MX2012009306A - Produccion de 6'-o-sialil-lactosa y compuestos intermedios. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a la síntesis de trisacáridos de la fórmula (I) y sales de los mismos, así como nuevos compuestos intermedios usados en la síntesis.

Description

PRODUCCION DE 6' -O-SIALIL-LACTOSA Y COMPUESTOS INTERMEDIOS Campo de la Invención La presente invención proporciona nuevos oligosacáridos y derivados de los mismos, y adicionalmente métodos para la preparación de estos oligosacáridos, especialmente a gran escala.

Antecedentes de la Invención Durante las pasadas décadas, se ha estado incrementado sin parar el interés por la preparación y comercialización de oligosacáridos de leche humana. La importancia de los oligosacáridos de leche humana , está enlazada directamente a sus actividades biológicas únicas tal como actividades antibacterianas, antivirales, del sistema inmunitario y actividades que mejoran el desarrollo cognitivo [1] · Los oligosacáridos sialilados de leche humana tal como disialilacto-N-tetraosa, 3 ' -0-sialil-3-0-fucosilactosa, 6' -O-sialil-lactosa, 3 ' -O-sialil-lactosa, 6 ' -O-sialilada-lacto-N-neotetraosa, 3 ' -O-sialilada-lacto-N- tetraosa etc., son componentes principales de la leche humana.

Entre los oligosacáridos sialidados de leche humana, listados anteriormente, el residuo de ácido siálico está enlazado siempre a las posiciones terminales 3'-0- y/o 6'-0- de D-galactosa o las posiciones 6-0- de residuos de Ref . : 232972 azúcar no terminales mediante enlaces a-glicosídicos .

A la fecha, no ha sido posible el acceso a grandes volúmenes de oligosacáridos sialilados de leche humana al usar metodologías de aislamiento, de biotecnología y de síntesis. La síntesis química de oligosacáridos sialilados de leche humana es uno de los campos más desafiantes de la química de los carbohidratos debido a la naturaleza de los mismos donadores de ácido siálico. En general, se logra glicosilaciones estereoselectivas mediante participaciones de grupos vecinos pero la carencia de un sustituyente en la posición C-3 de ácido siálico impide esta opción. De esta manera, se tiene que lograr la sialilación estereroselectiva mediante selección cuidadosa de una correspondencia de donador-aceptador de ácido siálico, efectos cinéticos y de solvente. Ádicionalmente, la presencia de la porción carboxílica en la posición anoméricá de ácido siálico también crea efectos estéricos y electrónicos poco favorecidos para a-sialilaciones estereoselectivas . El fuerte efecto de retiro de electrones del grupo carboxílico inicia reacciones secundarias potenciales durante la glicosilaci'ón mediante ß-eliminación.

Se puede demostrar tanto la importancia biológica como las dificultades de síntesis de los oligosacáridos sialilados por revisión de la técnica anterior de uno de los oligosacáridos sialilados más simples de leche humana llamado 6 ' -O-sialil-lactosa (6'-SL, O- (N-acetil-a-neuraminosil) - (2?6) -?-ß-D-galactopiranosil- (1?4) -D-glucosa, Esquema de reacción 1) .

Esquema de reacción 1. La estructura de 6 ' -O-sialil-lactosa La 6' -O-sialil-lactosa es uno de los oligosacáridos sialilados de leche humana encontrado en alta concentración en la leche de la madre .

Se han demostrado varios papeles biológicos de las 6 ' -O-sialil-lactosa tal como sus efectos prebióticos, antibacterianos, antivirales, del sistema inmunitario y efectos mejoradores del desarrollo cognitivo etc., [1]. Estas características importantes hacen a 6'-SL un objetivo atractivo para la producción a gran escala y desarrollo de producto para las industrias nutricionales y terapéuticas. Se ha sintetizado 6' -O-Sialil- lactosa por metodologías químicas [2], enzimáticas [3] y biotecnológicas [4] o se ha aislado de fuentes naturales [5] . Sin embargo, estas metodologías no han sido atractivas para el aumento en escala debido a la carencia de eficientes metodologías de purificación, el uso. de reactivos tóxicos y costosos y la implicación de muchos pasos de síntesis.

Se han desarrollado varios métodos de síntesis química para las 6' -O-sialil-lactosa [2a-c] , sales de Na, K, Mg y Ca de la misma [2d, e] o compuestos intermedios de la misma [2f-j] . En resumen, estas estrategias dan lactosa 6 ' -O-sialilada mediante 6' -O-sialilación estereoselectiva de ya sea dióles de 4', 6'-azúcar o alcoholes de 6 '-azúcar usando activaciones de donador de glicosilhaluro, tioglicosido o dietilfosfita. El uso de ya sea productos químicos muy costosos o muy tóxicos para la sialilación tal como cianuro de mercurio, bromuro de mercurio y carbonato de plata es una de las razones por las que estas metodologías son menos atractivas para la producción y estudios para aumento de escala. Los rendimientos y/o el estereocontrol no eficiente igualmente hacen a estas estrategias menos adecuadas para desarrollos .de tecnologías a gran escala. Adicionalmente, varias dificultades de purificación caracterizan todas las estrategias listadas de síntesis .

En el caso de producción enzimática de 6' -O-sialil-lactosa, las glicosil-transferasas y sialidasas son las enzimas preferidas usadas [3] . Estos sistemas enzimáticos complejos representan metodologías muy costosas para producciones a mayor escala de 6 ' -O-sialil-lactosa. De manera similar, no se pueden usar sialidasas exitosamente en metodologías de producción a mayor escala debido a su carencia de regio- y estéreo-selectividad. Igualmente los bajos rendimientos y los difíciles protocolos de purificación son un impedimento para desarrollos de tecnología a escala industrial.

El aislamiento de 6'-SL a partir de leche de humano y de otros mamíferos es más bien difícil aún en cantidades de miligramo debido a la presencia de un gran número de oligosacáridos similares. A la fecha, sólo se han desarrollado metodologías de HPLC analíticas para el aislamiento de 6'-SL a partir de fuentes naturales [5] .

También se describen algunas metodologías biotecnológicas que usan bacterias, levadura u otros microorganismos genéticamente modificados [4] . Estas metodologías tienen varias ventajas en los procesos regulares debido a las oportunidades de comercialización limitada.

La presente invención representa ' el primer planteamiento comercial adecuado para la producción comercial de 6' -O-sialil-lactosa y otros oligosacáridos sialilados bioactivos . La estrategia exitosa se basa en la introducción de nuevos pares donador- ceptador de ácido siálico, nuevos donadores de ácido siálico, nuevos aceptadores de lactosa tipo diol, compuestos intermedios cristalinos pertinentes, el" uso de activadores económicos y no tóxicos y poderosas tecnologías de purificación.

Breve Descripción de la Invención El primer aspecto de la presente invención se refiere a un método para la preparación de 6' -O-sialil-lactosa o uña sal de la misma, que comprende los pasos de: reacción de un aceptador de la fórmula general fórmula general 3 en donde R1 es -0R2, R2 que es un grupo removible por hidrogenación catalítica, o R1 es -SR3, R3 que se selecciona de alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y bencilo opcionalmente sustituido, o R1 es -NH-C (R" ) =C (R' ) 2 , en donde cada R' independientemente uno del otro es u grupo de retiro de electrones seleccionado a partir de-CN, -COOH, -COO-alquilo, -CO-alquilo, -CONH2, -CONH-alquilo y -CO (alquilo) 2 , o en donde los dos grupos R' -se enlazan conjuntamente y representan -C0- (CH2) 2-4-CQ- y de esta manera forman con el átomo de carbono al cual están unidos un cicloalcan-1 , 3-dion de 5-7 miembros, dion en el cual cualquiera de los grupos metilenos está opcionalmente sustituido con 1 o 2 grupos alquilo, y R" es H o alquilo, R4 se selecciona a partir de acilo opcionalmente sustituido y bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi, con un donador de la fórmula general 4 fórmula gene en donde R5 es acilo opcionalmente sustituido, R se selecciona a partir de-NHAc y -NAc2, Q es COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, y X es un grupo saliente, para producir un compuesto de la fórmula general 2 fórmula general 2 en donde R1, R4, R5, R8 y Q son como se define anteriormente, b) desprotección de un compuesto de la fórmula general 2 para dar un compuesto de la fórmula general 1 o sales del mismo fórmula general 1 en donde R1 es como se define anteriormente, y c) convertir subsiguientemente el compuesto de la fórmula general 1 o sales del mismo en 6 ' -O-sialil-lactosa o sales de la misma.

El segundo aspecto de la presente invención proporciona sales de Zn2+ de 6' -O-sialil-lactosa.

El tercer aspecto de la .presente . invención se refiere a sales orgánicas de 6' -O-sialil-lactosa.

El cuarto de la presente invención proporciona nuevas sales de 6' -O-sialil-lactosa de acuerdo al segundo y tercer aspecto para el uso con aditivo nutricional.

El quinto aspecto de la presente invención se refiere a nuevas sales de 6 ' -O-sialil-lactosa de acuerdo al segundo y tercer aspectos para el uso como un aditivo farmacéutico.

El sexto aspecto de la presente invención proporciona una composición nutricional que comprende una o más sales de 6'-O-sialil-lactosa de acuerdo al segundo y tercer aspectos.

El séptimo aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una o más sales de 6' -O-sialil-lactosa de acuerdo al segundo y tercer aspectos.

El octavo aspecto de la presente invención proporciona compuestos de la fórmula general 1A en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, de manera preferente bencilo, 4 -metilbencilo, 4-clorobencilo y 1-naftilmetilo y OR2 está en ß.

El noveno aspecto de la presente invención se refiere a compuestos de la fórmula general IB fórmula general IB en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, en la forma de sal seleccionada de las sales de Zn2+, K+, Ca2+, Mg2+, Ba2+, Fe2+, Mn2+, Cu2+ y sales orgánicos.

El décimo aspecto de la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula general 2A fórmula general 2A en donde R es un grupo removible por hidrogenación catalítica, y R5 son independientemente entre sí, acilo opcionalmente sustituido, R8 se selecciona a partir de -NHAc y -NAc2, y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalment sustituido El onceavo aspecto de la presente invención s refiere a un compuesto de la fórmula general 2C fórmula general 2C en donde-OR2 está en ß, R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, preferentemente bencilo, 4- metilbencilo, 4-clorobencilo y 1-naftilmetilo, y R4 se selecciona a partir de isobutirilo, pivaloilo y benzoilo opcionalmente sustituido, preferentemente benzoilo.

El doceavo aspecto de la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula general 2D fórmula general 2D en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, R4 se selecciona a partir de bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi y H, R5 se selecciona a partir de acilo opcionalmente sustituido y H, R8 se selecciona a partir de-NHAc y NAc2, y Q se selecciona a partir de -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido y -COOH en ya sea forma protonada o desprotonada, con la condición que si Q es -COOH en ya sea la forma protonada o desprotonada y R8 es -NHAc , entonces tanto R4 como R5 no pueden ser H de manera simultánea.

El treceavo aspecto de la presente invención se refiere a un compuesto de la fórmula general 4A o 4B fórmula general 4A fórmula general 4B en donde R5 acilo opcionalmente sustituido, preferentemente acetilo R6 se selecciona a partir de C2-6 alquilo, C3-6 cicloalquilo y bencilo opcionalmente sustituido, de manera preferente a partir de etilo, isopropilo, t-butilo, bencilo y ciclohexilo, R7 es bencilo sustituido, preferentemente 4- clorobencilo o 4-bromobencilo, y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, preferentemente -COOMe .

El catorceavo aspecto de la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula general 4C para el uso como donador de sialilo fórmula general 4C en donde R5 es acilo opcionalmente sustituido, preferentemente acetilo y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, preferentemente -COOMe.

El quinceavo aspecto de la presente invención se refiere a un compuesto de la fórmula general 3A fórmula general 3A en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, y R4 se selecciona a partir de bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi y acilo opcionalmente sustituido con la condición que se excluya acetilo.

Descripción Detallada de la Invención A todo lo largo de la presente descripción, el término "alquilo", ya sea solo o cuando está unido a otro átomo o grupo significa un grupo de hidrocarburo lineal o ramificado con 1-6 átomos de carbono, tal como metil, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, i-butilo, s-butilo, t-butilo, etc.

"Cicloalquilo" significa residuo de hidrocarburo cíclico con 3-6 átomos de carbono tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

En la presente solicitud, el término "arilo" se refiere a grupos homoaromáticos tal como fenilo o naftilo. De manera preferente, arilo significa fenilo.

En la presente descripción, el término acilo representa un R-C(=0)-, en donde R puede ser H, alquilo o arilo, tal como formilo, acetilo, propionilo, butirilo, pivaloilo, benzoilo, etc. Los residuos de alquilo y arilo pueden estar ambos sustituidos.

Para el propósito de esta invención con las reivindicaciones, el término "opcionalmente sustituido" significa que el grupo en cuestión puede tener ya sea un sustituyente o puede estar insustituido .

Para el propósito de esta invención con las reivindicaciones, el término "sustituido" significa que el grupo en cuestión está sustituido con un grupo que modifica las características químicas generales de la cadena o anillo. Los sustituyentes se pueden usar para modificar las características de la molécula como una totalidad, tal como estabilidad, solubilidad, y la capacidad para formar cristales. La persona experta en la técnica estará consiente de los otros sustituyentes adecuados de un tamaño similar y características similares de carga, que se pueden usar como alternativas en una situación determinada.

De manera más general en unión con los términos "alquilo", "cicloalquilo" , "arilo" y "acilo" el término "opcionalmente sustituido" se propone que signifique que el grupo en cuestión puede estar sustituido una o más veces, preferentemente 1-5 veces, de manera más preferente 1-3 veces con grupos seleccionados a partir del grupo que consiste de alquilo (sólo para cicloalquilo, arilo y acilio aromático) , hidroxi, alcoxi (es decir, alquil-oxi) , carboxi, oxo (que forma una funcionalidad ceto o de aldehido) , alcoxicarbonilo, alquilcarbonilo, formilo, arilo, ariloxicarbonilo, ariloxi, arilamino, arilcarbonilo, amino, mono- y dialquilamino, carbamoilo, mono- y dialquil-aminocarbonilo, alquil-carboniloamino, ciano, alcanoiloxi, nitro, alquiltio y halógeno (F, Cl, Br, I) .

El "grupo protector que es removióle por hidrogenación catalítica" se refiere a grupos cuyo enlace C-0 se escinde por la adición de hidrógeno en la presencia de cantidades catalíticas de paladio, níquel Raney u otro catalizador metálico apropiado conocido para el uso en la hidrogenólisis, dando por resultado la regeneración del grupo OH. Estos grupos protectores son bie conocidos por el experto en la técnica y se analizan completamente [7] . Los grupos protectores adecuados incluyen grupos bencilo, difenilmetilo (benzhidril) , 1-naftilmetil , 2-naftilmetil o trifenilmetil- (tritilo) , cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados a partir de: alquilo, alcoxi, fenilo, amino, acilamino, alquiloamino, dialquiloamino, nitro, carboxilo, alcoxicarbonilo, carbamoilo, N-alquilcarbamoilo, N, N-dialquilcarbamoilo, azido, halógenoalquilo o halógeno. De manera preferente, esta sustitución, si está presente, es en los anillos aromáticos. Los grupos protectores particularmente preferidos son grupos bencilo o 1-naftilmetilo, ambos están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos seleccionados de fenilo, alquilo o halógeno. De manera más preferente, el grupo protector se selecciona a partir de bencilo insustituido, 1-naftilmetilo insustituido, 4 -clorobencilo y 4-metilbencilo . Estos grupos protectores particularmente preferidos y más preferibles tienen la ventaja que los subproductos de la hidrogenólisis son exclusivamente tolueno, 1-metilnaftaleno , o derivados sustituidos de tolueno o 1-metilnaftaleno . Estos subproductos se pueden remover fácilmente a un en escalas de múltiples toneladas a partir de productos de oligosacárido solubles en agua mediante procesos de evaporación y/o extracción.

El primer aspecto de la presente solicitud se refiere a un método para la preparación de 6'-0-sialil-lactosa o una sal de la misma, que comprende los pasos de: a) reacción de un aceptador de la fórmula general 3 fórmula general 3 en donde R1 es -0R2, en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, o R1 es -SR3, R3 que se selecciona de alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y bencilo opcionalmente sustituido, o R1 es -NH-C (R" ) =C (R' ) 2/ en donde cada R' independientemente entre sí es un grupo de retiro de electrones seleccionado a partir de -CN, -COOH, -COO-alquilo, -CO-alquilo, -CONH2, -CONH-alquilo y -CO (alquilo) 2/ o en donde los dos grupos R' - se enlazan conjuntamente y representan -C0- (CH2) 2-4-C0- y de esta manera forman con el átomo de carbono al cual están unidos un cicloalcan-1 , 3-dion de 5-7 miembros, dion en el cual cualquiera de los grupos metileno está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos alquilo, y R" es H o alquilo, R4 se selecciona a partir de acilo opcionalmente sustituido y bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi, con un donador de la fórmula general 4 fórmula general 4 en donde R5 es acilo opcionalmente sustituido, R8 se selecciona a partir de -NHAc y -NAc2, Q es COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, y X es un grupo saliente, para producir un compuesto de la fórmula general 2 fórmula general 2 en donde R1, R4, R5, R8 y Q son como se definen anteriormente, b) desprotección de un compuesto de la fórmula general 2 para dar un compuesto de la fórmula general 1 o sales del mismo fórmula general 1 en donde R1 es como se define anteriormente, y c) convertir subsiguientemente el compuesto de la fórmula general 1 o sales el mismo en 6 ' -O-sialil-lactosa o sales de la misma.

Con respecto al paso c) del primer aspecto, los compuestos de la fórmula general 1 o sales del mismo se tratan para desprotegerlos de manera anomérica, de esta manera se puede o obtener 6 ' -O-sialil-lactosa o sales de la misma. De manera particular, se puede producir 6'-SL o sales de la misma al someter un compuesto de la fórmula general 1 o sales de la misma. i) a reducción catalítica cuando R1 es -0R2, en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, ii) a activación con un reactivo tiofílico seguido por hidrólisis cuando R1 es -SR3, en donde R3 se selecciona a partir de alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y bencilo opcionalmente sustituido, iii) a tratamiento con una amina o halógeno seguido por hidrólisis a pH ácido moderado o neutral cuando R1 es -NH-C (R" ) =C(R' ) 2, en donde cada R' es un grupo de retiro de electrones seleccionado a partir de -CN, -COOH, -COO-alquilo, -CO-alquilo, -CONH2, -CONH-alquilo y -CO (alquilo) 2 , o en donde los dos grupos R' - se enlazan con untamente y representan -C0- (CH2) 2-4-CO- y de esta manera forman con el átomo de carbono al cual están unidos un cicloalcan-1, 3 -dion de 5-7 miembros, dion en el cual cualquiera de los grupos metilenos está opcionalmente sustituido con 1-2 grupos alquilo, y R" es H o alquilo.

En una modalidad, R1 representa -0R2, en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, que s un grupo bencilo opcionalmente sustituido, (benzidrilo) , 1-naftiimetil, 2-naftilmetil o trifenilmetil (tritilo) , cuya remoción toma lugar típicamente en un solvente prótico o en una mezcla de solventes próticos . Se puede seleccionar un solvente prótico a partir de un grupo que consiste de agua, ácido cítrico o alcohol de ^-Cs átomos de carbono. La mezcla de uno o más solventes próticos con uno o más solventes orgánicos apróticos apropiados miscibles parcialmente completamente con los solventes próticos (tal como THF, dioxano, acetato de etilo, acetona, etc.) también se puede aplicar. Se usan de manera preferente agua, uno o más alcoholes de 0?-06 átomos de carbono o una mezcla de agua y uno o más alcoholes de Ci-C6 átomos de carbono, como el sistema de solvente. También son aplicables soluciones que contienen los derivados de carbohidrato en cualquier concentración o suspensiones de los derivados de carbohidrato con los solventes usados. La mezcla de reacción se agita a un intervalo de temperatura de 10-100°C, de manera preferente entre 20-60°C en una atmósfera de hidrógeno de 1-50 bares en la presencia de un catalizador tal como paladio, níquel Raney o cualquier otro catalizador metálico apropiado, preferentemente paladio en carbón o negro de paladio, hasta que se alcance el término de la reacción. Las concentraciones del catalizador metálico varían en general de 0.1 % a 10 % en base al peso del carbohidrato. De manera preferente, las concentraciones del catalizador varían de .0.15 % a 5 %, de manera más preferente 0.25 % a 2.25 %. También se puede realizar la hidrogenación por transferencia, cuando el hidrógeno se genere in situ a partir de ciclohexeno, ciclohexadieno, ácido fórmico o formiato de amonio. La adición de bases/ácidos orgánicos o inorgánicos y/o resinas de intercambio iónico básicas y/o ácidas también se puede usar para mejorar la cinética de la hidrogenólisis . El uso de sustancias básicas- se prefiere especialmente cuando estén presentes sustituyentes de halógeno en las porciones de bencilo sustituidas de los precursores. Las bases orgánicas preferidas incluyen pero no se limitan a trietilamina, diisopropil-etilamina, amoníaco, carbonato de amonio, dietilamina, etc. Los ácidos orgánicos/inorgánicos preferidos incluyen pero no se limitan a ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido cloroacético, ácido dicloroacético, ácido trifluoroacético, HCl, HBr, etc. Las condiciones propuestas anteriormente permiten la remoción simple, conveniente delicada de los solventes dando lugar a 6'-SL pura. Se puede aislar 6'-SL y sales de la misma a partir de la mezcla de reacción usando procedimientos de tratamiento convencionales en forma cristalina, amorfa, sólida, de suspensión o solución acuosa concentrada.

En otra modalidad para producir 6 ' -O-sialil-lactosa o sales R1 es -SR3 y R3 es alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o bencilo opcionalmente sustituido en la fórmula general 1. Típicamente, los tioglicósidos actúan como donador en las reacciones de glicosidación, conduciendo de este modo a una reacción de glicosidación en la presencia de agua que da por resultado la formación del correspondiente azúcar reductor. En una glicosilación típica, se disuelve un tioglicósido de acuerdo a la fórmula general 1 en agua o solventes apróticos polares que contienen agua seguido por la adición de un activador tiofílico tal como sales de mercurio (II), Br2 , I2, NBS, NIS, ácido tríflico o sales de triflato, o mezclas de los mismos-.

El compuesto intermedio activado reacciona fácilmente con agua que está presente en el ambiente de reacción y se producen 6 ' -O-sialil-lactósa o sales de la misma.

En otra modalidad, se puede formar 6'-0-sialil-lactosa y sales de la misma por remoción de grupos amina vinilogosos a cíclicos de los compuestos de la fórmula general 1, en donde R1 es -NH-C (R" ) =C (R' ) 2 , y R' es un grupo de retiro de electrones seleccionado a partir de -CN, -COOH, -COO-alquilo, -CO-alquilo, -CONH2í -CONH-alquilo, -CONH- I bencilo, -CON (alquilo) 2 y -CON (bencilo) 2/ o dos grupos R' -enlazados conjuntamente representan-CO- (CH2) 2-4-CO- y de esta manera forman con el átomo de carbono adyacente un cicloalcan-1, 3-dion de 5-7 miembros, y cualquiera de los grupos metilenos se puede sustituir con 1 o 2 grupos alquilo, y R" representa H o alquilo. La estructura de enamina se puede dividir por tratamiento con compuestos amino o halógeno. Los solventes usados para la reacción incluyen pero no se limitan a metanol, etanol, agua, ácido acético, acetato de etilo, etc., y mezclas de los mismos también se pueden aplicar. Típicamente los compuestos amino usados para transaminación son aminas primarias acuosas o anhidras, tal como etilamina, propilamina, butilamina, etc.; hidrazinas; tal como hidrato de hidrazina, acetato de hidrazina, etc.; derivados de hidroxilamina solución acuosa de amoníaco o gas amoníaco en condiciones anhidras. La amina vinilogosa cíclica también se puede escindir al usar halógeno tal como gas cloro o bromo. Ambos tipos de reacción producen funcionalidad de amina en la posición anomérica cuya hidrólisis bajo pH neutral o ligeramente ácido (pH « 4-7) proporciona fácilmente 6' -O-sialil-lactosa.

Si se obtiene 6' -O-sialil-lactosa en las reacciones mencionadas anteriormente, se convierte a una sal de la misma, y si se desea, se convierte una sal de 6' -O-sialil-lactosa u otra sal de 6' -O-sialil-lactosa.

En una modalidad preferida, R1 en un compuesto de la fórmula general 1 es -0R2, R2 que es un grupo removible por hidrogenación catalítica, seleccionado preferentemente de-bencilo, 4-metilbencilo, 4-clorobencilo y 1-naftilmetilo .

Con respecto al paso b) del primer aspecto de la presente solicitud en compuestos de acuerdo a la fórmula general 2, todos los grupos funcionales están protegidos excepto por 4' -OH, grupos ..protectores que se usan frecuentemente en la industria de carbohidratos. Los grupos protectores se pueden remover ya sea sucesivamente dando lugar a trisacáridos parcialmente protegidos (vide infra) y al menos compuestos de la fórmula general 1 o sales de los mismos o en un paso que conduce directamente a compuestos de la fórmula general 1 o sales de los mismos. Toda la combinación de pasos de desprotección como se usa en la presente se puede realizar en cualquier orden, seleccionado de este modo las condiciones apropiadas necesarias para removerlos así como para llevar a cabo los pasos de desprotección en una sucesión que entra en la competencia de la persona experta.

De acuerdo a una modalidad en el paso b) del primer aspecto, se pueden obtener compuestos de la fórmula general 1 o sales de los mismos a partir de un grupo de compuestos de la fórmula general 2 caracterizados por la fórmula general 2A fórmula general 2A en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, R4 y R5 son independientemente entre sí acilo opcionalmente sustituido, R8 se selecciona a partir de -NHAc o -NAc2 y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, que comprende los siguientes pasos: a) reacción de transesterificación catalizada con base seguida por una hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional de sal, o b) hidrólisis básica, acidificación opcional y formación op.cional de sal.

El término "desprotección por transesterificación catalizada con base" significa una reacción, donde los grupos protectores de acilo de los hidroxilos se remueven en- un solvente alcohólico tal como metanol, etanol, propanol, t-butanol, etc. , en la presencia de un alcoholato tal como NaOMe, NaOEt, KOfcBu, etc. a temperaturas de 20-100°C. El alcohol y el alcoholato se deben hacer corresponder. El uso de co-solventes como tolueno o xileno puede ser benéfico a fin de controlar el tamaño de partícula de producto para evitar las formaciones de gel . Bajo esta condición, sólo los O-acilos se pueden desproteger fácilmente y cuando R8 es -NAc2 también se debe remover uno del acilo. El grupo Q puede estar transesterificado . En una modalidad preferida, se usa una cantidad catalítica de NaOMe en metanol (des-O-acilación de Zemplén) . El término "hidrólisis básica" significa en general hidrólisis catalizada con base en agua, alcohol o mezclas de solventes orgánicos-agua, en condiciones de reacción homogénea o heterogénea a temperaturas que varían de 0-100°C. La base de elección en general es una base fuerte, por ejemplo, LiOH, NaOH, KOH, Ba(OH)2, K2C03 , resinas de intercambio iónico básicas, hidróxidos de tetra-alquilamonio, etc. Las bases se pueden usar en una forma de una solución acuosa también. Esta condición afecta a los O-acilo, cando Q es éster también 'está hidrolizádo y cuando R8 es -NAc2, también se remueve uno del acetilo. En una modalidad preferida, la base es NaOH y el solvente es metanol.

Se propone que "acidificación opcional" signifique que se puede realizar un paso de acidificación cuando la forma cida de los compuestos de la fórmula general 1 se necesita después de la desprotección por transesterificación catalizada con base o hidrólisis básica.

"Formación opcional de sal" significa que un compuesto de la fórmula general 1 en forma acida, si se necesita, se convierta a su sal diferente de aquella formada después de la desprotección de transesterificación catalizada con base o hidrólisis básica. Una sal de un compuesto de la fórmula general 1 significa un par iónico asociado que consiste del residuo ácido negativamente cargado el compuesto de la fórmula general 1 y un catión en cualquier proporción estequiométrica . Los cationes, como se usan en el présente contexto, pueden ser átomos o moléculas con carga positiva. El catión puede ser un catión inorgánico así como un catión orgánico. Los cationes inorgánicos preferidos son ión de amonio, metal alcalino, iones de metales de transición y metales alcalinotérreos, preferentemente Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Ba2+, Fe2+, Zn2+, Mn2+ y Cu2+, de manera más preferente K+, Ca2+, Mg2+, Ba2+, Fe2+ y Zn+. Los compuestos orgánicos básicos en forma positivamente cargadas pueden ser cationes orgánicos pertinentes . Estas moléculas orgánicas preferidas positivamente cargadas son dietil-amina, trietil-amina, diisopropil-etilamina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, imidazol, piperidina, piperazina, morfolina, bencil-amina, etilen-diamina, meglumina, pirrolidina, colina, tris- (hidroximetil) -metil-amina, N- (2-hidroxietil) -pirrolidina, N- (2-hidroxietilo) -piperidina, · N-(2-hidroxietilo) -piperazina, N- (2-hidroxietil) -morfolina, L-arginina, L-lisina, oligopéptidos que tienen una unidad de L-arginina o L-lisina u oligopéptidos que tienen grupos amina libre en la N- erminal, etc., todos en forma protonada. Una sal inorgánica y orgánica del compuesto de la fórmula genera 1 se puede obtener a partir de un compuesto de la fórmula general 1 en forma ácida. El pH de la solución del ácido libre en alcoholo o alcohol/agua se ajusta a 8,5-11 con una base; si la base es una inorgánica, se puede seleccionar de metal alcalino, metal alcalinotérreo e hidróxidos de metales de transición, carbonatos y bicarbonatos. La mezcla entonces se diluye con alcohol y se concentra in vacuo. La suspensión espesa obtenida entonces se filtra y se lava con alcohol.

En una realización preferida, se desprotegen los compuestos de la fórmula general 2A, en donde R2 se selecciona a partir de bencilo, 4-metilbencilo, 4-chlorobencilo y 1-naftilmetilo, R4 se selecciona a partir de isobutirilo, pivaloilo y benzoilo opcionalmente sustituido, preferentemente pivaloilo y benzoilo, R5 es acetilo, Q es -COOCH3 y -0R2 está en ß.

De acuerdo en otra modalidad en el paso b) del primer aspecto, los compuestos de la fórmula general 2B que corresponden a los compuestos de la fórmula general 2 fórmula general 2B en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, R4 es acilo opcionalmente sustituido con la condición de que excluya acetilo, y R8 se selecciona a partir de -NHAc y -NAc2, se someten a desprotección acida selectiva para dar el compuesto de la fórmula general 2C fórmula general en donde R2 y R4 son como se define anteriormente, seguido por a) reacción de transesterificación catalizada con base seguida por hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional de sal, o b) hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional de sal. para dar un compuesto de la fórmula general 1 o sales . del mismo .

Los compuestos de la fórmula general 2C se pueden obtener de una manera delicada a partir de los compuestos de la 2B. Los presentes inventores conocieron que los grupos acetilo en el residuo de ácido sálico (R5 es acetilo) se pueden remover de forma selectiva cuando se protege la porción lactosa por acetilos diferentes de acetilo (R4 es acilo opcionalmente sustituido con la condición que se excluya acetilo) debido a la mayor reactividad de los acetilos hacia la transesterificación ácida que los otros acilos. El pozo de desprotección se puede llevar a cabo en un alcohol de 1 a 6 átomos de carbono o una mezcla de alcoholes de Ci-6 átomos de carbono, preferentemente metanol y etanol en la presencia de un ácido, en general un ácido prótico seleccionado pero no limitado a ácido acético, ácido trifluoroacético, HC1, ácido fórmico, ácido sulfúrico, ácido perclórico, ácido oxálico, ácido p-toluenosulfónico, ácido bencenosulfónico, resinas de intercambio catiónico, etc., preferentemente ácido inorgánico fuerte que pueden estar presentes desde cantidad catalítica a exceso. La hidrólisis se puede llevar a cabo a temperaturas entre 0 y 20°C, de manera preferentemente a 5-10°C hasta que la TLC muestre reacción completa o casi completa que toma de aproximadamente 2 horas a 3 días dependiendo de la temperatura, concentración y H.

En una modalidad preferida, -0R2 está en ß, R2 es bencilo, 4-metilbencilo, 4-clorobencilo y 1-naftilmetilo, R4 se selecciona a partir de isobutirilo, pivaloilo y benzoilo opcionalmente sustituido, preferentemente benzoilo y el catalizador ácido de la desprotección ácida selectiva es ácido sulfúrico.

De acuerdo a otra realización en el paso b) del primer aspecto, un grupo de compuestos de la fórmula general 2 caracterizada por la fórmula general 2D fórmula general 2D en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, R4 es bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi, R5 acilo opcionalmente sustituido, R8 se selecciona a partir de -NHAc o -NAc2 y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido se desprotege, comprendiendo los pasos de: a) reacción de transesterificación catalizada con base que da por resultado otros compuestos de la fórmula general 2D, en donde R2 es como se define anteriormente, R4 es bencilo sustituido por 1-3 metoxi, R5 es H, R8 es -NHAc y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, seguido por aa) oxidación mediada por diclorodicianoquinona (DDQ) o nitrato de cerio (IV) -amonio (CAN) que da por resultado el otro compuesto de la fórmula general 2D, en donde R2 es como se define anteriormente, cada uno de R4 y R5 es . H, R8 es -NHAc y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, seguido por hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional del sal ab) hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional de sal que da por resultado otro compuesto de la fórmula general 2D, en donde R2 es como se define anteriormente, R4 es bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi, R5 es H, R8 es -NHAc y Q es -COOH en ya sea forma protonada o desprotonada, seguido por oxidación mediada por diclorodicianoquinona (DDQ) o por nitrato de cerio (IV)-amonio (CAN) para dar un compuesto de la fórmula general 1 o sales del mismo, o b) oxidación mediada por diclorodicianoquinona (DDQ) o nitrato de cerio (IV) -amonio (CAN) que da por resultado otro compuesto de la fórmula general 2D, en donde R2 es como anteriormente, R4 es H, R5 acilo opcionalmente sustituido, R8 se selecciona a partir de -NHAc y -NAc2 y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, seguido por ba) reacción de transesterificación catalizada con base seguido por hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional de sal, o bb) hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional del sal, para dar un compuesto de la fórmula general 1 o sales del mismo, o c) hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional de sal que da por resultado otro compuesto de la fórmula general 2D, en donde R2 es como se define anteriormente, R4 es bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi, R5 es H, R8 es -NHAc y Q es -COOH en ya sea forma protonada o desprotonada, seguido por oxidación mediada por diclorodiciañoquinona (DDQ) o nitrato de cerio (IV) -amonio (CAN) para dar un compuesto de la fórmula general 1 o sales del mismo.

El término "-COOH en ya sea forma protonada o desprotonada" en ciertos compuestos de la fórmula general 2D se propone que signifique que el compuesto carboxílico en estos compuestos de la fórmula general 2D está ya sea en forma ácida (protonada) , significando de este modo que son ácidos o. el grupo carboxílico en estos compuestos de la fórmula general 2D está en una forma de carboxilato (-C0O-) que significa que son sales, sales en las cuales el contraión positivamente cargado puede ser un catión orgánico o inorgánico. Estos catiónicos orgánicos o inorgánicos se especifican anteriormente.

La 6 ' -O-sialil-lactosa protegida puede contener 1, 2 o 3 grupos bencilo sustituidos con metoxi en la porción lactosa, preferentemente p-metoxibencilo (R4 = PMB) . Es bien conocido que los bencil-éteres sustituidos con metoxi se escinden más fácilmente de forma oxidativa que los bencil-éteres insustituidos , de esta manera puede ser posible una desprotección selectiva si el aglicón o Q contiene un grupo bencilo. Los agentes oxidativos típicos son diclorodiciañoquinona (DDQ) y nitrato de cerio (IV) -amonio (CAN) , la reacción corre en un solvente orgánico en la presencia de agua, preferentemente en diclorometano o acetonitrilo, dando por resultado remoción suave del grupo protector de metoxi-bencilo-éter .

Con respecto al paso a) del primer aspecto de la presente invención, un compuesto de la fórmula general 3 (R1 es -0R2, R2 que es un grupo removible por hidrogenación catalítica, o R1 es -SR3, R3 que es alquilo opcionalmente sustituido arilo opcionalmente sustituido o bencilo opcionalmente sustituido, o R1 es -NH-C (R" ) =C (R' ) 2 , en donde cada R' independientemente del otro es un grupo de retiro de electrones seleccionado a partir de -CN, -COOH, -COO-alquilo, -CO-alquilo, -CONH2, -CONH-alquilo y CO (alquilo) 2 , o en donde los grupos R' - se enlazan conjuntamente y representan -C0- (CH2) 2-4-CO- y de esta manera forman con el átomo de carbono al cual están unidos un cicloalcan-1 , 3 -dion de 5-7 miembros, dion en el cual cualquiera de los grupos metileno está opcionalmente sustituido con 1 o 2 grupos alquilo, R" es H o alquilo, R4 = acilo opcionalmente sustituido o bencilo sustituido por 1, 2 o 3 metoxi) se hace reaccionar con un compuesto de acuerdo a la fórmula general 4 (R5 = acilo opcionalmente sustituido, R8 = -NHAc o -NAc2, Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, X es un grupo saliente) para obtener compuestos de la fórmula general 2 (R4 es acilo opcionalmente sustituido o bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi, R5 es acilo opcionalmente sustituido, R8 es -NHAc o NAc2 y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido) (Esquema de reacción 2) .

Esquema de reacción 2 Fórmula general 3 Fórmula general 4 Fórmula general 2 El acoplamiento del aceptador de lactosa de la fórmula general 3 con el donador de sialilo de la fórmula general 4 se puede llevar a cabo en un solvente aprótico o en una mezcla de solventes apróticos en la presencia de un activador (promotor o catalizador) para conducir al producto glicosilado deseado. El nuevo enlace interglicosídico se forma por el desplazamiento nucleófilo del grupo saliente X del donador de acuerdo a la fórmula general 4 con el grupo 6' -OH de aceptor de acuerdo a la fórmula general 3. Otros grupos funcionales en ambos de los reactivos participantes se tienen que enmascarar con grupos protectores. Se tiene que tomar cuidado especial con respecto a la estereoselectividad. El resultado esteroquímico se puede afectar por diferentes factores tal como la presencia o ausencia de un grupo participante en el carbono del anillo adyacente al centro anomérico del donador, la naturaleza del grupo saliente X, efecto de solvente, la naturaleza de los grupos protectores en tanto el donador como el aceptador, la naturaleza de los promotores o catalizadores, temperatura, presión, interacciones estéricas entre el donador y el aceptador, y similares. En el caso de derivados de ácido siálico, se desarrolla un arreglo de activación anomérica para la glicosilación y está disponible para una persona experta en la técnica involucrada en la química del ácido siálico. Estas metodologías se analizan efusivamente por las revisiones [6] . Por el bien de los ejemplos, se mencionan brevemente algunas consideraciones generales más adelante dependiendo del grupo X.

Los haluros de glicosilo (X significa F, Cl, Br, I) se usan de manera infrecuente en la reacción de glicosilación debido a su fase accesibilidad y reactividad satisfactoria. Típicamente, los haluros anoméricos siguen el orden de reactividad F<Cl<Br<I para desplazamiento nucleófilo. Las reacciones de glicosilación se promueven en general por ión de metal pesado, principalmente mercurio o plata, y ácidos de Lewis .

Se pueden preparar fácilmente glicosil-tricloroacetimidatos (X= -0C (=NH) CC13) por la adición del OH anomérico libre a tricloroacetonitrilo bajo catálisis con base orgánico o inorgánica. En una reacción típica de glicosilación, la cantidad catalítica de ácido de Lewis, tal como triflato de trimetilsililo o BF3-eterato, promueve el acoplamiento .

Se pueden activar los tioglicósidos (X denota grupo alquiltio- o feniltio) por promotores tiofílicos tal como sales de mercurio (II) , Br2, I2/ NBS, NIS, ácido tríflico, sales de triflato, BF3-eterato, triflato de trimetilsililo, triflato de dimetil-metiltio-sulfonio, triflato de fenilselenio, perclorato de yodonio-dicolidina, yoduro de tetrabutilamonio o mezclas de los mismos en reacciones de condensación, preferentemente por Br2, NBS o NIS.

Los donadores de glicosil-fosfita (X es -0-P- (0- [alquilo o bencilo])2)/ se pueden promover con NBS, NIS, TMSOTf, TfOH, Tf20, ZnCl2, BF3-OEt2, LiC104/ DTBPI, Bu4NI, AgC104, LÍCIO4, Sn(0Tf)2 o mezclas de los mismos, preferentemente TMSOTf .

Primero, los acetato de glicosilo (X representa -OAc) en la reacción de glicosilación se someten a activación electrofílica proporcionando un compuesto intermedio reactivo, luego se tratan con el aceptador de OH nucleófilo. Los activadores típicos de elección son ácidos Bronsted (tal como TsOH, HCIO4, ácido sulfámico) , ácidos de Lewis (tal como ZnCl2, SnCl4, sales de triflato, BF3-eterato, perclorato de tritilo, A1C13/ anhídrido tríflico) y sus mezclas.

De acuerdo a un método preferido, en las reacciones de acoplamiento se emplea un grupo de compuestos de la fórmula 4, que se caracteriza por la fórmula general 4A fórmula general 4A en donde Rs es acilo opcionalmente sustituido, Q es -C00-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido y R7 es bencilo sustituido. La reacción corre en solvente aprótico, preferentemente en diclorometano, THF, tolueno, acetonitrilo o en mezclas de los mismos, de manera más preferente en mezclas de diclorometano/acetonitrilo, a temperatura entre -78 0°C, en la presencia de promotor tal como NBS, NIS, TMSOTf, TfOH, Tf20, ZnCl2 , BF3.OEt2, LiC104, DTBPI, Bu4NI, AgCl0 , LiC104, Sn(0Tf)2 o mezclas de los mismos, preferentemente TMSOTf.

En una modalidad preferida, el donador y el aceptador se disuelven en una mezcla de solvente de THF/DCM en relaciones 1:1 a 1:5 y la temperatura se mantiene entre -40°C a -10°C. Un promotor de elección que incluye pero no se limita a TMSOTf, TfOH, BF3-Et20, DTPI, yoduro de tetrabutilamonio, etc., se adiciona y la reacción se agita hasta que alcanza el término.

En otra modalidad preferida, el donador y el aceptador se disuelven en la mezcla de solventes de CH3CN/DCM en relaciones de 1:1.7 a 1:5 y la temperatura se mantiene entre -40°C a -30°C. Se adiciona un promotor de elección que incluye pero no se limita a T SOTf, TfOH, BF3-Et20, DTPI, yoduro de tetrabutilamonio, etc., y la reacción se agita aún hasta que alcanza el término.

En otra modalidad preferida, el donador y el aceptador se disuelven en la mezcla de solventes de T0I/CH3CN/DCM de manera preferente en una relación 1:1:1 y la temperatura se mantiene entre -40°C a -20°C. Se adiciona un promotor de elección, que incluye pero no se limita a TMSOTf, TfOH, BF3-Et20, DTPI, yoduro de tetrabutilamonio, etc., y la reacción se agita hasta que alcanza el término.

En un donador preferido de la fórmula general 4A R5 es acetilo, R7 es 4-clorobencilo o 4-bromobencilo, y Q es -CÓOMe.

Con respecto a la producción de compuestos de la fórmula general 2, partiendo del aceptador de la fórmula general 3 y el donador de la fórmula general 4, otra realización preferida comprende el uso de otro grupo ' de compuestos de la fórmula general 4, que se caracteriza bajo la fórmula general 4B fórmula general en donde R5 es acilo opcionalmente sustituido, Q es -COO- alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido y R6 se selecciona a partir de C2-s alquilo, C3-6 cicloalquilo y bencilo opcionalmente sustituido. La glicosilación se lleva a cabo en solventes apróticos tal como cloroformo, diclorometano, tolueno, dioxano, THF, acetonitrilo o mezcla de los mismos, de manera preferente cloroformo o diclorometano, bajo la activación de NIS, NBS, Br2, ácido tríflico, triflato de plata, BF3-eterato o mezclas de los mismos .

En un donador preferido de la fórmula general 4B R5 es acetilo, R6 se selecciona a partir de etilo, isopropilo, t-butilo, bencilo y ciclohexilo, y Q es -COOMe.

Una modalidad adicional preferida se refiere al uso de compuestos de la fórmula general 4C en la reacción de sialilación fórmula general 4C en donde R5 es acilo opcional .mente sustituido, y Q es -COO- alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido. La glicosilación se lleva a cabo en solventes apróticos tal como cloroformo, diclorometano, tolueno, dioxano, THF, acetonitrilo o mezclas de los mismos, de manera preferente cloroformo o diclorometano, bajo la activación de ácidos Bronsted o Lewis. Un compuesto de la fórmula general 4C en donde R5 es acetilo y Q es -COOMe es el donador preferido de elección.

En un donador preferido de la fórmula general 4C R5 es acetilo, y Q es -COOMe.

En otra modalidad, la síntesis de compuestos de acuerdo a la fórmula general 2 comprende el uso de compuestos de la fórmula general 3A fórmula general 3A en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, y R4 se selecciona a partir de bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi y acilo opcionalmente sustituido con la condición de que se excluya acetilo.

En una modalidad preferida, -0R2 está en ß, R2 se selecciona de bencilo, 4-metilbencilo, 4 -clorobencilo y 1-naftilmetilo, y R4 se selecciona de isobutirilo, pivaloilo y benzoilo.

La 6 ' -O-sialil-lactosa y varios compuestos intermedios de 6 ' -O-sialil-lactosa en forma acida tienen estabilidad química limitada en solución acuosa debido a la alta acidez de la porción estructural de ácido siálico y debido a la baja estabilidad hidrolítica del enlace de a-O-sialilo. Por ejemplo, la 6 ' -Osialil- lactosa se descompone en solución acuosa a temperatura ambiente en ácido siálico y lactosa por autocatalísis . La baja estabilidad ácida de la sialil- lactosa misma en soluciones acuosas es el principal obstáculo de aislamiento, y de tecnologías enzimáticas o químicas que tengan como objetivo la preparación de 6'-0-sialil-lactosa. Adicionalmente, la 6 ' -O-sialil-lactosa no es cristalina impidiendo el desarrollo de eficientes metodologías de purificación requeridas para la preparación de un producto de alta calidad de 6 ' -O-sialil-lactosa.

La presente invención comprende la provisión de nuevas sales de 6' -O-sialil-lactosa. El término "sal de 6' -O-sialil-lactosa" significa un par de iones asociados que consiste del residuo ácido negativamente cargado de 6 ' -O-sialil-lactosa y un catión en cualquier proporción estequiométrica. Los cationes, como se usa en el presente contexto, son átomos o moléculas con carga positiva. El catión puede ser catión inorgánico así como orgánico. Los cationes inorgánicos preferidos son ión de amonio, metal alcalino, metal alcalinotérreo y iones de metales de transición, de manera más preferente Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Ba2+, Fe2+, Zn2+, Mn2+ y Cu2+, de manera mucho más preferente K+, Ca2+, Mg2+, Ba2+, Fe2+ y Zn2+. Los compuestos orgánicos básicos en forma positivamente cargadas pueden ser catiónicos orgánicos pertinentes. Estas contrapartes preferidas positivamente cargadas son dietil-amina, trietil-amina, diisopropil-etil-amina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, imidazol, piperidina, piperazina, morfolina, bencilamina, etilendiam na, meglumina, pirrolidina, colina, tris- (hidroximetil) -metilamina, N- (2-hidroxietil) -pirrolidina, N- (2-hidroxietil) -piperidina, N- (2-hidroxietil) -piperazina, N- (2-hidroxietil) -morfolina, L-arginina, Lisina, oligopéptidos que tienen una unidad de L-arginina o L-lisina u oligopéptidos que tienen grupo amino libre en la N-terminal, etc., todos en forma protonada. Estas formaciones de sal se pueden usar para modificar las características de la molécula compleja como una totalidad, tal como estabilidad, compatibilidad a excipientes, solubilidad y capacidad para formar cristales .

De esta manera, se proporciona la sal de Zn2+ de 6'-O-sialil-lactosa como la nueva sal inorgánica de 6'-SL: Además, la presente solicitud se refiere a la provisión de sales orgánicas de 6' -SL de la fórmula I Fórmula I en donde A significa cualquier base orgánica y m es un número entero.

El compuesto A como base orgánica comprende de manera preferente bases tipo amina tal como dietilamina, trietilamina, diisopropil-etilamina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, imidazol, piperidina, piperazina, morfolina, bencilamina, etilendiamina, meglumina, pirrolidina, cloro, tris- (hidroximetil) -metilamina, N- (2-hidroxietil) -pirrolidina, N- (2-hidroxietil) -piperidina, N- (2-hidroxietil) -piperazina, N- (2-hidroxietil) -morfolina, L-arginina, L-lisina, oligopéptidos que tienen una unidad de L-arginina o L-lisina u oligopéptidos que tienen un grupo amino libre en la iV-terminal, etc. Estas bases están en la forma protonada cuando se asocian con 6'-SL. Las aminas orgánicas especialmente preferidas se seleccionan dedietilamina, tris- (hidroximetil) -metilamina, etanolamina y cloro.

Las sales inorgánicas y orgánicas de 6'-SL se pueden obtener de 6'-SL acida. El pH de la solución del ácido libre en alcohol o alcohol/agua se ajusta a 8.5-11 con la base seleccionada; si la base es una inorgánica se puede elegir de hidróxidos, carbonatos y bicarbonatos metálicos. A la mezcla entonces se diluye con alcohol y se concentra in vacuo. La suspensión espesa obtenida entonces se filtra y se lava con alcohol .

De una manera alternativa, una sal inorgánica u orgánica de un compuesto de la fórmula general 1, en donde R1 es -0R2, en la cual R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica (ver anteriormente) se somete a hidrogenólisis catalítica para dar lugar al sal inorgánica u orgánica correspondiente de 6'-SL.

Se enfatiza fuertemente que las nuevas sales de 6'-O-sialil-lactosa puede ser cristalinas, se pueden considerar como entidades químicas solas tal como a- o ß-anómeros o aún una mezcla anomérica de los mismos. Deben existir en formas anhidras, hidratadas así como solvatadas . Además, las nuevas sales de 6'-SL se pueden aislar como sólido amorfo, jarabe o solución acuosa concentrada también.

La 6 ' -O-sialil-lactosa y los oligosacáridos sialilados de leche humana son de gran importancia por lo que se enlazan directamente a sus actividades biológicas únicas tal como actividades antibacterianas, antivirales, de mejora del sistema inmunitario y de mejora del desarrollo cognitivo. Los oligosacáridos sialilados de leche humana que incluyen 6'-SL, opcionalmente en combinación con otros oligosacáridos de leche humana que contienen ácido siálico y/o N-acetil-lactosamina y/o fucosa, se encuentra que actúan como prebióticos en el sistema intestinal humano ayudando a desarrollar y mantener la flora intestinal. Adicionalmente , también han probado ser anti-inflamatorios , y por lo tanto estos compuestos son componentes atractivos en la industria nutricional para la producción de, por ejemplo, fórmulas para infante, cereales de infante, productos clínicos nutricionales para infantes, fórmulas para niños pequeños, o como complementos dietéticos o alimento funcional saludable para niños, adultos, dé edad avanzada o mujeres que den pecho, ' mbos como compuestos combinados de forma sintética y que se presentan de manera natural y sales de los mismos . De esta manera, las sales de Zn2+ de 6'-SL y/o las sales orgánicas de 6'-SL de acuerdo a la presente invención son adecuadas para uso farmacéutico y nutricional.

En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una sal de Zn2+ de 6'-SL y/o sales orgánicas de 6'-SL como ingrediente activo y uno o más portadores farmacéuticamente aceptables que incluyen pero no se limitan a aditivos, adyuvantes, excipientes y eluyentes (agua, gelatina, talco, azúcares, almidón, goma arábiga, gomas vegetales, aceites vegetales, polialquilenglicoles , agentes saborizantes , conservadores, estabilizadores, agentes emulsionantes, lubricantes, colorantes., agentes de relleno, agentes humectantes, etc.). Los portadores adecuados se describen la edición más reciente de Remington's Pharmaceutical Sciences, un texto normal de referencia en el campo. La forma de dosis para administración incluye, por ejemplo, tabletas, polvos, gránulos, pildoras, suspensiones, emulsiones, infusiones, cápsulas, jarabes, inyecciones, líquidos, elixires, extractos y tintura.

En una modalidad adicional, la sal de Zn2+ de 6'-SL y/o las sales orgánicas con 6'-SL de acuerdo a la presente invención se usan para la preparación de composiciones farmacéutica. Las composiciones farmacéutica se pueden producir por medio de cualquier manera¦ usual conocida en la técnica, por ejemplo, como se describe en la más reciente edición de Remington's Pharmaceutical Sciences, un texto normal de referencia en el campo.

En una modalidad adicional, se proporcionan formulaciones nutricionales que comprenden una o más sales de 6'-SL seleccionadas a partir de sal de Zn2+ de 6'-SL y/o sales orgánicas de 6'-SL de acuerdo a la presente invención tal como comida, bebida o alimento. La formulación nutricional puede contener micronutrientes comestibles, vitaminas y minerales también. Las cantidades de estos ingredientes pueden variar dependiendo de si la formulación se proponga para uso con infantes saludables normales, niños, adultos o sujetos que tienen necesidad especiales (por ejemplo que padecen de trastornos metabólicos. Los micronutrientes incluyen por ejemplo aceites, grasas o ácidos grasos comestibles (tal como aceite de coco, aceite de soya, monoglicéridos , diglicéridos, oleína de palma, aceite de girasol, aceite de pescado, ácido linoleico, ácido linolénico, etc.), carbohidratos (tal como glucosa y fructosa, sacarosa, maltodextrina, almidón, almidón de maíz hidrolizado, etc.) y proteínas de aseína, soya, suero o leche descremada, o hidrolizados de estas proteínas, pero también se pueden usar proteínas de otra fuente (ya sea intactas o hidrolizadas) . Se pueden elegir vitaminas del grupo que consiste de vitamina A, Bl, B2, B5, B6 , B12 , C, D, E, H, K, ácido fólico, inositol y ácido nicotínico. La formulación nutricional puede contener los siguientes minerales y elementos traza: Ca, P, K, Na, Cl, Mg, Mn, Fe, Cu, Zn, Se, Cr o I.

En una modalidad preferida, la formulación nutricional es una fórmula para infante. La fórmula para infante significa una materia alimenticia propuesta para uso nutricional particular para infantes durante los primeros 4-6 meses de vida y que satisfaga por sí misma los requisitos nutricionales de los infantes. Puede contener una o más especies prebióticas de Bifidobacterium, prebióticos tal como fructooligosacáridos y galactooligosacáridos, proteínas de caseína, soya, suero o leche descremada, carbohidratos tal como lactosa, sacarosa, maltodextrina, almidón y mezclas de estos, lípidos (por ejemplo, oleína de palma, aceite de girasol, aceite de cártamo) y «vitaminas y minerales esenciales en una dieta diaria. La fórmula para infante puede contener sal de Zn2+ de 6'-SL y/o sales orgánicas de 6'-SL de acuerdo a la presente invención en una cantidad total de 0.1-3.0 g/100 g de fórmula.

En otra modalidad preferida, la formulación nutricional puede ser un complemento alimenticio que incluye sal de Zn2+ de 6'-SL y/o sales orgánicas de 6'-SL de acuerdo a la presente invención. El complemento alimenticio puede comprender uno o más prebióticos en una cantidad suficiente para lograr el efecto deseado en un individuo, preferentemente niños y adultos. El complemento alimenticio puede contener también vitaminas, minerales, elementos traza y otros micronutrientes también. El complemento alimenticio puede estar por ejemplo en la forma de tabletas, cápsulas, pastillas o un líquido. El complemento puede contener aditivos convencionales seleccionados pero no limitados a aglutinantes, revestimientos, emulsionadores , agentes solubilizantes , agentes encapsuladores , agentes formadores de película, absorbentes, portadores, agentes de relleno, agentes dispersantes, agentes humectantes, agentes formadores de gelatina, agentes formadores de gel, etc. La dosis diaria de la sal de Zn2+ de 6'-SL y/o sales orgánicas de 6'-SL varía de 0.1 a 3.0 g .

De acuerdo a una modalidad más preferida, el complemento alimenticio es alimento funcional saludable digerible puesto que la administración de la sal de Zn2+ de 6'-SL y/o sales orgánicas de 6'-SL proporciona un efecto benéfico en la salud digestiva. El alimento funcional de salud digestiva es un alimento procesado usado con la intensión de mejorar y conservar la salud digestiva por la sal de Zn2+ de 6'-SL y/o sales orgánicas de 6'-SL de acuerdo a la presente ' invención como ingrediente o componente fisiológicamente funcional en forma de tableta, cápsula, polvo, etc. También se pueden usar diferentes términos tal como complemento dietético, nutracéutíco, alimento designado, producto de salud para referirse a un alimento funcional.

En una modalidad adicional, la sal de Zn2+ de 6'-SL y/o sales orgánicas de 6'-SL de acuerdo a la presente invención se usan para preparación de formulación nutricional que incluya alimentos, bebidas y forrajes, preferentemente fórmulas para infante, complementos alimenticios y alimento funcional de salud digestiva. La formulación nutricional se puede preparar de cualquier manera usual .

Se cree que los compuestos de la fórmula general 1, 2, 3 y 4 son compuestos intermedios de síntesis valiosos hacia 6'-SL. Los presentes inventores reconocieron de forma sorprendente que algunos de los compuestos de la fórmula general 1, 2, 3 y 4 se pueden obtener de forma cristalina. La cristalización o recristalización es uno de los métodos más simples y más baratos para aislar un producto a partir de una mezcla de reacción, separarlo de combinaciones y obtener una sustancia pura. El aislamiento o purificación que usa cristalización hace al proceso tecnológico completo fuerte y efectivo en el costo, de esta manera es ventajoso y atractivo en comparación a otros procedimientos. La presente invención tiene un gran valor comercial en una producción a gran escala de 6'-SL que proporciona alta pureza de compuestos intermedios, que no se puede lograr por ninguno de los otros métodos de purificación conocidos. Aunque algunos otros compuestos intermedios no han mostrado la capacidad de cristalizarse, se pueden preparar en reacciones limpias, de alto rendimiento y que forman menos subproductos donde han sido suficientes el tratamiento usual (extracción, evaporación, precipitación, etc.) para obtener productos de alta pureza que se han usado sin purificación adicional en el siguiente paso.

De esta manera, se proporciona como compuesto intermedio valioso de 6'-SL un grupo del compuesto de la fórmula general 1 o una sal de los mismos, específicamente compuestos de la fórmula general 1A fórmula general 1A en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, preferentemente bencilo, 4-metilbencilo, 4- clorobencilo y 1-naftilmetilo y OR2 está en ß, . y compuestos de la Fórmula general IB fórmula general IB en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, en forma de sal seleccionada de sales de Zn2+, K+, Ca2+, Mg+, Ba2+, Fe2+, Mn+, Cu2+ y sales orgánicas.

Se enfatiza fuertemente que los nuevos derivados caracterizado por las fórmulas generales 1A y IB se pueden considerar como entidades químicas únicas tal como ya sea a anómeros a o ß, preferentemente el anómero ß o aún una mezcla numérica de isómeros OÍ y ß. Los nuevos compuestos intermedios de 6'-SL de las fórmulas generales 1A y IB se pueden caracterizar como sólidos cristalinos, aceites, jarabes, material amorfo precipitado o productos secados por aspersión, preferentemente como sólidos cristalinos. Si son cristalinos, los compuestos de las fórmulas generales 1A y IB pueden existir ya se en formas cristalinas anhidras o hidratadas al incorporar una o varias moléculas de agua en sus estructuras cristalinas. De manera similar, los nuevos compuestos caracterizados por las fórmulas generales 1A y IB pueden existir como sustancias cristalinas que incorporan ligandos tal como moléculas orgánicas y/o iones en sus estructuras cristalinas.

Un compuesto de la fórmula general IB como sal significa un par asociado de iones que consiste del residuo ácido negativamente cargado de un compuesto de la fórmula general IB y un catión en cualquier proporción estequiométrica . El catión puede ser K+, Ca2+, g2+, Ba2+, Fe2+, Zn2+, Mn2+ y Cu2+, de manera más preferente K+, Ca2+, Mg+, Ba2+, Fe2+ y Zn2+. Los compuestos orgánicos básicos en forma positivamente cargadas pueden ser cationes orgánicos pertinentes también. Estas moléculas orgánicas positivamente cargadas preferidas son dietilamina, trietilamina, diisopropil-etil-amina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, imidazol, piperidina, piperazina, morfolin, bencilo amina, etilendiamina, meglumina, pirrolidina, colina, tris- (hidroximetil) -metil-amina, N- (2-hidroxietil) -pirrolidina, N- (2-hidroxietil) -piperidina, N- (2-hidroxietil) -piperazina, N- (2-hidroxietil) -morfolina, L-arginina, L-lisina, oligopéptidos que tienen una unidades de L-arginina o L- Usina u oligopéptidos que tienen grupos amino libre en la N-terminal , etc., todos en forma protonada.

Una modalidad preferida se refiere a compuestos de la fórmula general IB en donde R2 es bencilo, -0R2 está en ß y la sal se selecciona a partir de la sal de Zn2+ y sales orgánicas, y la sal orgánica se selecciona preferentemente de sal de etanolamonio, de dietilamonio, de tris- (hidroximetil) -metil amonio y colina.

Los nuevos compuestos de las fórmulas generales 1A y IB proporcionados en por la presente invención se pueden pueden usar para la preparación de 6'-SL misma y otros derivados de 6'-SL al usar metodologías químicas/enzimáticas conocidas en la técnica. También, se pueden usar los nuevos compuestos de las fórmulas generales 1A y IB como precursores/compuestos intermedios avanzados para la producción/preparación de numerosos oligosacáridos de leche humana. Los nuevos compuestos de las fórmulas generales 1A y IB también se pueden considerar como compuestos intermedios valiosos para la síntesis de oligosacáridos/glicoconjugados complejos adecuados para uso terapéutico/nutricional.

Se proporcionan compuestos de la fórmula general 2A fórmula general 2A en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, R4 y R5 son independientemente entre sí acilo opcionalmente sustituido, R8 se selecciona a partir de -NHAc y -NAc2, y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido.

Se enfatiza fuertemente que los nuevos derivados caracterizados por la fórmula 2A se pueden considerar como entidades químicas únicas tal como ya sea anómeros - o ß, preferentemente el anómero ß, o aún una mezcla numérica de isómeros y ß. Los nuevos compuestos intermedios de 6' -SL de la fórmula general 2A, se pueden caracterizar como sólidos cristalinos, aceites, jarabes, material amorfo precipitado o productos secados por aspersión, de manera preferente como sólidos cristalinos. Si son cristalinos, los compuestos de la fórmula general 2A pueden existir ya sea en forma cristalina anhidra hidratada al incorporar una o varias moléculas de agua en sus estructuras de cristal. De manera similar, los nuevos . compuestos caracterizados por la fórmula general 2A deben existir como sustancias cristalinas que incorporan ligandos tal como moléculas orgánicas y/o iones en sus estructuras cristalinas.

Los compuestos de la fórmula general 2A en donde -OR2 está en ß, R2 se selecciona a partir de bencilo, 4-metilbencilo, 4-clorobencilo y 1-naftilmetilo, R4 se selecciona a partir de isobutirilo, pivaloilo y benzoilo opcionalmente sustituido, de manera preferente pivaloilo y benzoilo, R5 es acetilo, Q es -CO0CH3 son especialmente preferidos .

Los nuevos compuestos de la fórmula general 2A proporcionados por la presente invención se pueden usar para la preparación de 6'-SL misma y otros derivados de 6'-SL al usar metodologíás químicas/enzimáticas conocidas en la técnica. También se pueden usar los nuevos compuestos de las fórmulas generales 2A como precursores/compuestos intermedios avanzados para la producción/preparación de numerosos oligosacáridos de leche humana. Los nuevos compuestos de las fórmulas generales 2A también se pueden considerar como compuestos intermedios valiosos para la síntesis de oligosacáridos/glicoconjugados complejos adecuados para uso terapéutico/nutricional .

Los compuestos preferidos,- adicionales de la fórmula general 2 son compuestos de la fórmula general 2C fórmula general 2C en donde -0 2 está en (¾, R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, preferentemente bencilo, 4-metilbencilo, 4-clorobencilo y 1-naftilmetilo, y R4 se selecciona a partir de isobutirilo, pivaloilo y benzoilo opcionalmente sustituido, preferentemente benzoilo .

Se enfatiza fuertemente que los nuevos derivados caracterizados por la fórmula general 2C se pueden considerar como entidades químicas únicas tal como ya sea anómeros o ß, preferentemente el anómero ß, o aún una mezcla anomérica de isómeros OÍ y ß . Los nuevos compuestos intermedios de 6'-SL de la fórmula general 2C se pueden caracterizar como sólidos cristalinos, aceites, jarabes, material amorfo precipitado o productos secados por aspersión, preferentemente como sólidos cristalinos. Si son cristalinos, los compuestos de la fórmula general 2C pueden existir ya sea en formas cristalinas anhidras o hidratadas al incorporar una o varias moléculas de agua en sus estructuras cristalinas. De manera similar, los nuevos compuestos caracterizados por la fórmula general 2C pueden existir como sustancias cristalinas que incorporan ligandos tal como moléculas orgánicas y/o iones en sus estructuras cristalinas.

Los nuevos compuestos de la fórmula general 2C proporcionados por la presente invención se pueden usar para la preparación de 6'-SL misma y otros derivados de 6'-SL al usar metodologías químicas/enzimáticas conocidas en la técnica. También se pueden usar los nuevos compuestos de las fórmulas generales 2C como precursores/compuestos intermedios avanzados para la producción/preparación de numerosos oligosacáridos de leche humana. También los nuevos compuestos de las fórmulas generales 2C se pueden considerar como compuestos intermedios valiosos para la síntesis de oligosacáridos/glicoconjugados complejos adecuados para uso terapéutico/nutricional .

Otro aspecto de la presente solicitud se refiere a la provisión de compuestos de la fórmula general 2D fórmula general 2D en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, R4 se selecciona a partir de bencilo sustituido con 1-3 grupos metoxi y H, R5 se selecciona a partir de acilo opcionalmente sustituido y H, R8 se selecciona a partir de -NHAc y NAc2, y Q se selecciona a partir de -COO-alquilo , alquilo que está opcionalmente sustituido y -COOH en ya sea forma protonada o desprotonada, con la condición que si Q es -COOH en ya sea forma protonada o desprotonada y R8 es -NHAc, entonces tanto R4 como R5 no pueden, ser simultáneamente H.

Se enfatiza fuertemente que los nuevos derivados caracterizados por la fórmula general 2D se pueden considerar como las únicas entidades químicas tal como ya sea anómeros a o ß, preferentemente el anómero ß, o aún una mezcla anomérica de isómeros a y ß. Los nuevos compuestos intermedios de d'-SL de la general formula 2D se pueden caracterizar como sólidos cristalinos, aceites, jarabes, material amorfo precipitado o productos secados por aspersión, preferentemente como sólidos cristalinos. Si son cristalinos, los compuestos de la fórmula general 2D pueden existir ya sea en formas cristalinas anhidras o hidratadas al incorporar una o varias moléculas de agua en sus estructuras cristalinas. De manera similar, los nuevos compuestos caracterizados por la fórmula general 2D pueden existir como sustancias cristalinas que incorporan ligandos tal como moléculas orgánicas y/o iones en sus estructuras cristalinas.

En una modalidad preferida, -OR2 está en ß , R2 se selecciona a partir de bencilo, 4 -metilbencilo , 4-clorobencilo y 1-naftilmetilo, R4 y R5 son H, R8 es -NHAc y Q es -CÓO-alquilo , alquilo que está opcionalmente sustituido, preferentemente -COOMe.

Los nuevos compuestos de la fórmula general 2D proporcionados por la presente invención se pueden usar para la preparación de 6'-SL misma y otros derivados, de 6'-SL al usar las metodologías químicas/enzimáticas conocida en la técnica. También, los nuevos compuestos de las fórmulas generales 2D se pueden usar como precursores/compuestos intermedios avanzados. Para la producción/separación de numerosos oligosacáridos de leche humana. También, los nuevos compuestos de las fórmulas generales 2D se pueden considerar, como compuestos intermedios valiosos para la síntesis de oligosacáridos/glicoconjugados complejos adecuados para uso terapéutico/nutricional .

Se tiene que enfatizar que los compuestos de la fórmula general 4A son nuevos. De esta manera, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula general 4A fórmula general 4A en donde R5 es acilo opcionalmente sustituido, Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido y R7 es bencilo sustituido. En modalidades preferidas R5 es acetilo, Q es -COOCH3 y R7 bencilo substituido, preferentemente sustituido por cloro o bromo en la posición 4.

Los compuestos de la fórmula general 4A se pueden considerar como materiales cristalinos en forma ß-anomérica. Son estables, se pueden almacenar durante períodos más largos de tiempo sin descomposición significativa, se pueden activar fácilmente en reacciones de glicosilación y muestran excelente -selectividad. Puesto que se conoce que no son sólidas sus contrapartes de bencil-fosfito insustituido, los compuestos de la fórmula general 4A acuerdo a la presente solicitud tienen obviamente aplicabilidad ventajosa en reacciones de sialilación.

Por consiguiente, la presente invención proporciona el uso de compuestos de la fórmula general 4A en la síntesis de sialo-oligosacáridos, preferente oligosacáridos sialilados de leche humana . ' estos HMO sialilados son, por ejemplo, 6'-sialil-lactosa, 3 ' -sialil-lactosa, 3 ' -sialil-3 -fucosil-lactosa, disialil- lacto-N-tetraosa, disialil-monofucosillacto-N-hexaosa, sialillacto-N-tetraosa, sialillacto-iV-tetraosa b, sialillacto-iV-tetraosa c, sialillacto-iV-fucopentaosa * II, monofucosil monosialillacto-iV-hexaose I, monosialillacto-N-neohéxaosa I, monosialil monofucosilacto-iV-neohexaosa.

La presente invención se refiere también a la producción de compuestos de la fórmula general 4A (Esquema de reacción 3) . Los derivados de ácido siálico fácilmente disponibles de acuerdo a la fórmula general 9 se fosfitilan ya sea directamente con (R0)2PY, en la cual Y es halógeno o grupo de alquilamino, en la presencia de amina terciaria, preferentemente Et3N, en solvente aprótico, preferentemente diclorometano, o en dos pasos consecutivos: primero adicionar PC13 y luego R7OH (R7 es bencilo sustituido, preferentemente halo- o metilbencilo) . En ambos pasos, se necesita una base de amina terciaria para neutralizar el ácido clorhídrico formado; en el primer paso imidazol, en el segundo paso Et3N son la base preferida. El solvente usado se selecciona a partir de solventes apróticos, preferentemente - diclorometano es el solvente de elección.

Esquema de reacción 3 fórmula general 9 fórmula general 4A «¦ Se tiene que enfatizar que los compuestos de la fórmula general 4B son nuevos. De esta manera, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula general 4B fórmula general en donde es acilo opcionalmente sustituido, preferentemente acetilo, R6 se selecciona a partir de C2-6 alquilo, C3-s cicloalquilo y bencilo opcionalmente sustituido, preferentemente a partir de etilo, isopropilo, t-butilo, bencilo y ciclohexilo, Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido preferentemente-COOMe .

Los compuestos de la fórmula general 4B se pueden considerar como materiales cristalinos en forma a-anomérica. Son estables, se pueden almacenar durante períodos más prolongados de tiempo sin descomposición significativa, se pueden activar fácilmente en reacciones de glicosilación y muestran excelente a-selectividad. Como sus análogos, tal como metil- fenil- o 4-metil-fenil-tioglicósido se conoce que no son sólidos, los compuestos de acuerdo a la fórmula general 4B de acuerdo a la presente solicitud tienen obviamente aplicabilidad ventajosa en reacciones de sialilación.

Por consiguiente, la presente invención proporciona el uso de compuestos de la fórmula general 4B en la síntesis de sialooligosacáridos , preferentemente oligosacáridos sialilados de leche humana, estos HMO sialilados son, por ejemplo, 6'-sialil-lactosa, 3 ' -sialil-lactosa, 3 ' -sialil-3-fucosil-lactosa, disialil-lacto-N-tetraosa, disialil-monofucosil-lacto-N-hexaosa, sialilacto-AT-tetraosa a, sialillacto-iV-tetraosa b, sialillacto-N-tetraosa c, sialillacto-W-fucopentaosa II, monofucosil monosialillacto-N-hexaosa I, monosialillacto-iV-neohexaosa I, monosialil monofucosillacto-JV-neohexaosa.

La presente invención también se' refiere a la producción de compuestos de la fórmula general 4B. Se puede acetilar el éster de ácido siálico o el éster de ácido tetra-O-acetil-siálico con acetato de isopropenilo en la presencia de ácido, preferentemente ácido tósico a temperatura elevada. El 2,4,7,8, 9-penta-0-acetil-5- (N-acetilacetamido) -3 , 5-dideoxi-2-tio-D-glicero-D-galacto-non-2-ulopiranosonato resultante entonces se hace reaccionar con R6SH (R6 es C2-5 alquilo, C3-e cicloalquilo o bencilo opcionalmente sustituido, preferentemente etilo, isopropilo, t-butilo, bencilo o ciclohexilo) para formar compuestos de la fórmula general 4B bajo ácido de Lewis (por ejemplo, eterato de trifluoruro de boro, TfOH, TMSOTf, etc.) la activación en un solvente prótico en una mezcla de solventes apróticos tal como diclorometano, dicloroetanp, cloroformo, THF, dioxano, acetonitrilo, DMF, etc. Los derivados de alquiltio activados tal como trimetilsilil-SR6 también se pueden aplicar. De acuerdo a un diferente planteamiento, se puede acoplar cloruro de tetraacetil-sialilo con RSSH en la presencia de base y el tioglicósido resultante se puede N-acetilar de manera subsiguiente con acetato de isopropenilo (Esquema de reacción 4) .

Esquema de reacción 4 Se tiene que enfatizar que el uso de los compuestos de la fórmula general 4C en las reacciones de sialilación no se ha mencionado en la técnica. De esta manera, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula general 4C para el uso como donador de sialilo fórmula general C en donde R5 es acilo Opcionalmente sustituido, preferentemente acetilo y Q es -COO-alquilo , alquilo que está opcionalmente sustituido, preferentemente -COOMe.

Los compuestos de la fórmula general 4C se pueden considerar como materiales cristalinos en forma ß-anomérica. Son estables, se pueden almacenar durante períodos prolongados de tiempo sin descomposición significativa, se pueden activar fácilmente en reacciones de glicosilación y muestran excelente a-selectividad.

Por consiguiente, en una modalidad más preferida, la presente invención proporciona el uso de compuestos de la fórmula general 4C en la síntesis de sialooligosacáridos , preferentemente oligosacáridos sialilados de leche humana. Estos HMO sialilados son por ejemplo 6 ' -sialil-lactosa, 3'-sialil-lactosa, 3 ' -sialil-3 -fucosillactos , disialillacto-N-tetraosa, disialil-monofucosillacto-N-hexaosa, sialillacto-W-tetraosa a, sialillacto-N- tetraosa b, sialillacto-N- tetraosa c, sialillacto-N-fucopentaosa II, raonofucosil monosialillacto-iV-hexaosa I, monosialillacto--V-neohexaosa I, monosiali1 -monofucosi1lacto-N-neohexaosa .

Se enfatiza que los compuestos de la fórmula general 3A son nuevos, cristalinos, se pueden considerar como entidades químicas únicas tal como a- o ß-anómeros o aún una mezcla anomérica de los mismos, preferentemente en ß-anómera. Pueden existir en formas anhidras, hidratadas así como solvatadas .

De esta manera, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula general 3A fórmula general 3A en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, y R4 se selecciona a partir de bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi y acilo opcionalmente sustituido con la condición que se excluya acetilo.

En una modalidad más preferida, -0R2 está en ß, R2 se selecciona a partir de bencilo, 4 -metilbencilo, 4-clorobencilo y 1-naftilmetilo, y R4 se selecciona a partir de isobutirilo, pivaloilo y benzoilo.

Los presentes inventores se dieron cuenta que los grupos acetilo son grupos acetilo son grupos protectores inconvenientes cuando los compuestos de la fórmula general 3A actúan como un aceptador de glicosilo en reacciones de sialilación. Bajo las condiciones de acoplamiento, la migración de acetilo siempre se presenta para dar una mezcla compleja que contiene sustancias con características físicas similares, compuestos que se pueden separar sólo por técnicas prolongadas y/o sofisticadas y/o laboriosas, por ejemplo, cromatografía. La elección del grupo protector de acilo voluminoso que no tienda o tienda a migrar menos da por resultado un aceptador cuyo producto de acoplamiento se forma casi exclusivamente en la glicosilación, haciendo el procedimiento de tratamiento y el proceso de aislamiento de los compuestos deseados más simple, rápido, poderoso y efectivo en el costo, por ejemplo, por cristalización, que es una de las cuestiones supremas en la preparación a gran escala o en un proceso industrial.

Otro aspecto de la presente invención es preparar aceptadores de glicosilo caracterizados por la fórmula general 3A anterior (Esquema de reacción 5) . El O-lactosido de inicio se puede formar fácilmente por glicosilación de Fischer (lactosa tratada con el correspondiente alcohol en la presencia de catalizadores ácidos) . Los O-lactosidos obtenidos de esta manera de la fórmula general 6 entonces se protegen selectivamente en la posición 4' ,6' con R9-CHO (R9 = fenilo opcionalmente sustituido con 1-2 alcoxi o nitro) , benzofenona o di-O-acetales de los mismos de manera conocida que da lugar a los compuestos de la fórmula general 7 seguido por acilación o metoxi-bencilación para obtener compuestos de la fórmula general 8. La acilación se puede realizar con haluros de acilo, anhídridos, esteres activos, etc., en la presencia de base de una manera conocida. Una formación típica de éter bencílico corre al adicionar el apropiado halogenuro de bencilo (cloruro, bromuro y yoduro) y NaH o KOH en polvo o NaOH en un solvente orgánico aprótico inerte tal como THF, dioxana, DMF, etc., aunque el reactivo haluro de bencilo se puede usar como solvente. También se pueden aplicar condiciones de catálisis de transferencia de fase en bencilación, el solvente de fase orgánica se selecciona del grupo de hidrocarburos aromáticos (tolueno, benceno, xiloles) y solución acuosa básica, preferentemente solución de NaOH o KOH al 50 % se usa como fase acuosa. Las sales de amonio o fosfonio cuaternarias, o éteres corona se pueden adicionar como catalizador, preferentemente TBAI. La remoción del grupo protector tipo acetal o cetal de los compuesto de la fórmula general 8 por hidrólisis ácida da por resultado compuestos de la fórmula general 3A.

Esquema de reacción 5 de Reacción fórmula general 8 fórmula general 3A En una modalidad preferida para preparar compuestos de la fórmula general 3A se usa ß-bencil-lactosido como el material de inicio (R1 = OBn en la fórmula general 6) . En una realización preferida adicional, el benzaldehído-dimetilacetal es el reactivo para proteger las posiciones ',6'. Para proteger los hidroxilos libres en los compuestos de la fórmula general 7, se favorecen grupos pivaloilo y benzoilo opcionalmente sustituidos. En el caso de remover el bencilideno-acetal de los compuestos de la fórmula general 8, los ácidos inorgánicos fuertes diluidos, los ácidos orgánicos (por ejemplo, ácidos alcanoicos, ácidos sulfónicos) y la resina de intercambio iónico en forma de H+, se les da preferencia . como el catalizador ácido, preferentemente ácido p-toluenosulfónico, y entre los solventes, los alcoholes, los hidrocarburos aromáticos, los alcanos clorados, o las mezclas de los mismos son favorables, preferentemente de DCM, metanol * o mezclas de los mismos.

De acuerdo a un aspecto adicional, los compuestos de la fórmula general 3A definida y reivindicada anteriormente se pueden usar para preparar 6'-SL. Los compuestos de la fórmula general 3A como el aceptador reacciona fácilmente con cualquier donador adecuado de sialilo que da lugar a los compuestos intermedios protegidos de 6'-SL de acuerdo a la fórmula general 2 anterior, que entonces se pueden transformar en 6'-SL y sales de los mismos por medio de manipulaciones desprotectoras como se describe anteriormente .

Llegarán a ser evidentes otras características de la invención en el transcurso de la siguiente descripción de las modalidades de ejemplo que se dan a manera de ilustración de la invención y no son limitantes de la misma.

Ejemplos Ejemplo 1 Una mezcla de ácido siálico anhidro (100 g, 323 mmol) y resina de intercambio iónico Amberlita IR-120 (H+) seca (100 g) en MeOH (1500 mL) se agitó durante 15 horas a temperatura ambiente. La resina de intercambio iónico se filtró y se lavó con MeOH (2x100 mL) . Los lavados se combinaron con el filtrado y se concentraron a 300 mL. El residuo concentrado se cristalizó al sembrar a temperatura ambiente. Los cristales se recolectaron por filtración dando 73.8 g (71 %) éster metílico de ácido siálico. El licor madre se concentró (10.5 g) y se cristalizó a partir de MeOH (30 20 mL) para producir 7.4 g (7 %) de éster metílico del ácido siálico. Rendimiento total de 81.2 g (78 %) .

RMN-1H (D20) d en ppm: 1.89 (dd, 1H, J=13.0Hz, J=11.4Hz); 2.03 (s, 3H) ; 2.28 (dd, 1H, J=13.0Hz, J=4.7Hz); 3.52 (dd, 1H, J=8.9Hz, J=3.0Hz); 3.59 (dd, 1H, J=11.6Hz, J=6.1Hz); 3.71 (ddd, J=8.9Hz, J=2.5Hz, J=11.6Hz); 3.82 (dd, 1H, J=11.6Hz, J=2.5Hz); 3.82 (s, 3H) ; 3.90 (dd, 1H, J=10.1Hz, J=10.0Hz); 3.98-4.10 (m, 2H, H-6, H-4).

Ejemplo 2 A una suspensión de ácido siálico anhidro (lOOg, 323 mmol) en MeOH (1200 mi) [contenido de agua de 0.03 %] se adicionó HC1 al 8 % en MeOH (50 mi) y la mezcla de reacción se agitó durante 6 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se neutralizó con trietilamina (15 mi) y la solución clara se concentró a 270 mL. El residuo concentrado se cristalizó en la siembra a temperatura ambiente durante 2 horas. El sólido se recolectó por filtración produciendo 104.9 g (100 %) . -Ejemplo 3 Una suspensión de éster metílico de ácido siálico (50 g, 155 mmol) y anhídrido acético (73 mi, 775 mmol) en DCM (175 mL) se agitó a temperatura ambiente y entonces se adicionó ácido perclóricó al 70 % (1 mL) gota a gota en el espacio de 30 minutos. Durante la adición, la temperatura de la mezcla se incrementó hasta el reflujo. La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 2.5 h, y después de este tiempo se adicionó gota a gota MeOH (7.5 mi, 185 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante una hora adicional a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (175 mL) y se lavó con agua (3x50 mL) . Las fases de agua combinadas se extrajeron con DCM (2x100 mL) . Las fases orgánicas combinadas se lavaron con NaHC03 saturada (2x100 mL) y se evaporaron. El residuo (59.6 g) se disolvió en iBuOAc a 50 °C y la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se dejó durante la noche para terminar la cristalización. El sólido se recolectó por filtración produciendo 39.2 g (52 %) de éster metílico de ácido tetraacetil -siálico .

RMN H. (C6D6) d en ppm: 1.60, 1.63, 1.70, 1.85, 1.92 (5s, 15H) ; 2.19 (dd, 1H, J=12.8Hz, J=5.7Hz); 2.25 (ddd, 1H, J=12.8Hz, J=10.8Hz); 3.28 (s, 3H) ; 4.23 (dd, 1H, J=12.4Hz, J=7.6Hz); 4.26 (dd, 1H) ; 4.54 (ddd, 1H, J=10.8Hz); 4.78 (d, 1H, J=10.2Hz); 5.02 (dd, 1H, J=12.4Hz, J=2.0Hz); 5.26 (ddd, 1H, J=10.8Hz, J=5.7Hz, J=10.5Hz); 5.61 (ddd, 1H, J=2.0Hz, J=7.6HZ); 5.64 (dd, 1H, J=2.3Hz, J=4.2Hz).

XH (CDC13) d en ppm: 1.91, 2.02, 2.03, 2.11, 2.15 (5s, 15H) ; 2.19 (dd, 1H, J=12.8Hz, J=11.4Hz); 3.26 (ddd, 1H, J=12.8Hz, J=5.4Hz); 3.86 (s, 3H) ; 4.03 (dd, 1H, J=12.4Hz, J=7.5Hz); 4.13-4.21 (m, 2H) ; 4.51 (dd, 1H, J=12.4Hz, J=2.4Hz); 5.22 (ddd, 1H, J=11.4Hz, J=5.4Hz, J=9.5Hz); 5.25 (ddd, 1H, J=2.4Hz, J=7.5Hz, J=5.6Hz); 5.36 (dd, 1H, J=1.5Hz, J=5.6Hz); 5.71 (m, 1 H) .

RMN 13C: 20.65, 20.75, 20.93, 22.93, 36.11, 49.04, 53.18, 62.50, 68.3, 69.12, 71.32, 72.07, 94.84, 168.93, 170.12, 170.30, 170.72, 171.04, 171.43 Ejemplo 4 A una mezcla de éster metílico de ácido siálico (60.8 188 mmol) y anhídrido acético (89 mi, 940 mmol) en DCM (220 mL) , se adicionó gota a gota ácido perclórico al 70 % (1.22 mL) en el espacio de 30 minutos. Durante la adición, la temperatura de la mezcla se incrementó hasta el reflujo. La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 2.5 h. De manera subsiguiente, se adicionó gota a gota MeOH (9.2 mL, 225 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante una hora adicional a temperatura ambiente. La solución clara se adicionó gota a gota a una suspensión de Na2C03 (60.8 g; 573 mmol) en DCM y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas . El sólido restante se removió por filtración y se lavó con DCM (2x50 mL) . La fase de DCM combinada se concentró a 150 mi, se adicionó ^uOAc (150 mL) y el DCM restante se removió y se dejó cristalizar durante la noche. Los cristales se recolectaron por filtración produciendo 65g (71 %) de éster metílico de ácido tetraacetil-siálico .

Ejemplo 5 Una suspensión de imidazol (1.88 kg) en DCM (20 L) se enfrió hasta 5°C, se adicionó PC13 (690 mi) , seguido por la adición de Et3N (4.16 L) . La suspensión espesa se agitó durante 60 minutos a 0°C y se adicionó tetraacetato (2.59 Kg) en solución de DCM (3 litros/kg) . La temperatura se mantuvo a 25°C y la mezcla de reacción se agitó durante 3h. Después de este tiempo, se adicionó alcohol p-Cl-bencílico (2.64 Kg) como sólido y la mezcla de reacción se agitó durante otras 2 h. La mezcla de reacción se transfirió al vaso de extracción de 110 L, se neutralizó con HC1 1N (26 L) y las fases se separaron. La fase orgánica se concentró a un aceite y se mantuvo en el refrigerador hasta el siguiente día. El re'siduo se disolvió en 15 L de fcBuOMe y se lavó con agua (3 x 7 L) la fase orgánica se evaporó. El residuo se disolvió .en i-Pr20 (5 L) y la solución turbia se volvió después un sólido. La suspensión espesa se filtró, el sólido se lavó con i-Pr20 (2x1.5L) y se secó en un horno al vacío. (2.65 Kg con 95 % de pureza) .

RMN XH d (CDC13) en ppm: 1.9-2.15 (m, 16H) ; 2.39 (dd, 1H, J=4.9Hz, J=13.00Hz); 3.75 (s, 3H) ; 3.85 (dd, 1H, J=10.6Hz, J=2.00Hz); 4.05 (m, 1H) ; 4.15 (dd, J=7.4 , J=12.4); 4.6 (m, 2H) 4.8-5 (m, 4H) ; 5.15 (m, 2H) ; 5.22 (m, 1H) .

Ejemplo 6 Se preparó de manera análoga: Ejemplo 7 Método A: A una suspensión del tetra-O-acetato de éster metílico de ácido N-acetil neuramínico (100 g, 0.2 mol) en acetato de isopropenilo (300 mL) se adicionó TsOH y la mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a 75 °C (baño de aceite) . La reacción llegó a ser una solución clara después de un par de minutos. Cuando la TLC (tolueno/acetona 3/2) mostró el término, se enfrió la mezcla, se diluyó con 500 mL de EtOAc y se lavó como sigue: lx NaHC03 (500 mL) , lx H20 (500 mL) y lx de salmuera (300 mL) . El residuo se concentró in vacuo, se redisolvió en EtOAc (200 mL) y heptano (280 mL) se adicionó a 70°C. La mezcla se enfrió a 0°C y se agitó durante 2 h. El sólido se recolectó por filtración para producir 102.12 g (87 %) .

Método B: A una suspensión de éster metílico de ácido siálico (100 g) en acetato de isopropenilo (500 mL) se adicionó TsOH y la mezcla de reacción se agitó durante 16 h a 75 °C (baño de aceite) . La reacción llegó a ser una solución clara después de un par de horas. Cuando la TLC (tolueno/acetona 3/2) mostró el término, la mezcla se enfrió, se diluyó con 500 mL de EtOAc y se lavó como sigue: lx NaHC03 (500 mL) , lx H20 (500 mL) y lx salmuera (300 mL) . El residuo se concentró in vacuo, se redisolvió en EtOAc (200 mL) y se adicionó heptano (280 mL) a 70°C. La mezcla se enfrió a 0°C y se agitó durante 2 h. El sólido se recolectó por filtración para producir 101.3 g (85 %) .

RMN a? d (CDC13) en ppm: 1.95-2.23 (m, 16H) ; 2.31 (S, 3H) ; 2.39 (s, 3H) ; 2.66 (dd, lh, J=13.5Hz, J=6.3Hz); 3.77 (s, 3H) ; 4.15 (m, 2H) ; 4.35 (dd, 1H, J=2.4Hz, J=12.4Hz); 5.15 (m, 3H) ; 5.8 (ra, 1H) .

RMN 13C (CDC13) d (ppm): 20.97, 21.13, 26.13, 28.24, 53.36, 54.66, 57.26, 62.03, 66.56, 67.72, 69.93, 70.57, 97.37, 166.80, 168.78, 169.80, 169.98, 170.49, 173.82 Ejemplo 8 A una solución fría a 0°C de penta-O-acetato de éster metílico de ácido ?,?-diacetil neuramínico (10 g, 17.4 mmol) y RSH (2.2 eq) en DCM (50 mL) se adicionó BF3 · OEt2 (2.79 mL, 1.3 eq) y la mezcla de reacción se agitó a este temperatura durante .3 h (durante la noche en el caso de tBuSH) . Se adicionó NaHC03 acuoso para neutralizar el ácido (25 mL) y las fases se separaron, la fase orgánica entonces se lavó con agua, y el solvente se evaporó in vacuo. El residuo se recristalizó como sigue.

R=i-Pr (cristalizado de i-Pr20) rendimiento 75 %, p.f<: 110-111°C RMN 1H (CDC13) d en ppm: 1.25 (d, 3H, J=6.7Hz); 1.35 (d, 3H, J=7Hz) ; 1.9-2.2 (m, 13H) ; 2.3 (s, 3H) ; 2.4 (s, 3H) ; 2.65 (dd, 1H, J=5.1Hz, J=13.7Hz); 3.25 (m, 1H) ; 3.8 (s, 3H) ; 4.2 (m, 2H) ; 4.75 (dd, 1H, J=2.3Hz, J=12.4Hz); 5.1 (m, 1H) ; 5.25 (dd, 1H, J=2.5Hz, J=3Hz) ; 5.45 (dd, 1H, J=9.9Hz, J=2.25Hz); 5.8 (m, 1H) .

RMN 13C (CDCI3) d (ppm): 20.88, 20.90, 21.04, 21.11, 24.83, 25.01, 26.13, 28.11, 34.29, 39.18, 52.98, 57.56, 62.59, 67.09, 69.16, 69.68, 12. I, 85.43, 169.18, 169.63, 170.35, 170.56, 170.58, 173.75, 174.49.

R=Bn (cristalizado de MeOH) rendimiento 79 % RMN XH (CDC13) d (ppm) : 1.9-2.2 (m, 13H) ; 2.3 (s, 3H) ; 2.4 (3, 3H) ; 2.7 (dd, 1H, J=5.1Hz, J=13.9Hz) ; 3.5 (s, 3H) ; 3.8 (s, 2H) ; 4.2 (m, 2H) ; 4.7 (dd, 1H, J=2.4Hz, J=12.4Hz) ; 5.2 (m, 1H) ; 5.3 (dd, 1H, J=2 Hz , J=4.2Hz) ; 5.55 (dd, 1H, J=9.9Hz, J=2 Hz) ; 5.8 (m, 1H) ; 7.3 (m, 5H) .

RMN 13C (CDCI3) d (ppm) : 20.91, 20.94, 21.09, 21.11, 26.16, 28.18, 32.99, 38.63, 52.80, 57.59, 62.36, 67.16, 68.65, 69.53, 71.82, 85.17, 127.41, 128.71, 129.009, 136.45, 168.43, 169.65, 170.39, 170.50, 170.66, 173.71, 174.55.

R=t-Bu (cristalizado de i-Pr20/Heptano) rendimiento 80 %, p. f . : 95-98°C RMN XH (CDCI3) d (ppm) : 1.4 (s, 9H) ; 1.9-2.2 (m, 13H) ; 2.3 (s, 3H) ; 2.4 (s, 3H) ; 2.7 (dd, 1H, J=4.8Hz, J=13.5Hz) ; 3.8 (s, 3H) ; 4.2 (m, 2H) ; 4.7 (dd, 1H, J=1.5Hz, J=12.2Hz) ; 5.1 (m, 1H) ; 5.3 (dd, 1H, J=2.8 Hz, J=3.2Hz); 5.55 (dd, 1H, J=10Hz, J=2.7 Hz) ; 5.8 (m, 1H) ; 7.3 (m, 5H) .

RMN 13C (CDCI3) d (ppm) : 20.87, 20.88, 21.02, 21.09, 26.07, 28.09, 31.46, 41.58, 47.81, 52.90, 57.77, 62.76, 66.99, 69.35, 69.50, 72.62, 86.45, 169.55, 169.81, 170.38, 170.61, 170.72, 174.02, 174.56.

R=Et (cristalizado de i-Pr20) rendimiento 78 %, p.f.: 137- 138°C R=ciclohexilo (cristalizado de MeOH) rendimiento 78 %, p.f.: 146-147°C RMN XH (CDC13) d (ppm) : 1.2-1.8 (m, 12H) ; 1.9-2.2 (m, 13H) ; 2.3 (s, 3H) ; 2.4 (s, 3H) ; 2.65 (dd, 1H, J=5.2Hz, J=13.8Hz); 2.8 (ra, 1H) ; 3.8 (s, 3H) ; 4.2 (m, 2H) ; 4.8 (dd, 1H, J=2.1Hz, J=12.4Hz); 5.05 (m, 1H) ; 5.25 (t, 1H, J=2.3Hz); 5.45 (dd, 1H, J=9.9Hz, J=2.3Hz); 5.8 (m, 1H) .

RMN 13C (CDCI3) d (ppm): 20.97, 20.99, 21.11, 21.15, 25.51, 26.23, 26.50, 28.16, 35.23, 35.29, 39.09, 42.05, 45.88, 53.01, 57.43, 63.05, 67.18, 69.53, 70.12, 73.33, 85.20, 169.32, 169.72, 170.45, 170.62, 170.68, 173.73, 174.51.

E emplo 9 A una suspensión de ß-bencillactosido (700 g, 1.6 mol) en DMF (5 L) se adicionó benzaldehído-dimetilacetal (389.5 mL, 2.6 mmol, 1.6' eq.) y p-TsOH-H20 (31.5 g, 0.17 mmol, 0.1 eq.). La mezcla de reacción entonces se calentó a 40-44 °C durante aproximadamente 22 h, después de lo cual se obtuvo una suspensión blanca. Se enfrió con temperatura de baño de hielo, se adicionó i-Pr20 (4 L) y la suspensión resultante se agitó adicionalmente durante 1.5 h a esta temperatura. Esta mezcla se filtró y el sólido blanco obtenido se lavó/suspendió con i-Pr20 (2 x 1 L) . Después del secado se obtuvieron 702 g del producto deseado como un sólido blanco libre. El licor madre resultante se dejó reposar a temperatura ambiente durante aproximadamente 3 días, tiempo durante el cual no se separó más sólido blanco. Esto se filtró y se lavó/suspendió con 1_Pr20 (2 x 150 mL) . Se obtuvieron adicionalmente 25 g de producto. Cantidad combinada: 727 g (86 %) .

RMN XH d (CD30D) en ppm: 3.3-3.45 (m, 2H) ; 3.5-3.7 (m, 5H) ; 3.95 (m, 2H) ; 4.15 (m, 3H) ; 4.40 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.5 (d; 1H, J=7.5Hz); 4.65 Jd, 1H, J=11.8Hz); 4.9 (d, 1H, J=ll .8Hz) ; 5.55 (s, 1H) ; 7.25 (m, 5H) .

RMN 13C: 61.75, 68.33, 70.17, 71.78, 71.86, 73.52, 74.89, 76.33, 77.35, 80.02; 102.3, 103.22, 104.87; 128.8-139.03 Ejemplo 10 El pentanol de inicio (650 g, 1.16 mol), piridina (3.25 1) y DMAP (7.1 g, 58 mmol) se cargaron al reactor y se adicionó PivCl (1.3 1, 10.6 mol) en una hora, la mezcla se calentó hasta 95°C y se agitó durante 15 horas. La mezcla de reacción se enfrió a 60°C, se adicionó 4.63 1 de MeOH, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1.5 horas . El sólido se filtró, se lavó dos veces, con 1.5 1 de MeOH, se secó a aire abierto durante una noche y en vacío durante tres días .

RMN ?? 6 (CD3OD) en ppm: 1.05-1.2 (4s, 36H) ; 1.25 (s, 9H) ; 3.4 (m, 1H) ; 3.55 (m, 1H) ; 3.8 (s, 3H) ; 3.95 (t, 1H, J=9.5Hz); 4.05 (dd, 1H, J=12.5Hz, J=1.7Hz); 4.2 (dd, 1H, J=11.8Hz, J=5.5Hz)) 4.35 (dd, 1H, J=12.5Hz, J=0.9Hz); 4.38 (dd, 1H, J=0.3Hz, J=3.5Hz); 4.55 (m, 4H) ; 4.8 (m, 2H) ; 4.95 (dd, 1H) ; 5.2 (m, 1H) ; 5.3 (m, 1H) , 5.45 (s, 1H) ; 6.85 (m, 2H) ; 7.2-7.4 (m, 7H) .

Ejemplo 11 A una mezcla del material de inicio (ejemplo 10, 32.5 g, 33.5 mmol) , DCM (65 mi) MeOH (16 mi) y agua (6.5 mi), se adicionó pTsOH-H20 (2.6 g, 13.7 mmol) y luego se calentó a temperatura de reflujo. Después de dos horas la TLC (Tolueno: Acetona 5:1) indica que se terminó la reacción. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con DCM (65 mi) y se lavó con NaHC03 saturado (65 mi) y agua (65 mi) . La fase orgánica se secó sobre MgS04 y se concentró para obtener 33 g de aceite incoloro. El producto crudo se disolvió en EtOAc (227 ral) a temperatura de reflujo, se adicionó éter de petróleo (40-70°C( 70 mi) y la mezcla se enfrió a 0°C. El sólido se filtró, se lavó con éter de petróleo (2x30 mi) y se secó para obtener 22.6 g (79.2 %) de aceptador .

RMN XH ß (CD3OD) en ppm: 1.05-1.2 (4s, 36H) ; 1.25 (s, 9H) ; 3.4 (m, 2H) ; 3.8 (m, 1H) ; 3.95 (m, 2H) ; 4.1 (m, 1H) ; 4.2 (dd, 1H, J=11.8Hz, J=5.5Hz) ; 4.55 (m, 4H) ; 4.8 (d, 1H, J=12.5Hz) ; 4.9 (dd, 1H) ; 5.0 (dd, 1H) ; 5.2 (m, 2H) ; 7.2-7.4 (m, 5H) .

Ejemplo 12 Una solución del pentanol (ejemplo 9, 5.6 g, 0.01 mol) en piridina (20 mL) y DCM (50 mL) se adicionó con baño de hielo y se adicionó lentamente cloruro de p-clorobenzoilo (14 mL) . La mezcla de reacción se f agitó durante 24 h a temperatura ambiente, y el solvente se evaporó in vacuo. El residuo se disolvió en DCM (70 ML) y se lavó con HC1 1N (40 mL) , H20 (40 mL) , NaHC03 (40 mL) y salmuera (30 mL) . La fase orgánica se secó sobre Na2C03 y el solvente se evaporó in vacuo. El sólido se disolvió en DCM (60 mL) y se adicionaron 360 mL de MeOH. El sólido blanco se filtró y se lavó con MeOH y se secó para producir 10.6 g (81 %) .

RMN ? (CDC13) d (ppm) : 3.05 (ra, 1H) ; 3.75 (m, 3H) ; 4.13 (dd, 1H( J=9.1Hz, J=9.5Hz); 4.31 (m, 1H) ; 4.42 (dd, 1H, J=4.1Hz, J=12.0Hz); 4.57 (m, 2H) ; 4.69 (d, 1H, J=7.7Hz); 4.75 (d, 1H, J=7.9Hz); 4.81 (d, 1H; 12.5Hz); 5.15 (dd, 1H, J=3.5Hz, J=10.4Hz); 5.30 (s, 1H) ; 5.38 (dd, 1H, J=7.9Hz, J=9.6Hz); 5.75 (m, 2H) , 7.05-8.05 (m, 30H) .

RMN 13C: 54.66, 62.92, 66.69, 68.13, 69.86, 70.76, 72.49, 72.73, 72.94, 73.13, 74.1, 76.42, 98.94, 100.81, 101.33, 126-140 (42C) , 169.27, 164.46, 164.78, 165.13, 165.34.

Ejemplo 13 Una solución de bencilideno-acetal (ejemplo 12, 2.0 g, 1.65 mmol) en DCM/MeOH (4/1, 10 mL) y TsOH (126 mg) se agitó a 40 °C durante 24h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con DCM, se lavó con NaHC03, agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre Na2S04 y el solvente se removió in vacuo. El sólido blanco se recristalizó de tolueno para producir 1.28 g (70 I) .

RMN H (CDCI3) 2.95 (m, 1H) ; 3.40 (m, 3H) ; 3.85 (m, 1H) ; 4.15 (m, 2H) ; 4.40 (dd, 1H, J=5Hz, J=11.9Hz); 4.5-4.8 (m, 5H) ; 5.15 (dd, 1H; J=3.1Hz, 10.4Hz); 5.40 (dd, 1H, J=7.7Hz, J=9.4Hz); 5.65 (m, 2H) , 7.0-8.0 (m, 25H) .

Ejemplo 14 A una solución enfriada con hielo de bencilideno- (3-bencillactosido (ejemplo 9, 6.2 g, 11.9 mmol) en piridina (40 mL) , se adicionó BzCl (13.8 mL) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó 30 minutos a esta temperatura, y durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se extinguió con MeOH y el solvente se evaporó in vacuo. El residuo se disolvió en DCM y se lavó con agua, HC1 1N, agua, NaHC03, y salmuera. La fase orgánica se secó sobre Na2S04 y el solvente se removió in vacuo. El sólido obtenido se recristalizó a partir de EtÓAc/Hexano para producir 9. lg (73 %) de un sólido puro blanco. P.f.: 162-164°C.

RMN XH (CDC13) d (ppm) : 2.95 (m, 1H) ; 3.58 (m, 1H) ; 3.78 (m, 2H) ; 4.25 (m, 2H) ; 4.40 (dd, 1H, J=4.3Hz, J=12.1Hz); 4.55 (d, 1H, 12.5Hz); 4.65 (m, 1H) ; 4.70 (d, 1H, J=7.7Hz); 4.78 (d, 1H; 12.5Hz); 4.85 (d, 1H, J=7.9Hz); 5.15 (dd, 1H, J=3.4Hz, J=10.4Hz); 5.30 (s, 1H) ; 5.40 (dd, 1H, J=7.8Hz, J=9.2Hz); 5.75 (m, 2H) .7.05-8.05 (m, 35H) .

Ejemplo 15 A una solución del derivado de pentabenzoilo (ejemplo 14, 22.0 g, 21 mmol) en mezcla de DCM (140 mL) MeOH (20 mL) se' adicionó monohidrato de TsOH (1.6g, 0.4eq), y la mezcla de reacción se agitó durante 2 días a 40 °C. Después de este tiempo se adicionó una solución saturada de NáHC03 y la mezcla se agitó durante 15 min. Las fases se separaron y la orgánica se lavó con agua y salmuera; después se secó sobre Na2S04. El solvente se evaporó in vacuo y el sólido obtenido se suspendió en EtOAc (200 mL) y la suspensión espesa se agitó durante la noche, después de la filtración y secado se obtuvieron 14.5 g (74 %) . P.f.: 220-222, 5°C.

RMN XH (CDC13) : 2.95 (m, 1H) ; 3.35 (m, 3H) ; 3.80 (m, 1H) ; 4.20 (m, 2H) ; 4.40 (dd, 1H, J=5Hz, J=11.9Hz); 4.5-4.9 (m, 5H) ; 5.07 (dd, 1H; J=3.1Hz, 10.4Hz); 5.45 (dd, 1H, J=7.7Hz, J=9.4Hz); 5.70 (m, 2H) , 7.0-8.1 (m, 30H) .

Ejemplo 16 A una solución enfriada a -40 °C de la mezcla donador-aceptador (100 g del aceptador y 107 g del donador) en CH3CN/DCM 1/1 (1200 mL) , se adicionó NIS (78 g) y la mezcla se agitó durante 15 min a esta temperatura. Después de este tiempo, se adicionó TfOH (5.1 mL) y la reacción se agitó entre -40 y -50 °C durante 2 h. Entonces se adicionó Et3N (35 mL) y la solución se diluyó con EtOAc (750 mL) y Na2S203 (750 mL) se adicionó y la solución se agitó hasta un color amarillo claro. La mezcla se lavó con Na2S203 (750 mL) y salmuera (500 mL) . La fase orgánica se secó sobre MgS04 y se evaporó in vacuo. El crudo se recristalizó en 3L de TBME para dar 80 g en dos cosechas.

RMN XH NMR d (CD3OD) en ppm: 1.05-1.3 (m, 45H) ; 1.75-2.25 (m, 16H) ; 2.6 (dd, 1H, J=4.5Hz, J=12.7Hz); 3.5-3.75 (m, 8H) ; 3.9- 4.10 (m, 5H) , 4.3 (m, 2H) ; 4.5 (m, 4H) ; 4.75-5 (m, 4H) ; 5.2 (m, 3H) ; 5.3 (m, 2H) ; 7.25 (m, 5H) .

RMN 13C: 21.02; 21.1; 21.32; 23.09; 23.45; 27.33; 27.38; 27.43; 27.51; 38.90; 39.08; 53.24; 62.34; 62.68; 62.70; 62.72; 66.44; 67.46; 68.87; 69.09; 69.4; 70.56; 71.78; 71.83; 73.00; 73.13; 73.43; 73.54; 73.88; 73.89; 99.26; 99.38; 99.92; 128.17; 128.57; 136.84; 168.09; 170.38; 170.41; 171.22; 178.00.

Ejemplo 17 A una solución enfriada a -40 °C de la mezcla donador-aceptador (aceptador: 5.3 g, donador: 8.5 g) en CH3CN/DCM 1/1 (65 mL) se adicionó TMSOTf (0.186 mL, 0.16 eq.) en 2 mL de MeCN. La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas de entre -35 a -40°C y después de este tiempo se adicionó Et3N para neutralizar el ácido. La solución se diluyó con 30 mL de EtOAc y la fase orgánica se lavó con 30 mL de agua y 40 mL de salmuera, la fase orgánica se secó sobre Na2S0 y el solvente se evaporó in vacuo. El residuo se disolvió en 20 mL de iBuOAc a 70 °C y 70 mL de i-Pr20 se adicionaron. La solución se cristalizó durante la noche a 4°C. Los cristales se recolectaron por filtración y se lavaron con i-Pr20 para producir 4.3 g del producto puro (51 %) .

A una solución enfriada a -40 °C de la mezcla donador-aceptador (aceptador: 5.3 g, donador: 9.42 g) en CH3CN/DCM 1/1 (65 mL) se adicionó TMSOTf (0.186 mL) en 2 mL de MeCN. La me2cla de reacción se agitó durante 3 horas de entre -35 a -40°C y después de este tiempo se adicionó Et3N para neutralizar el ácido. La solución se diluyó con 30 mL de EtOAc y la fase orgánica se lavó con 30 mL de agua y 40 mL de salmuera, la fase orgánica se secó sobre Na2S04 y el solvente se evaporó in vacuo. El residuo se disolvió en 20 mL de iBuOAc a 70 °C y se adicionaron 70 mL de i-Pr20. La solución se recristalizó durante la noche a 4°C. Los cristales se recolectaron por filtración y se lavaron con i-Pr20 para producir 4.3 g del producto puro (51 %) .

Ejemplo 19 R6: etilo, isopropilo, t-butilo, ciclohexilo, bencilo R": pivaloilo, benzoilo Procedimiento general: A una solución enfriada a -20 °C del donador (1.4 eq) y el aceptador (10.5 mmol) en mezcla de DCM/THF (75 mL + 15 mL) NBS (1.6 eq) se adicionó seguido por TfOH (0.42 eq.). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos a esta temperatura. Se adicionó para extinción una solución acuosa de Na2S203 al 7.5 % en NaHC03 acuoso saturado (45 mL) , y la mezcla bifásica se agitó durante 20 minutos, las fases se separaron y la orgánica se lavó una vez con agua. El producto se tomó en el paso de desprotección ácida sin purificación adicional.

R : benzoilo RMN ? (CDC13) d (ppm):1.85 (s, 3H) ; 1.9 (s, 3H) ; 2-2.2 (m, 13H) ; 2.48 (dd, 1H; J=4.8Hz, J=12.9Hz); 3.07 (m, 1H) ; 3.2 (m, 1H) ; 3.35 (ra, 1H) ; 3.65 (m, 1H) ; 3.8 (m, 4H) ; 4.1 (m, 1H) ; 4.2-4.4 (m, 3H) ; 4.4-4.6 (m, 3H) ; 4.65-4.9 (m, 4H) ; 5.05 (m, 1H) ; 5.15 ( , 1H) ; 5.25 (m, 1H) ; 5.7 (m, 12H) ; 7-7.6 (m, 20H) ; 7.8-8.1 (m, 10H) .

RMN 13C (CDCI3) d (ppm) : 20.7, 20.8, 20.9, 21.0, 25.8, 27.4, 38.4, 52.7, 56.4, 62.2, 65.1 (2C) , 67.0, 68.1, 68.8, 70.1, 70.2, 72.0, 72.3, 72.6, 73.1, 73.3, 74.3, 97.8, 98.5, 101.5, 127.6, 129.6, 132.8-133.4, 136.5, 164.9, 165.2 (2C), 165.6, 166.6, 169.4, 170.3, 170.8, 171.4, 173.4, 174.6.

R4 : pivaolilo RMN (CDC13) d .(ppm): 1.05-1.3 (m, 15H) ; 1.75 (dd, 1H, J=10.9Hz, J=12.9Hz); 1.95, 2.0, 2.05, 2.15, 2.25 (5s, 18H) ; 2.64 (dd, 1H, J=5.5Hz, 12.9Hz); 3.18 (m, 1H) ; 3.35 (m, 1H) ; 3.53 (m, 1H) ; 3.75 (m, 1H) ; 3.85 (s, 3H) ; 4.15-4.25 (m, 4H) ; 4.35-4.45 (m, 2H) ; 4.45-4.65 (m,5H); 4.8 (m, 1H) ; 4.95 (dd, 1H, J=7.9HZ, J=9.7HZ); 5.05 (m, 1H) ; 5.1-5.3 (m, 5H) ; 5.7 (m, 1H) ; 7.5 (m, 5H) .

RMN 13C (CDCI3) d (ppm): 20.99, 21.14, 21.19, 21.23, 27.29, 27.40, 27.42, 38.76, 38.89, 38.90, 39.06, 39.12, 53.04, 54.67, 57.00, 60.39, 62.25, 65.66, 66.97, 68.86, 69.59, 69.82, 70.45, 71.69, 72.00, 72.61, 72.77, 73.40, 73.65, 98.30, 99.25, 100.25, 128.11, 128.16, 128.53, 136.82, 166.92, 169.71, 170.56, 170.80, 171.41, 173.72, 174.71, 176.42, 177.00, 177.12, 179.91.

Ejemplo 20 R4 : pivaloilo, benzoilo, isobutirilo, 4-metilbenzoilo A una solución enfriada a 4°C del donador (lOg, 17.4 mmol) y el aceptador (1.4 eq) en DCM (100 mL) se adicionó en BF3«OEt2 (1.6 mL, 0.75 eq) y la reacción se agitó a esta temperatura durante 16 horas. La reacción se extinguió con NaH03 y la mezcla bifásica se agitó durante 10 minutos. La fase orgánica se lavó con agua y evaporó in vacuo. El residuo se tomó sin purificación adicional en el paso de desprotección ácida.

R4 : 4 -metilbenzoilo RMN XH (CDC13) d (ppm):1.85 (s, 3H) ; 1.9 (s, 3H) ; 2-2.2 (m, 13H) ; 2.25-2.44 (m, 15H) ; 2.48 (dd, 1H; J=4.8Hz, J=12.9Hz); 3.07 (m, 1H) ; 3.2 (m, 1H); .3.35 (m, 1H) ; 3.65 (m, 1H) ; 3.8 (m, 4H) ; 4.1 (m, 1H) ; 4.2-4.4 (m, 3H) ; 4.4-4.6 (m, 3H) ; 4.65-4.9 (m, 4H) ; 5.05 (m, 1H) ; 5.15 (M, 1H) ; 5.25 (m, 1H) ; 5.7 (ra, 12H) ; 6.9 (m, 2H) ; 7-7.25 (m, 13H) ; 7.7-7.9 (m, 10H) .

RMN 13C (CDC13) d (ppm) : 20.7, 20.8, 20.9, 21.0, 21.14, 21.27, 21.62, 21.66, 25.8, 27.4, 38.4, 52.7, 56.4, 62.2, 65.1 (2C), 67.0, 68.1, 68.8, 70.1, 70.2, 72.0, 72.3, 72.6, 73.1, 73.3, 74.3, 97.8, 98.5, 101.5, 127.6, 129.6, 132.8-133.4, 136.5, 164.9, 165.2 (2C) , 165.6, 166.6, 169.4, 170.3, 170.8, 171.4, 173.4, 174.6.

R4 : isobutirilo RMN XH (CDC13) d (ppm) : 1.0 (m, 30H) , 1.6 (dd, 1H, J=1.8Hz, J=2.05Hz); 1.80, 1.87, 1.90, 1.97 (4s, 12H) ; 2.12 (2s, 6H) ; 2.2-2.6 (m, 6H) ; 3.15 (m, 1H) ; 3.25 (m, 1H) ; 3.4· (m, 1H) ; 3.55-3.8 (m, 6H) ; 3.95-4.3 (m, 4H) ; 4.3-4.55 (m, 5H) ; 4.67 (d, 1H, J=12Hz) ; 4.75-5.2 (m, 7H) ; 7.1 (m, 5H) .

RMN 13C (CDC13) d (ppm):18.59, 18.80, 18.86, 18.94, 19.07, 19.12, 19.28, 19.29, 19.32, 20.84, 20.98, 20.99, 21.11, 25.95, 27.98, 33.96, 34.03, 34.07, 50.28, 52.29, 54.67, 56.79, 60.16, 61.93, 62.21, 65.51, 68.73, 69.23, 69.63, ¦ 70.51, 71.49, 72.33, 72.39, 72.82, 73.17, 73.23, 75.74, 98.19, 99.10, 101.12, 127.92, 128.04, 128.47, 136.79, 166.78, 169.64, 170.42, 170.75, 171.49, 173.66, 174.83, 175.32, 175.54, 175.64, 175.70, 176.49.

Ejemplo 21 R2: bencilo, -metilbencilo, 4-clorobencilo, 1-naftilmetilo; R4 : pivaloilo, benzoilo, 4- metilbenzoilo El jarabe obtenido en los ejemplos 19 o 20 se diluyó con MeOH, se enfrió a 5°C y se adicionó gota a gota ácido sulfúrico. La mezcla de reacción se agitó durante 48 horas a esta temperatura y se neutralizó con Et3N. Se evaporó el MeOH y el residuo se disolvió en EtOAc, se lavó con agua una vez y con agua en salmuera 5/1. La fase orgánica se evaporó in vacuo y el residuo se re-cristalizó (rendimiento: 50-60 % por dos pasos) .

R2 : bencilo, R4 : benzoilo 1H (CD3OD) d (ppm) : 1.5 (dd, 1H, J=11.7Hz, J=12.6Hz); 2.0 (s, 3H) ; 2.45 (dd, 1H, J=4.6Hz , J=12.8Hz) ; 3.2 (ra, 1H) ; 3.4-3.7 (m, 7H) ; 3.7-3.85 (m, 5H) ; 3.95 (m, 1H) ; 4.1 (d, 1H, J=3.5Hz); 4.25 (dd, 1H, J=9.2Hz, J=9.5Hz); 4.45-4.65 (m, 3H) ; 4.75 (d, 1H, J=12.2Hz); 5.15 (dd, 1H, J=3.3Hz, J=10.4Hz); 5.35 (dd, 1H, J=8Hz, J=9.7Hz); 5.64 (dd, 1H, J=7.9Hz, J=10.3Hz); 5.69 (dd, 1H, J=9.2Hz, J=9.4Hz); 7.05-7.65 (m, 20H; 7.8-8.1 (m,. 10H) . 13C (CD3OD) d (ppm) : 21.62, 39.03, 52.37, 52.44, 60.04, 63.14, 65.25, 67.44, 68.41, 70.50, 70.87, 72.58, 73.24, 73.39, 73.66, 73.97, 74.79, 77.15, 127.73, 128.16, 128.27, 128.37, 128.63, 129.08, 129.41, 129.46, 129.49, 129154, 129.59, 129.72, 129.81, 129.89, 133.18, 137.18, 165.63, 165.66, 165.95, 166.01, 166.22, 169.35, 173.99.

R2 : bencilo, R4 : pivaolilo RMN XH (CDCI3) d (ppm) : 1.0-1.3 (m, 45H) ; 1.9 (t, J=12.2Hz); 2.05 (s, 3H) ; 2.72 (m, 2H) ; 3.15 (m, 1H) ; 3.45 (m, 1H) ; 3.55 (m, 3H) ; 3.7-3.9 (m, 10H) ; 4.02 (m, 1H) ; 4.22 (dd, 1H, J=5.5Hz, J=11.5Hz); 4.4-4.6 (m, 4H) ; 4.72-4.85 (m, 3H) ; 4.95 (dd, 1H, J=7.9Hz, J=9.6Hz); 5.13 (dd, 1H, J=7.9Hz, J=10.3Hz); 5.18 (t, 1H, 9.4Hz); 6.65 (d, 1H, J=6.5Hz); 7.2-7.35 (m, 5H) . 13C (CDCI3) d (ppm) : 23.22, 27.23, 27.29, 27.37, 27.37, 27.44, 27.52, 27.59, 31.20, 38.94, 39.07, 39.12, 53.18, 53.65, 62.32, 63.68, 66.12, 67.77, 68.72, 69.41, 69.95, 70.92, 71.70, 71.79, 73.44, 73.70, 74.03, 99.13, 99.64, 99.83, 128.74, 129.32, 133.90, 135.38, 169.61, 174.25, 176.64, 177.19, 177.57, 177.87, 178.21.

R2: bencilo, R4 : 4-metilbenzoilo XH (CD3OD) d (ppm): 1.5 (dd, 1H, J=11.7Hz, J=12.6Hz); 2.0 (s, 3H) ; 2.25 (s, 3H) ; 2.31-2.43 (m, 12H) ; 2.48 (dd, 1H, J=4.6Hz , J=12.8Hz); 3.2 (m, 1H) ; 3.4-3.7 (m, 7H) ; 3.7-3.85 (m, 5H) ; 3.90 (m, 1H) ; 4.1 (d, 1H, J=3.5Hz); 4.24 (dd, 1H, J=9.2Hz, J=9.5Hz); 4.44-4.64 (m, 3H) ; 4.73 (d, 1H, J=12.2Hz); 5.12 (dd, 1H, J=3.2Hz, J=10.4Hz); 5.32 (dd, 1H, J=8Hz, J=9.6Hz) ; 5.57-5.70 (m, 2H) ; 6.87 (m, 2H) ; 7.05-7.3 (m, 13H) ; 7.65-7.95 (m, 10H) . 13C (CD3OD) d (ppm) : 21.05, 21.14, 21.27, 21.62, 21.66, 39.03, 52.37, 52.44, 60.04, 63.14, 65.25, 67.44, 68.41, 70.50, 70.87, 72.58, 73.24, 73.39, 73.66, 73.97, 74.79, 77.15, 127.73, 128.16, 128.27, 128.37, 128.63, 129.08, 129.41, 129.46, 129.49, 129.54, 129.59, 129.72, 129.81, 129.89, 133.18, 137.18, 165.63, 165.66, 165.95, 166.01, 166.22, 169.35, 173.99.

R2: 4-clorobencilo, R4 : pivaolilo RMN 1H (CDCI3) d (ppm) : 1.0-1.3 (m, 45H) ; 1.9 (t, J=12Hz) ; 2.05 (s, 3H) ; 2.64 (d, 1H, J=5.4); 2.75 (dd, 1H, J=3.7Hz, J=12.5Hz) ; 2.9 (m, 1H) ; 3.3 (m, 1H) ; 3.45 (m, 1H) ; 3.55 (m, 2H) ; 3.65-3.95 (m, 10H) ; 4.02 (m, 1H) ; 4.21 (dd, 1H, J=5.3Hz, J=11.7Hz) ; 4.4-4.6 (m, 4H) ; 4.67-4.8.5 (m, 2H) ; 4.95 (dd, 1H, J=8.3Hz, J=9.4Hz); 5.15 (m, 2tí) ; 6.48 (d, 1H, J=7.5Hz); 7.18 (m, 2H) ; 7.28 (m, 2H) . - 13C (CDCI3) d (ppm) : 23.22, 27.28, 27.30, 27.37, 27.43, 27.52, 27.58, 31.19, 38.93, 39.07, 39.12, 53.18, 53.65, · 62.32, 63.66, 66.15, 67.81, 68.77, 69.50, 70.02, 70.99, 71.67, 71.81, 73.45, 73.59, 73.98, 99.09, 99.69, 100.01, 128.53, 129.11, 133.75, 135.19, 169.54, 174.21, 176.59, 177.08, 177.42, 177.57, 178.17.

R2: 1-naftilmetilo, R4 : pivaloilo RMN 1H (CDCI3) d (ppm) : 1.0-1.4 (m, 45H) ; 1.85 (t, J=12.2Hz); 2.05 (S, 3H) ; 2.69 (dd, 1H, J=3.7Hz, J=12.5Hz); 2.8 (m, 1H) ; 3.45 (m, 1H; 3.55 (m, 3H) ; 3.7-3.95 (m, 10H) ; 4.05 (m, 1H) ; 4.22 (dd, 1H, J=5.6Hz, J=11.8Hz); 4.44 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.54 (m, 1H) ; 4.61 (d, 1H, J=7.9Hz); 4.78 (dd, 1H, J=3.2Hz, J=10.4Hz); 4.95 (m, 2H) ; 5.12 (ra, 2H) ; 5.3 (d, 1H, 11.7Hz); 7.35-7.5 (m, 4H) ; 7.8 (m, 2H) ; 8.0 (m, 1H) . 13C (CDCI3) d (ppm): 22.96, 27.12, 27.27, 27.32, 27.37, 27.47, 31.15, 38.75, 38.83,. 38.87, 39.00, 39.12, 53.62, 54.67, 55.07, 61.43, 62.27, 63.77, 65.94, 66.81, 68.61, 68.99, 69.41, 70.94, 71.65, 71.91, 73.32, 73.52, 74.31 99.25, 99.36, 99.93, 123.92, 125.31, 126.04, 126.62, 127.06, 128.72, 129.16, 131.80, 132.26, 132.26, 133.77, 169.77, 174.51, 176.41, 176.91, 177.38, 177.76, 178.07.

R2: 4-metilbencilo, R : pivaloilo RMN XH (CDCI3) d (ppm) : 1.0-1.3 (m, 45H) ; 1.9 (t, J=12.3Hz); 2.05 (S, 3H) ; 2.25 (s, 3H) ; 2.65 (m, 1H) ; 2.83, (m, 1H) ; 3.35 (m, 1H) ; 3.45 (m, 1H) ; 3.55 (m, 3H) ; 3.6-3.85 (m, r 12H) ; 3.95 (m, 1H) ; 4.15 (m, 1H) ; 4.32-4.5 (m, 3H) ; 4.63-4.8 (m, 2H) ; 4.85 (dd, 1H, J=8Hz, J=9.4Hz); 5.08-5.15 (m, 2H) ; 7.05 (m, 5H) . 13C (CDCI3 ) d (ppm): 21.10, 22.93, 27.02, 27.03, 27.09, 27.17, 38.64, 38.78, 38.84, 53.36, 54.89, 61.33, 62.32, 63.34, 65.87, 67.38, 68.38, 68.60, 69.16, 70.18, 70.65, 71.44, 71.69, 73.18, 73.33, 73.77, 98.71, 98.88, 99.63, 128.12, 128.99, 133.23, 137.75, 169.33, 173.98, 176.32, 176.98, 177.28, 177.56, 177.95.

Ejemplo 22 Método A: A una solución de un trisacárido protegido o parcialmente protegido de acuerdo con cualquiera de los ejemplos 16-21 en 5 volúmenes de MeOH, se adicionó solución acuosa 1M de NaOH lentamente. La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente y se adicionó Amberlite IR 120 H+ para neutralizar la base. La mezcla se filtró y el solvente se evaporó in vacuo. El material entonces se disolvió en MeOH y EtOH, y se adicionó lentamente TBME . El precipitado se filtró completamente y se lavó dos veces con TBME. El sólido blanco obtenido se disolvió en NaOH 1M y la mezcla de reacción se agitó durante 6 horas. Se usó IR-120 H+ para neutralizar la base y el solvente se evaporó in vacuo. Después de la coevaporácion con EtOH (dos veces) el producto se disolvió en MeOH y se adicionó lentamente i-PrOH para dar un sólido en forma de ácido libre.

Método B: A una solución de un trisacárido protegido o parcialmente protegido de acuerdo con cualquiera de los ejemplos 16-21 en MeOH, se adicionó NaO e y la mezcla de reacción se agitó durante 5 horas a 45 °C. La solución enfriada se lavó con heptano y se adicionó acetona. El precipitado se filtró completamente y se disolvió en NaOH 1M y la mezcla de reacción se agitó durante 6 horas. Se usó IR-120 H+ para neutralizar la base y el solvente se evaporó in vacuo. Después de la coevaporación con EtOH (dos veces) el producto se disolvió en MeOH y se adicionó lentamente i-PrOH para dar un sólido en forma de ácido libre.

R2 : bencilo XH (CD3OD). d (ppm) : 1.63 (t, 1H, J=11.9Hz); 2.00 (s, 3H) ; 2.78 (dd, 1H, J=4.5Hz, J=12.2Hz); 3.28-3.49 (m, 4H) ; 3.50-3.79 (m, 9H) ; 3.80-3.97 (m, 5H) ; 4.02 (dd, 1H, J=7.5Hz, J=10Hz) ; 4.35 (m, 1H) ; 4.42 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.66 (d, 1H, J=11.7Hz); 7.22-7.37 (m, 3H) ; 7.38-7.46 (m, 2H) . 13C (CD3OD) d (ppm) : 21.55, 41.26, 52.70, 60.81, 63.21, 63.42, 68.56, 69.01, 69.30, 70.66, 71.15, 72.12, 73.08, 73.55, 73.78, 74.47, 75.28, 75.32, 80.03, 100.29, 101.89, 103.36, 127.36, 127.87, 128.01, 128.12,. 137.72, 173.36, 173.88.

R2 : 4-clorobencilo XH (CD3OD) d (ppm) : 1.62 (t, 1H, J=12Hz) ; 2.00 (s, 3H) ; 2.77 (dd, 1H, J=4.7Hz, J=12.1Hz); 3.28-3.49 (m, 4H) ; 3.50-3.79 (m, 9H) ; 3.80-3.97 (m, 5H) ; 4.02 (dd, 1H, J=7.5Hz, J=10Hz); 4.35 (m, 1H) ; 4.42 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.66 (d, 1H, J=11.7Hz); 7.24 (m, 2H) ; 7.32 (m, 2H) . 13C (CD3OD) d (ppm) : 21.52, 41.23, 52.72, 60.79, 63.23, 63.42, 68.61, 69.03, 69.31, 70.56, 71.14, 72.13, 73.11, 73.56, 73.79, 74.48, 75.23, 75.31, 80.09, 100.17, 101.91, 103.21, 127.36, 127.89, 133.01, 136.76, 173.29, 173.78.

R2: 1-naftilmetilo H (CD3OD) d (ppm): 1.62 (t, 1H, J=11.8Hz); 2.00 (s, 3H) ; 2.78 (dd, 1H, J=4.5Hz, J=12.2Hz); 3.28-3.49 (m, 4H) ; 3.50-3.79 (m, 9H) 3.80-3.97 (m, 5H) ; 4.02 (dd, 1H, J=7.6Hz, J=10.1Hz); 4.35 (m, 1H) ; 4.42 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.68 (d, 1H, J=11.8Hz); 7.32-7. 54 (m, 4H) ; 7.7 (m, 2H) ; 7.95 (m,lH) . 13C (CD3OD) d (ppm): 21.54, 41.28, 52.72, 60.81, 63.20, 63.44, 68.53, 69.06, 69.38, 70.64, 71.12, 72.14, 73.05, 73.54, 73.65, 74.45, 75.24, 75.33, 80.02, 100.25, .101.87, 103.21, 122.91, 124.82, 125.25, 125.93, 127.06, 128.72, 129.16, 132.80, 133.12, 135.97, 136.88, 173.36, 173.88.

R2: 4 -metilbencilo XH (CD3OD) d (ppm): 1.63 (t, 1H, J=11.9Hz); 2.00 (s, 3H) ; 2.32 (s, 3H) ; 2.78 (dd, 1H, J=4.5Hz, J=12.2Hz); 3.28-3.49. (m, 4H) ; 3.50-3.79 (m, 9H) ; 3.80-3.97 (m, 5H) ; 4.02 (dd, 1H, J=7.5Hz, J=10Hz) ; 4.35 (m, 1H) ; 4.42 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.66 (d, 1H, J=ll . Hz) ; 7.21 (m, 4H) . 13C (CD3OD) d (ppm): 20.02, 21.55, 41.26, 52.70, 60.81, 63.21, 63.42, 68.56, 69.01, 69.30, 70.66, 71.15, 72.12, 73.08, 73.55, 73.78, 74.47, 75.28, 75.32, 80.03, 99.98, 100.89, 102.36, 127.36, 127.87, 128.01, 128.12, 133.26, 137.72, 173.36, 173.88 Ejemplo 23 A una solución de 40 g de ácido libre en una mezcla de metanol y agua (250 mL + 300 mL) , se adicionaron 4 g de Pd/C (10 %) . La mezcla de reacción se agitó dos días a temperatura ambiente bajo presión de H2 (globo) . La mezcla entonces se filtró a través de una almohadilla de celita y el solvente se evaporó in vacuo. El residuo se disolvió en 80 mL de H20 y se adicionó gota a gota a 1200 mL de EtOH. La suspensión espesa se filtró, el sólido se lavó con EtOH, acetona y una mezcla de acetona/Et20 1/1. El sólido se secó para dar 35 g de 6 ' -O-sialil- lactosa .

XH (D20) (mezcla anomérica de glucosa 0.6/0.4 ß ) : 1.75 (dd, 1H, J=12.0Hz, J=11.9Hz); 2.05 (s, 3H) ; 2.7 (dd, 1H, J=12.0Hz, J=4.6Hz); 3.31 (dd, 0.6H, J=7.8Hz, J=8.9Hz); 3.5-3.75 (m, 11.4H), 3.76-4.05 (m, 8.9H) ; 4.43 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.67 (d, 0.6H, J=7.8Hz), 5.23 (d, 0.4H, J=3.8Hz). 13C: 19.51, 24.78, 42.82, 54.51, 60.15", 62.83, 62.99, 65.36, 66.3, 71.1, 71.24, 72.68, 73.51, 73.78, 74.35, 74.53, 75.09, 75.24, 76.42, 76.45, 77.35, 77.39, 82.35, 82.46, 94.54, 98.37, 103.01, 105.92, 105.95, 176.21, 177.64.

Ejemplo 24: Formación de Sal Se obtuvieron sales inorgánicas y orgánicas de 6'-SL o glicósidos de 6'-SL a partir de 6'-SL acida o glicósidos de 6'-SL. El pH del ácido en alcohol o alcohol/agua se ajustó a 8.5-11 con una base orgánica seleccionada a partir de etanolamina, dietilamida, base de tris- (hidroximetil) -metil-amina e hidróxido de colina o con una base inorgánica seleccionada de hidróxido, carbonato y bicarbonato metálico. La mezcla entonces se diluyó con alcohol y se concentró in vacuo. La suspensión espesa obtenida entonces se filtró y se lavó con alcohol .

?? (CD3OD) d (ppm) : 1.63 (t, 1H, J=11.9Hz); 2.02 (s, 3H) ; 2.82 (m, 1H) ; 3.33-3.45 (m, 4H) ; 3.46-3.61 (m, 5H) ; 3.62-3.97 (m, 12H) ; 4.02 (dd, 1H, J=7.5Hz, J=10Hz) ; 4.37 (m, 2H) ; 4.66 (d, 1H, J=11.9Hz); 7.31 (m, 3H) ; 7.41.(m, 2H) . 13C (CD3OD) d (ppm): 21.10, 40.60, 52.04, 60.22, 62.78, 67.90, 68.51, 68.69, 70.11, 70.61, 70.64, 71.44, 72.44, 72.83, 73.17, 73.92, 74.50, 74.70, 79.82, 99.76, 101.23, 103.52, 127.00, 127.44, 127.56, 137.21, 172.68, 173.28.

XH (CD3OD) d (ppm) : 1.71 (t, 1H, J=ll.lHz); 2.00 (s, 3H) ; 2.78 (dd, 1H, J=4.5Hz, J=12.2Hz); 3.28-3.49 (m, 4H) ; 3.50-3.79 (m, 9H) ; 3.80-3.97 (m, 5H) ; 4.02 (dd, 1H, J=7.5Hz, J=10Hz); 4.35 (m, 1H) ; 4.42 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.66 (d, 1H, J=11.7Hz); 7.22-7.37 (m, 3H) ; 7.38-7.46 (m, 2H) . 13C (CD3OD) d (ppm): 21.77, 41.09, 52.78, 60.87, 61.32, 63.06, 63.64, 63.21, 68.26, 69.11, 70.67, 71.22, 71.36, 72.01, 73.00, 73.37, 73.58, 73.66, 74.39, 75.19, 75.32, 75.87, 79.40, 80.35, 99.92, 101.86, 101.94, 103.86, 104.00, 127.55, 127.99, 128.13, 137.83, 174.03, 174.08 XH (CD3OD) d (ppra) : 1.63 (dd, 1H, J=11.7Hz, J=12.2Hz); 2.00 (S, 3H) ; 2.78 (dd, 1H, J=4.5Hz, J=12.2Hz); 2.92 (ra, 4H) ; 3.33-3.47 (m, 2H) ; 3.46-3.57 (m, 5H) ; 3.58-3.78 (m, 9H) ; 3.78-3.90 (m, 5H) ; 3.93 (dd, 1H, J=2.5 , J=11.7Hz); 4.02 (dd, 1H, J=7.5Hz, J=10Hz); 4.35 (m, 1H) ; 4.42 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.66 (d, 1H, J=11.7Hz); 7.22-7.37 (m, 3H) ; 7.38-7.46 (m, 2H) . 13C (CD3OD) d (ppm) : 21.55, 41.26, 44.83, 52.70, 58.85, 60.81, 63.21, 63.42, 68.56, 69.01, 69.30, 70.66, 71.15, 72.12, 73.08, 73.55, 73.78, 74.47, 75.28, 75.32, 80.03, 99.98, 100.89, 102.36, 127.36, 127.87, 128.01, 128.12, 137.72, 173.36, 173.88 XH (CD3OD) d (ppm): 1.63 (dd, 1H, J=11.9Hz, J=12.1Hz); 2.00 (S, 3H) ; 2.78 (dd, 1H, J=4.5Hz, J=12.2Hz); 3.33-3.48 (m, 2H) ; 3.48-3.79 (m, 19H) ; 3.93 (dd, 1H, J=2.5, J=11.8Hz); 4.02 (dd, 1H, J=7.5Hz, J=10Hz) ; 4.35 (m, 1H) ; 4.42 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.66 (d, 1H, J=11.7Hz); 7.22-7.37 (m, 3H) ; 7.38-7.46 (ra, 2H) . 13C (CD3OD) d (ppm): 21.60, 41.22, 52.71, 59.62, 60.89, 61.38, 63.23, 63.39, 68.64, 68.97, 69.25, 70.64, 71.26, 73.68, 75.24, 75.27, 80.16, 100.39, 101.87, 103.94, 127.52, 127.97, 128.00, 128.11, 137.85, 173.40, 173.90 ¾ (CD30D) d (ppm) : 1.28 (t, 6H, J=11.8Hz); 1.65 (dd, 1H, J=11.9Hz, J=12.1Hz); 2.00 (s, 3H) ; 2.79 (dd, 1H, J=4.5Hz, J=12.2Hz); 3.00 (q, 4H) ; 3.33-3.57 (m, 7H) ; 3.57-3.77 (m, 5H) ; 3.78-3.89 (m, 4H) ; 3;93 (dd, 1H, J=11.9Hz, J=2.4Hz); 4.00 (dd, 1H, J=7.1Hz, J=9.7Hz); 4.35 (m, 1H) 4.42 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.66 (d, 1H, J=11.8Hz); 7.22-7.37 (m, 3H) ; 7.38-7.46 (ra, 2H) . 0.89, 3.06, 1.90, 85 lH- (CD3OD) d (ppm) : 1.63 (dd, 1H, J=11.9Hz, J=12.lHz); 1.98 (S, 3H) ; 2.80 (dd, 1H, J=4.5Hz, J=12.2Hz); 3.19 (s, 9H) ; 3.33-3.56 (m, 8H) ; 3.56-3.77 (m, 7H) ; 3.78-3.94 (m, 5H) ; 3.95-4.04 (m, 4H) ; 4.34 (m, 1H) ; 4.39 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.66 (d, 1H, J=11.8Hz); 7.22-7.36 (m, 3H) ; 7.40 (m, 2H) . 13C (CD3OD) d (ppm): 21.56, 40.95, 41.34, 52.75, 53.48, 53.53, 53.59, 55.92, 60.96, 63.15, 63.50, 63.84, 67.85, 68.65, 68.90, 69.31, 69.47, 70.61, 71.28, 72.05, 73.05, 73.41, 73.72, 74.45, 75.29, 76.89, 80.17, 100.42, 101.92, 103.97, 109.98 127.52, 127.97, 128..11, 137.90, 138.29, 173.26, 173.85 Sal de Na+ de 6' -SL Hí (D20) d (ppm): 1.54 (t, 1H, J=12.1Hz); 1.82 (s, 3H) ; 2.52 (dd, 1H, J=4.8Hz, J=12.3Hz); 3.10 (m, 1H) ; 3.27-3.55 (m, 10H) ; 3.56-3.82 (m, 9H) ; 4.23 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.48 (d, 0.7H, J=8Hz); 5.03 (d, 0.3H, J=3.7Hz). 13C (D20) d (ppm): 22.17, 40.19, 51.87, 52.10, 60.38, 62.71, 63.68, 68.46, 68.61, 70.87, 71.90, 72.44, 72.60, 73.78, 74.04, 74.68, 74.76, 79.80, 79.86, 96.16, 100.36, 103.33, 173.62, 174.99.

Sal de Zn2+ de 6' -SL Hí (D20) d (ppm): 1.54 (t, 1H, J=12.1Hz); 1.82 (s, 3H) ; 2.52 (dd, 1H, J=4.8Hz, J=12.3Hz); 3.10 (m, 1H) ; 3.27-3.55 (m, 10H) ; 3.56-3.82 (m, 9H) ; 4.23 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.48 (d, 0.7H, J=8Hz); 5.03 (d, 0.3H, J=3.7Hz). 13C (D20) d (ppm): 22.16, 40.16, 51.87, 60.15, 60.31, 62.69, 63.67, 68.45, 68.60, 70.02, 70.86, 71.12, 71.72, 71.88, 72.43, 72.59, 73.77 , 74.71, 74.73, 79.69, 91.90, 95.72, 100.34, 103.31, 173.63, 174.99.

Sal de etanolamonio de 6'-SL lH (D20) d (ppm) : 1.54 (t, 1H, J=12.1Hz) 1.82 (s, 3H) ; 2.52 (dd, 1H, J=4.8Hz, J=12.3Hz); 2.92 (m, 2H) ; 3.10 (m, 1H) ; 3.27-3.55 (m, 10H) ; 3.56-3.82 (ra, 11H) ; 4.23 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.48 (d, 0.7H, J=8Hz); 5.03 (d, 0.3H, J=3.7Hz). 13C (D20) d (ppm): 22.16, 40.19, 41.37, 51.87, 52.09, 57.93, 60.32, 62.70, 63.67, 68.46, 68.62, 70.03, 70.87, 71.13, 71.91, 72.43, 72.60, 73.80, 74.71, 74.74, 79.69, 79.80, 95.73, 100.35, 103.32, 173.61, 174.98.

Sal de tris- (hidroximetil) -metil-amonio de 6'-SL XH (D20) d (ppm): 1.54 (t, 1H, J=12.1Hz); 1.82 (s, 3H) ; 2.52 (dd, 1H, J=4.8Hz, J=12.3Hz); 3.10 (m, 1H) ; 3.56-3.82 (m, 9H) ; 4.24 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.47 (d, 0.7H, J=8Hz) ; 5.02 (d, 0.3H, J=3.7Hz) . 13C (D20) d (ppm): 22.15, 40.19, 51.87, 59.90, 60.83, 62.70, 63.67, 68.46, 68.61, 70.03, 70.87, 71.13, 71.72, 71.90, 72.43, 72.60, 73.79, 74.71, 74.74, 79.70, 79.81, 95.73, 100.35, 103.32, 173.60, 174.98.

Sal de dietil-amonio de 6'-SL XH (D20) d (ppm): 1.05 (t, 6H, J=7.3Hz); 1.54 (t, 1H, J=12.1Hz); 1.82 (s, 3H) ; 2.52 (dd, 1H, J=4.8Hz , J=12.3Hz); 2.84 (q, 4H, J=7.3Hz) ; 3.10 (m, 1H) ; 3.27-3.55 (m, 10H) ; 3.56-3.82 (m, 9H) ; 4.23 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.48 (d, 0.7H, J=8Hz) ; 5.03 (d, 0.3H, J=3.7Hz). 13C (D20) d (ppm): 10.67, 22.13, 40.18, 42.35, 51.85, 52.09, 60.15, 60.31, 62.68, 63.67, 68.45, 68.58, 70.01, 70.84, 71.71, 71.88, 72.41, 72.58, 73.78, 74.72, 79.69, 79.80, 91.89, 95.72, 100.33, 103.31, 173.59, 174.95.

Sal de colina de 6'-SL XK (D20) d (ppm) : 1.54 (t, 1H, J=12.1Hz); 1.82 (s, 3H) ; 2.52 (dd, 1H, J=4.8Hz, J=12.3Hz); 2.99, (s, 9H) ; 3.10 (m, 1H) ; 3.27-3.55 (m, 12H) ; 3.56-3.82 (m, 11H) ; 4.23 (d, 1H, J=7.8Hz); 4.48 (d, 0.7H, J=8Hz) ; 5.03 (d, 0.3H, J=3.7Hz). 13C (D20) d (ppm): 22.14, 40.17, 51.85, 52.10, 53.87, 53.92, 53.97, 55.67, 60.31, 62.69, 63.67, 67.42, 67.46, 67.50, 68.45, 68.58, 70.85, 71.11, 71.88, 72.41, 72.58, 73.77, 74.72, 79.68, 79.80, 91.89, 95.72, 100.33, 103.31, 173:59., 174.95.

Ejemplo 25 Sal de K+ de 6' -SL Se disolvió lg de 6'-SL en 3 mi de agua y se hizo pasar a través de una columna de intercambió iónico catiónico (Amberlite IRC50, forma K+) . Las fracciones (2-7) se recolectaron y liofilizaron.

Ejemplo 26 Sal de Ca2+ de 6' -SL Se disolvió lg de 6'-SL en 3 mi de agua y se hizo pasar a través de una columna de intercambio iónico catiónico (Amberlite IRC50, forma Ca2+) . Las fracciones (2-7) se recolectaron y liofilizaron.

Lista de Referencias 1. a) D.S. Newburg et al. Annu. Rev. Nutr. 2005, 25, 37-58 b) C. Kunz et al. Acta Pdediatr. 1993, 82, 903-912. 2. a) K. Furuhata et al. Chem. Pharm. Bull . 1986, 34, 2725-2731 b) V. Pozsgay et al. J". Carbohydr. Chem. 1987, 6, 41-55 c) Y. Liu et al. Chemistry & Biology 2007, 14, 847-859 d) A. Rencurosi et al. Carbohydr. Res. 2002, 337, 473-483 e) WO 2010/116317 f) R.L. Thomas et al. Tetrahedron Lett. 1990, 31, 2825-2828 g) G. Pazynina et al. Tetrahedron Lett. 2002, 43, 8011-8013 h) K. Matsuoka et al. Tetrahedron Lett. 2004, 45, 9383-9386 i) EP-A-254105 j) EP-A-479769. 3. a) E.S. Simón et al. JACS 1988, 110, 7159-7163 b) E.S. Simón et al. Methods in Enzymology 1989, 179, 275-287 c) K. Ajisaka et al. Carbohydr. Res. 1994, 259, 103-115 d) H. Tanaka et al. Biosci. Biotech. Biochem. 1995, 59, 638-643 e) D. Schmidt et al. Chem. Comm. 2000, 1919-1920 f) I. Maru et al. Biosci. Biotech. Biochem. 1992, 56, 1557-1561. 4. a) US 2002/0064836 Al b) US 2009/0082307 Al. 5. a) R. Kuhn et al. Chem. Ber. 1965, 98, 385-413 b) G. Grónberg et al. Carbohydr. Res. 1989, 191, 261-278 c) US 6288222 d) US 6623954. 6. a) K. Furuhata Trends Glycosci. Glycotechnol . 2004,. 16, 143-169 b) D.K. Ress et al. Curr. Org. Synth. 2004, 1, 31-46 c) X. Chen et al . ACS Chem. Biol . 2010, 5, 163-176. 7; P.G.M. Wuts and T.W. Greene Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 2007 Lista de Abreviaciones CMP-Neu5Ac ácido 5 ' -monofosfo-N-acetilneuramínico de citidina DCM Diclororaetano DMF N, N' -dimetilformamida DTPI yoduro de 2 , 6-di-ter-butilpiridinio GlcNAc N-acetil-glucosamina HMOS Oligosacáridos de Leche Humana - 6' -SL 6' -O-sialil-lactosa, NeuSAc (cc2-6) Gal (pl-4) Glc NBS N-bromosúccinimida NeuAc ácido neuramínico NIS N-yodosuccinimida RT Temperatura ambiente THF tetrahidrofurano TfOH ácido triflico TMSOTf triflato de trimetilsililo Tol tolueno Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método1 conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.

Claims (27)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un método para la preparación de 6-0-sialil-lactosa o una sal de la misma, caracterizados porque comprenden los pasos de : a) reacción de un aceptador de la fórmula general 3 fórmula general 3 en donde R1 es -0R2, R2 que es un grupo removible por hidrogenación catalítica, o R1 es -SR3, R3 que se selecciona opcionalmente a partir de alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y bencilo opcionalmente sustituido, o R1 es -NH-C (R" ) =C (R' ) 2 , en donde cada R' independientemente entre sí es un grupo de retiro de electrones seleccionado a partir de -CN, -COOH, -COO-alquilo, -CO-alquilo, -CONH2, -CONH-alquilo y -CO (alquil) 2 , o en donde los dos grupos R' - se enlazan conjuntamente y representan -CO- (CH2) 2-4-CO- y de esta manera forman con el átomo de carbono al cual están unidos un cicloalcan-1, 3-dion de 5-7 miembros, dion en el cual cualquiera de los grupos metileno está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos alquilo, y R' ' es H o alquilo, R4 se selecciona a partir de acilo opcionalmente sustituido y bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi, con un donador de la fórmula general 4 fórmula general 4 en donde R5 es acilo opcionalmente sustituido, R8 se selecciona a partir de -NHAc y -NAc2, Q es COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, y X es un grupo saliente, para producir un compuesto de la fórmula general 2 fórmula general 2 en donde R1, R4, R5, R8 y Q son como se definen anteriormente, b) desprotección de un compuesto de la fórmula general 2 para dar un compuesto de la fórmula general 1 o sales del mismo fórmula general 1 en donde Ri es como se define anteriormente, y c) conversión subsiguiente del compuesto de la fórmula general 1 o sales del mismo en 6 ' -O-sialil-lactosa o sales de la misma. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque un compuesto de la fórmula general 1 o sal del mismo se somete a a) reducción catalítica cuando Rx es -0R2, en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, o b) activación con un reactivo tiofílico seguido por hidrólisis cuando R1 es -SR3, en donde R3 se selecciona de alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y bencilo opcionalmente sustituido, o c) tratamiento con una amina o halógeno seguido por hidrólisis a pH neutral o ácido moderado cuando R1 es -NH-C (R" ) =C (R' ) 2 en donde cada R' es un grupo de retiro de electrones seleccionado a partir de -CN, -COOH, -COO-alquilo, -CO-alquilo, -CONH2, -CO H-alquilo y -CON (alquil) 2, o en donde los dos grupos R' - se enlazan conjuntamente y representan -C0-(CH2)2-4_CO- y de esta manera forman con el átomo de carbono al cual están unidos un cicloalcan-1, 3-dion de 5-7 miembros, dion en el cual cualquiera de los grupos metilenos está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos alquilo, y R' ' es H o alquilo, y cuando se obtiene 6 ' -O-sialil-lactosa, opcionalmente se convierte a una sal de la misma, sal de 6'-O-sialil-lactosa que se convierte opcionalmente a otra sal de 6 ' -O-sialil-lactosa . 3'. El método de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque R1 es -0R2, R2 que es un grupo removible por hidrogenación catalítica, preferentemente seleccionado a partir de bencilo, 4-metilbencilo, 4-clorobencilo y 1-naftilmetilo . . El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque se desprotege un compuesto de la fórmula general 2A que corresponde a los compuestos de la fórmula general 2 de conformidad con la reivindicación 1, fórmula general 2? en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, R4 y R5 son independientemente entre sí acilo opcionalmente sustituido, R8 se selecciona a partir de -NHAc o -NAc2, y Q es -COO-alquilo, que está opcionalmente sustituido, se desprotege comprendiendo los pasos de : a) reacción de transesterificación catalizada con base seguida por una hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional de sal, o b) hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional de sal para dar un compuesto de la fórmula general 1 o sales del mismo . 5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque R2 se selecciona a partir de bencilo, 4-metilbencilo, 4-clorobencilo y 1-naftilmetilo, R4 se selecciona a partir de isobutirilo, pivaloilo y benzoilo opcionalmente sustituido, preferentemente pivaloilo y benzoilo, Rs es acetilo, Q es -COOCH3 y -0R2 está en ß. 6. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque un compuesto de la fórmula general 2B que corresponde a los compuestos de la fórmula general 2 de conformidad con la reivindicación 1 fórmula general 2B en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, R4 es acilo opcionalmente sustituido con la condición que se excluye acetilo, R8 se selecciona a partir de -NHAc o -NAc2, se somete a desprotección acida selectiva para dar un compuesto de la fórmula general 2C fórmula general 2C en donde R2 y R4 son como se definen anteriormente, seguido por a) reacción de transesterificación catalizada con base seguido por una hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional de sal, o b) hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional de sal para dar un compuesto de la fórmula general 1 o sales del mismo. 7. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la desprotección acida selectiva se lleva a cabo en la presencia de ácido sulfúrico en un compuesto de la fórmula general 2B, en donde -0R2 está en ß, R2 es bencilo, 4-metilbencilo, 4-clorobencilo y 1- naftilmetilo, R4 se selecciona a partir de isobutirilo, pivaloilo y benzoilo opcionalmente sustituido, preferentemente benzoilo. 8. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque se desprotege un compuesto de la fórmula general 2D que corresponde a compuestos de la fórmula general 2 de conformidad con la reivindicación 1 fórmula general 2D en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, R4 es bencilo sustituido por 1-3 grupos raetoxi, R5 es acilo opcionalmente sustituido, R8 se selecciona a partir de -NHAc o -NAc2 y Q es -C00-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido que comprende los pasos de : a) reacción de transesterificación catalizada con base que da por resultado otro compuesto de la fórmula general 2D, en donde R2 es como se define anteriormente, R4 es bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi, R5 es H, Ra es -NHAc y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, seguido por aa) oxidación mediada por diclorodicianoquinona (DDQ) o nitrato de cerio ( IV) -amonio (CAN) que da por resultado otro compuesto de la fórmula general 2D, en donde R2 es como se define anteriormente, cada uno de R4 y R5 son H, R8 es -NHAc y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, seguido por hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional de sal, o ab) hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional de sal que da por resultado otro compuesto de la fórmula general 2D, en donde R2 es como se define anteriormente, R4 es bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi, y R5 es H, R8 es -NHAc y Q es -COOH en ya sea forma protonada o desprotonada, seguido por oxidación mediada por diclorodicianoquinona (DDQ) o nitrato de cerio (IV) -amonio (CAN) para dar un compuesto de la fórmula general 1 o sales del mismo, o b) oxidación mediada por diclorodicianoquinona (DDQ) o nitrato de cerio ( IV) -amonio (CAN) que da por resultado otro compuesto de la fórmula general 2D, en donde R2 es como antes R4 es H, R5 es acilo opcionalmente sustituido, R8 se selecciona a partir de -NHAc y -NAc2 y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, seguido por ba) reacción de transesterificación catalizada con base seguida por una hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional de sal, o bb) hidrólisis básica, acidificación opcional y formación opcional de sal, para dar un compuesto de la fórmula general 1 o sales del mismo, o c) hidrólisis 'básica, acidificación opcional y formación opcional de sal que da por resultado otro compuesto de la fórmula general 2D, en donde R2 es como se define anteriormente, R4 es bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi, R5 es H, R8 es -NHAc y Q es -COOH ya sea forma desprotonada o protonada, seguido por oxidación mediada por diclorodicianoquinona (DDQ) o nitrato de cerio (IV) -amonio (CAN) . Para dar un compuesto de la fórmula general 1 o sales del mismo. 9. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones- 1-8, caracterizado porque la reacción de glicosilación comprende el uso de un donador de las fórmulas generales 4A, 4B o 4C fórmula general 4A fórmula general 4B fórmula general 4C en donde R5 es acilo opcionalmente sustituido, R6 se selecciona a partir de C2-6alquilo, C3- 6cicloalquilo y bencilo opcionalmente sustituido, R7 es bencilo sustituido y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, y de un aceptador de la fórmula general 3A fórmula general 3A en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, y R4 se selecciona a partir de bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi y acilo opcionalmente sustituido con la condición que se excluye acetilo. 10. Sal de Zn2+ de 6 ' -0-sialil- lactosa . 11. Una sal orgánica de 6 ' -O-sialil-lactosa, preferentemente sal de dietil-amonio de 6 ' -O-sialil-lactosa, sal de etanolamonio de 6 ' -O-sialil- lactosa, sal de tris (hidroximetil) -metil-amonio o sal de colina de 6' -O-sialil-lactosa . 12. Una sal orgánica de 6 ' -O-sialil-lactosa, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 10 u 11, para usarse como aditivo nutricional. 13. Una sal orgánica de 6 ' -O-sialil-lactosa de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 10 u 11, para usarse como agente farmacéutico. 14. Una composición nutricional, caracterizada porque comprende una o más sales de 6 ' -O-salil-lactosa de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 10 u 11. 15. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una o más sales de S ' -O-salil- lactosa de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 10 u 11. 16. Un grupo de compuestos de la fórmula general 1, de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula general 1A. fórmula general 1A en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, preferentemente bencilo, 4-metilbencilo, 4- clorobencilo y 1-naftilmetilo y OR2 está en ß. 17. Un grupo de compuestos de la fórmula general 1 de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula general IB fórmula general en donde R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, en forma de sal seleccionada de la sal de Zn2+, K+, Ca2+, Mg2+, Ba2+, Fe2+, Mn+, Cu+ y sales orgánicas. 18. El compuesto de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque R2 es bencilo, -OR2 está en ß y la sal se selecciona a partir de la sal de Zn2+ y sales orgánicas, y la sal orgánica se selecciona de manera preferente de sal de etanolamonio, dietil-amónio, tris-(hidroximetil) -metil-amonio y colina. 19. Un compuesto de la fórmula general 2A fórmula general 2A caracterizado porque R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, R4 y R5 son independientemente entre sí acilo opcionalmente sustituido, R8 se selecciona a partir de -NHAc o -NAc2, y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido . 20. El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque -OR2 está en ß, R2 se selecciona a partir de bencilo, 4-metilbencilo, o 4-clorobencilo y 1-naftilmetilo, R4 se selecciona a partir de isobutirilo, pivaloilo y benzoilo opcionalraente sustituido, de manera preferentemente pivaloilo y benzoilo, R5 es acertilo, Q es COOCH3. 21. Un compuesto de la fórmula general 2C fórmula general 2C caracterizado porque -OR2 está en ß, R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, preferentemente bencilo, 4-metilbencilo, 4-clorobencilo y 1-naftilmetilo, y R4 se selecciona a partir de isobutirilo, pivaloilo y benzoilo opcionalmente sustituido, preferentemente benzoilo . 22. Un compuesto de la fórmula general 2D fórmula general 2D caracterizado porque R2 es un grupo removible por hidrogenación catalítica, R4 se selecciona a partir de bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi y H, R5 se selecciona a partir de acilo opcionalmente sustituido y H, R8 se selecciona a partir de -NHAc o NAc2, y Q se selecciona a partir de -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido y -COOH en ya sea forma protegida o desprotegida, con la condición que si Q es -COOH en ya sea forma protonada o desprotonada y R8 es -NHAc, entonces en tanto R4 como R5 no pueden ser simultáneamente H. 23. El compuesto de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque -0R2 está en p, R2 se selecciona a partir de bencilo, 4 -metilbencilo, 4-clorobencilo y 1-naftilmetilo, R4 y R5 son H, R8 es -NHAc y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, preferentemente -COOMe . 24. Un compuesto de la fórmula general 4A o 4B fórmula general 4A fórmula general caracterizado porque R5 es acilo opcionalmente sustituido, preferentemente acetilo, R6 se selecciona a partir de C2-ecilquilo, C3- ecicloalquilo y bencilo opcionalmente sustituido, preferentemente a partir de etilo, isopropilo, t-butilo, bencilo y ciclohexilo, R7 es bencilo sustituido, preferentemente 4-clorobencilo o 4-bromobencilo, y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, preferentemente -COOMe. 25. Un compuesto de la fórmula general 4C caracterizado porque se usa como donador de sialilo fórmula general 4C en donde R5 es acilo opcionalmente sustituido, preferentemente acetilo y Q es -COO-alquilo, alquilo que está opcionalmente sustituido, preferentemente -COOMe. 26. Un compuesto de la fórmula general 3A fórmula general 3A caracterizado porque R2 es un grupo reraovible por hidrogenación catalítica, y R4 se selecciona a partir de bencilo sustituido por 1-3 grupos metoxi y acilo opcionalraente sustituido con la condición que se excluye acetilo. 27. El compuesto de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque -0R2 está en ß, R2 se selecciona a partir de bencilo, 4-metilbencilo, 4-clorobencilo y 1-naftilmetilo, y R4 se selecciona a partir de isobutirilo, pivaloilo y benzoilo.