CN102822186A - 6’-o-唾液乳糖的制备和中间体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于制备6’-O-唾液乳糖(式(I))或其盐的方法，以及合成中的中间体和6’-O-唾液乳糖盐在药物或营养组合物中的用途。

Description

6’-O-唾液乳糖的制备和中间体
技术领域
本发明提供新型寡糖(低聚糖，oligosaccharide)及其衍生物，并且还提供用于制备、尤其是大规模制备这些寡糖的方法。
背景技术
在过去数十年间，对人乳寡糖的制备和商业化的兴趣持续增加。人乳寡糖的重要性直接与其独特的生物学活性如抗菌、抗病毒、免疫系统和认知发育的增强活性相关[1]。
唾液酸化的人乳寡糖如二唾液乳糖-N-四糖、3’-O-唾液酸基-3-O-岩藻糖基乳糖、6’-O-唾液乳糖、3’-O-唾液乳糖、6’-O-唾液酸化-乳糖-N-新四糖、3’-O-唾液酸化-乳糖-N-四糖等是人乳的主要成分。
在以上列出的唾液酸化人乳寡糖中，唾液酸残基总是通过α-糖苷键与D-半乳糖的末端3’-O-和/或6’-O-位置或非末端糖残基的6-O-位置相连。
迄今，通过使用分离、生物技术和合成方法获得大量的唾液酸化人乳寡糖还不可能。由于唾液酸供体自身的性质，唾液酸化人乳寡糖的化学合成是糖化学的最具挑战性领域之一。通常，立体选择性糖基化经由相邻基团参与实现，但是在唾液酸的C-3位置处缺少取代基阻止这样的选择。因此，立体选择性唾液酸化必须经由仔细选择唾液酸供体-受体匹配、动力学和溶剂效应来实现。此外，在唾液酸的异头位置处的羧基部分的存在对于立体选择性α-唾液酸化也产生不利的空间和电子效应。羧基的强吸电子效应在经由β-消除的糖基化期间引发潜在的副反应。
通过参考被称为6’-O-唾液乳糖(6’-SL，O-(N-乙酰基-α-神经氨酸基)-(2→6)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖，方案1)的最简单的一种唾液酸化人乳寡糖的背景技术，可以表明唾液酸化寡糖的生物学重要性和合成困难性。
Figure BDA00002020582500021
方案1.6’-O-唾液乳糖的结构
6’-O-唾液乳糖是在母乳中以高浓度被发现的唾液酸化人乳寡糖之一。
6’-O-唾液乳糖的若干生物学作用如其益生、抗菌、抗病毒、免疫系统和认知发育增强等作用[1]已被证实。这些重要特征使得6’-SL成为用于对于营养和治疗工业的大规模生产和产品开发的一个有吸引力的靶标。6’-O-唾液乳糖已经通过化学方法[2]、酶方法[3]和生物技术方法[4]合成或者它已经从天然来源被分离[5]。然而，由于缺乏有效纯化方法、使用昂贵且有毒试剂以及涉及众多合成步骤，这些方法对于规模化生产不具有吸引力。
对于6’-O-唾液乳糖[2a-c]、其Na、K、Mg和Ca盐[2d，e]或其中间体[2f-j]，已经开发了若干化学合成方法。总起来说，这些策略使用糖基卤化物、硫苷或亚磷酸二乙酯供体活化，经由对4’，6’-糖二醇或6’-糖醇的立体选择性6’-O-唾液酸化而获得6’-O-唾液酸化乳糖。使用非常昂贵或毒性很高的化学品(如氰化汞、溴化汞和碳酸银)用于唾液酸化是使得这些方法对大规模研究和生产缺乏吸引力的原因之一。没有有效的立体控制和/或产量同样使得这些策略不适于大规模技术开发。此外，极高的纯化难度是所有列举的合成策略的特征。
在酶促制备6’-O-唾液乳糖的情形下，糖基转移酶和唾液酸酶是优选使用的酶[3]。这些复杂酶系统代表用于大规模制备6’-O-唾液乳糖的极昂贵方法。类似地，由于缺乏区域选择性和立体选择性，唾液酸酶不能成功地用于大规模制备方法。低的收率和困难的纯化方案同样阻碍工业规模的技术开发。
由于存在大量相似的寡糖，即使以毫克量从人和其他哺乳动物乳汁中分离6’-SL都相当困难。至今，仅开发出分析型HPLC方法用于从天然来源分离6’-SL[5]。
利用遗传修饰细菌、酵母或其他微生物的一些生物学方法也被描述[4]。由于有限的商业化机会，这些方法在管理过程中存在严重缺陷。
本发明代表适合于工业制备6’-O-唾液乳糖及其他唾液酸化生物活性寡糖的第一种商业方法。该成功策略是基于引入新型唾液酸供体-受体对、新型唾液酸供体、新型二醇类型乳糖受体、相关的晶体中间体，使用廉价且无毒性的活化剂以及可靠的纯化方法。
发明内容
本发明的第一方面一种用于制备6’-O-唾液乳糖或其盐的方法，所述方法包括以下步骤：
a)使通式3的受体
Figure BDA00002020582500031
通式3
其中，R1是-OR2，该R2是通过催化氢化可去除的基团，或者R1是-SR3，该R3选自任选取代的烷基、任选取代的芳基和任选取代的苄基，或者R1是-NH-C(R”)＝C(R’)2，其中各个R’彼此独立地是吸电子基团，其选自-CN，-COOH，-COO-烷基，-CO-烷基，-CONH2，-CONH-烷基和-CON(烷基)2，或者其中两个R’基团连接在一起并表示-CO-(CH2)2-4-CO-，并且因此与它们连接的碳原子一起形成5-7元的环烷-1，3-二酮，在该二酮中的亚甲基中的任一个任选地被1或2个烷基取代，并且R”是H或烷基，
R4是选自任选取代的酰基和被1-3个甲氧基取代的苄基，
与通式4的供体发生发生反应
通式4
其中，R5是任选取代的酰基，
R8选自-NHAc和-NAc2，
Q是COO-烷基，该烷基任选地被取代，并且
X是离去基团，
从而生成通式2的化合物
Figure BDA00002020582500041
通式2
其中，R1、R4、R5、R8和Q是如上所定义的，
b)使通式2的化合物去保护从而得到通式1的化合物或其盐
Figure BDA00002020582500042
通式1
其中R1是如上所定义的，并且
c)随后将通式1的化合物或其盐转化为6’-O-唾液乳糖或其盐。
本发明的第二方面提供6’-O-唾液乳糖Zn2+盐。
本发明的第三方面涉及6’-O-唾液乳糖有机盐。
本发明的第四方面提供根据第二和第三方面的新型6’-O-唾液乳糖盐，其用作营养添加剂。
本发明的第五方面涉及根据第二和第三方面的新型6’-O-唾液乳糖盐，其用作药物添加剂。
本发明的第六方面提供一种营养组合物，所述营养组合物包含一种或多种根据第二和第三方面的6’-O-唾液乳糖盐。
本发明的第七方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含一种或多种根据第二和第三方面的6’-O-唾液乳糖盐。
本发明的第八方面提供通式1A的化合物
通式1A
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，优选苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基并且OR2为β型。
本发明的第九方面涉及通式1B的化合物
Figure BDA00002020582500052
通式1B
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，
其为选自Zn2+、K+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Fe2+、Mn2+、Cu2+和有机盐的盐形式。
本发明的第十方面提供通式2A的化合物
Figure BDA00002020582500053
通式2A
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，
R4和R5彼此独立地是任选取代的酰基，
R8选自-NHAc和-NAc2，并且
Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代。
本发明的第十一方面涉及通式2C的化合物
Figure BDA00002020582500061
通式2C
其中-OR2为β型，R2是通过催化氢化可去除的基团，优选苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，并且
R4选自异丁酰基、新戊酰基和任选取代的苯甲酰基，优选苯甲酰基。
本发明的第十二方面提供通式2D的化合物
Figure BDA00002020582500062
通式2D
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，
R4选自被1-3个甲氧基取代的苄基和H，
R5选自任选取代的酰基和H，
R8选自-NHAc和NAc2，并且
Q选自-COO-烷基，该烷基被任选地取代，和质子化或去质子化形式的-COOH，
条件是如果Q是质子化或去质子化形式的-COOH并且R8是-NHAc，则R4和R5两者不能同时是H。
本发明的第十三方面涉及通式4A或4B的化合物
通式4A通式4B
其中R5是任选取代的酰基，优选乙酰基，
R6选自C2-6烷基、C3-6环烷基和任选取代的苄基，优选选自乙基、异丙基、叔丁基、苄基和环己基，
R7是取代的苄基，优选4-氯苄基或4-溴苄基，并且
Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，优选-COOMe。
本发明的第十四方面提供通式4C的化合物，其用作唾液酸基供体
Figure BDA00002020582500072
通式4C
其中R5是任选取代的酰基，优选乙酰基并且Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，优选-COOMe。
本发明的第十五方面涉及通式3A的化合物
Figure BDA00002020582500073
通式3A
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，并且
R4选自被1-3个甲氧基取代的苄基和任选取代的酰基，条件是不包括乙酰基。
具体实施方式
在整个本说明书中，术语“烷基”(单独地或当连接于另一个原子或基团时)指具有1-6个碳原子的直链或支链烃基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基等。
“环烷基”指具有3-6个碳原子的环状烃残基，如环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
在本申请中，术语“芳基”指同芳香性基团如苯基或萘基。优选地，芳基指苯基。
在本说明书中，术语“酰基”表示R-C(＝O)-，其中R可以是H、烷基或芳基，如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、新戊酰基、苯甲酰基等。烷基和芳基残基都可以被取代。
用于本说明书及权利要求的目的，术语“任选取代的”指目标基团可以带有取代基或者可以是未取代的。
用于本说明书及权利要求的目的，术语“取代的”指目标基团被改变链或环的总体化学特性的基团取代。取代基可以被用于改变作为整体的分子的特性，如稳定性、可溶性和形成晶体的能力。本领域技术人员将知道在给定情形下可以用作备选方案的具有类似大小和电荷特性的其他合适取代基。
更通常地，与术语“烷基”、“环烷基”、“芳基”和“酰基”结合时，术语“任选地取代的”意在表示目标基团可以被选自由以下各项组成的组中的基团取代一次或多次，优选1-5次，更优选1-3次：烷基(仅用于环烷基、芳基和芳酰基)、羟基、烷氧基(即烷基-氧基)、羧基、氧代(形成酮或醛官能度)、烷氧基羰基、烷基羰基、甲酰基、芳基、芳基氧基羰基、芳基氧基、芳基氨基、芳基羰基、氨基、单-和二烷基氨基、氨基甲酰基、单-和二烷基-氨基羰基、烷基羰基氨基、氰基、烷酰氧基、硝基、烷硫基和卤素(F、Cl、Br、I)。
“通过催化氢化可去除的保护基”指这样的基团，其C-O键在催化量的已知用于氢解的钯、阮内镍或另一种适当金属催化剂存在下，通过加入氢发生裂解，导致恢复OH基团。这样的保护基是技术人员熟知的并且被充分地述及[7]。合适的保护基包括苄基、二苯基甲基(二苯甲基)、1-萘甲基、2-萘甲基或三苯基甲基(三苯甲基)，它们各自可以被选自以下的一个或多个基团任选地取代：烷基、烷氧基、苯基、氨基、酰基氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基、羧基、烷氧基羰基、氨基甲酰基、N-烷基氨基甲酰基、N，N-二烷基氨基甲酰基、叠氮基、卤代烷基或卤素。优选地，这样的取代，如果存在，是在芳香环上。尤其优选的保护基是苄基或1-萘甲基，其两者被选自苯基、烷基或卤素的一个或多个基团任选地取代。更优选地，保护基选自未取代的苄基、未取代的1-萘甲基、4-氯苄基和4-甲基苄基。这些尤其优选和更优选的保护基的优势在于：氢解的副产物排他地是甲苯、1-甲基萘、或取代的甲苯或1-甲基萘衍生物。甚至是在数吨规模下，这样的副产物也可以经由蒸发和/或萃取过程容易地从水溶性寡糖产物中除去。
本申请的第一方面涉及一种用于制备6’-O-唾液乳糖或其盐的方法，所述方法包括以下步骤：
a)使通式3的受体
Figure BDA00002020582500091
通式3
其中，R1是-OR2，该R2是通过催化氢化可去除的基团，或者R1是-SR3，该R3选自任选取代的烷基、任选取代的芳基和任选取代的苄基，或者R1是-NH-C(R”)＝C(R’)2，其中各个R’彼此独立地是吸电子基团，其选自-CN，-COOH，-COO-烷基，-CO-烷基，-CONH2，-CONH-烷基和-CON(烷基)2，或者其中两个R’基团连接在一起并表示-CO-(CH2)2-4-CO-，并且因此与它们连接的碳原子一起形成5-7元的环烷-1，3-二酮，在该二酮中的亚甲基中的任一个任选地被1或2个烷基取代，并且R”是H或烷基，
R4是选自任选取代的酰基和被1-3个甲氧基取代的苄基，
与通式4的供体反应
Figure BDA00002020582500092
通式4
其中，R5是任选取代的酰基，
R8选自-NHAc和-NAc2，
Q是COO-烷基，该烷基任选地被取代，并且
X是离去基团，
从而产生通式2的化合物
Figure BDA00002020582500101
通式2
其中，R1、R4、R5、R8和Q是如上所定义的，
b)使通式2的化合物去保护从而生成通式1的化合物或其盐
Figure BDA00002020582500102
通式1
其中R1是如上所定义的，并且
c)随后将所述通式1的化合物或其盐转化为6’-O-唾液乳糖或其盐。
关于第一方面的步骤c)，对通式1的化合物或其盐进行处理以将它们异头地去保护，由此可以获得6’-O-唾液乳糖或其盐。尤其，可以通过以下方式生产6’-SL或其盐
i)当R1是-OR2，其中R2是通过催化氢化可去除的基团时，使通式1的化合物或其盐进行催化还原，
ii)当R1是-SR3，其中R3选自任选取代的烷基、任选取代的芳基和任选取代的苄基时，利用亲硫试剂使通式1的化合物或其盐进行活化，接着水解，
iii)当R1是-NH-C(R”)＝C(R’)2，其中各个R’是选自-CN、-COOH、-COO-烷基、-CO-烷基、-CONH2、-CONH-烷基和-CON(烷基)2的吸电子基团，或者其中两个R’基团连接在一起并且表示-CO-(CH2)2-4-CO-，并由此与它们连接的碳原子一起形成5-7元的环烷-1，3-二酮，在该二酮中的亚甲基中的任一个任选地被1-2个烷基取代，并且R”是H或烷基时，用胺或卤素对通式1的化合物或其盐进行处理，接着在中性或弱酸性pH下进行水解。
在一个实施方案中，R1表示-OR2，其中R2是通过催化氢化可去除的基团，即任选取代的苄基、二苯基甲基(二苯甲基)、1-萘甲基、2-萘甲基或三苯基甲基(三苯甲基)，它们的去除通常发生在质子溶剂或质子溶剂的混合物中。质子溶剂可以选自由以下各项组成的组：水、乙酸或C1-C6醇。也可以采用一种或多种质子溶剂与一种或多种可以部分或完全与该质子溶剂混溶的合适非质子有机溶剂(如THF、二
Figure BDA00002020582500111
烷、乙酸乙酯、丙酮等)的混合物。水、一种或多种C1-C6醇或水和一种或多种C1-C6醇的混合物优选用作溶剂系统。也可以使用含任何浓度的糖衍生物的溶液或糖衍生物与所用溶剂的悬浮液。反应混合物在10-100℃的温度范围，优选在20-60℃，在1-50bar的氢气氛中在催化剂如钯、阮内镍或任何其他合适金属催化剂(优选碳负载钯或钯黑)存在下搅拌，直到达到反应完成。基于糖的重量，催化剂金属浓度通常为0.1％至10％。优选地，催化剂浓度为0.15％至5％，更优选0.25％至2.25％。当氢从环己烯、环己二烯、甲酸或甲酸铵原位产生时，也可以进行转移氢化。添加有机或无机碱/酸和/或碱性和/或酸性离子交换树脂也可以用于改善氢解的动力学。当卤素取代基存在于这些前体的取代苄基部分上时，尤其优选使用碱性物质。优选的有机碱包括但不限于三乙胺、二异丙基乙胺、氨水、氨基甲酸铵、二乙胺等。优选的有机/无机酸包括但不限于甲酸、乙酸、丙酸、氯乙酸、二氯乙酸、三氟乙酸、HCl、HBr等。上述条件使得溶剂去除简单、方便且准确，从而产生纯的6’-SL。可以使用常规操作程序将6’-SL及其盐以晶体、无定形固体、浆状体(syrupy)形式或浓水溶液从反应混合物中分离。
在生产6’-O-唾液乳糖或盐的另一个实施方案中，在通式1中，R1是-SR3并且R3是任选取代的烷基、任选取代的芳基或任选取代的苄基。硫苷典型地充当苷化反应中的供体，由此在水存在下进行苷化反应，导致形成相应的还原糖。在典型的糖基化中，根据通式1的硫苷被溶解在水或含水的偶极非质子溶剂中，接着加入亲硫活化剂如汞(II)盐、Br2、I2、NBS、NIS、三氟甲磺酸或三氟甲磺酸盐或其混合物。活化的中间体容易地与存在于反应环境中的水反应并产生6’-O-唾液乳糖或其盐。
在另一个实施方案中，可以通过去除通式1的化合物的无环插烯胺基(其中R1是-NH-C(R”)＝C(R’)2，并且R’是选自-CN、-COOH、-COO-烷基、-CO-烷基、-CONH2、-CONH-烷基、-CONH-苄基、-CON(烷基)2和-CON(苄基)的吸电子基团，或者两个R’基团连接在一起表示-CO-(CH2)2-4-CO-，并且由此与相邻碳原子一起形成5-7元的环烷-1，3-二酮且亚甲基中的任一个可以被1或2个烷基取代，并且R”是H或烷基)来形成6’-O-唾液乳糖及其盐。可以通过用氨基化合物或卤素处理来分解烯胺结构。用于该反应的溶剂包括但不限于甲醇、乙醇、水、乙酸、乙酸乙酯等，并且也可以采用它们的混合物。用于氨基交换的氨基化合物通常是含水或无水的伯胺，如乙胺、丙胺、丁胺等；肼类如水合肼、乙酸肼等；羟胺衍生物；氨水溶液或无水状态的氨气。也可以通过使用卤素如氯气或溴来裂解无环插烯胺。两种类型的反应都在异头位置处生成胺官能度，其在中性或弱酸性pH(pH≈4-7)下水解容易地提供6’-O-唾液乳糖。
如果在上述反应中获得6’-O-唾液乳糖，则它被转化为其盐，并且如果需要，将6’-O-唾液乳糖的盐转化为6’-O-唾液乳糖的另一种盐。
在一个优选实施方案中，通式1的化合物中的R1是-OR2，该R2是通过催化氢化可去除的基团，优选选自苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基。
关于本申请第一方面的步骤b)，在根据通式2的化合物中，除了4’-OH，所有的官能团都被保护，该保护基常用于糖化学中。这些保护基可以相继地被去除，产生部分保护的三糖(参见下文)并在最后产生通式1的化合物或其盐，或者在一个步骤中直接产生通式1的化合物或其盐。如本文中使用的，去保护步骤的所有组合可以以任何顺序进行，由此选择去除它们所需的合适条件以及连续进行去保护步骤都落在技术人员能力范围之内。
根据一个实施方案，在第一方面的步骤b)中，通式1的化合物或其盐可以获自一组由通式2A表征的通式2的化合物
Figure BDA00002020582500131
通式2A
其中，R2是通过催化氢化可去除的基团，
R4和R5彼此独立地是任选取代的酰基，
R8选自-NHAc或-NAc2，并且
Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，
包括以下步骤：
a)碱催化的酯交换反应，接着进行碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成，或
b)碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成。
术语“碱催化的酯交换去保护”指这样的反应，其中来自羟基的酰基保护基在醇溶剂如甲醇、乙醇、丙醇、叔丁醇等中，在醇化物如NaOMe、NaOEt、KOtBu等存在下，在20-100℃温度下被除去。所述醇和醇化物应当相匹配。助溶剂如甲苯或二甲苯的使用可以是有益的以便控制产物的粒度以及避免凝胶形成。在此条件下，仅O-酰基可以容易地被去保护，并且当R8是-NAc2时，其中的一个乙酰基也被去除。可以对Q基团进行酯交换。在一个优选实施方案中，催化量的NaOMe被用于甲醇(Zemplén去-O-酰基化)。术语“碱性水解”通常指在水、醇或水-有机溶剂混合物中，在均相或多相反应条件下，在0-100℃的温度范围的碱催化水解。所选的碱通常是强碱，例如LiOH、NaOH、KOH、Ba(OH)2、K2CO3、碱离子交换树脂、氢氧化四烷基铵等。所述碱也可以以水溶液的形式使用。此条件影响O-酰基，当Q是酯时，其也被水解，并且当R8是-NAc2时，其中的一个乙酰基也被去除。在一个优选实施方案中，碱是NaOH并且溶剂是甲醇。
“任选的酸化”意在指，当在碱催化的酯交换去保护或碱性水解后需要通式1的化合物的酸形式时，可以进行酸化步骤。
“任选的盐形成”指，如果需要，将酸性形式的通式1的化合物转化为它的盐，该盐不同于在碱催化的酯交换去保护或碱性水解之后形成的盐。通式1的化合物的盐指缔合离子对，其由通式1的化合物的带负电荷的酸残基和阳离子以任何化学计量比例组成。如在本文内容中使用的，阳离子可以是带正电荷的原子或分子。阳离子可以是无机阳离子和有机阳离子。优选的无机阳离子是铵离子、碱金属离子、碱土金属离子和过渡金属离子，更优选Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Fe2+、Zn2+、Mn2+和Cu2+，最优选K+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Fe2+和Zn2+。带正电荷形式的碱性有机化合物可以是相关的有机阳离子。这样的优选带正电荷的有机分子是二乙胺、三乙胺、二异丙基乙基胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、咪唑、哌啶、哌嗪、吗啉、苄胺、1，2-乙二胺、甲葡胺、吡咯烷、胆碱、三-(羟甲基)-甲胺、N-(2-羟基乙基)-吡咯烷、N-(2-羟基乙基)-哌啶、N-(2-羟基乙基)-哌嗪、N-(2-羟基乙基)-吗啉、L-精氨酸、L-赖氨酸、具有L-精氨酸或L-赖氨酸单元的寡肽或在N-端上具有游离氨基的寡肽等，其都是以质子化的形式。通式1的化合物的无机和有机盐可以获自酸形式的通式1的化合物。用碱将在醇或醇/水中的游离酸的溶液的pH调至8，5-11；如果该碱是无机碱，则它可以选自碱金属、碱土金属以及过渡金属的氢氧化物、碳酸盐和碳酸氢盐。然后用醇稀释混合物并在真空下浓缩。然后过滤获得的浆液并用醇洗涤。
在一个优选实施方案中，通式2A的化合物(其中R2选自苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，R4选自异丁酰基、新戊酰基和任选取代的苯甲酰基，优选新戊酰基和苯甲酰基，R5是乙酰基，Q是-COOCH3并且-OR2为β型)被去保护。
根据另一个实施方案，在第一方面的步骤b)中，使属于通式2的化合物的通式2B的化合物
Figure BDA00002020582500141
通式2B
其中，R2是通过催化氢化可去除的基团，
R4是任选取代的酰基，条件是不包括乙酰基，并且
R8选自-NHAc和-NAc2，
进行选择性的酸性去保护以生成通式2C的化合物
Figure BDA00002020582500151
通式2C
其中，R2和R4是如上所定义的，
接着
a)碱催化酯交换反应，随后碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成，或
b)碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成
从而得到通式1的化合物或其盐。
通式2C的化合物可以以合适方式由化合物2B的化合物获得。本发明的发明人认识到，由于乙酰基比其他酰基对于酸性酯交换具有更高的反应性，所以当乳糖部分通过不同于乙酰基的酰基(R4是任选取代的酰基，条件是不包括乙酰基)保护时，唾液酸残基中的乙酰基(R5是乙酰基)可以被选择性地去除。去保护步骤可以在C1-6醇或C1-6醇的混合物，优选甲醇和乙醇中，在酸，通常是质子酸，其选自但不限于乙酸、三氟乙酸、HCl、甲酸、硫酸、高氯酸、草酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、阳离子交换树脂等，优选可以以催化量至过量存在的强无机酸存在下进行。水解可以在0至20℃的温度，优选在5-10℃下进行，直到TLC显示完全或接近完全反应，取决于温度、浓度和pH，所述反应耗时约2小时至3天。
在一个优选的实施方案中，-OR2为β型，R2是苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，R4选自异丁酰基、新戊酰基和任选取代的苯甲酰基，优选苯甲酰基，并且选择性的酸性去保护的酸催化剂是硫酸。
根据另一个实施方案，在第一方面的步骤b)中，一组由通式2D表征的通式2的化合物被去保护，
Figure BDA00002020582500161
通式2D
其中，R2是通过催化氢化可去除的基团，
R4是被1-3个甲氧基取代的苄基，
R5是任选取代的酰基，
R8选自-NHAc或-NAc2，并且
Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代所述去保护包括以下步骤：
a)碱催化的酯交换反应，其导致产生通式2D的另一种化合物，其中R2是如上所定义的，R4是被1-3个甲氧基取代的苄基，R5是H，R8是-NHAc并且Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，接着
aa)二氯二氰基苯醌(DDQ)或硝酸铈(IV)铵(CAN)介导的氧化，其导致产生通式2D的另一种化合物，其中R2是如上所定义的，R4和R5各自是H，R8是-NHAc，并且Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，接着碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成，或者
ab)碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成，其导致产生另一种通式2D的化合物，其中R2是如上所定义的，R4是被1-3个甲氧基取代的苄基，R5是H，R8是-NHAc并且Q是质子化或去质子化形式的-COOH，接着二氯二氰基苯醌(DDQ)或硝酸铈(IV)铵(CAN)介导的氧化从而得到通式1的化合物或其盐，
或者
b)二氯二氰基苯醌(DDQ)或硝酸铈(IV)铵(CAN)介导的氧化，其导致产生通式2D的另一种化合物，其中R2是以上的，R4是H，R5是任选取代的酰基，R8选自-NHAc和-NAc2并且Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，接着
ba)碱催化的酯交换反应随后碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成，或者
bb)碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成
从而得到通式1的化合物或其盐，
或者
c)碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成，其导致产生通式2D的另一种化合物，其中R2是如上所定义的，R4是被1-3个甲氧基取代的苄基，R5是H，R8是-NHAc并且Q是质子化或去质子化形式的-COOH，接着二氯二氰基苯醌(DDQ)或硝酸铈(IV)铵(CAN)介导的氧化，从而得到通式1的化合物或其盐。
在通式2D的某些化合物中，术语“质子化或去质子化形式的-COOH”意在指，通式2D的那些化合物中的羧基处于酸性(质子化)形式，由此表示它们是酸，或者通式2D的那些化合物中的羧基处于羧酸根(-COO-)形式，表示它们是盐，在该盐中带正电荷的抗衡离子可以是无机或有机阳离子。这些无机和有机阳离子是如上所述的。
受保护的6’-O-唾液乳糖可以包含在乳糖部分上的1、2或3个甲氧基取代的苄基，优选对甲氧基苄基(R4＝PMB)。总所周知的是，甲氧基取代的苄基醚比未取代的苄基醚更容易被氧化裂解，因此如果苷元或Q包含苄基，则选择性去保护是可能的。典型的氧化剂是二氯二氰基苯醌(DDQ)和硝酸铈(IV)铵(CAN)，反应在有机溶剂中、在水存在下进行，优选在二氯甲烷或乙腈中进行，导致甲氧基-苄基醚保护基的顺利去除。
关于本发明第一方面的步骤a)，通式3的化合物(R1是-OR2，该R2是通过催化氢化可去除的基团，或者R1是-SR3，该R3是任选取代的烷基、任选取代的芳基或任选取代的苄基，或者R1是-NH-C(R”)＝C(R’)2，其中每个R’彼此独立地是选自-CN、-COOH、-COO-烷基、-CO-烷基、-CONH2、-CONH-烷基和-CON(烷基)2的吸电子基团，或者其中两个R’基团连接在一起并且表示-CO-(CH2)2-4-CO-并由此与它们连接的碳原子一起形成5-7元的环烷-1，3-二酮，在该二酮的亚甲基中的任一个任选地用1或2个烷基取代，R”是H或烷基，R4＝任选取代的酰基或被1、2或3个甲氧基取代的苄基)与根据通式4的化合物(R5＝任选取代的酰基，R8＝-NHAc或-NAc2，Q是-COO-烷基，所述烷基任选地被取代，X是离去基团)反应，以获得通式2的化合物(R4是任选取代的酰基或被1-3个甲氧基取代的苄基，R5是任选取代的酰基，R8是-NHAc或NAc2并且Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代)(方案2)。
Figure BDA00002020582500181
通式3通式4通式2
方案2
通式3的乳糖受体与通式4的唾液酸基供体的偶联可以在非质子溶剂或非质子溶剂的混合物中、在活化剂(促进剂或催化剂)存在下进行，以导致产生所需的糖基化产物。新的糖苷间键通过根据通式4的供体的离去基团X与根据通式3的受体的6’-OH基团的亲核置换而形成。两个参与的反应物中的其他官能团必须用保护基屏蔽。关于立体选择性必须尤其注意。立体化学结果可能受到如以下不同因素影响：在与供体的异头中心邻接的环碳处是否存在参与基团，离去基团X的性质，溶剂效应，供体和受体上的保护基的性质，促进剂或催化剂的性质，温度，压力，供体和受体之间的空间相互作用等。在唾液酸衍生物的情况中，一系列用于糖基化的异头活化被开发并且是唾液酸化学领域技术人员可以利用的。这些方法通过综述广泛地讨论[6]。作为举例，根据X基团，以下简要提及一些总的考虑。
糖基卤化物(X指F、Cl、Br、I)经常被用于糖基化反应，这是由于它们的易于获得性和令人满意的反应性。典型地，对于亲核置换，异头卤化物遵循F＜Cl＜Br＜I的反应性次序。糖基化反应通常通过重金属离子，主要是汞或银以及路易斯酸促进。
糖基三氯乙酰亚胺酯(X＝-OC(＝NH)CCl3)可以容易地通过在无机或有机碱催化下将游离的异头OH添加到三氯乙腈来制备。在典型的苷化反应中，催化量的路易斯酸如三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯或BF3-醚合物促进偶联。
硫苷(X表示烷硫基或苯硫基)可以通过亲硫促进剂如汞(II)盐、Br2、I2、NBS、NIS、三氟甲磺酸、三氟甲磺酸酯盐、BF3-醚合物、三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯、二甲基-甲硫基锍三氟甲磺酸酯、苯硒三氟甲磺酸酯、高氯酸双可力丁碘、四丁基碘化铵或其混合物活化，在缩合反应中，优选通过Br2、NBS或NIS活化。
糖基亚磷酸酯供体(X是-O-P-(O-[烷基或苄基])2)可以用NBS、NIS、TMSOTf、TfOH、Tf2O、ZnCl2、BF3·OEt2、LiClO4、DTBPI、Bu4NI、AgClO4、LiClO4、Sn(OTf)2或它们的混合物促进，优选用TMSOTf促进。
在糖基化反应中，首先对糖基乙酸酯(X表示-OAc)进行亲电活化，提供反应性中间体，然后用亲核OH-受体处理。所选的典型活化剂是布朗斯台德酸(如TsOH、HClO4、氨基磺酸)、路易斯酸(如ZnCl2、SnCl4、三氟甲磺酸酯盐、BF3-醚合物、三苯甲基高氯酸酯、AlCl3、三氟甲磺酸酐)及它们的混合物。
根据一种优选方法，将一组由通式4A表征的通式4的化合物用于偶联反应。
Figure BDA00002020582500191
通式4A
其中，R5是任选取代的酰基，Q是-COO-烷基，该烷基是任选取代的并且R7是取代的苄基。所述反应在非质子溶剂，优选在二氯甲烷、THF、甲苯、乙腈或其混合物中，更优选在二氯甲烷/乙腈混合物中，在-78-0℃的温度，在促进剂如NBS、NIS、TMSOTf、TfOH、Tf2O、ZnCl2、BF3·OEt2、LiClO4、DTBPI、Bu4NI、AgClO4、LiClO4、Sn(OTf)2或其混合物，优选TMSOTf存在下进行。
在一个优选的实施方案中，所述供体和受体被溶解在以1∶1至1∶5的比率的THF/DCM的溶剂混合物中，并将温度保持在-40℃至-10℃。加入所选的促进剂(其包括但不限于TMSOTf、TfOH、BF3·Et2O、DTPI、四丁基碘化铵等)并且搅拌直到反应完成。
在另一个优选的实施方案中，所述供体和受体被溶解在以1∶1.7至1∶5的比率的CH3CN/DCM的溶剂混合物中并将温度保持在-40℃至-30℃。加入所选的促进剂(其包括但不限于TMSOTf、TfOH、BF3·Et2O、DTPI、四丁基碘化铵等)并且搅拌直到反应完成。
在另一个优选的实施方案中，供体和受体被溶解在优选以1∶1∶1的比率的Tol/CH3CN/DCM的溶剂混合物中并将温度保持在-40℃至-20℃。加入所选的促进剂(其包括但不限于TMSOTf、TfOH、BF3·Et2O、DTPI、四丁基碘化铵等)并且搅拌直到反应完成。
在一种优选的通式4A的供体中，R5是乙酰基，R7是4-氯苄基或4-溴苄基，并且Q是-COOMe。
关于从通式3的受体和通式4的供体开始制备通式2的化合物，另一个优选的实施方案包括使用另一组的由通式4B表征的通式4的化合物，
Figure BDA00002020582500201
通式4B
其中R5是任选取代的酰基，Q是-COO-烷基，该烷基被任选取代，并且R6选自C2-6烷基、C3-6环烷基和任选取代的苄基。糖基化在非质子溶剂如氯仿、二氯甲烷、甲苯、二
Figure BDA00002020582500202
烷、THF、乙腈或其混合物中，优选在氯仿或二氯甲烷中，在NIS、NBS、Br2、三氟甲磺酸、三氟甲磺酸银、BF3-醚合物或其混合物的活化下进行。
在一种优选的通式4B的供体中，R5是乙酰基，R6选自乙基、异丙基、叔丁基、苄基和环己基，并且Q是-COOMe。
一个进一步优选的实施方案涉及通式4C的化合物在唾液酸化反应中的用途。
Figure BDA00002020582500203
通式4C
其中R5是任选取代的酰基，并且Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代。糖基化在非质子溶剂如氯仿、二氯甲烷、甲苯、二
Figure BDA00002020582500211
烷、THF、乙腈或其混合物中，优选在氯仿或二氯甲烷中，在布朗斯台德酸或路易斯酸的活化下进行。其中R5是乙酰基而Q是-COOMe的通式4C的化合物是优选选择的供体。
在一种优选的通式4C的供体中，R5是乙酰基，而Q是-COOMe。
在另一个实施方案中，根据通式2的化合物的合成包括使用通式3A的化合物
通式3A
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，并且
R4选自被1-3个甲氧基取代的苄基，和任选取代的酰基，条件是不包括乙酰基。
在一个优选的实施方案中，-OR2为β型，R2选自苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，并且R4选自异丁酰基、新戊酰基和苯甲酰基。
由于唾液酸结构基序的高酸性以及α-O-唾液酸基键(sialyl linkage)的低水解稳定性，所以6’-O-唾液乳糖和若干酸性形式的6’-O-唾液乳糖中间体在水溶液中具有有限的化学稳定性。例如，在室温、在水溶液中，6’-O-唾液乳糖通过自催化分解为唾液酸和乳糖。唾液乳糖自身在水溶液中的低酸稳定性是分离的主要障碍，并且是目标在于制备6’-O-唾液乳糖的酶或化学技术的主要障碍。此外，6’-O-唾液乳糖不是结晶的，这阻碍了对于制备高品质6’-O-唾液乳糖产品所需的有效纯化方法的开发。
本发明包括提供新的6’-O-唾液乳糖的盐。术语“6’-O-唾液乳糖的盐”指缔合离子对，其由6’-O-唾液乳糖的带负电荷的酸残基和阳离子以任何化学计量比例组成。如本文内容中使用的，阳离子是带正电荷的原子或分子。阳离子可以是无机阳离子和有机阳离子。优选的无机阳离子是铵离子、碱金属离子、碱土金属离子和过渡金属离子，更优选Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Fe2+、Zn2+、Mn2+和Cu2+，最优选K+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Fe2+和Zn2+。带正电荷形式的碱性有机化合物可以是相关的有机阳离子。这样的优选带正电荷的对应物是二乙胺、三乙胺、二异丙基乙基胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、咪唑、哌啶、哌嗪、吗啉、苄胺、1，2-乙二胺、甲葡胺、吡咯烷、胆碱、三-(羟甲基)-甲胺、N-(2-羟基乙基)-吡咯烷、N-(2-羟基乙基)-哌啶、N-(2-羟基乙基)-哌嗪、N-(2-羟基乙基)-吗啉、L-精氨酸、L-赖氨酸、具有L-精氨酸或L-赖氨酸单元的寡肽或在N-端上具有游离氨基的寡肽等，其都是以质子化的形式。这样的盐形成可以用来改变作为整体的复合分子的性质，如稳定性、与赋形剂的相容性、可溶性和形成晶体的能力。
因此，提供了6’-O-唾液乳糖的Zn2+盐作为新型无机6’-SL盐：
Figure BDA00002020582500221
此外，本申请涉及提供式I的6’-SL有机盐
Figure BDA00002020582500222
式1
其中A表示任何有机碱而m是整数。
作为有机碱的化合物A优选包括胺类碱如二乙胺、三乙胺、二异丙基乙基胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、咪唑、哌啶、哌嗪、吗啉、苄胺、1，2-乙二胺、甲葡胺、吡咯烷、胆碱、三-(羟甲基)-甲胺、N-(2-羟基乙基)-吡咯烷、N-(2-羟基乙基)-哌啶、N-(2-羟基乙基)-哌嗪、N-(2-羟基乙基)-吗啉、L-精氨酸、L-赖氨酸、具有L-精氨酸或L-赖氨酸单元的寡肽或在N-端上具有游离氨基的寡肽等。当与6’-SL相关时，这些碱是质子化形式的。尤其优选的有机胺选自二乙胺、三-(羟甲基)-甲胺、乙醇胺和胆碱。
6’-SL的无机和有机盐可以从酸性6’-SL获得。利用所选的碱将该游离酸在醇或醇/水中的溶液的pH调至8，5-11；如果碱是无机碱，则它可以选自金属氢氧化物、碳酸盐和碳酸氢盐。然后用醇稀释该混合物并在真空下浓缩。然后过滤获得的浆液并用醇洗涤。
在一种备选方式中，使通式1的化合物(其中R1是-OR2，该R2是通过催化氢化可去除的基团(参见上文))的无机或有机盐进行催化氢解，从而产生相应的6’-SL的无机或有机盐。
着重强调的是，所述新型6’-O-唾液乳糖盐可以是结晶的，它们可以被认为是单独的化学个体如α-异头物或β-异头物，或甚至是其异头混合物。它们可以以无水、水合以及溶剂化形式存在。此外，所述新型6’-SL盐可以作为非结晶固体、浆状体或浓水溶液被分离。
6’-O-唾液乳糖和唾液酸化人乳寡糖是极为重要的，这直接与它们独特的生物学活性如抗菌、抗病毒、免疫系统和认知发育增强活性相关。发现唾液酸化的人乳寡糖，包括6’-SL，任选地结合含人乳寡糖的其他唾液酸和/或N-乙酰基乳糖胺和/或海藻糖，在人肠道系统中充当益生元，有助于形成和维持肠内菌群。此外，它们也已被证实具有抗炎作用，并且因此这些化合物，作为合成构成的和天然存在的化合物及其盐，是营养工业中有吸引力的组分，其用于制备例如婴儿配方食品、婴儿谷物食品、临床婴儿营养产品、学步儿童配方食品，或作为用于儿童、成人、老年人或哺乳期妇女的膳食补充剂或保健功能食品。因此，根据本发明的6’-SL Zn2+盐和/或6’-SL有机盐适合于药物和营养用途。
在另一方面中，本发明提供药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分的6’-SL Zn2+盐和/或6’-SL有机盐以及一种或多种药用载体，所述药用载体包括但不限于添加剂、佐剂、赋形剂和稀释剂(水、明胶、滑石、糖类、淀粉、阿拉伯树胶、植物胶、植物油、聚亚烷基二醇、调味剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、润滑剂、着色剂、填充剂、湿润剂等)。合适的载体描述于最新版的Remington′s Pharmaceutical Sciences(本领域中的一个标准参考文献)中。用于给药的剂型包括例如，片剂、粉剂、粒剂、丸剂、混悬剂、乳化剂、浸剂、胶囊剂、糖浆剂、注射剂、液体、酏剂、浸膏和酊剂。
在一个进一步的实施方案中，根据本发明的6’-SL Zn2+盐和/或6’-SL有机盐被用于制备药物组合物。药物组合物可以通过本领域中任何已知的通常方式生产，例如描述于最新版的Remington′s PharmaceuticalSciences(本领域中的一个标准参考文献)中的那些。
在一个进一步的实施方案中，提供了营养制剂如食品、饮料或饲料，所述营养制剂包含选自根据本发明的6’-SL Zn2+盐和/或6’-SL有机盐中的一种或多种6’-SL盐。该营养制剂也可以包含可食用的微量营养物、维生素和矿物质。这样的成分的量可以根据该制剂是否意在用于正常、健康的婴儿、儿童、成人或具有特殊需要的对象(例如患有代谢疾病)而变化。微量营养物包括例如可食用的油、脂肪或脂肪酸(如椰油、豆油、单酸甘油酯、甘油二酯、棕榈油精、葵花油、鱼油、亚油酸、亚麻酸等)、糖类(如葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糊精、淀粉、水解玉米淀粉等)和来自酪蛋白、大豆、乳清或脱脂乳的蛋白，或这些蛋白的水解产物，但也可以使用来自其他来源的蛋白(完整的或水解的)。维生素可以选自由以下各项组成的组：维生素A、B1、B2、B5、B6、B12、C、D、E、H、K、叶酸、肌醇和烟酸。营养配方可以包含以下矿物质和痕量元素：Ca、P、K、Na、Cl、Mg、Mn、Fe、Cu、Zn、Se、Cr或I。
在一个优选实施方案中，所述营养制剂是婴儿配方食品。婴儿配方食品是指这样的食物，其用于处于生命的头4-6个月期间的婴儿的特殊营养用途并且自身满足婴儿的营养需要。它可以包含一种或多种益生菌双歧杆菌物种、益生元如果寡糖和半乳寡糖，来自酪蛋白、大豆、乳清或脱脂乳的蛋白、糖类如乳糖、蔗糖、麦芽糊精淀粉或其混合物、脂类(例如棕榈油精、葵花油、红花油)以及日常饮食中必需的维生素和矿物质。婴儿配方食品包含的根据本发明的6’-SL Zn2+盐和/或6’-SL有机盐的总量可以为0.1-3.0g/100g配方食品。
在另一个优选的实施方案中，营养制剂可以是包含根据本发明的6’-SL Zn2+盐和/或6’-SL有机盐的食物补充补剂。该食物补充补剂可以包含一种或多种益生元，其量足以在个体中(优选在儿童和成人中)实现所需的效果。该食物补充补剂还可以包含维生素、矿物质、痕量元素和其他微量营养物。该食物补充剂可以为例如片剂、胶囊剂、锭剂或液体的形式。该补充剂可以包含选自但不限于以下的常规添加剂：粘合剂、包衣、乳化剂、增溶剂、包封剂、成膜剂、吸附剂、载体、填充剂、分散剂、湿润剂、胶冻剂(jellifying agent)、胶凝剂等。6’-SL Zn2+盐和/或6’-SL有机盐的日剂量为0.1至3.0g。
根据一个更优选的实施方案，该食物补充剂是消化健康功能食品，因为6’-SL Zn2+盐和/或6’-SL有机盐的给予对消化健康产生有益作用。消化健康功能食品是一种加工食品，其使用的目的是通过以片剂、胶囊、粉剂等形式的作为生理功能成分或组分的根据本发明的6’-SL Zn2+盐和/或6’-SL有机盐来增强并保持消化健康。不同的术语如膳食补充剂、营养食品、设计食品、健康产品也可以用于指代功能食品。
在进一步的实施方案中，根据本发明的6’-SL Zn2+盐和/或6’-SL有机盐被用于制备营养制剂，所述营养制剂包括食物、饮料和饲料，优选婴儿配方食品、食物补充剂和消化健康功能食品。该营养制剂可以以任何常规方式制备。
认为通式1、2、3和4的化合物对于6’-SL是有价值的合成中间体。本发明的发明人惊人地发现通式1、2、3和4的化合物中的一部分可以以晶体形式获得。结晶或再结晶是从反应混合物分离产物、从污染物分离产物并获得纯物质的最简单和最廉价的方法之一。利用结晶的分离或纯化使得整个技术过程可靠且成本有效，因此与其他程序相比，它具有优势且吸引人。本发明在6’-SL的大规模生产中具有极达商业价值，提供高纯度的中间体，这是通过任何其他已知纯化方法所不能实现的。虽然一部分其他中间体没有显示出结晶的能力，但是它们可以在清洁、高产率且较少副产物形成的反应中制备，其中常规操作(萃取、蒸发、沉淀等)程序已经足以获得高纯度产品，其在没有进一步纯化下被用于下一个步骤中。
因此，提供了作为有价值的6’-SL中间体的一组通式1的化合物或其盐，即通式1A的化合物和通式1B的化合物。
Figure BDA00002020582500261
通式1A
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，优选苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基并且OR2为β型。
Figure BDA00002020582500262
通式1B
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，并且其是以选自以下的盐形式：Zn2+、K+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Fe2+、Mn2+、Cu2+和有机盐。
着重强调的是，由通式1A和1B表征的新型衍生物可以被认为是单独的化学个体如α异头物或β异头物，优选β异头物，或甚至是α异头物和β异头物的异头混合物。通式1A和1B的新型6’-SL中间体可以表征为结晶固体、油状物、浆状体、沉淀非晶体物质或喷雾干燥产物，优选作为结晶固体。如果是晶体，通式1A和1B的化合物可以以无水晶体形式或以通过在其晶体结构中结合一个或若干个水分子而以水合晶体形式存在。类似地，由通式1A和1B表征的新型化合物可以作为在其晶体结构中结合有配体如有机分子和/或离子的晶体物质存在。
作为盐的通式1B的化合物盐指，缔合离子对由通式1B的化合物的带负电荷的酸残基和阳离子以任何化学计量比例组成。阳离子可以是K+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Fe2+、Zn2+、Mn2+和Cu2+，最优选K+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Fe2+和Zn2+。带正电荷形式的碱性有机化合物也可以是相关的有机阳离子。这样的优选带正电荷的有机分子有二乙胺、三乙胺、二异丙基乙基胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、咪唑、哌啶、哌嗪、吗啉、苄胺、1，2-乙二胺、甲葡胺、吡咯烷、胆碱、三-(羟甲基)-甲胺、N-(2-羟基乙基)-吡咯烷、N-(2-羟基乙基)-哌啶、N-(2-羟基乙基)-哌嗪、N-(2-羟基乙基)-吗啉、L-精氨酸、L-赖氨酸、具有L-精氨酸或L-赖氨酸单元的寡肽或在N-端上具有游离氨基的寡肽等，其都是为质子化形式。
一个优选的实施方案涉及通式1B的化合物，其中R2是苄基，-OR2为β型并且所述盐选自Zn2+盐和有机盐，并且所述有机盐优选选自乙醇铵、二乙基铵、三-(羟甲基)-甲基铵和胆碱盐。
本发明提供的通式1A和1B的新型化合物可以通过使用本领域中已知的化学/酶方法用于制备6’-SL本身以及其他6’-SL衍生物。通式1A和1B的新型化合物也可以用作用于生产/制备大量人乳寡糖的高级前体/中间体。新型通式1A和1B的化合物也可以被认为是用于合成适用于治疗/营养用途的复杂寡糖/糖缀合物的有价值的中间体。
提供了通式2A的化合物
Figure BDA00002020582500271
通式2A
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，
R4和R5彼此独立地是任选取代的酰基，
R8选自-NHAc和-NAc2，并且
Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代。
着重强调的是，由通式2A表征的新型衍生物可以被认为是单独的化学个体如α异头物或β异头物，优选β异头物，或甚至是α异头物和β异头物的异头混合物。通式2A的新型6’-SL中间体可以表征为结晶固体、油状物、浆状体、沉淀非结晶物质或喷雾干燥产物，优选作为结晶固体。如果是晶体，通式2A的化合物可以以无水晶体形式或通过在其晶体结构中结合一个或若干个水分子而以水合晶体形式存在。类似地，由通式2A表征的新型化合物可以作为在其晶体结构中结合有配体如有机分子和/或离子的晶体物质存在。
尤其优选这样的通式2A的化合物，其中-OR2为β型，R2选自苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，R4选自异丁酰基、新戊酰基和任选取代的苯甲酰基，优选新戊酰基和苯甲酰基，R5是乙酰基，Q是-COOCH3。
本发明提供的通式2A的新型化合物可以通过使用本领域中已知的化学/酶方法用于制备6’-SL本身以及其他6’-SL衍生物。通式2A的新型化合物也可以用作用于生产/制备大量人乳寡糖的高级前体/中间体。通式2A的新型化合物也可以被认为是用于合成适用于治疗/营养用途的复杂寡糖/糖缀合物的有价值的中间体。
进一步优选的通式2的化合物是通式2C的化合物
Figure BDA00002020582500281
通式2C
其中-OR2为β型，R2是通过催化氢化可去除的基团，优选为苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，并且
R4选自异丁酰基、新戊酰基和任选取代的苯甲酰基，优选苯甲酰基。
着重强调的是，由通式2C表征的新型衍生物可以被认为是单独的化学个体如α异头物或β异头物，优选β异头物，或甚至是α异头物和β异头物的异头混合物。通式2C的新型6’-SL中间体可以表征为结晶固体、油状物、浆状体、沉淀非结晶物质或喷雾干燥产物，优选作为结晶固体。如果是晶体，通式2C的化合物可以以无水晶体形式或通过在其晶体结构中结合一个或若干个水分子而以水合晶体形式存在。类似地，由通式2C表征的新型化合物可以作为在其晶体结构中结合有配体如有机分子和/或离子的晶体物质存在。
本发明提供的通式2C的新型化合物可以通过使用本领域中已知的化学/酶方法用于制备6’-SL本身以及其他6’-SL衍生物。通式2C的新型化合物也可以用作用于生产/制备大量人乳寡糖的高级前体/中间体。通式2C的新型化合物也可以被认为是用于合成适用于治疗/营养用途的复杂寡糖/糖缀合物的有价值的中间体。
本申请的另一方面涉及提供通式2D的化合物
Figure BDA00002020582500291
通式2D
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，
R4选自被1-3个甲氧基取代的苄基和H，
R5选自任选取代的酰基和H，
R8选自-NHAc和NAc2，并且
Q选自-COO-烷基，该烷基被任选地取代，和为质子化或去质子化形式的-COOH，
条件是如果Q是质子化或去质子化形式的-COOH并且R8是-NHAc，则R4和R5两者不能同时是H。
着重强调的是，由通式2D表征的新型衍生物可以被认为是单独的化学个体如α异头物或β异头物，优选β异头物，或甚至是α异头物和β异头物的异头混合物。通式2D的新型6’-SL中间体可以表征为结晶固体、油状物、浆状体、沉淀非结晶物质或喷雾干燥产物，优选作为结晶固体。如果是晶体，通式2D的化合物可以以无水晶体形式或通过在其晶体结构中结合一个或若干个水分子而以水合晶体形式存在。类似地，由通式2D表征的新型化合物可以作为在其晶体结构中结合有配体如有机分子和/或离子的晶体物质存在。
在一个优选的实施方案中，-OR2为β型，R2选自苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，R4和R5是H，R8是-NHAc并且Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，优选-COOMe。
本发明提供的通式2D的新型化合物可以通过使用本领域中已知的化学/酶方法用于制备6’-SL本身以及其他6’-SL衍生物。通式2D的新型化合物也可以用作用于生产/制备大量人乳寡糖的高级前体/中间体。通式2D的新型化合物也可以被认为是用于合成适用于治疗/营养用途的复杂寡糖/糖缀合物的有价值的中间体。
需要强调的是，通式4A的化合物是新的。因此，本发明提供通式4A的化合物
Figure BDA00002020582500301
通式4A
其中R5是任选取代的酰基，Q是-COO-烷基，该烷基被任选地取代的并且R7是取代的苄基。在一个优选实施方案中，R5是乙酰基，Q是-COOCH3并且R7是取代的苄基，优选在位置4被氯或溴取代。
通式4A的化合物可以被认为是以β异头形式的晶体物质。它们是稳定的，可以长期储存而不发生显著分解，可以在糖基化反应中容易地被活化并且显示极好的α选择性。因为已知其未取代的亚磷酸苄酯对应物不是固体，所以根据本申请的通式4A的化合物在唾液酸化反应中具有明显有利的应用性。
因此，本发明提供通式4A的化合物在合成唾液寡糖(sialooligosaccharide)，优选唾液酸化人乳寡糖中的用途。这样的唾液酸化HMO例如是6’-唾液乳糖、3’-唾液乳糖、3’-唾液酸基-3-岩藻糖基乳糖、二唾液酸基乳酰-N-四糖、二唾液酸基单岩藻糖基乳酰-N-六糖、唾液酸基乳酰-N-四糖a、唾液酸基乳酰-N-四糖b、唾液酸基乳酰-N-四糖c、唾液酸基乳酰-N-岩藻五糖II、单岩藻糖基单唾液酸基乳酰-N-六糖I、单唾液酸基乳酰-N-新六糖I、单唾液酸基单岩藻糖基乳酰-N-新六糖。
本发明还涉及通式4A的化合物的制备(方案3.)。容易获得的根据通式9的唾液酸衍生物通过以下方式被亚磷酸酯化：直接用(R7O)2PY，其中Y是卤素或二烷基氨基，在叔胺优选Et3N存在下，在非质子溶剂优选二氯甲烷中；或者在两个连续步骤中：首先加入PCl3然后加入R7OH (R7是取代的苄基，优选卤代苄基或甲基苄基)。在两个步骤中，都需要叔胺碱以中和形成的盐酸：在第一步中咪唑是优选的碱，在第二步中Et3N是优选的碱。所使用的溶剂选自非质子溶剂，优选地，二氯甲烷是所选的溶剂。
通式9通式4A
方案3
需要强调的是，通式4B的化合物是新的。因此本发明提供通式4B的化合物
Figure BDA00002020582500312
通式4B
其中R5是任选取代的酰基，优选乙酰基，
R6选自C2-6烷基，C3-6环烷基和任选取代的苄基，优选选自乙基、异丙基、叔丁基、苄基和环己基，
Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，优选-COOMe。
通式4B的化合物可以被认为是处于α异头形式的晶体物质。它们是稳定的，可以长期储存而不发生显著分解，可以在糖基化反应中容易地被活化并且显示极好的α选择性。因为已知其类似物如甲基、苯基或4-甲基苯基硫苷不是固体，所以根据本申请的通式4B的化合物在唾液酸化反应中具有明显有利的应用性。
因此，本发明提供通式4B的化合物在合成唾液寡糖，优选唾液酸化人乳寡糖中的用途。这样的唾液酸化HMO例如是6’-唾液乳糖、3’-唾液乳糖、3’-唾液酸基-3-岩藻糖基乳糖、二唾液酸基乳酰-N-四糖、二唾液酸基单岩藻糖基乳酰-N-六糖、唾液酸基乳酰-N-四糖a、唾液酸基乳酰-N-四糖b、唾液酸基乳酰-N-四糖c、唾液酸基乳酰-N-岩藻五糖II、单岩藻糖基单唾液酸基乳酰-N-六糖I、单唾液酸基乳酰-N-新六糖I、单唾液酸基单岩藻糖基乳酰-N-新六糖。
本发明还涉及通式4B的化合物的制备。在酸(优选对甲苯磺酸)存在下，在升高的温度下，唾液酸酯或四-O-乙酰唾液酸酯可以利用乙酸异丙烯基酯乙酰化。然后所得的2，4，7，8，9-五-O-乙酰基-5-(N-乙酰基乙酰氨基)-3，5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-D-半乳酰-non-2-ulo吡喃糖苷酸酯与R6SH(R6是C2-6烷基、C3-6环烷基或任选取代的苄基，优选乙基、异丙基、叔丁基、苄基或环己基)，在路易斯酸(例如三氟化硼醚合物、TfOH、TMSOTf等)活化下在一种非质子溶剂或非质子溶剂(如二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、THF、二
Figure BDA00002020582500321
烷、乙腈、DMF等)的混合物中发生反应，从而形成通式4B的化合物。也可以使用活化的烷基硫代衍生物如三甲基甲硅烷基-SR6。根据不同的方法，在碱存在下，四乙酰唾液酰氯可以与R6SH偶联并且随后可以用乙酸异丙烯基酯将所得的硫苷进行N-乙酰化(方案4)。
Figure BDA00002020582500322
方案4
必须强调的是，现有技术中还没有提及在唾液酸化反应中使用通式4C的化合物。因此本发明提供通式4C的化合物，其用作唾液酸基供体
Figure BDA00002020582500331
通式4B
其中R5是任选取代的酰基，优选乙酰基，并且Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，优选-COOMe。
通式4C的化合物可以被认为是为β异头形式的晶体物质。它们是稳定的，可以长期储存而不发生显著分解，可以在糖基化反应中容易地被活化并且显示极好的α选择性。
因此，在一个更优选的实施方案中，本发明提供通式4C的化合物在合成唾液寡糖，优选唾液酸化人乳寡糖中的用途。这样的唾液酸化HMO例如是6’-唾液乳糖、3’-唾液乳糖、3’-唾液酸基-3-岩藻糖基乳糖、二唾液酸基乳酰-N-四糖、二唾液酸基单岩藻糖基乳酰-N-六糖、唾液酸基乳酰-N-四糖a、唾液酸基乳酰-N-四糖b、唾液酸基乳酰-N-四糖c、唾液酸基乳酰-N-岩藻五糖II、单岩藻糖基单唾液酸基乳酰-N-六糖I、单唾液酸基乳酰-N-新六糖I、单唾液酸基单岩藻糖基乳酰-N-新六糖。
要强调的是，通式3A的化合物是新的、结晶的，它们可以被认为是单独的化学个体如α异头物或β异头物，或甚至是它们的异头混合物，优选β异头物。它们可以以无水、水合以及溶剂化形式存在。
因此，本发明提供通式3A的化合物
Figure BDA00002020582500332
通式3A
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，并且
R4选自被1-3个甲氧基取代的苄基和任选取代的酰基，条件是不包括乙酰基。
在一个更优选的实施方案中，-OR2为β型，R2选自苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，并且R4选自异丁酰基、新戊酰基和苯甲酰基。
本发明的发明人认识到，当通式3A的化合物在唾液酸化反应中充当糖基受体时，乙酰基是不方便的保护基。在偶联条件下，经常发生乙酰基迁移而得到包含具有相似物理特性的物质的复杂混合物，这些化合物只能通过冗长和/或复杂和/或费力的技术例如色谱法分离。选择不倾向于或较不倾向于迁移的更大体积的酰基保护基导致产生这样的受体，其偶联产物几乎全部在苷化中形成，使得所需化合物的操作程序和分离过程(例如通过结晶)更简单、快速、有效且节省成本，这是在大规模生产或工业过程中最重要的关注点之一。
本发明的另一方面是制备由以上通式3A表征的糖基受体衍生物(方案5)。起始的O-乳糖苷可以通过Fischer苷化(在酸催化剂存在下，用相应的醇处理乳糖)容易地形成。然后，如此获得的通式6的O-乳糖苷在4’，6’位置处以已知方式被R9-CHO(R9＝任选被1-2个烷氧基或硝基取代的苯基)、二苯甲酮或其二-O-缩醛选择性保护，产生通式7的化合物，接着酰化或甲氧基-苄基化从而获得通式8的化合物。酰化可以利用酰基卤、酸酐、活性酯等在碱存在下以已知方式进行。典型的苄基醚形成通过以下方式进行：将适当的苄基卤化物(氯化物、溴化物或碘化物)以及NaH或粉末KOH或NaOH加入到惰性有机非质子溶剂如THF、二
Figure BDA00002020582500341
烷、DMF等中，甚至所述试剂苄基卤化物可以被用作溶剂。相转移催化条件也可以应用于苄基化，有机相溶剂选自以下组：芳香烃(甲苯、苯、二甲苯)和碱性水溶液，优选地50％NaOH或KOH溶液被用作水相。季铵或盐或冠醚可以作为催化剂添加，优选TBAI。通过酸性水解从通式8的化合物去除缩醛或缩酮类保护基，导致产生通式3A的化合物。
通式6通式7
通式8通式3A
方案5
在制备通式3A的化合物的一个优选实施方案中，β-苄基乳糖苷被用作起始物料(通式6中，R1＝OBn)。在进一步优选的实施方案中，苯甲醛-二甲基缩醛是用于保护4’，6’-位置的试剂。为了保护通式7的化合物中的游离羟基，新戊酰基和任选取代的苯甲酰基是优选的。在从通式8的化合物去除亚苄基缩醛的情况中，稀释的强无机酸、有机酸(例如链烷酸、磺酸)和H+型离子交换树脂优选作为酸催化剂，优选对甲苯磺酸，并且在溶剂之中，醇类、芳香烃、氯化烷烃或其混合物是优选的，优选DCM、甲醇或其混合物。
根据进一步的方面，以上定义和要求保护的通式3A的化合物可以用于制备6’-SL。通式3A的化合物作为受体容易地与任何合适的唾液酸基供体反应，从而产生以上根据通式2的经保护的6’-SL中间体，其然后可以通过如上所述的去保护操作转化为6’-SL及其盐。
在示例性实施方案的以下描述过程中，本发明的其他特征将变得明显，所述示例性实施方案是用于举例说明本发明而不是用于限制本发明。
实施例
实施例1.
Figure BDA00002020582500361
将无水唾液酸(100g，323mmol)和干燥的Amberlite IR-120(H+)离子交换树脂(100g)在MeOH(1500mL)中的混合物在室温搅拌15小时。滤出离子交换树脂并用MeOH洗涤(2x100mL)。洗液与滤液合并并浓缩至300mL。浓缩的残余物在室温在种晶后结晶。通过过滤收集晶体，得到73.8g(71％)唾液酸甲基酯。将母液浓缩(10.5g)并从MeOH(30mL)再结晶，产生7.4g(7％)唾液酸甲基酯。总收率81.2g(78％).
1H NMR(D2O)δ(ppm)：1.89(dd，1H，J＝13.0Hz，J＝11.4Hz)；2.03(s，3H)；2.28(dd，1H，J＝13.0Hz，J＝4.7Hz)；3.52(dd，1H，J＝8.9Hz，J＝3.0Hz)；3.59(dd，1H，J＝11.6Hz，J＝6.1Hz)；3.71(ddd，J＝8.9Hz，J＝2.5Hz，J＝11.6Hz)；3.82(dd，1H，J＝11.6Hz，J＝2.5Hz)；3.82(s，3H)；3.90(dd，1H，J＝10.1Hz，J＝10.0Hz)；3.98-4.10(m，2H，H-6，H-4)。
实施例2.
向无水唾液酸(100g，323mmol)在MeOH(1200ml)[0.03％水含量]的悬浮液中，加入在MeOH(50ml)中的8％HCl，并且将反应混合物在室温搅拌6小时。用三乙基胺(15ml)中和反应混合物并且将该清澈溶液浓缩至270mL。浓缩的残余物在室温在种晶后结晶2小时。通过过滤收集固体，得到104.9g(100％)。
实施例3.
Figure BDA00002020582500371
将唾液酸甲基酯(50g，155mmol)和乙酸酐(73ml，775mmol)在DCM(175mL)中的悬浮液在室温搅拌，然后在30分钟内逐滴加入70％高氯酸(1mL)。将添加期间，混合物的温度上升直至回流。将反应混合物在回流下搅拌2.5h，并且在此时之后，逐滴加入MeOH(7.5ml，185mmol)并且将反应混合物在室温再搅拌一小时。用DCM(175mL)稀释反应混合物并用水(3xS0mL)洗涤。合并的水相用DCM(2x100mL)萃取。合并的有机相用饱和NaHCO3(2x100mL)洗涤并蒸发。将残余物(59.6g)于50℃溶解在iBuOAc中并且将该混合物冷却至室温并静置过夜以完成结晶。通过过滤收集固体，产生39.2g(52％)四乙酰基唾液酸甲基酯。
1H NMR(C6D6)δ(ppm)：1.60，1.63，1.70，1.85，1.92(5s，15H)；2.19(dd，1H，J＝12.8Hz，J＝5.7Hz)；2.25(ddd，1H，J＝12.8Hz，J＝10.8Hz)；3.28(s，3H)；4.23(dd，1H，J＝12.4Hz，J＝7.6Hz)；4.26(dd，1H)；4.54(ddd，1H，J＝10.8Hz)；4.78(d，1H，J＝10.2Hz)；5.02(dd，1H，J＝12.4Hz，J＝2.0Hz)；5.26(ddd，1H，J＝10.8Hz，J＝5.7Hz，J＝10.5Hz)；5.61(ddd，1H，J＝2.0Hz，J＝7.6Hz)；5.64(dd，1H，J＝2.3Hz，J＝4.2Hz).
1H(CDCl3)δ(ppm)：1.91，2.02，2.03，2.11，2.15(5s，15H)；2.19(dd，1H，J＝12.8Hz，J＝11.4Hz)；3.26(ddd，1H，J＝12.8Hz，J＝5.4Hz)；3.86(s，3H)；4.03(dd，1H，J＝12.4Hz，J＝7.5Hz)；4.13-4.21(m，2H)；4.51(dd，1H，J＝12.4Hz，J＝2.4Hz)；5.22(ddd，1H，J＝11.4Hz，J＝5.4Hz，J＝9.5Hz)；5.25(ddd，1H，J＝2.4Hz，J＝7.5Hz，J＝5.6Hz)；5.36(dd，1H，J＝1.5Hz，J＝5.6Hz)；5.71(m，1H).
13C NMR：20.65，20.75，20.93，22.93，36.11，49.04，53.18，62.50，68.3，69.12，71.32，72.07，94.84，168.93，170.12，170.30，170.72，171.04，171.43
实施例4.
向唾液酸甲基酯(60.8g，188mmol)和乙酸酐(89ml，940mmol)在DCM(220mL)中的混合物中，在30分钟内逐滴加入高氯酸70％(1.22mL)。在添加期间，混合物的温度上升直至回流。将该反应混合物在回流下搅拌2.5h。随后，逐滴加入MeOH(9.2mL，225mmol)并且将反应混合物在室温再搅拌一小时。将该清澈溶液逐滴加入到Na2CO3(60.8g；573mmol)在DCM的悬浮液中并且将混合物在室温搅拌2小时。通过过滤去除剩余的固体并用DCM(2x50mL)洗涤。将合并的DCM相浓缩至150ml，加入iBuOAc(150mL)并且除去剩余的DCM，并留置结晶过夜。通过过滤收集晶体，产生65g(71％)四乙酰基唾液酸甲基酯。
实施例5.
Figure BDA00002020582500382
将咪唑(1.88kg)在DCM(20L)中的悬浮液冷却至5℃，加入PCl3(690ml)，接着加入Et3N(4.16L)。将浓浆液(heavy slurry)在0℃搅拌60min并且将四乙酸盐(2.59Kg)加入到DCM溶液(3升/kg)中。将温度设定为25℃并且将反应混合物搅拌3h。此后，加入作为固体的p-Cl-苄基醇(2.64Kg)并且将反应混合物再搅拌2h。将反应混合物转移到110L萃取容器中，用1N HCl(26L)中和并进行相分离。将有机相浓缩至油状物并保存在冰箱中直至第二天。将残余物溶解在15L的tBuOMe中并用水(3x 7L)洗涤；将有机相蒸发。将残余物溶解在i-Pr2O(5L)中并且之后该混浊液变为固体。将浆液滤出，用i-Pr2O(2x1.5L)洗涤固体并且在真空烘箱中干燥。(2.65Kg，纯度为95％)。
1H NMR δ(CDCl3)(ppm)：1.9-2.15(m，16H)；2.39(dd，1H，J＝4.9Hz，J＝13.00Hz)；3.75(s，3H)；3.85(dd，1H，J＝10.6Hz，J＝2.00Hz)；4.05(m，1H)；4.15(dd，J＝7.4，J＝12.4)；4.6(m，2H)；4.8-5(m，4H)；5.15(m，2H)；5.22(m，1H).
实施例6.
类似地制备：
实施例7.
Figure BDA00002020582500392
方法A：向N-乙酰基神经氨酸甲基酯四-O-乙酸酯(100g，0.2mol)在乙酸异丙烯基酯(300mL)中的悬浮液中加入TsOH，并将反应混合物在75℃(油浴)搅拌16h。反应在数分钟后变为清澈溶液。当TLC(甲苯/丙酮3/2)显示完成时，将混合物冷却，用500mL EtOAc稀释并进行如下洗涤：1x NaHCO3(500mL)、1x H2O(500mL)和1x盐水(300mL)。将残余物在真空中浓缩，重新溶解在EtOAc(200mL)中并在70℃加入庚烷(280mL)。将混合物冷却至0℃并且搅拌2h。通过过滤收集固体而产生102.12g(87％)。
方法B：向唾液酸甲基酯(100g)在乙酸异丙烯基酯(500mL)中的悬浮液中加入TsOH并将反应混合物在75℃(油浴)搅拌16h。反应在数小时后变为清澈溶液。当TLC(甲苯/丙酮3/2)显示完成时，将混合物冷却，用500mL EtOAc稀释并进行如下洗涤：1x NaHCO3(500mL)、1x H2O(500mL)和1x盐水(300mL)。将残余物在真空中浓缩，重新溶解在EtOAc(200mL)中并且在70℃加入庚烷(280mL)。将混合物冷却至0℃并搅拌2h。通过过滤收集固体而产生101.3g(85％)。
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.95-2.23(m，16H)；2.31(s，3H)；2.39(s，3H)；2.66(dd，1h，J＝13.5Hz，J＝6.3Hz)；3.77(s，3H)；4.15(m，2H)；4.35(dd，1H，J＝2.4Hz，J＝12.4Hz)；5.15(m，3H)；5.8(m，1H).
13C NMR(CDCl3)δ(ppm)：20.97，21.13，26.13，28.24，53.36，54.66，57.26，62.03，66.56，67.72，69.93，70.57，97.37，166.80，168.78，169.80，169.98，170.49，173.82
实施例8.
Figure BDA00002020582500401
向N，N-二乙酰基神经氨酸甲基酯五-O-乙酸酯(10g，17.4mmol)和RSH(2.2eq)在DCM(50mL)中的0℃冷溶液中加入BF3·OEt2(2.79mL，1.3eq)并将反应混合物在此温度下搅拌3h(在tBuSH的情况下，搅拌过夜)。加入NaHCO3水溶液以中和(25mL)酸并且分离各个相，然后用水洗涤有机相，并且将溶剂在真空中蒸发。残余物结晶如下。
R＝i-Pr(从i-Pr2O结晶)，收率75％，mp：110-111℃
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.25(d，3H，J＝6.7Hz)；1.35(d，3H，J＝7Hz)；1.9-2.2(m，13H)；2.3(s，3H)；2.4(s，3H)；2.65(dd，1H，J＝5.1Hz，J＝13.7Hz)；3.25(m，1H)；3.8(s，3H)；4.2(m，2H)；4.75(dd，1H，J＝2.3Hz，J＝12.4Hz)；5.1(m，1H)；5.25(dd，1H，J＝2.5Hz，J＝3Hz)；5.45(dd，1H，J＝9.9Hz，J＝2.25Hz)；5.8(m，1H).
13C NMR(CDCl3)δ(ppm)：20.88，20.90，21.04，21.11，24.83，25.01，26.13，28.11，34.29，39.18，52.98，57.56，62.59，67.09，69.16，69.68，72.57，85.43，169.18，169.63，170.35，170.56，170.58，173.75，174.49.
R＝Bn(从MeOH结晶)，收率79％
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.9-2.2(m，13H)；2.3(s，3H)；2.4(s，3H)；2.7(dd，1H，J＝5.1Hz，J＝13.9Hz)；3.5(s，3H)；3.8(s，2H)；4.2(m，2H)；4.7(dd，1H，J＝2.4Hz，J＝12.4Hz)；5.2(m，1H)；5.3(dd，1H，J＝2Hz，J＝4.2Hz)；5.55(dd，1H，J＝9.9Hz，J＝2Hz)；5.8(m，1H)；7.3(m，5H).
13C NMR(CDCl3)δ(ppm)：20.91，20.94，21.09，21.11，26.16，28.18，32.99，38.63，52.80，57.59，62.36，67.16，68.65，69.53，71.82，85.17，127.41，128.71，129.009，136.45，168.43，169.65，170.39，170.50，170.66，173.71，174.55.
R＝t-Bu(从i-Pr2O/庚烷结晶)，收率80％，mp：95-98℃
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.4(s，9H)；1.9-2.2(m，13H)；2.3(s，3H)；2.4(s，3H)；2.7(dd，1H，J＝4.8Hz，J＝13.5Hz)；3.8(s，3H)；4.2(m，2H)；4.7(dd，1H，J＝1.5Hz，J＝12.2Hz)；5.1(m，1H)；5.3(dd，1H，J＝2.8Hz，J＝3.2Hz)；5.55(dd，1H，J＝10Hz，J＝2.7Hz)；5.8(m，1H)；7.3(m，5H).
13C NMR(CDCl3)δ(ppm)：20.87，20.88，21.02，21.09，26.07，28.09，31.46，41.58，47.81，52.90，57.77，62.76，66.99，69.35，69.50，72.62，86.45，169.55，169.81，170.38，170.61，170.72，174.02，174.56.
R＝Et(从i-Pr2O结晶)，收率78％，mp：137-138℃
R＝环己基(从MeOH结晶)，收率78％，mp：146-147℃
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.2-1.8(m，12H)；1.9-2.2(m，13H)；2.3(s，3H)；2.4(s，3H)；2.65(dd，1H，J＝5.2Hz，J＝13.8Hz)；2.8(m，1H)；3.8(s，3H)；4.2(m，2H)；4.8(dd，1H，J＝2.1Hz，J＝12.4Hz)；5.05(m，1H)；5.25(t，1H，J＝2.3Hz)；5.45(dd，1H，J＝9.9Hz，J＝2.3Hz)；5.8(m，1H).
13C NMR(CDCl3)δ(ppm)：20.97，20.99，21.11，21.15，25.51，26.23，26.50，28.16，35.23，35.29，39.09，42.05，45.88，53.01，57.43，63.05，67.18，69.53，70.12，73.33，85.20，169.32，169.72，170.45，170.62，170.68，173.73，174.51.
实施例9.
Figure BDA00002020582500421
向β-苄基乳糖苷(700g，1.6mol)在DMF(5L)中的悬浮液中加入苯甲醛二甲基缩醛(389.5mL，2.6mmol，1.6eq.)和p-TsOH·H2O(31.5g，0.17mmol，0.1eq.)。然后将反应混合物加热至40-44℃达约22h，之后获得白色悬浮液。将其冷却至冰浴温度，加入i-Pr2O(4L)并将所得的悬浮液在此温度再搅拌11/2h。过滤此混合物并将获得的白色固体用i-Pr2O(2×1L)洗涤/悬浮。干燥后获得702g作为纯白固体的所需产物。允许所得的母液在室温静置约3天，在此期间出现更多的白色固体。对此过滤并用i-Pr 2O(2×150mL)洗涤/悬浮。进一步获得25g产物。合并的量：727g(86％)。
1H NMR δ(CD3OD)(ppm)：3.3-3.45(m，2H)；3.5-3.7(m，5H)；3.95(m，2H)；4.15(m，3H)；4.40(d，1H，J＝7.8Hz)；4.5(d，1H，J＝7.5Hz)；4.65(d，1H，J＝11.8Hz)；4.9(d，1H，J＝11.8Hz)；5.55(s，1H)；7.25(m，5H).
13C NMR：61.75，68.33，70.17，71.78，71.86，73.52，74.89，76.33，77.35，80.02；102.3，103.22，104.87；128.8-139.03
实施例10.
将起始的戊醇(650g，1.16mol)、吡啶(3.25l)和DMAP(7.1g，58mmol)装到反应器中并且在一小时内加入PivCl(1.3l，10.6mol)，将混合物温热至95℃并搅拌15小时。将反应混合物冷却至60℃，加入4.63l MeOH，并且将混合物在室温搅拌1，5小时。过滤固体，用1.5l MeOH洗涤两次，在露天下干燥一夜并在真空中干燥三天。
1H NMR δ(CD3OD)(ppm)：1.05-1.2(4s，36H)；1.25(s，9H)；3.4(m，1H)；3.55(m，1H)；3.8(s，3H)；3.95(t，1H，J＝9.5Hz)；4.05(dd，1H，J＝12.5Hz，J＝1.7Hz)；4.2(dd，1H，J＝11.8Hz，J＝5.5Hz))；4.35(dd，1H，J＝12.5Hz，J＝0.9Hz)；4.38(dd，1H，J＝0.3Hz，J＝3.5Hz)；4.55(m，4H)；4.8(m，2H)；4.95(dd，1H)；5.2(m，1H)；5.3(m，1H)，5.45(s，1H)；6.85(m，2H)；7.2-7.4(m，7H).
实施例11.
向起始物料(实施例10，32.5g，33.5mmol)、DCM(65ml)、MeOH(16ml)和水(6.5ml)的混合物中，加入pTsOH·H2O(2.6g，13.7mmol)然后加热至回流温度。在两小时后，TLC(甲苯∶丙酮5∶1)指示反应完成。将反应混合物冷却至室温，用DCM(65ml)稀释并用饱和NaHCO3(65ml)和水(65ml)洗涤。将有机相在MgSO4上干燥并浓缩，从而获得33g无色油状物。在回流温度，将粗产物溶解在EtOAc(227ml)中，加入石油醚(40-70℃，70ml)并将混合物冷却至0℃。过滤固体，用石油醚(2x30ml)洗涤并干燥，从而获得22.6g(79.2％)受体。
1H NMR δ(CD3OD)(ppm)：1.05-1.2(4s，36H)；1.25(s，9H)；3.4(m，2H)；3.8(m，1H)；3.95(m，2H)；4.1(m，1H)；4.2(dd，1H，J＝11.8Hz，J＝5.5Hz)；4.55(m，4H)；4.8(d，1H，J＝12.5Hz)；4.9(dd，1H)；5.0(dd，1H)；5.2(m，2H)；7.2-7.4(m，5H).
实施例12.
Figure BDA00002020582500441
用冰浴冷却戊醇(实施例9，5.6g，0.01mol)在吡啶(20mL)和DCM(50mL)中的溶液并且缓慢加入对氯苯甲酰氯(14mL)。将反应混合物在室温搅拌24h，并将溶剂在真空下蒸发。将残余物溶解在DCM(70ML)中并用1N HCl(40mL)、H2O(40mL)、NaHCO3(40mL)和盐水(30mL)洗涤，将有机相在Na2CO3上干燥并将溶剂在真空下蒸发。将固体溶解在DCM(60mL)中并加入360mL MeOH。过滤白色固体并用MeOH洗涤并干燥，从而产生10.6g(81％)。
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：3.05(m，1H)；3.75(m，3H)；4.13(dd，1H，J＝9.1Hz，J＝9.5Hz)；4.31(m，1H)；4.42(dd，1H，J＝4.1Hz，J＝12.0Hz)；4.57(m，2H)；4.69(d，1H，J＝7.7Hz)；4.75(d，1H，J＝7.9Hz)；4.81(d，1H；12.5Hz)；5.15(dd，1H，J＝3.5Hz，J＝10.4Hz)；5.30(s，1H)；5.38(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝9.6Hz)；5.75(m，2H).7.05-8.05(m，30H).
13C NMR：54.66，62.92，66.69，68.13，69.86，70.76，72.49，72.73，72.94，73.13，74.1，76.42，98.94，100.81，101.33，126-140(42C)，169.27，164.46，164.78，165.13，165.34.
实施例13.
Figure BDA00002020582500442
将亚苄基缩醛(实施例12，2.0g，1.65mmol)在DCM/MeOH(4/1，10mL)和TsOH(126mg)中的溶液在40℃搅拌24h。将反应混合物冷却至室温并用DCM稀释，用NaHCO3、水和盐水洗涤。将有机相在Na2SO4上干燥并在真空下除去溶剂。白色固体从甲苯中再结晶，从而产生1.28g(70％)。
1H NMR(CDCl3)：2.95(m，1H)；3.40(m，3H)；3.85(m，1H)；4.15(m，2H)；4.40(dd，1H，J＝5Hz，J＝11.9Hz)；4.5-4.8(m，5H)；5.15(dd，1H；J＝3.1Hz，10.4Hz)；5.40(dd，1H，J＝7.7Hz，J＝9.4Hz)；5.65(m，2H)，7.0-8.0(m，25H).
实施例14.
向亚苄基-β-苄基乳糖苷(实施例9，6.2g，11.9mmol)在吡啶(40mL)中的冰浴冷却的溶液中，逐滴加入BzCl(13.8mL)。将反应混合物在此温度搅拌30min，并且在室温下搅拌过夜。用MeOH猝灭反应并将溶剂在真空下蒸发。将残余物溶解在DCM中并用水、1N HCl、水、NaHCO3和盐水洗涤。将有机相在Na2SO4上干燥并在真空下除去溶剂。获得的固体从EtOAc/己烷再结晶，从而产生9.1g(73％)纯白色固体。M.p.：162-164℃。
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：2.95(m，1H)；3.58(m，1H)；3.78(m，2H)；4.25(m，2H)；4.40(dd，1H，J＝4.3Hz，J＝12.1Hz)；4.55(d，1H，12.5Hz)；4.65(m，1H)；4.70(d，1H，J＝7.7Hz)；4.78(d，1H；12.5Hz)；4.85(d，1H，J＝7.9Hz)；5.15(dd，1H，J＝3.4Hz，J＝10.4Hz)；5.30(s，1H)；5.40(dd，1H，J＝7.8Hz，J＝9.2Hz)；5.75(m，2H).7.05-8.05(m，35H).
实施例15.
向五苯甲酰基衍生物(实施例14，22.0g，21mmol)在DCM(140mL)和MeOH(20mL)混合物中的溶液中，加入TsOH一水合物(1.6g，0.4eq)，并将反应混合物在40℃搅拌2天。在此之后，加入NaHCO3的饱和溶液并且将混合物搅拌15min。进行相分离并用水和盐水洗涤有机相；在Na2SO4上干燥后。将溶剂在真空下蒸发并将获得的固体悬浮在EtOAc(200mL)中并将浆液搅拌过夜，过滤和干燥后，获得14.5g(74％)。Mp.：220-222，5℃。
1H NMR(CDCl3)：2.95(m，1H)；3.35(m，3H)；3.80(m，1H)；4.20(m，2H)；4.40(dd，1H，J＝5Hz，J＝11.9Hz)；4.5-4.9(m，5H)；5.07(dd，1H；J＝3.1Hz，10.4Hz)；5.45(dd，1H，J＝7.7Hz，J＝9.4Hz)；5.70(m，2H)，7.0-8.1(m，30H).
实施例16.
Figure BDA00002020582500461
向供体-受体混合物(100g受体和107g供体)在CH3CN/DCM 1/1(1200mL)中的-40℃冷溶液中，加入NIS(78g)并将混合物在此温度搅拌15min。在此之后，加入TfOH(5.1mL)并将反应在-40至-50℃搅拌2h。然后加入Et3N(35mL)并将该溶液用EtOAc(750mL)稀释并加入Na2S2O3(750mL)，并将溶液搅拌直至浅黄色。混合物用Na2S2O3(750mL)和盐水(500mL)洗涤。将有机相在MgSO4上干燥并在真空下蒸发。粗产物在3L TBME中结晶，两次收获得到80g。
1H NMR δ(CD3OD)(ppm)：1.05-1.3(m，45H)；1.75-2.25(m，16H)；2.6(dd，1H，J＝4.5Hz，J＝12.7Hz)；3.5-3.75(m，8H)；3.9-4.10(m，5H)，4.3(m，2H)；4.5(m，4H)；4.75-5(m，4H)；5.2(m，3H)；5.3(m，2H)；7.25(m，5H).
13C NMR：21.02；21.1；21.32；23.09；23.45；27.33；27.38；27.43；27.51；38.90；39.08；53.24；62.34；62.68；62.70；62.72；66.44；67.46；68.87；69.09；69.4；70.56；71.78；71.83；73.00；73.13；73.43；73.54；73.88；73.89；99.26；99.38；99.92；128.17；128.57；136.84；168.09；170.38；170.41；171.00；171.22；178.00.
实施例17.
Figure BDA00002020582500471
向供体-受体混合物(受体：5.3g，供体：8.5g)在CH3CN/DCM 1/1(65mL)中的-40℃冷溶液中，加入在2mL MeCN中的TMSOTf(0.186mL，0.16eq.)。将反应混合物在-35- -40℃搅拌3h并且在此之后，加入Et3N以中和酸。用30mL EtOAc洗涤溶液并用30mL水和40mL盐水洗涤有机相，将有机相在Na2SO4上干燥并将溶剂在真空下蒸发。在70℃将残余物溶解在20mL iBuOAc中并加入70mL i-Pr2O。溶液在4℃结晶过夜。通过过滤收集晶体并用i-Pr2O洗涤，从而产生4.3g的纯产物(51％)。
实施例18.
Figure BDA00002020582500472
向供体-受体混合物(受体：5.3g，供体：9.42g)在CH3CN/DCM 1/1(65mL)中的-40℃冷溶液中，加入在2mL的MeCN中的TMSOTf(0.186mL)。将反应混合物在-35- -40℃搅拌3h并且在此之后，加入Et3N以中和酸。溶液用30mL EtOAc稀释并用30mL水和40mL盐水洗涤有机相，将有机相在Na2SO4上干燥并将溶剂在真空下蒸发。在70℃，将残余物溶解在20mL iBuOAc中并加入70mL i-Pr2O。溶液在4℃结晶过夜。通过过滤收集晶体并用i-Pr2O洗涤，从而产生4.3g的纯产物(51％)。
实施例19.
Figure BDA00002020582500481
R6：乙基、异内基、叔丁基、环己基、苄基R4：新戊酰基、苯甲酰基
一般程序：向供体(1.4eq.)和受体(10.5mmol)在DCM/THF混合物(75mL+15mL)中的-20℃冷溶液中，加入NBS(1.6eq.)，接着加入TfOH(0.42eq.)。将反应混合物在此温度搅拌30min。加入在饱和NaHCO3水溶液(45mL)中的7.5％Na2S2O3水溶液以进行猝灭，并且将两相混合物搅拌20min，进行相分离并且用水洗涤有机相一次。将产物用于酸性去保护步骤中而没有进行进一步的纯化。
R4：苯甲酰基
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.85(s，3H)；1.9(s，3H)；2-2.2(m，13H)；2.48(dd，1H；J＝4.8Hz，J＝12.9Hz)；3.07(m，1H)；3.2(m，1H)；3.35(m，1H)；3.65(m，1H)；3.8(m，4H)；4.1(m，1H)；4.2-4.4(m，3H)；4.4-4.6(m，3H)；4.65-4.9(m，4H)；5.05(m，1H)；5.15(M，1H)；5.25(m，1H)；5.7(m，12H)；7-7.6(m，20H)；7.8-8.1(m，10H).
13C NMR(CDCl3)δ(ppm)：20.7，20.8，20.9，21.0，25.8，27.4，38.4，52.7，56.4，62.2，65.1(2C)，67.0，68.1，68.8，70.1，70.2，72.0，72.3，72.6，73.1，73.3，74.3，97.8，98.5，101.5，127.6，129.6，132.8-133.4，136.5，164.9，165.2(2C)，165.6，166.6，169.4，170.3，170.8，171.4，173.4，174.6.
R4：新戊酰基
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.05-1.3(m，15H)；1.75(dd，1H，J＝10.9Hz，J＝12.9Hz)；1.95，2.0，2.05，2.15，2.25(5s，18H)；2.64(dd，1H，J＝5.5Hz，12.9Hz)；3.18(m，1H)；3.35(m，1H)；3.53(m，1H)；3.75(m，1H)；3.85(s，3H)；4.15-4.25(m，4H)；4.35-4.45(m，2H)；4.45-4.65(m，5H)；4.8(m，1H)；4.95(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝9.7Hz)；5.05(m，1H)；5.1-5.3(m，5H)；5.7(m，1H)；7.5(m，5H).
13C NMR(CDCl3)δ(ppm)：20.99，21.14，21.19，21.23，27.29，27.40，27.42，38.76，38.89，38.90，39.06，39.12，53.04，54.67，57.00，60.39，62.25，65.66，66.97，68.86，69.59，69.82，70.45，71.69，72.00，72.61，72.77，73.40，73.65，98.30，99.25，100.25，128.11，128.16，128.53，136.82，166.92，169.71，170.56，170.80，171.41，173.72，174.71，176.42，177.00，177.12，179.91.
实施例20.
Figure BDA00002020582500491
R4：新戊酰基、苯甲酰基、异丁酰基、4-甲基苯甲酰基
向供体(10g，17.4mmol)和受体(1.4eq)在DCM(100mL)中的4℃冷溶液中，加入BF3·OEt2(1.6mL，0.75eq)并将反应在此温度搅拌16h。用NaHCO3猝灭反应并将两相混合物搅拌10min。用水洗涤有机相并在真空下蒸发。将产物用于酸性去保护步骤中而没有进行进一步的纯化。
R4：4-甲基苯甲酰基
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.85(s，3H)；1.9(s，3H)；2-2.2(m，13H)；2.25-2.44(m，15H)；2.48(dd，1H；J＝4.8Hz，J＝12.9Hz)；3.07(m，1H)；3.2(m，1H)；3.35(m，1H)；3.65(m，1H)；3.8(m，4H)；4.1(m，1H)；4.2-4.4(m，3H)；4.4-4.6(m，3H)；4.65-4.9(m，4H)；5.05(m，1H)；5.15(M，1H)；5.25(m，1H)；5.7(m，12H)；6.9(m，2H)；7-7.25(m，13H)；7.7-7.9(m，10H).
13C NMR(CDCl3)δ(ppm)：20.7，20.8，20.9，21.0，21.14，21.27，21.62，21.66，25.8，27.4，38.4，52.7，56.4，62.2，65.1(2C)，67.0，68.1，68.8，70.1，70.2，72.0，72.3，72.6，73.1，73.3，74.3，97.8，98.5，101.5，127.6，129.6，132.8-133.4，136.5，164.9，165.2(2C)，165.6，166.6，169.4，170.3，170.8，171.4，173.4，174.6.
R4：异丁酰基
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.0(m，30H)，1.6(dd，1H，J＝1.8Hz，J＝2.05Hz)；1.80，1.87，1.90，1.97(4s，12H)；2.12(2s，6H)；2.2-2.6(m，6H)；3.15(m，1H)；3.25(m，1H)；3.4(m，1H)；3.55-3.8(m，6H)；3.95-4.3(m，4H)；4.3-4.55(m，5H)；4.67(d，1H，J＝12Hz)；4.75-5.2(m，7H)；7.1(m，5H).
13C NMR(CDCl3)δ(ppm)：18.59，18.80，18.86，18.94，19.07，19.12，19.28，19.29，19.32，20.84，20.98，20.99，21.11，25.95，27.98，33.96，34.03，34.07，50.28，52.29，54.67，56.79，60.16，61.93，62.21，65.51，68.73，69.23，69.63，70.51，71.49，72.33，72.39，72.82，73.17，73.23，75.74，98.19，99.10，101.12，127.92，128.04，128.47，136.79，166.78，169.64，170.42，170.75，171.49，173.66，174.83，175.32，175.54，175.64，175.70，176.49.
实施例21.
Figure BDA00002020582500511
R2：苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基、1萘甲基；R4：新戊酰基、苯甲酰基、4-甲基苯甲酰基
将在实施例19或20中获得的浆状体用MeOH稀释，冷却至5℃并逐滴加入硫酸。将反应混合物在此温度搅拌48h并用Et3N中和。将MeOH蒸发并将残余物溶解在EtOAc，用水洗涤一次并用5/1水盐水洗涤。将有机相在真空中蒸发并将残余物结晶(两步的收率：50-60％)。
R2：苄基，R4：苯甲酰基
1H(CD3OD)δ(ppm)：1.5(dd，1H，J＝11.7Hz，J＝12.6Hz)；2.0(s，3H)；2.45(dd，1H，J＝4.6Hz，J＝12.8Hz)；3.2(m，1H)；3.4-3.7(m，7H)；3.7-3.85(m，5H)；3.95(m，1H)；4.1(d，1H，J＝3.5Hz)；4.25(dd，1H，J＝9.2Hz，J＝9.5Hz)；4.45-4.65(m，3H)；4.75(d，1H，J＝12.2Hz)；5.15(dd，1H，J＝3.3Hz，J＝10.4Hz)；5.35(dd，1H，J＝8Hz，J＝9.7Hz)；5.64(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝10.3Hz)；5.69(dd，1H，J＝9.2Hz，J＝9.4Hz)；7.05-7.65(m，20H；7.8-8.1(m，10H).
13C(CD3OD)δ(ppm)：21.62，39.03，52.37，52.44，60.04，63.14，65.25，67.44，68.41，70.50，70.87，72.58，73.24，73.39，73.66，73.97，74.79，77.15，127.73，128.16，128.27，128.37，128.63，129.08，129.41，129.46，129.49，129.54，129.59，129.72，129.81，129.89，133.18，137.18，165.63，165.66，165.95，166.01，166.22，169.35，173.99.
R2：苄基，R4：新戊酰基
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.0-1.3(m，45H)；1.9(t，J＝12.2Hz)；2.05(s，3H)；2.72(m，2H)；3.15(m，1H)；3.45(m，1H)；3.55(m，3H)；3.7-3.9(m，10H)；4.02(m，1H)；4.22(dd，1H，J＝5.5Hz，J＝11.5Hz)；4.4-4.6(m，4H)；4.72-4.85(m，3H)；4.95(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝9.6Hz)；5.13(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝10.3Hz)；5.18(t，1H，9.4Hz)；6.65(d，1H，J＝6.5Hz)；7.2-7.35(m，5H).
13C(CDCl3)δ(ppm)：23.22，27.23，27.29，27.37，27.37，27.44，27.52，27.59，31.20，38.94，39.07，39.12，53.18，53.65，62.32，63.68，66.12，67.77，68.72，69.41，69.95，70.92，71.70，71.79，73.44，73.70，74.03，99.13，99.64，99.83，128.74，129.32，133.90，135.38，169.61，174.25，176.64，177.19，177.57，177.87，178.21.
R2：苄基，R4：4-甲基苯甲酰基
1H(CD3OD)δ(ppm)：1.5(dd，1H，J＝11.7Hz，J＝12.6Hz)；2.0(s，3H)；2.25(s，3H)；2.31-2.43(m，12H)；2.48(dd，1H，J＝4.6Hz，J＝12.8Hz)；3.2(m，1H)；3.4-3.7(m，7H)；3.7-3.85(m，5H)；3.90(m，1H)；4.1(d，1H，J＝3.5Hz)；4.24(dd，1H，J＝9.2Hz，J＝9.5Hz)；4.44-4.64(m，3H)；4.73(d，1H，J＝12.2Hz)；5.12(dd，1H，J＝3.2Hz，J＝10.4Hz)；5.32(dd，1H，J＝8Hz，J＝9.6Hz)；5.57-5.70(m，2H)；6.87(m，2H)；7.05-7.3(m，13H)；7.65-7.95(m，10H).
13C(CD3OD)δ(ppm)：21.05，21.14，21.27，21.62，21.66，39.03，52.37，52.44，60.04，63.14，65.25，67.44，68.41，70.50，70.87，72.58，73.24，73.39，73.66，73.97，74.79，77.15，127.73，128.16，128.27，128.37，128.63，129.08，129.41，129.46，129.49，129.54，129.59，129.72，129.81，129.89，133.18，137.18，165.63，165.66，165.95，166.01，166.22，169.35，173.99.
R2：4-氯苄基，R4：新戊酰基
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.0-1.3(m，45H)；1.9(t，J＝12Hz)；2.05(s，3H)；2.64(d，1H，J＝5.4)；2.75(dd，1H，J＝3.7Hz，J＝12.5Hz)；2.9(m，1H)；3.3(m，1H)；3.45(m，1H)；3.55(m，2H)；3.65-3.95(m，10H)；4.02(m，1H)；4.21(dd，1H，J＝5.3Hz，J＝11.7Hz)；4.4-4.6(m，4H)；4.67-4.85(m，2H)；4.95(dd，1H，J＝8.3Hz，J＝9.4Hz)；5.15(m，2H)；6.48(d，1H，J＝7.5Hz)；7.18(m，2H)；7.28(m，2H).
13C(CDCl3)δ(ppm)：23.22，27.28，27.30，27.37，27.43，27.52，27.58，31.19，38.93，39.07，39.12，53.18，53.65，62.32，63.66，66.15，67.81，68.77，69.50，70.02，70.99，71.67，71.81，73.45，73.59，73.98，99.09，99.69，100.01，128.53，129.11，133.75，135.19，169.54，174.21，176.59，177.08，177.42，177.57，178.17.
R2：1-萘甲基，R4：新戊酰基
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.0-1.4(m，45H)；1.85(t，J＝12.2Hz)；2.05(s，3H)；2.69(dd，1H，J＝3.7Hz，J＝12.5Hz)；2.8(m，1H)；3.45(m，1H；3.55(m，3H)；3.7-3.95(m，10H)；4.05(m，1H)；4.22(dd，1H，J＝5.6Hz，J＝11.8Hz)；4.44(d，1H，J＝7.8Hz)；4.54(m，1H)；4.61(d，1H，J＝7.9Hz)；4.78(dd，1H，J＝3.2Hz，J＝10.4Hz)；4.95(m，2H)；5.12(m，2H)；5.3(d，1H，11.7Hz)；7.35-7.5(m，4H)；7.8(m，2H)；8.0(m，1H).
13C(CDCl3)δ(ppm)：22.96，27.12，27.27，27.32，27.37，27.47，31.15，38.75，38.83，38.87，39.00，39.12，53.62，54.67，55.07，61.43，62.27，63.77，65.94，66.81，68.61，68.99，69.41，70.94，71.65，71.91，73.32，73.52，74.3199.25，99.36，99.93，123.92，125.31，126.04，126.62，127.06，128.72，129.16，131.80，132.26，132.26，133.77，169.77，174.51，176.41，176.91，177.38，177.76，178.07.
R2：4-甲基苄基，R4：新戊酰基
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.0-1.3(m，45H)；1.9(t，J＝12.3Hz)；2.05(s，3H)；2.25(s，3H)；2.65(m，1H)；2.83，(m，1H)；3.35(m，1H)；3.45(m，1H)；3.55(m，3H)；3.6-3.85(m，12H)；3.95(m，1H)；4.15(m，1H)；4.32-4.5(m，3H)；4.63-4.8(m，2H)；4.85(dd，1H，J＝8Hz，J＝9.4Hz)；5.08-5.15(m，2H)；7.05(m，5H).
13C(CDCl3)δ(ppm)：21.10，22.93，27.02，27.03，27.09，27.17，38.64，38.78，38.84，53.36，54.89，61.33，62.32，63.34，65.87，67.38，68.38，68.60，69.16，70.18，70.65，71.44，71.69，73.18，73.33，73.77，98.71，98.88，99.63，128.12，128.99，133.23，137.75，169.33，173.98，176.32，176.98，177.28，177.56，177.95.
实施例22.
方法A：向根据实施例16-21中任一个的经保护的或部分经保护的三糖在5体积的MeOH中的溶液中，缓慢加入1M NaOH水溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜并加入Amberlite IR 120H+以中和碱。过滤混合物并将溶剂在真空下蒸发。然后将材料溶解在MeOH和EtOH中，并缓慢加入TBME。滤出沉淀并用TBME洗涤两次。将获得的白色固体溶解在1MNaOH中并将反应混合物搅拌6h。将IR-120H+用于中和碱并将溶剂在真空下蒸发。在与EtOH共蒸发(两次)后，将产物溶解在MeOH中并缓慢加入i-PrOH，从而得到游离酸形式的固体。
方法B：向根据实施例16-21中任一个的经保护的或部分经保护的三糖在MeOH中的溶液中，加入NaOMe并将反应混合物在45℃搅拌5h。冷溶液用庚烷洗涤并加入丙酮。滤出沉淀并溶解在1M NaOH中，并将反应混合物搅拌6h。将IR-120H+用于中和碱并将溶剂在真空下蒸发。在与EtOH共蒸发(两次)后将产物溶解在MeOH中并缓慢加入i-PrOH，从而产生游离酸形式的固体。
R2：苄基
1H(CD3OD)δ(ppm)：1.63(t，1H，J＝11.9Hz)；2.00(s，3H)；2.78(dd，1H，J＝4.5Hz，J＝12.2Hz)；3.28-3.49(m，4H)；3.50-3.79(m，9H)；3.80-3.97(m，5H)；4.02(dd，1H，J＝7.5Hz，J＝10Hz)；4.35(m，1H)；4.42(d，1H，J＝7.8Hz)；4.66(d，1H，J＝11.7Hz)；7.22-7.37(m，3H)；7.38-7.46(m，2H).
13C(CD3OD)δ(ppm)：21.55，41.26，52.70，60.81，63.21，63.42，68.56，69.01，69.30，70.66，71.15，72.12，73.08，73.55，73.78，74.47，75.28，75.32，80.03，100.29，101.89，103.36，127.36，127.87，128.01，128.12，137.72，173.36，173.88.
R2：4-氯苄基
1H(CD3OD)δ(ppm)：1.62(t，1H，J＝12Hz)；2.00(s，3H)；2.77(dd，1H，J＝4.7Hz，J＝12.1Hz)；3.28-3.49(m，4H)；3.50-3.79(m，9H)；3.80-3.97(m，5H)；4.02(dd，1H，J＝7.5Hz，J＝10Hz)；4.35(m，1H)；4.42(d，1H，J＝7.8Hz)；4.66(d，1H，J＝11.7Hz)；7.24(m，2H)；7.32(m，2H).
13C(CD3OD)δ(ppm)：21.52，41.23，52.72，60.79，63.23，63.42，68.61，69.03，69.31，70.56，71.14，72.13，73.11，73.56，73.79，74.48，75.23，75.31，80.09，100.17，101.91，103.21，127.36，127.89，133.01，136.76，173.29，173.78.
R2：1-萘甲基
1H(CD3OD)δ(ppm)：1.62(t，1H，J＝11.8Hz)；2.00(s，3H)；2.78(dd，1H，J＝4.5Hz，J＝12.2Hz)；3.28-3.49(m，4H)；3.50-3.79(m，9H)；3.80-3.97(m，5H)；4.02(dd，1H，J＝7.6Hz，J＝10.1Hz)；4.35(m，1H)；4.42(d，1H，J＝7.8Hz)；4.68(d，1H，J＝11.8Hz)；7.32-7.54(m，4H)；7.7(m，2H)；7.95(m，1H).
13C(CD3OD)δ(ppm)：21.54，41.28，52.72，60.81，63.20，63.44，68.53，69.06，69.38，70.64，71.12，72.14，73.05，73.54，73.65，74.45，75.24，75.33，80.02，100.25，101.87，103.21，122.91，124.82，125.25，125.93，127.06，128.72，129.16，132.80，133.12，135.97，136.88，173.36，173.88.
R2：4-甲基苄基
1H(CD3OD)δ(ppm)：1.63(t，1H，J＝11.9Hz)；2.00(s，3H)；2.32(s，3H)；2.78(dd，1H，J＝4.5Hz，J＝12.2Hz)；3.28-3.49(m，4H)；3.50-3.79(m，9H)；3.80-3.97(m，5H)；4.02(dd，1H，J＝7.5Hz，J＝10Hz)；4.35(m，1H)；4.42(d，1H，J＝7.8Hz)；4.66(d，1H，J＝11.7Hz)；7.21(m，4H).
13C(CD3OD)δ(ppm)：20.02，21.55，41.26，52.70，60.81，63.21，63.42，68.56，69.01，69.30，70.66，71.15，72.12，73.08，73.55，73.78，74.47，75.28，75.32，80.03，99.98，100.89，102.36，127.36，127.87，128.01，128.12，133.26，137.72，173.36，173.88
实施例23.
Figure BDA00002020582500551
向40g游离酸在甲醇和水的混合物(250mL+300mL)中的溶液中，加入4g Pd/C(10％)。将反应混合物在室温在H2压力(气球)下搅拌2天。然后通过C盐(Celite)垫过滤混合物并将溶剂在真空下蒸发。将残余物溶解在80mL H2O中并向1200mL EtOH滴加。过滤浆液，用EtOH、丙酮和1/1丙酮/Et2O的混合物洗涤固体。干燥固体，从而得到35g 6′-O-唾液乳糖。
1H(D2O)(葡萄糖的异头混合物，0.6/0.4β/α)：1.75(dd，1H，J＝12.0Hz，J＝11.9Hz)；2.05(s，3H)；2.7(dd，1H，J＝12.0Hz，J＝4.6Hz)；3.31(dd，0.6H，J＝7.8Hz，J＝8.9Hz)；3.5-3.75(m，11.4H)，3.76-4.05(m，8.9H)；4.43(d，1H，J＝7.8Hz)；4.67(d，0.6H，J＝7.8Hz)，5.23(d，0.4H，J＝3.8Hz).
13C：19.51，24.78，42.82，54.51，60.15，62.83，62.99，65.36，66.3，71.1，71.24，72.68，73.51，73.78，74.35，74.53，75.09，75.24，76.42，76.45，77.35，77.39，82.35，82.46，94.54，98.37，103.01，105.92，105.95，176.21，177.64.
实施例24：盐形成
由酸性6’-SL或6’-SL糖苷获得6’-SL或6’-SL糖苷的无机和有机盐。用选自选自乙醇胺、二乙基胺、三-(羟甲基)-甲胺碱和氢氧化胆碱的有机碱或选自金属氢氧化物、碳酸盐和碳酸氢盐的无机碱，将在醇或醇/水中的所述酸的pH调至8，5-11。然后用醇稀释该混合物并在真空下浓缩。然后过滤获得的浆液并用醇洗涤。
Figure BDA00002020582500561
1H(CD3OD)δ(ppm)：1.63(t，1H，J＝11.9Hz)；2.02(s，3H)；2.82(m，1H)；3.33-3.45(m，4H)；3.46-3.61(m，5H)；3.62-3.97(m，12H)；4.02(dd，1H，J＝7.5Hz，J＝10Hz)；4.37(m，2H)；4.66(d，1H，J＝11.9Hz)；7.31(m，3H)；7.41(m，2H).
13C(CD3OD)δ(ppm)：21.10，40.60，52.04，60.22，62.78，67.90，68.51，68.69，70.11，70.61，70.64，71.44，72.44，72.83，73.17，73.92，74.50，74.70，79.82，99.76，101.23，103.52，127.00，127.44，127.56，137.21，172.68，173.28
Figure BDA00002020582500571
1H(CD3OD)δ(ppm)：1.71(t，1H，J＝11.1Hz)；2.00(s，3H)；2.78(dd，1H，J＝4.5Hz，J＝12.2Hz)；3.28-3.49(m，4H)；3.50-3.79(m，9H)；3.80-3.97(m，5H)；4.02(dd，1H，J＝7.5Hz，J＝10Hz)；4.35(m，1H)；4.42(d，1H，J＝7.8Hz)；4.66(d，1H，J＝11.7Hz)；7.22-7.37(m，3H)；7.38-7.46(m，2H).
13C(CD3OD)δ(ppm)：21.77，41.09，52.78，60.87，61.32，63.06，63.64，63.21，68.26，69.11，70.67，71.22，71.36，72.01，73.00，73.37，73.58，73.66，74.39，75.19，75.32，75.87，79.40，80.35，99.92，101.86，101.94，103.86，104.00，127.55，127.99，128.13，137.83，174.03，174.08
Figure BDA00002020582500572
1H(CD3OD)δ(ppm)：1.63(dd，1H，J＝11.7Hz，J＝12.2Hz)；2.00(s，3H)；2.78(dd，1H，J＝4.5Hz，J＝12.2Hz)；2.92(m，4H)；3.33-3.47(m，2H)；3.46-3.57(m，5H)；3.58-3.78(m，9H)；3.78-3.90(m，5H)；3.93(dd，1H，J＝2.5，J＝11.7Hz)；4.02(dd，1H，J＝7.5Hz，J＝10Hz)；4.35(m，1H)；4.42(d，1H，J＝7.8Hz)；4.66(d，1H，J＝11.7Hz)；7.22-7.37(m，3H)；7.38-7.46(m，2H).
13C(CD3OD)δ(ppm)：21.55，41.26，44.83，52.70，58.85，60.81，63.21，63.42，68.56，69.01，69.30，70.66，71.15，72.12，73.08，73.55，73.78，74.47，75.28，75.32，80.03，99.98，100.89，102.36，127.36，127.87，128.01，128.12，137.72，173.36，173.88
Figure BDA00002020582500581
1H(CD3OD)δ(ppm)：1.63(dd，1H，J＝11.9Hz，J＝12.1Hz)；2.00(s，3H)；2.78(dd，1H，J＝4.5Hz，J＝12.2Hz)；3.33-3.48(m，2H)；3.48-3.79(m，19H)；3.93(dd，1H，J＝2.5，J＝11.8Hz)；4.02(dd，1H，J＝7.5Hz，J＝10Hz)；4.35(m，1H)；4.42(d，1H，J＝7.8Hz)；4.66(d，1H，J＝11.7Hz)；7.22-7.37(m，3H)；7.38-7.46(m，2H).
13C(CD3OD)δ(ppm)：21.60，41.22，52.71，59.62，60.89，61.38，63.23，63.39，68.64，68.97，69.25，70.64，71.26，73.68，75.24，75.27，80.16，100.39，101.87，103.94，127.52，127.97，128.00，128.11，137.85，173.40，173.90
Figure BDA00002020582500582
1H(CD3OD)δ(ppm)：1.28(t，6H，J＝11.8Hz)；1.65(dd，1H，J＝11.9Hz，J＝12.1Hz)；2.00(s，3H)；2.79(dd，1H，J＝4.5Hz，J＝12.2Hz)；3.00(q，4H)；3.33-3.57(m，7H)；3.57-3.77(m，5H)；3.78-3.89(m，4H)；3.93(dd，1H，J＝11.9Hz，J＝2.4Hz)；4.00(dd，1H，J＝7.1Hz，J＝9.7Hz)；4.35(m，1H)；4.42(d，1H，J＝7.8Hz)；4.66(d，1H，J＝11.8Hz)；7.22-7.37(m，3H)；7.38-7.46(m，2H).
13C(CD3OD)δ(ppm)：10.64，21.57，41.29，42.29，52.74，60.89，63.23，63.43，68.63，68.95，69.30，70.62，71.25，72.04，73.06，73.41，73.73，74.47，75.26，75.28，80.15，100.41，101.90，103.95，127.51，127.97，127.99，128.10，137.88，173.35，173.85
Figure BDA00002020582500591
1H(CD3OD)δ(ppm)：1.63(dd，1H，J＝11.9Hz，J＝12.1Hz)；1.98(s，3H)；2.80(dd，1H，J＝4.5Hz，J＝12.2Hz)；3.19(s，9H)；3.33-3.56(m，8H)；3.56-3.77(m，7H)；3.78-3.94(m，5H)；3.95-4.04(m，4H)；4.34(m，1H)；4.39(d，1H，J＝7.8Hz)；4.66(d，1H，J＝11.8Hz)；7.22-7.36(m，3H)；7.40(m，2H).
13C(CD3OD)δ(ppm)：21.56，40.95，41.34，52.75，53.48，53.53，53.59，55.92，60.96，63.15，63.50，63.84，67.85，68.65，68.90，69.31，69.47，70.61，71.28，72.05，73.05，73.41，73.72，74.45，75.29，76.89，80.17，100.42，101.92，103.97，109.98127.52，127.97，128.11，137.90，138.29，173.26，173.85
6’-SL Na+盐
1H(D2O)δ(ppm)：1.54(t，1H，J＝12.1Hz)；1.82(s，3H)；2.52(dd，1H，J＝4.8Hz，J＝12.3Hz)；3.10(m，1H)；3.27-3.55(m，10H)；3.56-3.82(m，9H)；4.23(d，1H，J＝7.8Hz)；4.48(d，0.7H，J＝8Hz)；5.03(d，0.3H，J＝3.7Hz).
13C(D2O)δ(ppm)：22.17，40.19，51.87，52.10，60.38，62.71，63.68，68.46，68.61，70.87，71.90，72.44，72.60，73.78，74.04，74.68，74.76，79.80，79.86，96.16，100.36，103.33，173.62，174.99.
6’-SL Zn2+盐
1H(D2O)δ(ppm)：1.54(t，1H，J＝12.1Hz)；1.82(s，3H)；2.52(dd，1H，J＝4.8Hz，J＝12.3Hz)；3.10(m，1H)；3.27-3.55(m，10H)；3.56-3.82(m，9H)；4.23(d，1H，J＝7.8Hz)；4.48(d，0.7H，J＝8Hz)；5.03(d，0.3H，J＝3.7Hz).
13C(D2O)δ(ppm)：22.16，40.16，51.87，60.15，60.31，62.69，63.67，68.45，68.60，70.02，70.86，71.12，71.72，71.88，72.43，72.59，73.77，74.71，74.73，79.69，91.90，95.72，100.34，103.31，173.63，174.99.
6’-SL乙醇铵盐
1H(D2O)δ(ppm)：1.54(t，1H，J＝12.1Hz)；1.82(s，3H)；2.52(dd，1H，J＝4.8Hz，J＝12.3Hz)；2.92(m，2H)；3.10(m，1H)；3.27-3.55(m，10H)；3.56-3.82(m，11H)；4.23(d，1H，J＝7.8Hz)；4.48(d，0.7H，J＝8Hz)；5.03(d，0.3H，J＝3.7Hz).
13C(D2O)δ(ppm)：22.16，40.19，41.37，51.87，52.09，57.93，60.32，62.70，63.67，68.46，68.62，70.03，70.87，71.13，71.91，72.43，72.60，73.80，74.71，74.74，79.69，79.80，95.73，100.35，103.32，173.61，174.98.
6’-SL三-(羟甲基)-甲基铵盐
1H(D2O)δ(ppm)：1.54(t，1H，J＝12.1Hz)；1.82(s，3H)；2.52(dd，1H，J＝4.8Hz，J＝12.3Hz)；3.10(m，1H)；3.56-3.82(m，9H)；4.24(d，1H，J＝7.8Hz)；4.47(d，0.7H，J＝8Hz)；5.02(d，0.3H，J＝3.7Hz).
13C(D2O)δ(ppm)：22.15，40.19，51.87，59.90，60.83，62.70，63.67，68.46，68.61，70.03，70.87，71.13，71.72，71.90，72.43，72.60，73.79，74.71，74.74，79.70，79.81，95.73，100.35，103.32，173.60，174.98.
6’-SL二乙基铵盐
1H(D2O)δ(ppm)：1.05(t，6H，J＝7.3Hz)；1.54(t，1H，J＝12.1Hz)；1.82(s，3H)；2.52(dd，1H，J＝4.8Hz，J＝12.3Hz)；2.84(q，4H，J＝7.3Hz)；3.10(m，1H)；3.27-3.55(m，10H)；3.56-3.82(m，9H)；4.23(d，1H，J＝7.8Hz)；4.48(d，0.7H，J＝8Hz)；5.03(d，0.3H，J＝3.7Hz).
13C(D2O)δ(ppm)：10.67，22.13，40.18，42.35，51.85，52.09，60.15，60.31，62.68，63.67，68.45，68.58，70.01，70.84，71.71，71.88，72.41，72.58，73.78，74.72，79.69，79.80，91.89，95.72，100.33，103.31，173.59，174.95.
6’-SL胆碱盐
1H(D2O)δ(ppm)：1.54(t，1H，J＝12.1Hz)；1.82(s，3H)；2.52(dd，1H，J＝4.8Hz，J＝12.3Hz)；2.99，(s，9H)；3.10(m，1H)；3.27-3.55(m，12H)；3.56-3.82(m，11H)；4.23(d，1H，J＝7.8Hz)；4.48(d，0.7H，J＝8Hz)；5.03(d，0.3H，J＝3.7Hz).
13C(D2O)δ(ppm)：22.14，40.17，51.85，52.10，53.87，53.92，53.97，55.67，60.31，62.69，63.67，67.42，67.46，67.50，68.45，68.58，70.85，71.11，71.88，72.41，72.58，73.77，74.72，79.68，79.80，91.89，95.72，100.33，103.31，173.59，174.95.
实施例25.
6’-SL K+盐
将1g 6’-SL溶解在3mL水中并通过阳离子交换柱(Amberlite IRC50K+形式)。收集馏分(2-7)并冻干。
实施例26.
6’-SL Ca2+盐
将1g 6’-SL溶解在3mL水中并通过阳离子交换柱(Amberlite IRC50Ca2+形式)。收集馏分(2-7)并冻干。
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Figure BDA00002020582500621
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CMP-Neu5Ac  胞苷5’-单磷酸-N-乙酰基神经氨酸
DCM         二氯甲烷
DMF         N，N’-二甲基甲酰胺
DTPI        2，6-二-叔丁基碘化吡啶
GlcNAc      N-乙酰基-葡糖胺
HMOs        人乳寡糖
6’-SL      6’-O-唾液乳糖，Neu5Ac(α2-6)Gal(β1-4)Glc
NBS         N-溴代琥珀酰亚胺
NeuAc       神经氨酸
NIS         N-碘代琥珀酰亚胺
RT          室温
THF         四氢呋喃
TfOH        三氟甲磺酸
TMSOTf      三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯
Tol         甲苯。

Claims (27)

1.一种用于制备6’-O-唾液乳糖或其盐的方法，所述方法包括以下步骤：
a)使通式3的受体
Figure FDA00002020582400011
通式3
其中，R1是-OR2，该R2是通过催化氢化可去除的基团，或者R1是-SR3，该R3选自任选取代的烷基、任选取代的芳基和任选取代的苄基，或者R1是-NH-C(R”)＝C(R’)2，其中每个R’彼此独立地是选自-CN、-COOH、-COO-烷基、-CO-烷基、-CONH2、-CONH-烷基和-CON(烷基)2的吸电子基团，或者其中两个R’基团连接在一起并表示-CO-(CH2)2-4-CO-并且由此与它们连接的碳原子一起形成5-7元的环烷-1，3-二酮，该二酮中的亚甲基中的任一个任选地被1或2个烷基取代，并且R”是H或烷基，
R4是选自任选取代的酰基和被1-3个甲氧基取代的苄基，
与通式4的供体发生反应
Figure FDA00002020582400012
通式4
其中，R5是任选取代的酰基，
R8选自-NHAc和-NAc2，
Q是COO-烷基，该烷基任选地被取代，并且
X是离去基团；
从而产生通式2的化合物
Figure FDA00002020582400021
通式2
其中，R1、R4、R5、R8和Q是如上所定义的，
b)使通式2的化合物去保护以得到通式1的化合物或其盐
Figure FDA00002020582400022
通式1
其中R1是如上所定义的，以及
c)随后将所述通式1的化合物或其盐转化为6’-O-唾液乳糖或其盐。
2.根据权利要求1所述的方法，其中
a)当R1是-OR2，其中R2是通过催化氢化可去除的基团时，使通式1的化合物或其盐进行催化还原，或者
b)当R1是-SR3，其中R3选自任选取代的烷基、任选取代的芳基和任选取代的苄基时，利用亲硫试剂对通式1的化合物或其盐进行活化，接着进行水解，或者
c)当R1是-NH-C(R”)＝C(R’)2，其中每个R’是选自-CN、-COOH、-COO-烷基、-CO-烷基、-CONH2、-CONH-烷基和-CON(烷基)2的吸电子基团，或者其中两个R’基团连接在一起并表示-CO-(CH2)2-4-CO-并且由此与它们连接的碳原子一起形成5-7元的环烷-1，3-二酮，该二酮中的亚甲基中的任一个任选地被1或2个烷基取代，并且R”是H或烷基时，利用胺或卤素对通式1的化合物或其盐进行处理，接着在中性或弱酸性pH下进行水解，
以及当获得6’-O-唾液乳糖时，将其任选地转化为它的盐，该6’-O-唾液乳糖的盐任选地被转化为6’-O-唾液乳糖的另一种盐。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中R1是-OR2，该R2是通过催化氢化可去除的基团，优选地选自苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中对属于权利要求1中提及的通式2的化合物的通式2A的化合物进行去保护，
Figure FDA00002020582400031
通式2A
其中，R2是通过催化氢化可去除的基团，
R4和R5彼此独立地是任选取代的酰基，
R8选自-NHAc或-NAc2，并且
Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，
所述去保护包括以下步骤：
a)碱催化的酯交换反应，接着进行碱性水解，任选的酸化和任选的盐形成，或
b)碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成
从而得到通式1的化合物或其盐。
5.根据权利要求4所述的方法，其中R2选自苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，R4选自异丁酰基、新戊酰基和任选取代的苯甲酰基，优选地新戊酰基和苯甲酰基，R5是乙酰基，Q是-COOCH3并且-OR2为β型。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中使属于权利要求1中提及的通式2的化合物的通式2B的化合物
Figure FDA00002020582400041
通式2B
其中，R2是通过催化氢化可去除的基团，
R4是任选取代的酰基，条件是不包括乙酰基，并且
R8选自-NHAc和-NAc2；
进行选择性的酸性去保护以得到通式2C的化合物，
Figure FDA00002020582400042
通式2C
其中，R2和R4是如上所定义的，
接着
a)碱催化的酯交换反应，接着进行碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成，或
b)碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成
从而得到通式1的化合物或其盐。
7.根据权利要求6所述的方法，其中在硫酸存在下在通式2B的化合物上进行所述选择性酸性去保护，其中-OR2为β型，R2是苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，R4选自异丁酰基、新戊酰基和任选取代的苯甲酰基，优选苯甲酰基。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中对属于权利要求1中提及的通式2的化合物的通式2D的化合物进行去保护，
Figure FDA00002020582400051
通式2D
其中，R2是通过催化氢化可去除的基团，
R4是被1-3个甲氧基取代的苄基，
R5是任选取代的酰基，
R8选自-NHAc或-NAc2并且
Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代
所述去保护包括以下步骤：
a)碱催化的酯交换反应，其导致产生通式2D的另一种化合物，其中R2是如上所定义的，R4是被1-3个甲氧基取代的苄基，R5是H，R8是-NHAc并且Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，接着
aa)二氯二氰基苯醌(DDQ)或硝酸铈(IV)铵(CAN)介导的氧化，其导致产生通式2D的另一种化合物，其中R2是如上所定义的，R4和R5中的每一个是H，R8是-NHAc并且Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，接着进行碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成，或者
ab)碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成，其导致产生通式2D的另一种化合物，其中R2是如上所定义的，R4是被1-3个甲氧基取代的苄基，R5是H，R8是-NHAc并且Q是质子化或去质子化形式的-COOH，接着进行二氯二氰基苯醌(DDQ)或硝酸铈(IV)铵(CAN)介导的氧化
从而得到通式1的化合物或其盐，
或者
b)二氯二氰基苯醌(DDQ)或硝酸铈(IV)铵(CAN)介导的氧化，其导致产生通式2D的另-种化合物，其中R2是如上所定义的，R4是H，R5是任选取代的酰基，R8选自-NHAc和-NAc2并且Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，接着
ba)碱催化的酯交换反应，接着进行碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成，或者
bb)碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成
从而得到通式1的化合物或其盐，
或者
c)碱性水解、任选的酸化和任选的盐形成，其导致产生通式2D的另一种化合物，其中R2是如上所定义的，R4是被1-3个甲氧基取代的苄基，R3是H，R8是-NHAc并且Q是质子化或去质子化形式的-COOH，接着进行二氯二氰基苯醌(DDQ)或硝酸铈(IV)铵(CAN)介导的氧化，从而得到通式1的化合物或其盐。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，在所述方法中，所述糖基化反应包括使用通式4A、4B或4C的供体
Figure FDA00002020582400061
通式4A通式4B通式4c
其中，R5是任选取代的酰基，
R6选自C2-6烷基、C3-6环烷基和任选取代的苄基，
R7是取代的苄基，并且
Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，
和通式3A的受体
通式3A
其中，R2是通过催化氢化可去除的基团，并且
R4选自被1-3个甲氧基取代的苄基和任选取代的酰基，条件是不包括乙酰基。
10.6’-O-唾液乳糖Zn2+盐。
11.6’-O-唾液乳糖有机盐，优选6’-O-唾液乳糖二乙基铵盐、6’-O-唾液乳糖乙醇铵盐、三-(羟甲基)-甲基铵盐或6’-O-唾液乳糖胆碱盐。
12.根据权利要求10或11中任一项所述的6’-O-唾液乳糖盐，其用作营养添加剂。
13.根据权利要求10或11中任一项所述的6’-O-唾液乳糖盐，其用作药物。
14.一种营养组合物，所述应用组合物包含一种或多种根据权利要求10或11中任一项所述的6’-O-唾液乳糖盐。
15.一种药物组合物，所述药物组合物包含一种或多种根据权利要求10或11中任一项所述的6’-O-唾液乳糖盐。
16.一组权利要求1中提及的通式1的化合物，其由通式1A表征
通式1A
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，优选苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，并且OR2为β型。
17.一组权利要求1中提及的通式1的化合物，其由通式1B表征
Figure FDA00002020582400072
通式1B
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，
所述化合物为选自Zn2+、K+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Fe2+、Mn2+、Cu2+和有机盐的盐形式。
18.根据权利要求17所述的化合物，其中R2是苄基，-OR2为β型，并且所述盐选自Zn2+盐和有机盐，并且所述有机盐优选选自乙醇铵、二乙基铵、三-(羟甲基)-甲基铵和胆碱盐。
19.一种通式2A的化合物
Figure FDA00002020582400081
通式2A
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，
R4和R5彼此独立地是任选取代的酰基，
R8选自-NHAc和-NAc2，并且
Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代。
20.根据权利要求19所述的化合物，其中-OR2为β型，R2选自苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，R4选自异丁酰基、新戊酰基和任选取代的苯甲酰基，优选新戊酰基和苯甲酰基，R5是乙酰基，Q是-COOCH3。
21.一种通式2C的化合物
Figure FDA00002020582400082
通式2C
其中-OR2为β型，R2是通过催化氢化可去除的基团，优选苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，并且
R4选自异丁酰基、新戊酰基和任选取代的苯甲酰基，优选苯甲酰基。
22.一种通式2D的化合物
Figure FDA00002020582400091
通式2D
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，
R4选自被1-3个甲氧基取代的苄基和H，
R5选自任选取代的酰基和H，
R8选自-NHAc和NAc2，并且
Q选自-COO-烷基，该烷基被任选地取代，和质子化或去质子化形式的-COOH，
条件是如果Q是质子化或去质子化形式的-COOH并且R8是-NHAc，则R4和R5两者不能同时是H。
23.根据权利要求22所述的化合物，其中-OR2为β型，R2选自苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，R4和R5是H，R8是-NHAc并且Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，优选-COOMe。
24.一种通式4A或4B的化合物
Figure FDA00002020582400092
通式4A通式4B
其中R5是任选取代的酰基，优选乙酰基，
R6选自C2-6烷基、C3-6环烷基和任选取代的苄基，优选选自乙基、异丙基、叔丁基、苄基和环己基，
R7是取代的苄基，优选4-氯苄基或4-溴苄基，并且
Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，优选-COOMe。
25.一种通式4C的化合物，其用作唾液酸基供体，
Figure FDA00002020582400101
通式4C
其中R5是任选取代的酰基，优选乙酰基并且Q是-COO-烷基，该烷基任选地被取代，优选-COOMe。
26.一种通式3A的化合物
Figure FDA00002020582400102
通式3A
其中R2是通过催化氢化可去除的基团，并且
R4选自被1-3个甲氧基取代的苄基和任选取代的酰基，条件是不包括乙酰基。
27.根据权利要求26所述的化合物，其中-OR2为β型，R2选自苄基、4-甲基苄基、4-氯苄基和1-萘甲基，并且R4选自异丁酰基、新戊酰基和苯甲酰基。
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