：味甘，气微温，气薄而味浓，可升可降，阳中之阳也，无毒，归肺、脾、肝、肾经，具有增强机体免疫功能和造血功能，改善物质代谢，抗应激和抗病毒等功效，用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，痈疽难溃，久溃不敛，血虚萎黄，内热消渴；

甘草：甘、平，归心、肺、脾、胃经。补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药，用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性等；

连翘：味苦，性微寒，入心经，肺经，小肠经，具有清热解毒，抗菌，抗内毒素，保肝利尿，镇吐镇痛，散结消肿，疏散风热等功效，主治风热感冒，咽喉肿痛，痈疮肿毒等；

枸杞子：味甘，性平，归肝经，肾经，肺经，有养肝，滋肾，润肺，提高免疫力，抗肿瘤，促生长等作用，用于肝肾亏虚，虚劳咳嗽，消渴引饮等症状；

陈皮：温、辛、苦，入脾、胃、肺经，具有理气健脾，调中，燥湿，化痰，抗炎，抗溃疡功效，主治脾胃气滞之脘腹胀满或疼痛、消化不良，湿浊阻中之胸闷腹胀、纳呆便溏，痰湿壅肺之咳嗽气喘；

黄芩：苦、寒，归肺、胆、脾、大肠、小肠经，具有抗菌抗病毒，抗炎，调节免疫功能，解热，镇静，保肝，利胆等效果，用于胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安等；

淫羊藿：辛、甘、温，归肝、肾经，具有补肾阳，强筋骨，增强免疫力，抗炎抗菌，祛风湿的功效，主治筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛等；

白术：苦、甘、温，归脾、胃经，有健脾益气、燥湿利水、止汗、抗菌，抗肿瘤，镇静，安胎功效，用于脾虚食少，腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自汗，胎动不安；

地黄瓜：甘、寒，有清热凉血，养阴生津等功效，主要用于阴虚内热，内热消渴，咽喉肿痛等；

苍术：辛、苦、温，归脾、胃、肝经，具有燥湿健脾，祛风散寒，抗菌抗肿瘤，明目等功效，用于治疗脘腹胀满，泄泻水肿，风寒感冒，夜盲症等；

大青叶：味苦，大寒，无毒，入脾、心、胃经，清热，解毒，抗菌，抗病毒，抗内毒素，凉血，止血，主治温病热盛烦渴，流行性感冒，急性传染性肝炎，丹毒，痢疾，痈疽肿毒等；

猪苓：甘、淡、平，归肾、膀胱经，具有利水渗湿，免疫增强，抑菌，抗肿瘤及保肝作用，主要治疗小便不利，水肿、泄泻，淋浊，带下等；

当归：甘、辛、温，归肝、心、脾经，具有补血活血，增强免疫力，润肠通便，抗炎抑菌等功效，主要用于血虚萎黄，眩晕心悸，肠燥便秘，风湿痹痛等症状；

党参：性味甘平，微酸，入脾经，肺经，有补中益气，健脾益肺，增强免疫力，增强造血能力和抗应激等功效，主治脾胃虚弱，少食腹泻，气虚垂脱等；

茯苓：甘、淡、平，归心经，肺经，脾经，肾经，具有渗湿利尿，镇静，抑菌，免疫增强，抗肿瘤，抗癌等作用，用于小便不利，水肿胀满，痰饮咳逆，呕吐，脾虚食少，泄泻，痰饮咳嗽，抗癌等；

黄连：性寒，味苦，归心、脾、胃、肝、胆、大肠经，具有清热燥湿，泻火解毒，抗菌，抗原虫等作用，主要用于湿热痞满，呕吐吞酸，泻痢，黄疸，高热神昏，心火亢盛等。

本发明采用纯天然中草药，安全可靠、无毒副作用，诸药按君臣佐使原则配伍，具有清热解毒，抗菌消炎，提高机体免疫力的的功效。

一种用于防治猪圆环病毒病的中药组合，可以制备成溶液剂、散剂、颗粒剂、可溶性粉剂、预混剂、片剂、胶囊剂、注射液等中药剂型；但以注射液为佳。

一种用于防治猪圆环病毒病的中药组合物制成注射液的制备方法，具体步骤如下：

（1）按重量份数称取各味中药，粉碎，加热煎煮两次，第一次加10倍量水，第二次加6倍量水，合并两次煎液，用四层纱布过滤，继续加热浓缩，待浓缩药液与原药材的重量比为1:1，冷却至40℃～60℃；

（2）在步骤（1）制得的药液中按照2:1:1的重量比例一次加入纤维素酶、果胶酶和蛋白酶，以重量体积百分含量计（g/mL），三种酶的加入量占药液量的2%～3%，静置12小时；

（3）将步骤（2）制得的药液继续加热煎煮20～30分钟，加入2倍药液体积的纯化水，加热至60℃-80℃，再加入含1%（w/v，g/mL）壳聚糖的醋酸溶液，加入的体积占药液体积的8%～12%，搅拌均匀，静置12小时，取上清液，调节pH值至6.5～7.5，浓缩，过滤，灌装，灭菌既得。

本发明的优点：采用注射方式施药，生物利用度高，且制得的注射液性状稳定，能够有效的提高机体免疫力，增强机体的抗病能力，对猪圆环病毒病具有良好的治疗效果。

具体实施方式

下述实施例仅对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制。

实施例1

按重量份数称取原料药：金银花25份，柴胡25份，鱼腥草30份，板蓝根25份，黄芪25份，甘草20份，连翘15份，枸杞子18份，陈皮15份，黄芩18份，淫羊藿15份，白术12份，地黄瓜15份，苍术12份，党参8份，茯苓8份，大青叶35份，猪苓15份，当归15份，黄连8份。

将上述原料制备成注射液的步骤具体如下：

（1）取各原料药粉碎，加热煎煮两次，第一次加10倍量水，第二次加6倍量水，合并两次煎液，用四层纱布过滤，继续加热浓缩，待浓缩药液与原药材的重量比为1:1，冷却至40℃；

（2）在步骤（1）制得的药液中按2:1:1的重量比例一次加入纤维素酶、果胶酶和蛋白酶，以重量体积百分含量计（g/mL），使三种酶的总量占药液量的2%，静置12小时；

（3）将步骤（2）制得的药液继续加热煎煮30分钟，加入2倍体积的纯化水，加热至80℃，再加入含1%（w/v，g/mL）壳聚糖的醋酸溶液，加入的体积占药液体积的8%，搅拌均匀，静置12小时后取上清液，调节pH值为6.5，浓缩3倍，0.45μm滤膜过滤，灌装，灭菌既得。

实施例2

按重量份数称取原料药：金银花28份，柴胡28份，鱼腥草25份，板蓝根20份，黄芪20份，甘草22份，连翘17份，枸杞子15份，陈皮17份，黄芩15份，淫羊藿18份，白术10份，地黄瓜10份，苍术10份，党参11份，茯苓11份，大青叶30份，猪苓20份，当归17份，黄连5份，重量为实施例1中的10倍。

将上述原料制备成注射液的步骤具体如下：

（1）取各原料药粉碎，加热煎煮两次，第一次加10倍量水，第二次加6倍量水，合并两次煎液，用四层纱布过滤，继续加热浓缩，待浓缩药液与原药材的重量比为1:1，冷却至50℃；

（2）在步骤（1）制得的药液中按2:1:1的重量比例一次加入纤维素酶、果胶酶和蛋白酶，以重量体积百分含量计（g/mL），使三种酶的总量占药液量的2.5%，静置12小时；

（3）将步骤（2）制得的药液继续加热煎煮30分钟，加入2倍体积的纯化水，加热至70℃，再加入含1%（w/v，g/mL）壳聚糖的醋酸溶液，加入的体积占药液体积的10%，搅拌均匀，静置12小时后取上清液，调节pH值为7，浓缩3倍，微孔滤膜过滤，灌装，灭菌既得。

实施例3

按重量份数称取原料药，金银花30份，柴胡30份，鱼腥草28份，板蓝根22份，黄芪22份，甘草25份，连翘20份，枸杞子20份，陈皮20份，黄芩20份，淫羊藿20份，白术20份，地黄瓜20份，苍术20份，党参15份，茯苓15份，大青叶32份，猪苓25份，当归18份，黄连10份，重量为实施例1中的5倍。

将上述原料制备成注射液的步骤具体如下：

（1）取各原料药粉碎，加热煎煮两次，第一次加10倍量水，第二次加6倍量水，合并两次煎液，用四层纱布过滤，继续加热浓缩，待浓缩药液与原药材的重量比为1:1，冷却至60℃；

（2）在步骤（1）制得的药液中按2:1:1的重量比例一次加入纤维素酶、果胶酶和蛋白酶，以重量体积百分含量计（g/mL），使三种酶的总量占药液量的3%，静置12小时；

（3）将步骤（2）制得的药液继续加热煎煮30分钟，加入2倍体积的纯化水，加热至60℃，再加入含1%（w/v，g/mL）壳聚糖的醋酸溶液，加入的体积占药液体积的12%，搅拌均匀，静置12小时后取上清液，调节pH值为7.5，浓缩3倍，过滤，灌装，灭菌既得。

经检验，上述实施例1、2、3制得的注射液均符合质量标准。

本发明制得的注射液采用肌内注射，每次0.1mL/kg猪，一日2次，连用3日，即可取得良好效果。

实施例4

按重量份数称取原料药：金银花28份，柴胡28份，鱼腥草30份，板蓝根25份，黄芪25份，甘草22份，连翘18份，枸杞子20份，陈皮20份，黄芩18份，淫羊藿20份，白术15份，地黄瓜15份，苍术18份，党参15份，茯苓15份，大青叶35份，猪苓20份，当归18份，黄连8份。

将上述原料药制备成颗粒剂时，还需添加蔗糖和加益粉。本实施例中按重量份数称取蔗糖80份，加益粉85份。

将上述原料制备成颗粒剂的步骤具体如下：

（1）取各原料药粉碎，加水煎煮两次，第一次加10倍量水，煎煮1.5小时，第二次加8倍量水，煎煮1小时，合并两次煎液，用四层纱布过滤，继续加热浓缩，至浓缩药液的相对密度在70℃约为1.20的稠膏，冷却至室温；

（2）在步骤（1）制得的稠膏中加入95%乙醇使含醇量达47.5%，静置12小时，抽滤，减压回收乙醇。

（3）在步骤（2）制得的药液中逐渐加入混匀的蔗糖和加益粉，瞬时煮沸，搅匀，喷雾干燥，过32目筛，在50℃真空干燥2h，既得颗粒剂。

成品检验

1.稳定性试验

将实施例2中制得的注射液置于温度为40℃、相对湿度为75%的恒温恒湿箱中。第1次取样20支，进行外观性状的分析，并测定药物组分中黄芩苷含量的变化，以后每隔一个月再取样20支进行上述分析，取样共计4次。4次取样样品的分析结果见下表1。

表1 注射液稳定性试验结果

由表1可知，4次取样的样品其外观性状均澄清透明，药物组分中黄芩苷含量为7.14±0.01mg/mL。统计分析表明4次取样的药物组分中黄芩苷含量无显著差异（P＞0.05）。

由上述可知，本发明的中药组合物性状稳定，制备工艺合理可行。

2.玫瑰花环试验

玫瑰花环试验是体外检测人和动物细胞免疫功能的一种方法。E-玫瑰花环试验是T淋巴细胞计数的一种重要方法。由于人和动物的T淋巴细胞表面有红细胞受体，因此红细胞可以粘附到T淋巴细胞的周围而形成玫瑰花样的细胞团。在红细胞中，以绵羊红细胞最为常用。B淋巴细胞由于没有红细胞受体，所以不能形成E-玫瑰花环，以资鉴别。

猪圆环病毒（PCV Ⅱ）在患病猪的胸腺、脾、肠系膜、支气管等处的淋巴组织中均广泛存在，其中肺脏及淋巴结中检出率较高，表明猪圆环病毒（PCV Ⅱ）严重侵害猪的免疫系统。猪圆环病毒可与巨噬细胞-单核细胞、组织细胞和胸腺巨噬细胞相伴随，导致患病猪体况下降，形成免疫抑制。免疫抑制导致免疫缺陷，由免疫缺陷引起的临床症状的严重程度与血液循环及淋巴器官中B细胞、T细胞的减少显著相关，而与周围血液及淋巴组织中巨噬细胞-单核细胞谱系细胞的增加显著相关。因此，机体抵抗猪圆环病毒侵袭的关键在于细胞免疫水平的高低，特别是T淋巴细胞功能的正常发挥。通过玫瑰花环试验检测T淋巴细胞可以判断机体的免疫能力。

1.材料

试验药品：灭菌过的生理盐水；市售黄芪多糖注射液，主要组分为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪提取液，含量为每1mL含黄芪甲甙不少于1.0mg，相当于含生药2g；实施例1制得的中药注射液。

受试体：试验选用断奶35日、体重10kg左右的仔猪，共计30头。

其他试验材料：绵羊红细胞。

2.试验方法

空白对照组：灭菌过的生理盐水；

对照组：市售黄芪多糖注射液；

试验组：实施例1制得的中药注射液。

将试验动物随机分配给以上3组，每组10头。

以上各组均采取肌内注射方式施药，每次0.1mL/kg猪，一日2次，连用3日，第4日进行无菌耳静脉采血，与绵羊红细胞结合后镜检计数，计算公式如下：

E-玫瑰花环%=E-玫瑰花环数/计数的淋巴细胞总数×100%

实验结果见下表2。

表2 各处理组的玫瑰花环试验结果（%）

由表2可知，试验组的玫瑰花环形成率最高，达44.8±4.2%，空白对照组和对照组分别为32.5±3.3%、38.5±3.5%。统计分析表明，试验组的玫瑰花环形成率显著高于空白对照组和对照组（P＜0.01，P＜0.05）。由上述可知，本发明制得的中药注射能够显著提高机体的免疫力，从而增强机体的抗病能力。

3.药效试验

试验动物：河南省某猪场的120头病猪，经临床及实验室诊断已确诊感染猪圆环病毒病，所选病猪的个体大小和精神状态相近。

试验材料：

试验组：试验组1、2、3、4分别对应本发明实施例1、2、3制备的注射液和实施例4制备的颗粒剂，其中，注射液采取肌内注射，每次0.1mL/kg猪，一日1次，连用7日；颗粒剂的使用量为每200kg饲料添加100g颗粒剂，每日3～4次，连用7日。

对照组：市售黄芪多糖注射液，主要组分为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪提取液，含量为每1mL含黄芪甲甙不少于1.0mg，相当于含生药2g，采取肌内注射，每次0.1mL/kg猪，一日1次，连用7日。

空白对照组：注射用水，采取肌内注射，每次0.1mL/kg猪，一日1次，连用7日。

疗效判断标准：

治愈：连续用药一个疗程后，各种症状均消失，各项生理指标恢复正常，精神好，食欲佳；有效：连续用药一个疗程后，各种症状缓解，各项生理指标基本恢复正常，精神转好，开始进食；无效：连续用药两个疗程后，各种症状无明显好转，有的甚至病情加重、死亡。临床药效试验结果见表3。

表3 临床药效试验结果

由表3可知，用药7天后，本发明中药组合物在治疗猪圆环病毒病上的疗效较对照组显著，治疗有效率达75%以上，治愈率达60%以上。病猪经治疗后，进食量明显增加，精神逐渐恢复。连续用药或加大用药量的疗效更佳。

结论：本发明中药组合物对猪圆环病毒病的治疗效果明显，见效较快，短期治疗即可获得良好治疗效果。

Claims (3)

1.一种用于防治猪圆环病毒病的中药组合物，其特征在于，主要由以下重量份数的原料制成：金银花25～30份，柴胡25～30份，鱼腥草25～30份，板蓝根20～25份，黄芪20～25份，甘草20～25份，连翘15～20份，枸杞子15～20份，陈皮15～20份，黄芩15～20份，淫羊藿15～20份，白术10～20份，地黄瓜10～20份，苍术10～20份，党参8～15份，茯苓8～15份，大青叶30～35份，猪苓15～25份，当归15～18份，黄连5～10份；该中药组合物的剂型为注射液；该注射液的制备方法具体步骤如下：

（1）按重量份数称取各味中药，粉碎，加热煎煮两次，第一次加10倍量水，第二次加6倍量水，合并两次煎液，用四层纱布过滤，继续加热浓缩，待浓缩药液与原药材的重量比为1:1，冷却至40℃～60℃；

（2）在步骤（1）制得的药液中按照2:1:1的重量比例一次加入纤维素酶、果胶酶和蛋白酶，以重量体积百分含量计（g/mL），使三种酶的总量占药液量的2%～3%，静置12小时；

（3）将步骤（2）制得的药液继续加热煎煮20～30分钟，加入2倍药液体积的纯化水，加热至60℃-80℃，再加入含1%（w/v，g/mL）壳聚糖的醋酸溶液，加入的体积占药液体积的8%～12%，搅拌均匀，静置12小时，取上清液，调节pH值至6.5～7.5，浓缩，过滤，灌装，灭菌既得。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，主要由以下重量份数的原料制成：金银花25份，柴胡25份，鱼腥草30份，板蓝根25份，黄芪25份，甘草20份，连翘15份，枸杞子18份，陈皮15份，黄芩18份，淫羊藿15份，白术12份，地黄瓜15份，苍术12份，党参8份，茯苓8份，大青叶35份，猪苓15份，当归15份，黄连8份。

3.一种如权利要求1所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

（1）按重量份数称取各味中药，粉碎，加热煎煮两次，第一次加10倍量水，第二次加6倍量水，合并两次煎液，用四层纱布过滤，继续加热浓缩，待浓缩药液与原药材的重量比为1:1，冷却至40℃～60℃；

（2）在步骤（1）制得的药液中按照2:1:1的重量比例一次加入纤维素酶、果胶酶和蛋白酶，以重量体积百分含量计（g/mL），使三种酶的总量占药液量的2%～3%，静置12小时；

（3）将步骤（2）制得的药液继续加热煎煮20～30分钟，加入2倍药液体积的纯化水，加热至60℃-80℃，再加入含1%（w/v，g/mL）壳聚糖的醋酸溶液，加入的体积占药液体积的8%～12%，搅拌均匀，静置12小时，取上清液，调节pH值至6.5～7.5，浓缩，过滤，灌装，灭菌既得。