CN102818902A - 一种胰岛素检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种胰岛素的检测试剂盒。试剂盒盒体内包括：试剂R1：缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；试剂R2：缓冲液、结合有胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列反应，再将反应物置于半/全自动生化分析仪下，检测主波长600nm处吸光度变化的速度，从而测算出胰岛素的浓度大小。本试剂盒具有准确、稳定、方便的优点。

Description

一种胰岛素检测试剂盒及其制备方法

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种检测人胰岛素的检测试剂盒。

背景技术

胰岛素是由胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。外源性胰岛素主要用来治疗糖尿病，胰岛素注射不会有成瘾和依赖性。

胰岛素检查，可以判定糖尿病患者是1型患者还是2型患者。主要适合于没有使用胰岛素治疗的患者，可在空腹及餐后2小时抽血进行测定，而餐后水平应比空腹高出4～5倍。如果胰岛素水平明显降低，就称之为绝对缺乏，可见于1型糖尿病；如果并没有明显减少，而表现为血糖升高，就称为相对缺乏，是因为胰岛素发挥作用的环节出现故障，常见于存在胰岛素抵抗的2型糖尿病。

血清胰岛素检测，包括空腹和餐后胰岛素分泌水平检测。一般常与糖耐量试验(OGTT)同步进行检测。通过检测血清胰岛素水平，可以更清楚地了解糖尿病病情的严重程度，并有助于判别预后，制定相应的治疗方案。

几种病情类型

首先是胰岛素抵抗型(分泌增高型)，表现为空腹胰岛素水平正常和高于正常，进食后胰岛素峰值明显高于正常。表明胰岛素分泌功能正常和偏高，提示体内存在胰岛素抵抗。此型多见于肥胖的糖尿病人。治疗主要以平衡饮食或增加运动量为主，不用药或仅用胰岛素增敏剂即可，以最大限度减轻胰岛负担，有利血糖长期稳定的控制。

其次是胰岛素释放障碍型，表现为胰岛素反应曲线呈迟缓上升，高峰后移，病人多为消瘦或40岁以上的中年人，胰岛病变大多轻微，为β细胞功能障碍型，此型病人除平衡饮食和增加运动量外，应用胰岛素增敏剂为主，适当加用刺激胰岛分泌胰岛素的药物，可以改善胰岛素高峰时间，使胰岛素释放趋于正常。

再次是胰岛素分泌缺乏型，多见于青少年或2型糖尿病后期，胰岛素分泌曲线低下，应接受胰岛素治疗，在治疗中还应适时进行血胰岛素分泌水平测定，以监护病情发展。

另外，还可表现为胰岛素缺乏和胰岛素抵抗同时存在，多见于2型糖尿病中后期，此类病人早期虽是胰岛素抵抗，但却长期应用刺激胰岛素的药物，致使胰岛素功能逐步衰竭，最终可导致体内胰岛素的缺乏。此类病人应加用胰岛素增敏剂或α-葡萄糖苷酶抑制剂，以减轻胰岛负担，待血糖控制后，再逐步减少刺激胰岛产生胰岛素的药物。

胰岛素测定方法很多，包括：免疫电泳法、补体结合法、凝结试验法、免疫沉淀法、凝胶过滤法和放射免疫法。这些方法具有操作繁琐、耗时长、过度浪费资源的缺点，不适于常规检验。

发明内容

本发明的目的是提供一种胰岛素的检测试剂盒。该试剂盒可直接应用于全自动生化分析仪上，结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。

本发明的另一目的是提供上述检测试剂盒的生产制备及使用方法。

为实现上述目的，本发明提供的试剂盒组成为：

试剂R1：缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；

试剂R2：缓冲液、结合有胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。

本发明提供的上述试剂盒的制备方法及操做步骤如下：

（a）按下列比例配制好试剂：

试剂R1：

Tris缓冲液      200-220mmol/L

聚乙二醇        5-10 mmol/L

叠氮钠          1-5 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  1-5mmol/L

牛血清白蛋白    1-5mmol/L；

试剂R2：

Tris缓冲液      200-220mmol/L

结合有胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子   3.5-5%（v/v）

吐温-20         1-5mmol/L

叠氮钠          0.5-3 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  1-5mmol/L

牛血清白蛋白    1-5mmol/L；

（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；

（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；

（d）根据吸光度变化值计算出样本中胰岛素的浓度。

具体实施方式

下述实施例是为了更详细的解释本发明，但不应理解为本发明局限于此。

实施例1：

本发明的试剂盒举例是双试剂，其中：

试剂R1：

Tris缓冲液      200mmol/L

聚乙二醇        8 mmol/L

叠氮钠          5 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  5mmol/L

牛血清白蛋白    5mmol/L；

试剂R2：

Tris缓冲液      200mmol/L

结合有胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子   5%（v/v）

吐温-20         5mmol/L

叠氮钠          3 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  5mmol/L

牛血清白蛋白    5mmol/L。

实施例2：试剂盒使用方法

1.试剂准备，试剂为液体双试剂，开瓶即用，其中：

试剂R1：

Tris缓冲液      200mmol/L

聚乙二醇        8 mmol/L

叠氮钠          5 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  5mmol/L

牛血清白蛋白    5mmol/L；

试剂R2：

Tris缓冲液      200mmol/L

结合有胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子   5%（v/v）

吐温-20         5mmol/L

叠氮钠          3 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  5mmol/L

牛血清白蛋白    5mmol/L。

2.全自动生化仪参数设置

(a)检测温度：37℃

(b)检测波长：主波长为600nm；

(c)反应时间：10分钟。

3.检测步骤（全部在全自动生化分析仪中完成）

(a)取120μL 试剂1和15μL血清样本混匀；

(b)将混匀后的溶液在37℃温育5分钟；

(c)再添加60μL 试剂2，反应30秒后，读取吸光度A1，再孵育270秒后，读取吸光度A2；

(d) 计算△A= A2 - A1。

4.通过吸光度变化值计算出胰岛素的浓度。

本发明具有的优点：

该试剂盒结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。所需检测仪器（生化分析仪）在各大医院和检测中心普遍使用。

Claims (7)

1.一种胰岛素检测试剂盒，其组成为：试剂R1、试剂R2，其中：

a、试剂R1包括：200-220mmol/L Tris缓冲液、5-10 mmol/L聚乙二醇、1-5 mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白；

b、试剂R2：200-220mmol/L Tris缓冲液、结合有胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子、1-5mmol/L吐温-20、0.5-3 mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白。

2.权利要求1的试剂盒，其特征在于：试剂R2中的胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子的制备方法为： 10.5mg/ml的胰岛素单克隆抗体与10%的乳胶颗粒（直径50-100nm），加入到200-220mmol/L Tris缓冲液中，震荡反应4小时，离心去上清，再用200-220mmol/L Tris缓冲液稀释至0.5%，并加入0.1-0.3 mmol/L叠氮钠。

3.上述试剂盒的制备和操作方法，主要步骤为：

（a）按下列比例配制好试剂：

试剂R1：

Tris缓冲液      200-220mmol/L

聚乙二醇        5-10 mmol/L

叠氮钠          1-5 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  1-5mmol/L

牛血清白蛋白    1-5mmol/L；

试剂R2：

Tris缓冲液      200-220mmol/L

结合有胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子   3.5-5%（v/v）

吐温-20         1-5mmol/L

叠氮钠          0.5-3 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  1-5mmol/L

牛血清白蛋白    1-5mmol/L；

（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；

（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；

（d）根据吸光度变化值计算出样本中胰岛素的浓度。

4.权利要求3的方法，其特征在于，被测样品与试剂比例应控制在1： 10到1：15之间。

5.权利要求3的方法，其特征在于，反应温度为37（±1）℃。

6.权利要求3的方法，其特征在于，反应时间为10分钟。

7.权利要求3的方法，其特征在于，用半/全自动生化分析仪检测的波长为600nm。