CN102816128A

CN102816128A - 含杂环基的氨基甲醇衍生物及其盐类及合成方法和用途

Info

Publication number: CN102816128A
Application number: CN201210186211XA
Authority: CN
Inventors: 张兴民; 王恩思; 郭靖; 牛生秀; 戴琢琳; 郑楠; 季丽萍; 王震芳; 梁铁
Original assignee: BEIJING FORELAND BIOPHARMA Co Ltd
Current assignee: BEIJING FORELAND BIOPHARMA Co Ltd
Priority date: 2011-06-10
Filing date: 2012-06-07
Publication date: 2012-12-12
Anticipated expiration: 2032-06-07
Also published as: US20150094337A1; CN102250035A; CN104583187A; US9315492B2; CN102816128B

Abstract

本发明涉及一种含杂环基的氨基甲醇衍生物及其盐类及合成方法和用途，属于医药领域。本发明含杂环基的氨基甲醇衍生物及其盐类用于制备免疫抑制、治疗器官移植排斥反应药物，或用于制备治疗免疫炎症性疾病如多发性硬化症、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎的药物。

Description

含杂环基的氨基甲醇衍生物及其盐类及合成方法和用途

技术领域

本发明属于医药领域，可用于治疗各种移植排斥反应和免疫炎症性疾病如多发性硬化症、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等。

背景技术

免疫系统是机体保护自身的防御性结构，主要由淋巴器官（胸腺、淋巴结、脾、扁桃体）、其它器官内的淋巴组织和全身各处的淋巴细胞、抗原呈递细胞等组成，也包括血液中其它白细胞及结缔组织中的浆细胞和肥大细胞。构成免疫系统的核心成分是淋巴细胞，它使免疫系统具备识别能力和记忆能力。淋巴细胞经血液和淋巴周游全身，从一处的淋巴器官或淋巴组织至另一处的淋巴器官或淋巴组织，使分散各处的淋巴器官和淋巴组织连成一个功能整体。T细胞和B细胞是人体最重要的免疫细胞。免疫系统各组分功能的正常是维持机体免疫功能相对稳定的保证，任何组分的缺陷或功能的亢进都会给机体带来损害。

免疫系统各组分广布全身，错综复杂，特别是免疫细胞和免疫分子在机体内不断地产生、循环和更新。免疫系统具有高度的辨别力，能精确识别自己和非己物质，以维持机体的相对稳定性；同时还能接受、传递、扩大、储存和记忆有关免疫的信息，针对免疫信息发生正和负的应答并不断调整其应答性。然而，免疫系统功能的失调也会对人体极为不利：人体的识别能力异常容易导致过敏现象的发生，反之则会引起反复感染；人体的自我稳定能力异常，会使免疫系统对自身的细胞作出反应，引发自身免疫疾病。

免疫抑制剂是一类在肿瘤化疗、器官移植、免疫病理学和临床免疫学等多学科研究基础上发展起来的新的药剂类别,具有免疫抑制作用,可抑制机体异常的免疫反应,目前广泛应用于器官移植抗排斥反应和自身免疫性疾病的治疗。

环磷酰胺(CTX)最早应用于临床,后来人们发现它在体内可被肝细胞微粒体羟化,产生具有烷化作用的代谢产物而具有强而持久的免疫作用。它通过杀伤免疫细胞, 影响免疫过程中的各阶段, 作为一种免疫抑制剂用于肾病综合征、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等。较明显的副作用使其应用受到了限制。

糖皮质激素如今已是临床中最常用的免疫抑制剂, 它可通过抑制巨噬细胞的吞噬功能, 减少针对自身抗原的自身抗体生成而抑制人体的免疫反应, 广泛应用于严重急性感染、过敏性疾病、组织器官移植的排斥反应及治疗某些自身免疫性疾病等。

硫唑嘌呤具有抑制T淋巴细胞和B淋巴细胞的作用, 是一种免疫抑制剂，多年来, 已成为防止器官移植排斥反应的有效药物, 并广泛应用于多种自身免疫病的治疗。

环孢霉素A （CsA）作为细胞因子合成抑制剂, 抑制T细胞的细胞因子基因转录, 阻断T细胞产生, 干扰T细胞活化。它在G0/G1期（G0、G1、S 是细胸分裂周期中的不同阶段）交界处阻断T细胞激活, 属于T细胞早期激活的抑制剂。自20世纪80年代起, CsA被陆续推广应用到各种器官和组织的移植, 获得了广泛成功, 开辟了器官移植的新时代。

FK506是继CsA之后开发的另一种亲免疫结合剂, 它可预防多种移植排斥, 尤适用于肝脏移植。FK506的免疫抑制作用约为CsA的 10～100倍, 其急、慢性排斥反应率低, 感染率低, 激素用量较少, 可逆转急性排斥反应, 不良反应较CsA少, 故有望取代CsA成为器官移植术后首选的免疫抑制剂。

雷帕霉素(Rapamycin, RPM)首次被用于抗移植排斥, 它可有效地预防排斥反应, 与其它药物合用, 使急性排斥率下降。它可特异性抑制蛋白激酶的磷酸化及其活性来抑制细胞因子诱导的蛋白质及DNA合成。为T细胞和B细胞激活晚期激活抑制剂。雷帕霉素作为一种新型免疫抑制剂, 其作用不仅是抑制免疫细胞, 而且抑制血管平滑肌增生和移行, 减轻排斥反应。

霉酚酸酯被美国FDA批准,并迅速应用于临床, 它疗效高, 对增殖的淋巴细胞有很高的选择性作用, 同时还能通过直接抑制B细胞增殖, 阻止抗体的形成。

上述免疫抑制剂由于选择性和特异性的限制, 在治疗的同时不可避免地会损伤患者的免疫防卫能力, 致使患者抗感染能力下降, 恶性病变的危险增加, 损伤造血、免疫系统及肝、肾、消化道功能, 造成神经和内分泌功能紊乱，并引发某些过敏反应等。如环磷酰胺可引起患者脱发, 致出血性膀胱炎, 如尿频、尿痛、血尿、蛋白尿等；糖皮质激素可加重或诱发感染, 诱发胃溃疡, 合并出血和穿孔, 引起代谢紊乱, 升高血压、血糖、血脂, 引起骨质疏松, 兴奋中枢神经系统致失眠等不良反应；硫唑嘌呤可致胆汁淤积和肝细胞损害；MTX有消化道损害症状, 如口腔溃疡、血便等, 尚可致畸胎、死胎；环孢霉素具有肾、肝及神经系统毒性, 并可导致高血压, 继发感染和肿瘤的发生；FK506也具有肾毒性, 而且在神经毒性方面还甚于CsA, 并对胰岛β2细胞有损伤, 诱发糖尿病；雷帕霉素可引起白细胞、血小板减少和高脂血症；霉酚酸脂则可引起呕吐、腹泻等胃肠道症状, 白细胞减少症, 败血症以及高血尿酸、高血钾、肌痛或嗜睡等。

1-磷酸-鞘氨酶受体拮抗剂FTY720与鞘氨醇（一种内生性溶血脂质）具有一些结构上的相似之处。鞘氨醇经由鞘氨醇酶诱导的磷酸化作用形成1-磷酸-鞘氨酶，其受体家族的同族配体。其受体的激活导致如下生理活动: 细胞分化、生存和生长，及可以起细胞粘附和细胞形态改变的细胞骨架重组的调整等。在正常的免疫反应中，T淋巴细胞和B淋巴细胞在淋巴结中增殖。当它们处于淋巴结中时，它们调低1-磷酸-鞘氨酶受体表达。一旦它们的激活和增殖被完成，就会调高细胞表面1-磷酸-鞘氨酶受体数量，这样可以使它们离开淋巴结。淋巴细胞1-磷酸-鞘氨酶受体可以与其配体结合，因此下调1-磷酸-鞘氨酶。然后淋巴细胞不再具有从淋巴结内脱离的功能，并粘附于淋巴结内 (1, 2, 3)。传统免疫抑制药物如环孢素的作用机制是抑制T淋巴细胞和B淋巴细胞激活。而1-磷酸-鞘氨酶受体拮抗剂不是通过灭活淋巴细胞而使整个免疫反应受损的方式，而是通过限制淋巴细胞在淋巴系统内的方法达到目的。1-磷酸-鞘氨酶受体拮抗剂可用于治疗各种移植排斥反应和免疫炎症性疾病。

1-磷酸-鞘氨酶受体拮抗剂FTY720已由Novartis (诺华公司) 研制成功，并在美国和欧洲进行了有关于多发性硬化症和移植病人的临床试验 (4,5)，并通过临床II期试验。然而，FTY720 不仅作用于1-磷酸-鞘氨酶受体-1(S1P1), 而且作用于1-磷酸-鞘氨酶受体-3 (S1P3),因此可以导致心率过缓等副作用 (6)。

发明内容

本发明提供一种含杂环基的氨基甲醇衍生物及其盐类及合成方法和用途。

本发明涉及式I化合物：

式I

其中，

R₁=烷基、环烷基、芳香基、杂环；

R₂，R₃=氢、卤素或烷基；

R₄=烷基、芳香甲基、羰基、烷基磺酰基；

W，Y，Z= C, CH, CR₁, N, O, S；

X,V=C、N。

本发明的详细情况如下：

正如上面所述，整个公开的内容中，除了特别注明之外，下面的术语都应该理解为如下含义：

用“至少有一个”，或者“被一个取代（紧随其后的是一种已知的取代基）”这样的术语表示连接到特定基团上的取代基的数目，如烷基，环烷基，杂环，芳基，异质芳基，指的是例如1-6个，或一般1-4个，一般为1，2或3个，通常指的是一个或两个，或一个。

“烷基”指的是脂肪族烃类，它可以是直链也可以带支链，链是由约1-20个碳原子组成的。首选烷基链上约包含1-8个碳原子，更可取的烷基链上约含有1-6个碳原子。在一个具体化的方案中，若烷基包含1-3个碳原子，那就是C1-C3。支链烷烃是由一个或多个低级烷基，如甲基、乙基或丙基，连接到一条直链烷烃上而形成的。“低级烷基”指的是链上含有约1-6个碳原子的基团，它可以是直链也可以带有支链。“烷基”可以是未取代也可以是被一个或多个取代基选择性取代，这些取代基可以相同也可以不同。取代基都可由如下基团组成，如卤素、烷基、芳香基、环烷基、杂环、杂芳香类、氰基、羟基、烷氧基、硫基、氨基、脂肪族胺类、脂肪环胺类、脂肪族重氮化合物、脂肪醚（酯）类、芳香醚（酯）类、脂肪环醚（酯）类、羧酸、烷氧基甲（酰）基。若没有限制，适宜的烷基，可以包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基。

“芳香基”指的是一种芳香族单环或多环体系，约由6-14个碳原子组成，而由6-10碳原子组成的较为常见。芳香基可以被一个或多个“环取代基”有选择性的取代，这些取代基可以相同也可以不同，正如定义下的苯。若无其他限制，合适的芳香基团可包括苯基、萘基。

“杂芳基”是指约含5到14个环原子的具有芳香性的单环或多环系统，最好是5到10个环原子，环系统其中的一个或多个原子是除了碳以外的其他元素，例如，氮，氧，硫，它们可以单独或者联合存在。首选的杂芳基包含5到6个环原子。杂芳基可以被一个或者多个相同的或者不同的环取代基取代并以此作为界定。杂芳基根名称之前的前缀词氮，氧，硫意味着至少分别有一个氮，氧，硫作为环原子。杂芳基上的一个氮原子也可以被氧化成N-氧化物。“杂芳基”也可以包括上述定义的杂芳基与芳基的稠和。杂芳基的非限定的例子有吡啶，吡嗪，呋喃，噻吩，嘧啶，吡啶（包括N-取代吡啶），异噁唑，异噻唑，噁唑啉，噻唑，吡唑，噁二唑，吡咯，吡唑，三唑，1,2,4-硫二唑，吡嗪，哒嗪，喹喔啉，酞嗪，羟吲哚，咪唑[1,2-A]吡啶，咪唑[2,1-B]噻，苯并呋喃，吲哚，氮杂吲哚，苯并咪唑，苯并噻吩，喹啉，咪唑，噻吩并吡啶，喹唑啉，吡咯并吡啶，咪唑并吡啶，异喹啉，苯并氮杂吲哚，1,2,4–三嗪，苯并噻唑等等。“杂芳基”一词也包括饱和杂环基，例如：四氢异喹啉，四氢喹啉等等。

“环烷基”是指含有3到10个碳原子的非芳香族单环或多环系统，最好是5到10个碳原子。首选环烷基环原子个数为5到7。环烷基可以被一个或者多个相同的或者不同的环取代基取代并以此作为界定。合适的单环环烷基的非限制例子包括; 环丙基，环戊基，环己基，环庚烷等等。适合多环环烷基的非限定例子包括：十氢萘，降冰片烷，金刚烷等等。

“卤素”是指氟，氯，溴，碘。首选是氟，氯和溴。

“杂环”是指含3到10个环原子的非芳香饱和单环或多环系统，最好是5到10个环原子，在环系统中的一个或多个原子（如两个，三个或四个）是除了碳以外的元素。如氮，氧或硫，单独或一起存在。并且在环系统上没有两个相连的氧和/或硫原子。首先含有5到6个环原子的杂环。杂环根名称之前的前缀词氮，氧，硫意味着至少分别有一个氮，氧，硫作为环原子。杂环环上的任何形式的氨基，如可能有的被保护的氨基，例如，- N（BOC），N（CBZ）-N组（TOS）等等都可认为是本发明的一部分。杂环可以被一个或者多个相同的或者不同的环取代基取代并以此作为界定。合适的单环杂环环的非限制的例子包括哌啶，吡咯烷，哌嗪，吗啉，硫代吗啉，噻唑烷，二噁烷，四氢呋喃，四氢噻吩，内酰胺，内酯等等

“芳杂环”也可能意味着一个单一的基团（如羰基），它同时取代一个环上相同碳原子上的二个活泼氢。这种化学成分例如吡咯酮：

值得注意的是，本发明在包含环系统的杂原子中，在碳原子上没有羟基连接N,O或S原子，同样，在碳上也没有N或者S基团连接其它杂原子。因此，举例来说，在环上：

没有-OH直接连到2号和5号碳。

还应当指出有互变异构形式，例如下述基团：

和

在本发明中被认为相当于典型实例。

“羟烷基”意思是一个OH-烷基-基团，这里的烷基为先前定义。首选包含低级烷基的羟乙基。

适宜的羟烷基团的非限制性的例子还包括羟甲基和2-羟乙基。

“酰基”意思是一类H-C(O)-，连烷基的-C(O)-或者环烷基-C(O)-，这些不同的基团已如前所述。母核通过羰基连在一起。首选包含低级烷基的酰基。非限制性的适宜的酰基基团还包括甲酰基，乙酰基和丙酸。

“烷氧基”意思是一个烷基-O-基团，在这里烷基如前所述。非限制性的适宜的烷氧基团包括甲氧基，乙氧基，n-丙氧基，异丙氧基和n-丁氧基。母核通过醚氧基连在一起。

术语“被取代的”意思是在一个特定的原子上一个或更多的氢被指定的基团所替代，如果指定的原子的正常化合价在现有的情况下没有超出，那么取代后结果是一个稳定的化合物。

取代基和/或变量只有在组合结果成稳定的化合物时才能允许被组合。这种“稳定的化合物”或：稳定的结构“意思是一种化合物在反应混合物中能够充分有效地继续隔离到一种有用的纯净程度，

而且成为了一个有效的治疗药物的配方。

术语“选择性取代”意思是可以用指定的基团，自由基或者其它基团进行选择性的取代。

术语“纯化”，“纯化形式”或者“处于隔离和纯化形式”对于一个化合物指的是上述的化合物经过一个合成工艺（例如经过一个反应混合物）、原料药或者组合应用的隔离之后形成的物理状态。因此，对于一个化合物而言，术语“纯化”，“以纯化的形态”或者“在分离纯化的形态”指的是该化合物所处的物理状态，该物理状态是指在纯化过程后或者是经过此处描述以及众所周知的娴熟的技艺的处理（如色谱分离、重结晶等）之后的状态。按照标准，在足够的纯度下，此处描述或是有名的高技艺的分析技术也具有特征性。

同样值得注意的是，本专利中的正文，路线，实例和表格中的任何不满足化合价原则的碳原子和杂原子被假设为含有足够数量的氢原子以满足化合价原则。

当化合物中的一个官能团被称作“受保护的”，就意味着这个官能团处于修饰的形式以阻止其在反应中发生不希望出现的副反应。适合的保护基将通过有机实验中的一般操作技术和规范的教材（如：T. W. Greene et al, Protective Groups in organic Synthesis (1991), Wiley, New York.）中提到的方法得到验证。

当任何可变基团（如，芳基，杂环基，R2等）不止一次出现在任何组分或化学式（I）中，那么在每一次改变中其定义相对于其他的改变是独立的。

正如这里所用到的“组成”一词，其目的是包含一个产物在指定的数量中的特定成分和任何产物从在指定的数量中的特定成分的化合而得到的直接或非直接的结果。

该发明中化合物的前药和溶剂化物在此也是经过仔细考虑的。在T. Higuchi 和 V. Stella所著的Pro-drugs as Novel Delivery Systems (1987)Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, Bioreversible Carriers in Drug Design, (1987) Edward B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association 和在Pergamon Press中提供了有关前药的讨论。 “前药”一词表示一个化合物（如，一个药物前体）在体内转化为化学式（I）中的化合物或药用盐类，水合物或溶剂化物。这种转化可能由多种机理（如代谢或化学过程）产生，如血液中的水解作用。在T. Higuchi 和W. Stella, “Pro-drugs as Novel Delivery Systems,” Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association 和在Pergamon Press, 1987.中提供了有关前药使用的讨论。

例如，化学式（I）中的化合物有一个羟基，前药的形成可用其他取代基团替换羟基中的氢原子而得到。例如，这些取代基可以是(C1-C6)链烷酰氧甲基, 1-((C1-C6)链烷酰氧基)乙基, 1-甲基-1-((C1-C6) 链烷酰氧基)乙基, (C1-C6)烷氧羰基氧甲基, N-(C1-C6)烷氧羰基胺甲基, -琥珀酰基, (C1-C6)链烷酰基, -氨基(C1-C4)链烷基, -芳乙酰基和-氨酰基, 或 -氨酰基--氨酰基, 每个氨酰基是独立的从天然 L-氨基酸中选择的, P(O)(OH)2, -P(O)(O(C1-C6)烷基)2 或糖基(最根本的原因是除去了以半缩醛形式存在的糖类中的一个羟基), 等等。

对于化学式（I）中任意一个化合物都含有一个氨基，其前药的形成可用其他取代基团替换氨基中的氢原子而得到。例如，这些取代基可以是R-羰基, RO-羰基, NRR’-羰基（ R 和 R’ 各自独立），(C1-C10)烷基, (C3-C7) 环烷基,苯基, 或 R-羰基是天然存在的-氨酰基或天然的-氨酰基, —C(OH)C(O)OY1 其中Y1 是 H, (C1-C6)烷基或者苯基, —C(OY2)Y3 其中 Y2 代表 (C1-C4)烷基还有 Y3 代表 (C1-C6)烷基, 羰基 (C1-C6)烷基, 氨基(C1-C4)烷基或者一-N—或者二-N,N-(C1-C6)烷氨基烷基, —C(Y4)Y5 其中 Y4 代表氢或者甲基还有 Y5 代表一-N— 或者二-N,N-(C1-C6)吗啉代烷氨基,哌啶-1-基或吡咯烷-1-基,等等。

本发明中的一个或多个化合物可能以非溶剂化物的形式存在，就像与医药学上可接受的水、乙醇等溶剂形成的溶剂化物形式一样，因此，本发明包括溶剂化物和非溶剂化物两种形式。“溶剂化物”指本发明中的一个化合物与一个或多个溶剂分子形成的物理聚集体，这个物理聚集体包括离子的不同程度和共价键，例如氢键。已证实这个溶剂化物可以被分离，例如，当晶体的晶格中混有一个或多个溶剂分子时。“溶剂化物”包括溶剂相和可分离的溶剂化物两部分。相应的溶剂化物例子有很多，包括乙醇溶剂化物，甲醇溶剂化物等。“水合物”是一种以水（H₂O）分子为溶剂的溶剂化物。

本发明中的一个或多个化合物都可以随意的制备成溶剂化物。溶剂化物的制备众所周知。例如M. Caira et al, J. Pharmaceutical Sci., 93(3), 601-611 (2004)中描述了抗真菌药氟康唑的溶剂化物的制备，即用乙酸乙酯和水制备。E. C. van Tonder et al, AAPS PharmSciTech., 5(1), article 12 (2004); 和 A. L. Bingham et al, Chem. Commun., 603-604 (2001)中也描述了溶剂化物、水合物的类似制备方法。一种典型的、非限制性的制备过程是在高于常温的温度时将发明的化合物溶解于所需要量的理想溶剂中（有机溶剂或水或它们的混合溶剂），降温，放置析晶，然后用标准的方法分离挑出晶体。用I. R.光谱学分析技术可以证实结晶中形成溶剂化物（水合物）的溶剂（水）的存在。

“有效剂量”或“治疗上的有效剂量”是指本发明中的化合物或一个组合物的在抑制上述疾病中有显著效果的剂量，并因此产生了所需的治疗作用，改善作用，抑制或预防作用。

式

的成盐化合物也属于本发明领域。除特别指示外，提到式化合物就了解它的成盐化合物。本发明中的盐指用有机酸/无机酸形成的酸式盐，以及用有机碱/无机碱形成的碱式盐。另外，当式

化合物的碱性官能团是吡啶或咪唑（但不限制于吡啶或咪唑），酸性官能团是羧酸（但不限制于羧酸）时就会形成两性离子（内盐），内盐也包括在本发明中的盐内。

尽管其他的盐也是有用的，但优先选择医学上可接受的盐（即无毒的，生理上可接受的）。式

化合物盐的形成：式

化合物与等量的酸/碱在盐沉淀物介质中反应形成；或在水介质中通过冻干法形成。

可仿效的酸式盐包括：乙酸盐类、抗坏血酸盐、苯甲酸盐类、苯磺酸盐类、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐类、柠檬酸盐类、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、延胡索酸盐类、盐酸化物、氢溴化物、氢碘化物、乳酸盐类、马来酸盐类、甲磺酸盐、萘磺酸盐类、硝酸盐类、草酸盐类、磷酸盐类、丙酸盐类、水杨酸盐类、琥珀酸盐、硫酸盐类、酒石酸盐类、硫氰酸盐类、甲苯磺酸盐等。另外有些酸被普遍认为适合用于构成低级药物化合物所成的有药用价值盐类，并被商讨，例如：P. Stahl，Camille G 等.药物盐类手册：性能，选择和使用。（2002）苏黎世：Wiley-VCH；S. Berge等，药物科学杂志，(1977) 66(1) 1-19; P. Gould,世界药学杂志(1986) ¬33 201-217; Anderson等，药物化学实践（1966），学术出版社，纽约；橘皮书中（食品药品管理，华盛顿，哥伦比亚特区网站）。另外，这些公开均被合并于参考文献中。

典型的碱式盐包括铵盐，碱金属盐，例如钠盐，锂盐和钾盐，碱土金属盐，例如钙盐和镁盐，有机碱（例如有机胺类）所构成的盐，例如二环己基胺，叔丁基胺类，另外还有氨基酸所构成的盐，例如精氨酸，赖氨酸等构成的盐。低级的含氮族可被媒介分成四组份：低级卤代烷（例如甲基，乙基，丁基的氯代物，溴化物和碘代物）；二烃基硫酸盐（例如二甲基，二乙基和二丁基硫酸盐）；长链卤化物（例如癸基，十二烷基，十八烷基氯代物，溴代物和碘代物）；芳烷基卤代物（例如苄基和苯乙基的溴代物）。

所有这类酸式盐和碱式盐意图成为在研究范围内药学可接受盐类，并且所有的酸式和碱式盐为了发明，均被认定为是等同于相应化合物的自由形态。

目前化合物中，药学可接受的脂类包括以下几组：（1）羟基酯化后的羧酸酯，其中羧酸组分的不含羰基部分从以下当中挑选出来：直链或支链烷基，（例如乙酰基，正丙基，叔丁基或正丁基）。烷氧烷基（例如甲氧甲基），芳烷基（例如苄基），芳氧烷基（例如苯氧甲基），芳基（例如苯基选择性的被卤素，C1-4烷基或C1-4烷氧基抑或氨基所取代）；（2）磺酸酯，例如烷基或芳烷基磺酰基（例如甲磺酰基）（3）氨基酸脂类（例如L-缬氨酰基或L-异白氨酰基）；（4）磷酸酯，单磷酸酯，二磷酸酯或三磷酸酯；（5）磷酸酯可被进一步酯化，例如被C1-20醇类或它的反应性衍生物酯化，也可被2,3-二（C6-24）酰基丙三醇酯化。

分子式I化合物及其盐，溶剂化物，酯和它的前体药物，都存在它们的互变异构形式（例如酰胺或者亚酰胺结构）。所有这些互变异构形式都预期成为目前发明的一部分。

分子式I化合物如前所述含有不对称或手性中心，因此，存在不用的立体异构形式。分子式I的所有立体结构和混合物一样，包括外消旋混合物，作为目前发明的一部分。另外，目前的发明包括所有的几何和位置异构体。例如，如果分子式I含有一个双键或一个稠环，那么无论顺式还是反式结构，抑或它们的混合物，都在发明的范畴之内。

非对映体混合物能够分离成单独的非对映体，基于它们不同的物理化学性质，采用众所周知的手段，例如，对映异构体的拆分可通过与适当的光学活性物质（例如手性醇或Mosher`s 莫氏酰氯）反应转换为非对映异构体，将其分离并转化（如水解）为相对应的单一的异构体。式I中的一些化合物可能是阻转异构体（如取代芳基）也是本发明中的一部分。对映异构体也可利用手性色谱柱分离。

式I中的化合物可能存在着不同的互变异构形式，这些形式都包含在本发明范围内。例如，酮-烯醇和亚胺-烯胺形式的化合物。

本发明还包括了有同位素标记的化合物，但事实上，一个或多个原子被一个不同原子质量或质量数的原子所取代在自然界中是常见的。列入本发明的化合物中的同位素包括H,C,N,O,P,F,S,如²H,³H,¹³C,¹⁴C,¹⁵N,¹⁸O,¹⁷O,³¹P,³²P,³⁵S,¹⁸F和³⁶S。

式I中某些同位素标记的化合物（如³H和¹⁴C）在物质和/或组织分布检测中是非常有用的。同位素氚(即 ³H)和¹⁴C(即 ¹⁴C)因其易于制备和检测而广泛应用。此外，被氘(即 ²H)取代的化合物可表现出一定的治疗优势，产生更好的代谢稳定性（如，增加体内半衰期或减少剂量需求），因此在一些情况下被采用。式1中同位素标记的化合物的合成过程参照已公开的方案和/或在本文的例子。

本发明还包括式I中化合物的多聚化物，盐类，溶剂化物，酯类和前药。

式 1

在一具体方案中，式1中的R₁为：

在另一具体方案中，式1中的R₁=

R₄=烷基，烯丙基，苄基，-C(=O)CH₃, -C(=O)R, -SO₂CH₃, -SO₂R(R=烷基) 芳香甲基、羰基、烷基磺酰基；

R₅=烷基，烷氧基或R₇OCH₂CH₂O-,

R₆=H,烷基或氟代烷基，

R₇=烷基

在另一具体方案中，式1中的

可以是

在另一具体方案中，式1中的R₂和R₃分别是H，卤素，烷基。

在另一具体方案中，式1中化合物可从下列中选择：

实例1、6-[5-（4-甲氧基苯基）-2-[1,3,4]噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘基-甲醇

实例2、6-[5-（4-乙氧基苯基）-2-[1,3,4]噁二唑基]- ]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘基-甲醇

实例3、6-[5-（4-氟苯基）-2- [1,3,4]噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘基-甲醇

实例4、6-[5-（3-氟苯基）-2-[1,3,4]噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘基-甲醇

实例5、6-[5-（2-氟苯基-2-[1,3,4]噁二唑基]- 2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘基-甲醇

实例6、6-[5-（4-吡啶基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例7、6-[5-（4-哌啶基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例8、1-{4-[5-(6-羟甲基-6-氨基-5,6,7,8-四氢-2-萘基)-2-1,3,4-噁二唑基]-1-哌啶基}乙酮

实例9、6-[5-(3-甲基-4-甲氧基苯基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例10、7-{5-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例11、7-[5-(3-三氟甲基-4-异丙氧基苯基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例12、6-[5-(3-硝基-4-吡啶基)-3-1,2,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例13、7-[5-(2-羟甲基-4-吡啶基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例14、4-[5-(7-羟甲基-7-氨基-5,6,7,8,-四氢-2-萘基)-1,3,4,-噁二唑基]-1-茚满醇

实例15、7-[5-（4-甲氧基-3-甲基苯基）-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例16、7-[5-(4-异丙氧基苯基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例17、7-{5-[4-(2-甲氧基乙氧基)-3-三氟甲基苯基]-2-1,3,4-噁二唑基}-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例18、7-{5-[4-(2-甲氧基乙氧基)-3-甲基苯基]-2-1,3,4-噁二唑基}-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例19、7-[5-(6-异丙氧基-3-吡啶基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例20、7-[5-（3,4-二乙氧基苯基）-2-[1,3,4]-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例21: 2-（7-苄氨基-5，6，7，8-四氢-7-萘甲醇基）-5-（3-甲基-4-异丙氧基）-1，3，4-噁二唑

实例22: 2-（7-氨基-5，6，7，8-四氢-7-萘甲醇基）-5-（3-甲基-4-异丙氧基）-1，3，4-噁二唑

实例23、7-[5-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-乙氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例24、7-[5-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-二甲氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例25、N-{2-羟甲基-7-[5-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-2-1,3,4-噁二唑基]-1,2,3,4-四氢-2-萘基}乙酰胺

实例26、N-{2-羟甲基-7-[5-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-2-1,3,4-噁二唑基]-1,2,3,4-四氢-2-萘基}甲磺酰胺

实例27、7-[3-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-5-1,2,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例28、6-[3-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-5-1,2,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例29、7-[5-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-3-1,2,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例30、6-[5-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-3-1,2,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例31、7-[4-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-1-1,2,3-三唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

实例32、6-[4-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-1-1,2,3-三唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇及其生理学上可接受的盐。

本发明所述的含有多种取代基的2-氨基-1，2，3，4-四氢萘基-2-甲醇化合物及其盐，为盐酸化合物。

本发明所述的含有多种取代基的2-氨基-1，2，3，4-四氢萘基-2-甲醇化合物的制备方法是，包括按照下列反应式及步骤：

反应流程l

反应流程2

反应流程3

本发明含杂环基的氨基甲醇衍生物及其盐类在制备免疫抑制药物中的应用。

本发明含杂环基的氨基甲醇衍生物及其盐类在制备治疗移植排斥反应的药物中的应用。

本发明含杂环基的氨基甲醇衍生物及其盐类在制备治疗免疫炎症性疾病的药物中的应用。

本发明含杂环基的氨基甲醇衍生物及其盐类在制备治疗多发性硬化症、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎的药物中的应用。

根据本发明的化合物还可以存在各种多晶型，例如无定形和结晶性多晶型。根据本发明的化合物的所有多晶型都包括在本发明的范围内，是本发明的进一步方面。

以下，所有对“根据式（I）的化合物”的称谓都涉及如上所述的式（I）化合物和如本文所述的它们的盐、溶剂化物和生理学上的功能衍生物。

根据式（I）的化合物为达到所需生物学效果所必要的量取决于大量因素，例如所选择的具体化合物、预期用途、给药方式和患者的临床状况。一般来说，每日剂量在 20mg至200mg，通常从20mg至50mg。关于上述疾病的预防或治疗，根据式（I）的化合物可以使用化合物本身，但是优选地使用与可耐受的赋形剂的药物组合物形式。赋形剂在与组合物的其他成分相容和对患者健康无害的意义上当然必须是可耐受的。赋形剂可以是固体或液体，或者二者皆是，优选地与化合物配制成单一剂量，例如片剂，其中可以含有0.05至95重量％活性化合物。还可以存在其他药学活性物质，包括其他根据式（I）的化合物。根据本发明的药物组合物可以通过已知的药学方法之一制备。这些方法本质上由混合各组分与药学上可接受的赋形剂和／或助剂组成。

根据本发明的药物组合物是适合口服、直肠、局部、经口（例如舌下）和肠胃外（例如皮下、肌内、真皮内或静脉内）给药的那些，不过在每种具体情况下最适合的给药方式取决于在每种情况下所治疗疾病的性质与严重性和所用根据式（I）的化合物的性质。糖衣制剂和糖衣缓释制剂也包括在本发明的范围内。耐酸的和肠溶的制剂是优选的。适合的肠溶衣包括乙酸纤维素邻苯二甲酸酯、乙酸聚乙烯邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯和异丁烯酸与异丁烯酸甲酯的阴离子聚合物。

适合口服给药的药物化合物可以是独立的单元，例如胶囊剂、扁囊剂、镀剂或片剂，它们各自含有一定量根据式（I）的化合物；粉剂或颗粒剂；在含水或无水液体中的溶液或悬液；水包油型或油包水型乳剂。已经提到，这些组合物可以通过任意适合的药学方法制备，该方法包括使活性化合物与赋形剂（可以由一种或多种另外的成分组成）发生接触的步骤。一般来说，组合物是这样制备的，均匀一致地混合活性化合物与液体和／或微细粉碎的固体赋形剂，然后如果必要的话，使产物成型。因而，片剂例如可以这样制备，压制化合物：如果适当的话，与一种或多种另外的成分的粉末或颗粒或者使其成型。压制片可以这样制备，在适合的机械中，将自由流动形式、例如粉末或颗粒形式的化合物，如果适当的话，先与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂和／或一种（大量）表面活性剂／分散剂混合，压制成片。成型片可以这样制备，在适合的机械内，使用惰性液体稀释剂湿润的粉状化合物成型。

适合经口（舌下）给药的药物组合物包括锭剂，它含有根据式（I）的化合物和矫味剂，习惯上是蔗糖和阿拉伯胶，和软锭剂，它在惰性基质中包括化合物，前者例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶。

适合肠胃外给药的药物组合物优选地包括根据式（I）的化合物的无菌含水制剂，它们优选地与预期受药者的血液是等渗的。这些制剂优选地是静脉内给药的，不过给药也可以采取皮下、肌内或真皮内注射的方式。这些制剂可以优选地这样制备，混合化合物与水，赋予所得溶液无菌和与血液等渗。根据本发明的可注射组合物一般含有0．1至5％重量活性化合物。

适合直肠给药的药物组合物优选地是单一剂量的栓剂。它们可以这样制备，混合根据式（I）的化合物与一种或多种常规的固体赋形剂，例如可可脂，使所得混合物成型。

适合对皮肤局部用药的药物组合物优选地是软膏剂、霜剂、糊剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。可以使用的赋形剂是石油凝胶、羊毛脂、聚乙二醇、醇类和两种或多种这些物质的组合。活性化合物的浓度一般占组合物重量的0．1至15％。

透皮给药也是可能的。适合透皮给药的药物组合物可以是单一的贴剂，它们适合与患者的表皮长期紧密接触。这类贴剂适合含有活性化合物的可选被缓冲的水溶液，化合物溶解和／或分散在粘合剂中或者分散在聚合物中。适合的活性化合物浓度是约1%至35%，优选从约3%至15%。特别可能的是。活性化合物可以通过电子转运或离于电渗而被释放，例如描述在Pharmaceutical Research（药学研究），2（6）：318（1986）。

本发明化合物及其生理学上的盐仅作用于鞘氨醇₁磷酸受体₁（S1P1）, 下调S1P1表达，抑制淋巴细胞进入外周血液循环。用于治疗免疫炎症性疾病如多发性硬化症、类风湿关节炎等。

附图说明

图1是实例21和实例22能明显抑制自身免疫性多发性硬化症的诱导及发病图；

图中化合物-179是实例21，图中化合物-067是实例22。

图2是实例21和实例22能明显抑制实验性类风湿关节炎的诱导及发病图；

图中化合物-179是实例21，图中化合物-067是实例22。

具体实施方式

实验部分：

I、化合物的合成：

1、合成过程中LCMS的分析条件如下：

LC Analysis

2、合成部分

反应流程4：中间体9的制备

中间体1的制备：

原料间-溴苯乙酸 (100 克， 0.47 摩尔, 1.0 eq) 溶解到二氯甲烷 (500 毫升) 中，冰盐浴降温至0℃，向其中滴加草酰氯 (120 克， 0.95 摩尔, 2.0 eq) ，滴加温度保持在 0℃。滴加完毕后改室温反应2小时。反应完成后减压浓缩得间溴-苯乙酰氯 (110 克， 0.47 摩尔)，溶解到二氯甲烷（200 毫升）中待用。

另一个反应瓶中加入三氯化铝 (210 克， 1.9 摩尔, 4.0 eq ) 和二氯甲烷 (500 毫升)。体系冰盐浴降温至 -5 ℃，向体系滴加上述制备好的酰氯的二氯甲烷溶液，保持温度-5 ℃，滴加完后向体系通入乙烯气体，保持温度-5℃~0 ℃，持续通乙烯气体3小时。反应完成后倾入冰水(5000 毫升) 中，用二氯甲烷 (3×1000 毫升)萃取，合并有机相用水(1000 毫升) 洗涤一次，有机相无水 Na₂SO₄干燥，顾虑，母液减压浓缩，得残留物经柱层析 (乙酸乙酯:庚烷 = 1:30) 纯化，得中间体1化合物(45 g ，产率: 43 %) 为黄色固体。MS (M + H⁺)：225, 227, 理论计算值：225, 227。

中间体3的制备:

在氮气保护下，原料1（20.0 克，89 毫摩尔，1.0 eq）和ZnI（1.4 克，cat.）加入到三甲基硅氰（13.0 克，130 毫摩尔，1.5 eq）中，体系室温反应3小时生成2。向反应体系加入NH₃/甲醇溶液（50 毫升），加毕室温反应过夜。反应完成后体系减压浓缩，残留物用HCl/甲醇（50 毫升）溶解，加入乙醚（200 毫升）有大量固体析出，过滤，滤饼干燥得中间体3化合物（23 克，89%）为黄色固体。MS (M + H⁺)：251, 理论计算值：251。

中间体4的制备:

中间体3（23 克，80 毫摩尔，1.0 eq）加入到8N盐酸（200 毫升）中，加热至回流反应过夜。反应完成后降温至室温，过滤，收集滤饼，干燥后得中间体4化合物（20克，81%）为黄色固体。MS (M + H⁺)：271, 理论计算值：271

中间体5的制备:

原料4（20.0 克，65 毫摩尔，1.0 eq）加入到甲醇（500 毫升）中，降温至0 ℃，滴加氯化亚砜（23.0 克，195 毫摩尔，3.0 eq），加毕升温至回流反应3小时。反应完成后体系减压浓缩，残留物加水（300 毫升），饱和碳酸氢钠调pH = 8，水相用醋酸乙酯（200 毫升）萃取三次，合并有机相食盐水洗涤一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩得中间体5化合物（15.0 克，81%）为黑色油状物。MS (M + H⁺)：285, 理论计算值：285。

中间体6的制备:

LiAlH₄（4.0 克，106 毫摩尔，2.0 eq）加入到四氢呋喃（200 毫升）中，降温至0 ℃，滴加原料5（15.0 克，53 毫摩尔，1.0 eq）的四氢呋喃（100 毫升）溶液，加毕, 0 ℃反应30分钟。反应完成后体系加入水（4 毫升），氢氧化钠（8 毫升），水（4 毫升），然后过滤，母液减压浓缩得中间体6化合物（12.0 克，88%）为黑色油状物。MS (M + H⁺)：256, 理论计算值：256。

中间体7的制备:

原料6（13.0 克，51 毫摩尔，1.0 eq），醋酸（4.5 克，150 毫摩尔，1.5 eq）和苯甲醛（5.3克，51 毫摩尔，1.0 eq）加入到二氯甲烷（200 毫升）中，降温至0 ℃，分批加入醋酸硼氢化钠（16.0克，150 毫摩尔，1.5 eq），加毕25度反应30分钟。反应完成后体系加入氢氧化钠（8 毫升），饱和碳酸氢钠（100 毫升），用二氯甲烷（100 毫升）萃取三次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析（乙酸乙酯:庚烷 =1：10）纯化得中间体7化合物（13.0 克，74%）为棕色油状物。MS (M + H⁺)： 346, 理论计算值：346。

中间体8的制备:

原料7（13.0 克，38 毫摩尔，1.0eq）和TsOH（0.3 克，cat）加入到2，,2二甲氧基丙烷（100 毫升）中，封闭加热至120 ℃，反应过夜。反应完成后体系减压浓缩，残留物加入水（100 毫升），饱和碳酸氢钠（50 毫升），用二氯甲烷（100毫升）萃取三次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得粗品，经柱层析（乙酸乙酯:庚烷 =1：20）纯化得中间体8化合物（9.4 克，65%）为浅黄色固体。MS (M + H⁺)： 386, 388 理论计算值：386, 388。

中间体9的制备:

原料8（5.0 克，13 毫摩尔，1.0 eq）加入到四氢呋喃（50 毫升）中，氮气保护下降温至-78 ℃，滴加n-BuLi（7.8 毫升，1.5 eq），在-78℃，反应30分钟，向其中加入干冰（2 g），加毕自然升温至室温，减压浓缩，残留物加入水（50 毫升），用2N HCl调pH = 4，过滤，收集滤饼干燥得中间体9化合物（4.0 克，88%）为白色固体。MS (M + H+)： 352, 理论计算值：352。

中间体18的制备:

反应流程5：中间体18的制备

中间体18 可参照9的合成方法通过反应流程4 获得。

实例1的合成：

反应流程6：实例1的合成

中间体19的制备:

4 - 甲氧基苯甲酸甲酯（33 克， 0.2 摩尔）和无水肼(7.7 克， 0.24 毫摩尔) 的混合物在氮气下加热到140 ℃，反应在此温度下持续30分钟。冷却到室温后，反应混合物用乙酸乙酯翠取（3×100毫升）。有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得中间体19化合物粗品 (30 g) 直接用于下一步发应。

中间体20的制备:

原料18（0.5 克，1.0 eq）溶解到干燥的二氯甲烷（20 毫升）中，加入DMF（0.01克，cat），降温至0 ℃，滴加草酰氯（500 毫克，3.0 eq），加毕自然升至室温反应30 min，反应完成后直接减压浓缩得酰氯，加二氯甲烷（10 毫升）溶解待用；

另一反应瓶中加入19（240 毫克， 1.0eq）和二氯甲烷（20 毫升），室温下加入Et₃N（430 毫克，3.0 eq），加毕降至0 ℃，滴加上述制备好的酰氯的二氯甲烷溶液，加毕自然升至室温反应1 h。LCMS和薄层色谱法（乙酸乙酯：石油醚=1:1）监测反应完成。反应液加入水30 毫升，二氯甲烷3×30 毫升萃取，有机相干燥后浓缩得粗品，经柱层析（乙酸乙酯：石油醚=1:5）纯化后得中间体20化合物 200毫克。

中间体21的制备:

原料20（100 毫克，1.0eq）溶解到POCl₃（10 毫升）中，加热回流反应3 h，LCMS和薄层色谱法（二氯甲烷：甲醇 = 10:1）监测反应完成。反应液减压浓缩除掉POCl₃，残留物加入冰水20 克，NaHCO₃调节pH=8，二氯甲烷3×30 毫升萃取，有机相干燥后柱层析（二氯甲烷：甲醇=30:1）后得中间体21化合物 50 mg。

实例1： 6-[5-（4-甲氧基苯基）-2-[1,3,4]噁二唑基]- 2-氨基-1,2,3,4-四氢2-萘基-甲醇

原料 21 (45 毫克， 0.094 毫摩尔, 1.0 eq) 和硝酸铈铵（45 mg）加入到乙腈（10 毫升）和二氯甲烷（1 毫升）中，体系室温反应5小时，反应用薄层色谱法（二氯甲烷：甲醇 = 10:1）和LCMS监测。反应完成后向体系加入水（20 毫升），用二氯甲烷（3× 20 毫升）萃取，合并有机相用饱和食盐水（20 毫升）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析（二氯甲烷：甲醇 = 50:1）纯化得实例1（20 毫克， 61%）为白色固体。NMR (400MHz, CDCl₃) δ= 7.42（2H, d）, 7.32 (2H, d), 7.21 (2H, m), 6.90 (1H, d), 3.86 (3H, s), 3.70 (2H, dd), 2.80 (4H, m), 1.82 (2H, m); Rt = 3.12 min, MS (M + H+)：352, 理论计算值：352

以下实例可用类似操作于实例1的合成方式获得：

实例2： 6-[5-（4-乙氧基苯基）-2-[1,3,4]噁二唑基]- ]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘基-甲醇

NMR (400MHz, CD₃OD) δ= 8.04（2H, d）, 7.92 (2H, m), 7.41 (1H, m), 7.52 (2H, d), 4.10 (2H, m), 3.60 (2H, d), 3.30 (4H, m), 3.00 (2H, m), 1.40 (3H, t); Rt = 3.34 min, MS (M + H⁺)： 366, 理论计算值：366

实例3： 6-[5-（4-氟苯基）-2- [1,3,4]噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘基-甲醇

NMR (400MHz, CDCl₃) δ= 8.10（2H, d）, 7.96 (2H, m), 7.21 (3H, m), 3.52 (2H, m), 3.10 (2H, m), 2.80 (2H, m), 1.82 (2H, m); Rt = 3.16 min, MS (M + H⁺)：340, 理论计算值：340

实例4： 6-[5-（3-氟苯基）-2-[1,3,4]噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘基-甲醇

NMR (400MHz, CDCl₃) δ= 8.00（1H, m）, 7.90 (1H, m), 7.64 (1H, m), 7.22 (3H, m), 3.52 (2H, m), 3.10 (2H, m), 2.80 (2H, m), 1.82 (2H, m); Rt = 3.24 min, MS (M + H+)：340, 理论计算值：340.

实例5： 6-[5-（2-氟苯基-2-[1,3,4]噁二唑基]- 2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘基-甲醇

NMR (400MHz, CD₃OD) δ= 8.16（1H, m）, 7.92 (2H, m), 7.64 (1H, m), 7.32 (3H, m), 3.62 (2H, m), 3.10 (2H, m), 2.42 (2H, m), 1.64 (2H, m); Rt = 3.10 min, MS (M + H+)：340, 理论计算值：340.

实例6：6-[5-（4-吡啶基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

NMR (400MHz, CD₃OD) δ= 8.70（2H, d）, 8.20 (2H, 2), 7.64 (1H, m), 7.30 (3H, m), 3.60 (2H, m), 3.00 (2H, m), 2.02 (2H, m), 1.24 (2H, m); Rt = 2.77 min, MS (M + H+)：323, 理论计算值：323.

实例7：6-[5-（4-哌啶基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

NMR (400MHz, CD₃OD) δ= 7.64 (2H, m), 7.30 (1H, m), 3.60 (2H, m), 3.00 (2H, m), 2.82 (4H, m), 2.64 (1H, m), 2.02 (2H, m), 1.80 (4H, m), 1.24 (2H, m); Rt = 2.40 min, MS (M + H+)：329, 理论计算值：329.

实例8：1-{4-[5-(6-羟甲基-6-氨基-5,6,7,8-四氢-2-萘基)-2-1,3,4-噁二唑基]-1-哌啶基}乙酮

NMR (400MHz, CDCl₃) δ= 7.80 (2H, m), 7.20 (1H, m), 3.76 (2H, m), 3.60 (4H, m), 3.10 (2H, m), 2.82 (2H, m), 2.64 (1H, m), 2.24 (3H, s), 2.02 (2H, m), 1.80 (4H, m), 1.24 (2H, m); Rt = 2.64 min, MS (M + H+)：371, 理论计算值：371.

实例9：6-[5-(3-甲基-4-甲氧基苯基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

NMR (400MHz, CDCl₃) δ= 7.94 (1H, m), 7.90 (2H, m), 7.82（1H, m）, 7.20 (1H, m), 6.66 (1H, d), 3.90 (3H, s), 3.70 (2H, dd), 2.90 (4H, m), 2.30 (3H, s), 1.52 (2H, m); Rt = 3.38 min, MS (M + H+)：366, 理论计算值：366

实例10：7-{5-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ= 8.05 (2H, d), 7.85 (2H, m), 7.35（1H, m）, 7.15 (2H, d), 4.20 (2H, m), 3.62 (2H, m), 3.30 (3H, s), 2.90 (4H, m), 1.85 (2H, m); Rt = 3.21 min, MS (M + H+): 396, 理论计算值：396

实例11：7-[5-(3-三氟甲基-4-异丙氧基苯基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

NMR (400MHz, CD₃Cl₃) δ= 7.9（2H, m）, 7.60 (1H, m), 7.35 (1H, m), 7.00 (1H, m), 6.85 (1H, m), 4.60 (1H, m), 3.75 (2H, m), 3.150 (2H, m), 2.70 (2H, m), 2.10 (2H, m), 1.32 (6H, d), Rt = 3.90 min, MS (M + H+)：448, 理论计算值：448

实例12：6-[5-(3-硝基-4-吡啶基)-3-1,2,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

NMR (400MHz, DMSO-d₃) δ= 8.95（1H, m）, 8.82 (1H, m), 8.50 (1H, m), 7.91 (2H, m), 7.38 (1H, m), 5.02 (1H, d), 2.90 (4H, m), 2.70 (2H, d), 1.78 (2H, m), Rt = 3.04 min, MS (M + H⁺)： 368, 理论计算值：368

实例13：7-[5-(2-羟甲基-4-吡啶基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

NMR (400MHz, CD₃Cl₃) δ= 7.72（1H, m）, 7.50 (1H, m), 7.41 (2H, m), 7.01 (1H, m), 6.80 (1H, m), 5.12 (2H, d), 4.10 (2H, d), 3.60 (2H, d), 3.30 (2H, m), 1.82 (2H, m), Rt = 2.71 min, MS (M + H+)：353, 理论计算值：353

实例14：4-[5-(7-羟甲基-7-氨基-5,6,7,8,-四氢-2-萘基)-1,3,4,-噁二唑基]-1-茚满醇

NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ= 8.05 (1H, d), 7.85 (2H, m), 7.60（1H, d）, 7.50 (1H, m), 7.35 (1H, m), 5.45 (1H, m), 5.15 (1H, m), 3.5 (2H, m), 3.20 (2H, m), 3.00 (2H, m) 2.70 (4H, m), 1.90 (2H, m); Rt = 2.97 min, MS (M + H+)：378, 理论计算值：378

实例15： 7-[5-（4-甲氧基-3-甲基苯基）-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ=7.95（3H, m）,7.85 (1H, s), 7.36 (1H, s), 7.14 (1H, d), 3.90 (3H, s), 2.90 (4H, m), 2.85 (2H, m), 2.25 (3H, s), 1.88 (2H, m), Rt = 3.49 min, MS (M + H+)：366, 理论计算值：366

实例16：7-[5-(4-异丙氧基苯基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

NMR (400MHz, DMSO-d₆+D₂O) δ=8.10（2H, d）, 7.90 (2H, d), 7.41 (1H, d), 7.20 (2H, d), 4.81 (1H, m), 3.45 (2H, m), 2.99 (2H, m), 2.81 (2H, m), 1.86 (2H, m), 1.38 (6H, m), Rt = 3.77 min, MS (M + H+)：380, 理论计算值：380

实例17：7-{5-[4-(2-甲氧基乙氧基)-3-三氟甲基苯基]-2-1,3,4-噁二唑基}-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

NMR (400MHz, DMSO+D₂O) δ= 8.37（1H, d）, 8.27 (1H, s), 7.87 (2H, m), 7.54 (1H, d), 7.35 (1H, d), 4.38 (2H, m), 3.74 (2H, m), 3.33 (5H, m), 2.90 (2H, m), 2.83 (2H, m), 1.86 (2H, m). Rt = 3.64 min, MS (M + H+)：464, 理论计算值：464

实例18：7-{5-[4-(2-甲氧基乙氧基)-3-甲基苯基]-2-1,3,4-噁二唑基}-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ=7.95（2H, d）,7.83 (2H, d), 7.34 (1H, d), 7.15 (1H, d), 4.22 (2H, s), 3.74 (2H, m), 3.44 (2H, m), 3.33 (3H, s), 2.95 (2H, m), 2.83 (2H, m), 2.26 (3H, s), 1.83 (2H, m); Rt = 3.07 min, MS (M + H+)：410, 理论计算值：410

实例19：7-[5-(6-异丙氧基-3-吡啶基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

NMR (400MHz, CDCl₃) δ= 8.85（1H, s）, 8.22 (1H, d), 7.81 (2H, d), 7.22 (1H, d), 6.80 (1H, d), 5.39 (1H, m), 3.54 (2H, s), 3.00 (2H, m), 2.89 (2H, m), 1.88 (2H, m), 1.39 (3H, s),1.37 (3H, s); Rt = 3.68 min, MS (M + H+)：381, 理论计算值：381

实例20：7-[5-（3,4-二乙氧基苯基）-2-[1,3,4]恶二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ=7.95（2H, d）,7.83 (2H, d), 7.34 (1H, d), 7.15 (1H, d), 4.22 (2H, s), 3.74 (2H, m), 3.44 (2H, m), 3.33 (3H, s), 2.95 (2H, m), 2.83 (2H, m), 2.26 (3H, s), 1.83 (2H, m)。

中间体21-1的合成

取化合物21-0（4-羟基苯甲酸）5 g（36 mmol），无水乙醇50 mL，加热至回流，缓慢滴加浓硫酸3.4 mL（63 mmol），滴毕继续搅拌反应8 h，蒸除大部分乙醇，静置析出晶体，过滤，滤饼水洗至中性，干燥，得白色固体化合物21-1 5 g，产率83%；mp 109-111℃；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 7.92 (d, 2H, J=8.4 Hz, 2×-ArH), 6.88 (d, 2H, J=8.0 Hz, 2×-ArH), 5.97 (s, 1H, -OH), 4.38 (q, 2H, J=6.8 Hz, -CH₂-), 1.38 (t, 3H, J=6.8 Hz, -CH₃)；¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 167.4, 160.6, 131.9, 131.9, 122.1, 115.3, 115.3, 61.1, 14.2。

中间体21-2的合成

取化合物21-1 16 g（76.9 mmol），无水碳酸钾39.8 g（0.29 mol），无水乙醇200 mL，加热至60℃，滴加2-溴丙烷35.5 g（0.29 mol）的无水乙醇溶液50 mL，保持60℃继续搅拌反应2 h，反应毕，蒸除溶剂后硅胶柱层析（展开剂：乙酸乙酯：石油醚=1:10），得无色油状化合物21-2 20 g，产率99%；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 7.97 (d, 2H, J=8.0 Hz, 2×-ArH), 6.88 (d, 2H, J=8.0 Hz, 2×-ArH), 4.62 (t, 1H, J=5.6 Hz, -CH-), 4.33 (d, 2H, J=6.8 Hz, -CH₂-), 1.34 (d, 9H, J=4.8 Hz, 3×-CH₃)；¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 166.3, 161.6, 131.4, 131.4, 122.4, 114.9, 114.9, 69.9, 60.4, 21.8, 14.3。

中间体21-3的合成

取化合物21-2 2 g（12 mmol），二氯甲烷50 mL，冰盐浴保持-10℃下，缓慢滴加溴素1.53 g（12 mmol）的二氯甲烷溶液20 mL，滴毕，40℃搅拌反应3.5 h，加入10% 硫代硫酸钠溶液搅拌至溶液无色，水层用二氯甲烷萃取三次，有机层用无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩滤液后硅胶柱层析（展开剂：乙酸乙酯：石油醚=1：3），得无色油状化合物21-3 1.8 g，产率65%；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 8.13 (s, 1H, -ArH), 7.85 (d, 1H, J=8.8 Hz, -ArH), 6.80 (d, 1H, J=8.8 Hz, -ArH), 4.56-4.53 (m, 1H, -CH-), 4.28 (q, 2H, J=7.2 Hz, -CH₂-), 1.29 (t, 9H, J=6.8 Hz, 3×-CH₃)；¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 164.7, 157.8, 134.5, 129.9, 123.5, 113.0, 112.4, 71.6, 60.5, 21.5, 14.0。

中间体21-4的合成

在N₂保护下，取化合物21-3 1.5 g（5 mmol），甲基硼酸0.34 g（5.5 mmol），K₃PO₄ ^.3H₂O 4.15 g（15 mmol），四三苯基膦钯0.13 g（0.25 mmol），甲苯30 mL，加热回流反应3 h，加少许水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取三次，有机层用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂后硅胶柱层析（展开剂：乙酸乙酯：石油醚=1：50），得无色油状化合物21-4 0.75 g，产率65%；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 7.86-7.83 (m, 2H, 2×-ArH), 6.82 (d, 1H, J=8.4 Hz, -ArH), 4.62-4.59 (m, 1H, -CH-), 4.35 (q, 2H, J=7.2 Hz, -CH₂-), 2.13 (s, 3H, Ar-CH₃), 1.38-1.34 (m, 9H, 3×-CH₃)；¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 166.6, 159.9, 132.0, 128.9, 127.3, 121.8, 111.2, 70.0, 60.3, 22.0, 16.2, 14.3。

中间体21-5的合成

取化合物21-4 5 g（22 mmol），水合肼（80%）13.6 mL（0.22 mol），无水乙醇80 mL，加热回流反应过夜，蒸除溶剂后硅胶柱层析（展开剂：乙酸乙酯），得白色固体化合物21-5 4.5 g，产率95%；mp 97-99℃；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 8.69 (s, 1H, -NH-), 7.57 (s, 2H, 2×-ArH), 6.70 (d, 1H, J=8.4 Hz, -ArH), 4.48 (t, 1H, J=6.0 Hz, -CH-), 4.22 (s, 2H, -NH₂), 2.09 (s, 3H, Ar-CH₃), 1.26 (d, 6H, J=5.6 Hz, 2×-CH₃)；¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 168.3, 158.7, 129.5, 127.3, 125.9, 123.7, 111.3, 69.8, 21.8, 21.6, 16.1。

中间体21-6的合成

在N₂保护下，加入Mg 0.78 g（28.6 mmol），几粒碘，升温至80℃，滴加少量中间体8（3-苄基-4-[7-溴-1，2，3，4-四氢萘基]-2，2-二甲基-1，3-噁唑烷） 10 g（26 mmol）的THF溶液100 mL以引发反应，搅拌下继续滴加剩余的中间体8溶液并保持反应体系微沸，滴毕，继续回流反应5 h。冷却，保持反应温度-10℃，通入干燥CO₂气体1.5 h， 0℃下滴加浓硫酸1.4 mL，继续搅拌0.5 h，蒸除溶剂后硅胶柱层析（展开剂：乙酸乙酯：石油醚=1:3），得白色固体化合物21-6 5.3 g，产率58%；mp 180-182℃； ¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ: 12.71 (s, 1H, -CO₂H), 7.65 (d, 2H, J=8.4 Hz, 2×-ArH), 7.40 (d, 2H, J=7.2 Hz, 2×-ArH), 7.28 (t, 2H, J=7.6 Hz, 2×-ArH), 7.21-7.14 (m, 2H, 2×-ArH), 3.87 (s, 2H, -CH₂-), 3.65 (d, 1H, J=8.0 Hz, -CH₂-OH), 3.50 (d, 1H, J=8.0 Hz, -CH₂-OH), 2.91 (t, 2H, J=16.8 Hz, -CH₂-), 2.77 (t, 2H, J=16.0 Hz, -CH₂-), 1.82-1.74 (m, 2H, -CH₂-), 1.22 (s, 3H, -CH₃), 1.08 (s, 3H, -CH₃)；¹³C NMR (100 MHz, DMSO) δ: 167.3, 141.4, 140.7, 136.3, 130.3, 128.5, 128.2, 127.9, 127.9, 126.6, 126.6, 126.5, 94.8, 71.9, 62.0, 45.8, 35.9, 30.2, 27.6, 27.3, 27.0。

中间体21-8的合成

取中间体21-6 2 g （5.7 mmol），二氯甲烷40 mL，氯化亚砜1.24 mL（17.1 mmol），回流反应3 h，蒸除溶剂得粗品酰氯21-7，该粗品酰氯21-7未经提纯直接用于下一步反应；即取中间体21-5 1.2 g（5.8 mmol），THF 30 mL，吡啶0.9 mL（11.5 mmol），冰盐浴-5℃，然后滴加上一步粗品酰氯21-7的THF溶液20 mL，滴毕继续搅拌反应0.5 h，加少许水淬灭反应，乙酸乙酯萃取三次，有机层用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液蒸干后硅胶柱层析（展开剂：乙酸乙酯：二氯甲烷=1:15），得浅黄色固体化合物21-8 1.4 g，产率45%；mp 116-117℃； ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 9.90 (d, 1H, J=5.2 Hz, -CONH-), 9.85 (d, 1H, J=4.4 Hz, -CONH-), 7.73 (d, 1H, J=8.4 Hz, -ArH), 7.67 (s, 1H, -ArH), 7.60 (d, 2H, J=6.6 Hz, 2×-ArH), 7.39 (d, 2H, J=7.2 Hz, 2×-ArH), 7.28 (t, 2H, J=6.8 Hz, 2×-ArH), 7.21 (d, 1H, J=7.2 Hz, -ArH), 7.11 (d, 1H, J=8.4 Hz, -ArH), 6.77 (d, 1H, J=8.4 Hz, -ArH), 4.58-4.55 (m, 1H, -CH-), 3.83 (s, 2H, -CH₂-), 3.83-3.61 (m, 2H, -CH₂-), 2.88-2.75 (m, 4H, 2×-CH₂-), 2.15 (s, 3H, -CH₃), 1.82-1.80 (m, 2H, -CH₂-), 1.34-1.27 (m, 6H, 2×-CH₃), 1.27 (s, 3H, -CH₃), 1.18 (s, 3H, -CH₃)；¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 165.5, 165.4, 159.3, 141.1, 139.9, 136.4, 130.2, 128.9, 128.8, 128.5, 128.3, 128.3, 127.9, 127.9, 127.4, 126.7, 126.6, 124.7, 122.5, 111.3, 95.4, 72.5, 69.9, 62.3, 46.4, 36.0, 30.8, 28.1, 27.6, 27.0, 21.9, 16.2。

中间体21-9的合成

在N₂保护下，取化合物21-8 1.2 g（2.2 mmol），三氯氧磷20 mL，加热至100℃搅拌反应3 h，蒸干溶剂后硅胶柱层析（甲醇：二氯甲烷=1:30），得化合物21-9 0.2 g，产率45%；mp 280-282℃；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 7.92 (d, 2H, J=6.8 Hz, 2×-ArH), 7.82 (t, 2H, J=8.0 Hz, 2×-ArH), 7.42 (d, 2H, J=7.2 Hz, 2×-ArH), 7.30 (t, 2H, J=7.2 Hz, 2×-ArH), 7.20 (t, 2H, J=8.0 Hz, 2×-ArH), 6.93 (d, 1H, J=8.0 Hz, -ArH), 4.66-4.63 (m, 1H, -CH-), 3.90 (s, 2H, -CH₂-), 3.80-3.70 (m, 2H, -CH₂-), 3.03-2.88 (m, 4H, 2×-CH₂-), 2.28 (s, 3H, -CH₃), 1.96-1.89 (m, 2H, -CH₂-), 1.40-1.36 (m, 6H, 2×-CH₃), 1.25 (s, 3H, -CH₃), 1.21 (s, 3H, -CH₃)；¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 164.5, 164.0, 158.9, 141.1, 139.4, 137.1, 129.3, 129.1, 128.4, 128.3, 128.0, 127.8, 126.8, 126.0, 124.1, 121.6, 115.4, 112.1, 95.5, 72.7, 70.2, 62.4, 46.5, 36.4, 30.7, 28.2, 27.5, 27.2, 22.0, 16.3。

实例21: 2-（7-苄氨基-5，6，7，8-四氢-7-萘甲醇基）-5-（3-甲基-4-异丙氧基）-1，3，4-噁二唑(在先专利申请201110155280.X中的化合物179)

在N₂保护下，取化合物21-9 1.2 g（2.2 mmol），p-TsOH 0.02 g（0.013 mmol），甲醇50 mL，加热回流反应，旋转蒸除溶剂后柱层析（展开剂：甲醇：二氯甲烷=1：50），得白色固体实例22 0.4 g，产率60%。mp 159-161℃； ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 7.91-7.82 (m, 4H, 4×-ArH), 7.31-7.23 (m, 6H, 6×-ArH), 6.93 (d, 1H, J=9.3 Hz, -ArH), 4.66-4.62 (m, 1H, -CH-), 3.79-3.77 (m, 2H, -CH₂-), 3.59 (q, 2H, J=10.8 Hz, -CH₂-), 3.04-2.85 (m, 4H, 2×-CH₂-), 2.27 (s, 3H, -CH₃), 2.01-1.90 (m, 2H, -CH₂-), 1.39-1.37 (m, 6H, 2×-CH₃)；¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 164.5, 163.9, 158.9, 139.7, 139.5, 135.0, 129.3, 129.2, 128.4, 128.2, 127.8, 127.2, 126.0, 124.3, 121.7, 115.3, 112.1, 70.1, 64.5, 55.6, 45.6, 37.2, 28.2, 25.7, 22.0, 16.3。

实例22: 2-（7-氨基-5，6，7，8-四氢-7-萘甲醇基）-5-（3-甲基-4-异丙氧基）-1，3，4-噁二唑 (在先专利申请201110155280X中的化合物067)

将化合物22 0.2 g（0.0 mmol），甲醇20 mL，甲酸铵0.21 g（0.0 mmol），Pd/C（10%）0.12 g（0.0 mmol）加入到100 mL三颈瓶中，加热回流反应，TLC跟踪反应进程。反应毕，冷却，过滤，滤液浓缩后硅胶柱层析（展开剂：甲醇：二氯甲烷=1:5），得白色固体化合物-067 0.07 g，产率44%。mp 189-191℃；¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 7.93-7.85 (m, 4H, 4×-ArH), 7.39 (d, 1H, J=8.1 Hz, -ArH), 7.17 (d, 1H, J=8.4 Hz, -ArH), 4.75-4.71 (m, 1H, -CH-), 3.61 (s, 2H, -NH₂), 3.51-3.50 (m, 2H, -CH₂-), 3.09 (s, 2H, -CH₂-), 2.94-2.92 (m, 2H, -CH₂-), 2.22 (s, 3H, -CH₃), 2.05-2.00 (m, 2H, -CH₂-), 1.34-1.32 (m, 6H, 2×-CH₃)；¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 164.0, 163.6, 159.5, 134.2, 129.8, 129.0, 127.9, 127.3, 126.3, 125.7, 124.4, 121.3, 114.9, 113.1, 70.2, 63.1, 55.5, 34.2, 27.3, 25.1, 22.0, 16.1；质谱ESI-MS：(C₂₃H₂₇N₃O₃) (M⁺+1) : 394.5，377.7, 352.9; 红外光谱IR（KBr）v cm^－１: 3400, 2976, 2925, 2557, 2019, 1611, 1554, 1485, 1402, 1385, 1373, 1333, 1311, 1273, 1255, 1174, 1136, 1110, 1060, 996, 953, 874, 825, 742。

实例23: 7-[5-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-乙氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

在实例22（80 毫克， 0.2 毫摩尔, 1.0 eq）的二氯甲烷溶液中（30毫升）加入醋酸（18 毫克， 0.3 毫摩尔, 1.5 eq），40％的乙醛（35 毫克， 0.3 毫摩尔, 1.5 eq）。溶剂冷却到0℃时，向反应混合物中加入硼氢化钠和NaBH(OAc)₃(65 毫克， 0.3 毫摩尔, 1.5 eq)。在室温下搅拌5小时，加入水（50 毫升）。用碳酸氢钠调整pH值至8〜9 。然后混合物用二氯甲烷（50毫升）提取三次。有机相用盐水（30毫升）洗后，用无水硫酸钠干燥，集中后用真空将有机溶剂抽尽。粗产物经硅胶柱层析（二氯甲烷：甲醇= 20:1）获得实例23 20毫克（收率：58％）。NMR (400MHz, CD₃OD) δ= 7.82（4H, m）, 7.28 (1H, m), 7.06 (1H, d), 4.70 (1H, m), 3.60 (2H, m), 3.18 (4H, m), 2.90 (2H, m), 2.20 (3H, s), 2.12 (2H, m), 1.40 (9H, m); Rt = 3.79 min, MS (M + H+)：422, 理论计算值：422

实例24: 7-[5-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-2-1,3,4-噁二唑基]-2-二甲氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

30 mg实例22溶解到5 毫升二氯甲烷中，加入甲醛5 毫克，冰醋酸 5毫克，控温 0 ^oC下，加入醋酸硼氢化钠，加毕 0 ^oC反应30 min，LCMS监测反应大部分生成二甲基的产物，经柱层析纯化后得实例24，纯度97%（LCMS）；经HNMR检测纯度较好（>95%）。NMR (400MHz, CD₃Cl₃) δ= 7.80（3H, m）, 7.78 (1H, m), 7.15 (1H, m), 6.84 (1H, m), 4.60 (1H, m), 3.74 (2H, m), 3.15 (2H, m), 2.76 (6H, s), 2.20 (3H, s), 2.00 (2H, m), 1.42 (2H, m), 1.38 (6H, d), Rt = 4.04 min, MS (M + H+)：422, 理论计算值：422

实例25: N-{2-羟甲基-7-[5-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-2-1,3,4-噁二唑基]-1,2,3,4-四氢-2-萘基}乙酰胺

实例22（100 毫克，0.25毫摩尔，1.0eq）加入到二氯甲烷（10毫升）中，控制温度0 ^oC左右加入乙酸酐（26毫克，0.25毫摩尔，1.0eq），加毕室温反应2小时，反应过程用薄层色谱法（二氯甲烷：甲醇=5:1）监控。反应完成后，体系倾入水（20 毫升）中，饱和NaHCO₃调节pH至8~9，二氯甲烷（20毫升）萃取混合物，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩，粗品经柱层析（二氯甲烷：甲醇 = 30:1）纯化得实例25（50 毫克， 46%）为白色固体. NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ= 7.93（2H, d）,7.83 (2H, d), 7.38 (1H, s), 7.30 (1H, d), 7.15 (1H, d), 4.72 (1H, m), 3.64 (3H, m), 3.22 (2H, m), 2.99 (1H, d), 2.86 (2H, m), 2.23 (3H, s), 1.75 (3H, s),1.34 (3H, s), 1.32 (3H, s); Rt = 3.66 min, MS (M + H+)：436, 理论计算值：436

实例26: N-{2-羟甲基-7-[5-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-2-1,3,4-噁二唑基]-1,2,3,4-四氢-2-萘基}甲磺酰胺

实例22（100 毫克，0.25毫摩尔，1.0eq）加入到四氢呋喃（10毫升）和水（10 毫升）中，加入K₂CO₃（172 毫克，1.25 毫摩尔，5.0eq），加毕搅拌30分钟，再降温至0 ^oC 下加入甲磺酰氯（45 毫克，0.38毫摩尔，1.5eq），加毕室温反应2小时，反应过程用薄层色谱法（二氯甲烷：甲醇=5:1）和LCMS检测，反应完成后，倾入水（20 毫升）中，二氯甲烷（20 毫升）萃取三次，有机相干燥后，浓缩，粗品经柱层析（二氯甲烷：甲醇 = 100:1）得实例26（30 毫克，25%）为黄色固体。NMR (400MHz, CDCl₃) δ=7.93（3H, m）,7.85 (1H, s), 7.28 (1H, d), 6.94 (1H, d), 4.62 (1H, m), 3.84 (2H, m), 3.02 (2H, m), 2.94 (2H, m), 2.31 (3H, s), 1.85 (2H, m), 1.47 (3H, s), 1.40 (3H, s), 1.24 (3H, s); Rt = 3.69 min, MS (M + H+)：472, 理论计算值：472

反应流程7：实例27的合成

中间体23的制备:

原料4-羟基-3-甲基苯甲酸 (100 克， 0.66摩尔, 1.0 eq) 溶解到甲醇 (500 毫升)中，体系用冰盐浴冷却到0 ^oC ，向其中滴加 SOCl₂ (200 毫升)。滴加完毕，反应体系升温至回流反应5小时。反应过程用薄层色谱法 (乙酸乙酯: 石油醚=1:3)监测。反应完成后减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解，饱和NaHCO₃洗涤一次，水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液浓缩得中间体 23化合物 (10 克， 92%) 为黄色油状物。

中间体24的制备:

中间体23 (10 克， 52 毫摩尔, 1.0 eq) 溶解到 DMF (100 毫升) 中，加入 K₂CO₃ (21.0 克， 0.015 摩尔, 3.0 eq ) 和2-溴代异丙烷 (13.0克， 0.1 摩尔, 2.0 eq)。反应升温至 130 ⁰C 反应15小时。反应过程用薄层色谱法 (乙酸乙酯: 石油醚=1:5)监测。反应完成后自然冷却至室温，加入水 (100 毫升)，用乙酸乙酯 (100 毫升)萃取混合物，合并有机相，饱和食盐水洗涤一次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得中间体24化合物 (12 克， 92%) 为黄色油状物。

中间体25的制备:

原料 24 (5 克， 24 毫摩尔, 1.0 eq) 溶解到乙醇 (50 毫升) 中，向其中加入 NH₃H₂O (20 毫升)。反应密闭加热到120 ⁰C 持续15小时。反应过程用薄层色谱法 (乙酸乙酯: 石油醚=1:5)监测。反应完成后体系减压浓缩，残留物加水(100 毫升)，用乙酸乙酯 (100 毫升)萃取三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩，残留物柱层析(乙酸乙酯: 石油醚=5:1) 纯化得中间体 25化合物 (3.0 克， 67%) 为白色固体。

中间体26的制备:

原料 25 (100 毫克， 0.52 毫摩尔, 1.0 eq) 溶解到 POCl₃ (5 毫升) 中，体系加热回流反应5小时。反应过程用薄层色谱法 (乙酸乙酯: 石油醚=1:5)监测。反应完成后减压浓缩，残留物加入到冰水(20 毫升)中。用乙酸乙酯 (100 毫升)萃取三次。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩，柱层析（乙酸乙酯: 石油醚=1:10）得中间体26化合物 (60 毫克， 67%) 为黄色油状物。

中间体27的制备:

原料 26 (500 毫克， 2.9 毫摩尔, 1.0 eq) 溶解到甲醇(10 毫升)中，加入盐酸羟胺（520 毫克，5.8 毫摩尔，2.0eq）和K₂CO₃（800 毫克， 5.8 毫摩尔， 2.0 eq）加毕升温至回流反应过夜。反应用薄层色谱法（乙酸乙酯: 石油醚=1:5）监测。反应完成后降至室温，体系减压浓缩，加水30 毫升，用二氯甲烷（30 毫升）萃取三次。合并有机相，盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得粗品，经柱层析（乙酸乙酯: 石油醚=1:5）纯化得中间体27化合物（300 毫克，50%）为黄色固体。

中间体28的制备:

原料 27 (150 毫克， 0.7 毫摩尔, 1.0 eq) 和 9 (250 毫克， 0.7 毫摩尔, 1.0 eq) 溶解到二氯甲烷 (10 毫升) 中，向其中加入DIC（130 毫克，1.1 eq，1.5 eq）。加毕，室温反应过夜。反应用薄层色谱法（乙酸乙酯: 石油醚=1:5）和LCMS监测。反应完成后向体系加水（20 毫升），二氯甲烷（30 毫升）萃取三次，合并有机相，盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，经柱层析（乙酸乙酯: 石油醚=1:5）纯化得中间体28化合物（80 毫克，21%）为白色固体。

中间体29的制备:

原料 28 (30 毫克， 0.05 毫摩尔, 1.0 eq)加入到四氢呋喃（10 毫升）中，向体系中加入四丁基氟化铵（30 mg），加毕，室温反应过夜，反应用薄层色谱法（乙酸乙酯: 石油醚=1:5）和LCMS监测，反应完成后向体系加入水（20毫升），用乙酸乙酯（20毫升）萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水（20毫升）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩，得粗品，经柱层析（乙酸乙酯: 石油醚=1：10）纯化得中间体29化合物（15 毫克， 52%）为白色固体。

实例27 7-[3-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-5-1,2,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

原料 29 (45 毫克， 0.09 毫摩尔, 1.0 eq)和硝酸铈铵（45 mg）加入到乙腈（10 毫升）和二氯甲烷（1毫升）中，体系室温反应5小时，反应用薄层色谱法（二氯甲烷：甲醇=10:1）和LCMS监测。反应完成后向体系加入水（20毫升），用二氯甲烷（20毫升）萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水（20毫升）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩，得粗品，经柱层析（二氯甲烷：甲醇=50:1）纯化得实例27（20 毫克， 61%）为白色固体。

NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ= 7.93（1H, m）, 7.87 (2H, s), 7.71 (1H, dd), 7.42 (1H, d), 7.14 (1H, s), 4.75 (1H, m), 3.42 (2H, s), 2.92 (4H, m), 2.22 (3H, s), 1.88 (2H, m), 1.32 (6H, m); Rt = 4.10 min, MS (M + H+)：394, 理论计算值：394

实例28: 6-[3-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-5-1,2,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇可按实例27的方式制备：

NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ= 7.9（4H, m）, 7.21 (1H, m), 7.41 (2H, m), 6.9 (1H, m), 6.80 (1H, m), 4.62 (1H, m), 3.70 (2H, m), 3.50 (2H, m), 2.80 (2H, m), 2.32 (3H, s), 1.42 (2H, m), 1.38 (6H, d), Rt = 4.10 min, MS (M + H+)：394, 理论计算值：394

反应流程8：实例29的合成

中间体30的制备:

原料8（1.0克，2.6毫摩尔，1.0eq），K4Fe(CN)6·3H2O（2.2克，5.2毫摩尔，2.0eq）和PtOAc（10 毫克，cat.）加入到DMAC（20 毫升）中，加热至120℃反应过夜，反应完成后倾入水（20毫升）中，乙酸乙酯（20毫升）萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析（乙酸乙酯: 石油醚=1:10）纯化得中间体30化合物（0.3克，35%）为白色固体。

中间体31的制备:

原料30（300 毫克，0.9 毫摩尔，1.0eq），盐酸羟胺（110毫克，1.8毫摩尔，2.0eq）和K₂CO₃（370 mg 2.7毫摩尔，3.0eq）加入到甲醇（10 毫升）中，微波加热至80℃反应5小时，反应完成后倾入水（20毫升）中，二氯甲烷（20毫升）萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析（甲醇：二氯甲烷=1:30）纯化得中间体31化合物（150毫克，46%）为白色固体。

中间体32的制备:

原料24（5.0克，24毫摩尔，1.0eq）和氢氧化钠（2.9克，72毫摩尔，3.0eq）加入到甲醇（30毫升）和水（20毫升）中，室温反应过夜。反应完成后倾入水（50毫升）中，用稀盐酸调pH=4，过滤，收集滤饼，干燥得中间体32化合物（3.5克，76%）为白色固体。

中间体33的制备:

原料31（100 毫克，0.27 毫摩尔，1.0eq）和32（60毫克，0.3毫摩尔，1.1eq）加入到二氯甲烷（10毫升）中，室温下加入DIC（50毫克，0.4毫摩尔，1.5eq），加毕室温反应5小时，反应完成后倾入水(20毫升)中,二氯甲烷(20毫升) 萃取三次，合并有机相无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩，得粗品，经柱层析（二氯甲烷：甲醇 = 50:1）得中间体33化合物（60 毫克，41%）为白色固体。

中间体34的制备:

原料33（100毫克，0.18毫摩尔，1.0eq）和TBAF（四丁基氟化铵）（96毫克，0.36毫摩尔，2.0eq）加入到四氢呋喃（10毫升）中，室温反应6小时，反应过程用薄层色谱法（乙酸乙酯: 石油醚=1:2）监测。反应完成后体系倾入水（20毫升）中，用二氯甲烷（20毫升）萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩，得粗品，经柱层析（二氯甲烷：甲醇 =30:1）得中间体34化合物（60毫克，62%）为白色固体。

实例29 7-[5-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-3-1,2,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇

原料34（60毫克，0.11毫摩尔，1.0eq）和CAN（硝酸铈铵）（60mg）加入到乙腈（10毫升）和二氯甲烷（2毫升）中，加毕室温反应6小时，反应用薄层色谱法（二氯甲烷：甲醇=5:1）监测。反应完成后体系倾入水（20毫升）中，饱和NaHCO₃调pH=8，二氯甲烷（20毫升）萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩得粗品，经柱层析（二氯甲烷：甲醇=10:1）纯化得实例29（30毫克，66%）为白色固体。

NMR (400MHz, CDCl₃) δ=7.91（2H, d）,7.82 (2H, m), 7.47 (1H, s), 7.14 (1H, d), 6.85 (1H, d), 4.61 (1H, m), 3.71 (2H, s), 3.06 (2H, m), 2.88 (2H, m), 2.24 (3H, s), 2.04 (2H, m), 1.27 (6H, m); Rt = 4.38 min, MS (M + H+)：394, 理论计算值：394

实例30: 6-[5-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-3-1,2,4-噁二唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇可用类似于实例29的方式制备：

NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ= 8.00（2H, m）, 7.8 (2H, m), 7.2 (2H, m), 4.82 (1H, m), 3.40 (2H, m), 3.20 (2H, m), 2.80 (2H, m), 2.22 (3H, s), 1.42 (2H, m), 1.38 (6H, d), Rt = 4.32 min, MS (M + H+)：394, 理论计算值：394

反应流程8：实例31的合成

中间体35的制备:

原料25 (4.8 克， 25毫摩尔), 溴（5.0克，31毫摩尔，1.2 当量），在0℃下加入40毫升氢氧化钠(4克，100毫摩尔，3.8当量)的溶液。反应被加热到75 ℃。进行12小时反应后，冷却至室温，用乙酸乙酯（3×100毫升）提取三次。合并有机相并用饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩得粗品。经柱层析（乙酸乙酯: 石油醚=10:1）纯化得中间体35化合物（1 克，产率66%）为棕色油。

中间体36的制备:

原料35（2.5克，15毫摩尔，1.0当量）在0℃下加入盐酸（50毫升）中。所生成溶液在0℃下加入亚硝酸钠（1.2克，17毫摩尔，1.2式）的水溶液中（10毫升）中。此反应溶液在室温下搅拌4小时，反应混合物用乙酸乙酯（50毫升）萃取三次。合并有机相并用饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩得粗品。经柱层析（乙酸乙酯: 石油醚 =30:1），得黄色油状中间体36化合物（2.1 克，产率= 50％）。

中间体38的制备:

在原料36（1.0克，3.6毫摩尔，1.0当量）的甲苯（10毫升）溶液中，在氮气下添加碘化铜（50毫克，催化剂量），Pd（PPh₃）₄ （50毫克，催化剂量），三乙胺（3.2克， 32毫摩尔，9.0当量）和乙炔基三甲基硅烷（1.0克，11毫摩尔，3.0当量）。此反应溶液在85℃下搅拌12小时。反应进程用质谱和薄层色谱法（乙酸乙酯: 石油醚=1:10）监测。在反应冷却至室温时，加入TBAF（100毫克）。反应混合物在室温下搅拌2小后用乙酸乙酯（50毫升）萃取三次。合并有机相并用饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩得粗品。经柱层析（乙酸乙酯: 石油醚=1:10）得中间体37化合物为黄色油状物。（0.5克，收率79％）。

中间体39的制备:

中间体6（1.0克，4毫摩尔，1.0当量），叠氮化钠（0.8克，12毫摩尔，3.0当量），碘化铜（40毫克，0.05当量）和N1，N2 - 二甲基乙烷-1,2-二胺（40毫克，0.1当量）与乙醇（7毫升）和水（3毫升）混合在一起，在100℃下搅拌6小时，反应进度用质谱和薄层色谱法（二氯甲烷：甲醇=10:1）监测。反应结束后用二氯甲烷（50毫升）提取三次。合并有机相用饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析（乙酸乙酯: 石油醚=30:1）得中间体39化合物为棕色油状物（0.5 克，收率=59％）。

实例31：7-[4-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-1-1,2,3-三唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇的制备

在氮气下，在N，N-二甲基甲酰胺溶液（10毫升）中加入中间体38（100毫克，0.57毫摩尔，1.0当量），中间体39（120毫克，1.0当量，0.57毫摩尔），硫酸铜（20毫克，CAT）和抗坏血酸钠（110毫克，0.23毫摩尔，1.0当量），此反应混合物在室温下搅拌反应3小时。反应进度用质谱和薄层色谱法（二氯甲烷：甲醇=10:1）监测。反应结束后用，加入水（20毫升）和二氯甲烷（30毫升）提取三次。用盐水（30毫升）洗涤一次，合并有机相用饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析（二氯甲烷：甲醇=20:1），得棕色固体实例31（30毫克，收率= 14％）。

NMR (400MHz, CDCl₃) δ=8.02 (1H, s), 7.54 (2H, m), 7.42 (1H, m), 6.92（1H, m）, 6.82 (1H, m), 4.45 (1H, m), 3.60 (2H, s), 3.04 (2H, m), 2.76 (2H, m), 2.14 (3H, s), 1.98 (2H, m), 1.24 (6H, d); Rt = 3.84 min, MS (M + H+)：393, 理论计算值：393

反应流程9：实例32的合成

中间体40的制备:

中间体15（300毫克，1.2毫摩尔，1.0当量），叠氮化钠（240毫克，12毫摩尔，3.0当量），碘化铜（10毫克，0.05当量）和N1，N2 - 二甲基乙烷-1,2-二胺（10毫克，0.1当量）与乙醇（7毫升）和水（3毫升）混合在一起，在100℃下搅拌反应6小时，反应进度用质谱和薄层色谱法（二氯甲烷：甲醇 = 10:1）监测。反应结束后用二氯甲烷的（50毫升）提取三次。合并有机相用饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析（二氯甲烷：甲醇 = 30:1）得中间体40化合物为棕色油状物（0.2 克，收率 = 78％）。

实例32: 6-[4-(3-甲基-4-异丙氧基苯基)-1-1,2,3-三唑基]-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘甲醇的制备:

在氮气下，在N，N-二甲基甲酰胺溶液（10毫升）中加入中间体38（100毫克，0.57毫摩尔，1.0当量），中间体40（120毫克， 0.57毫摩尔，1.0当量），硫酸铜（20毫克，催化剂量）和抗坏血酸钠（110毫克，0.23毫摩尔，1.0当量），此反应混合物在室温下搅拌反应3小时。反应进度用质谱和薄层色谱法（二氯甲烷：甲醇=10:1）监测。反应结束后用，加入水（20毫升）和二氯甲烷（30毫升）提取三次。用盐水（30毫升）洗涤一次，合并有机相用饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析（二氯甲烷：甲醇 = 20:1），得棕色固体实例32化合物（40毫克，收率= 18％）。

NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ=9.10 (1H, s), 7.74 (4H, m), 7.35 (1H, m), 7.05（1H, m）, 4.65 (1H, m), 3.10 (2H, s), 3.02 (2H, m), 2.90 (4H, m), 2.20 (3H, s), 1.30 (6H, d); Rt = 3.43 min, MS (M + H+)：393, 理论计算值：393

1. 鞘氨醇₁－磷酸受体₁鸟苷酸γ硫结合试验（S₁P₁-GTPγ S binding assay）

材料

1) CHO－鞘氨醇₁－磷酸受体₁（S₁P₁）细胞系

2) T-75 细胞培养板; 150 mm细胞培养皿

3) DMEM细胞培养液; 10% (v/v) 胎儿小牛血清; 100 U/毫升青霉素 – 100 μg/毫升链霉素; 2 mM L-谷维素, 1 mg/毫升 G-418

4) 细胞裂解缓冲液: HEPES 20 mM (pH 7.4), EDTA 10 mM

5) 储存液: HEPES 20 mM, EDTA 0.1 mM

6) 结合缓冲液: HEPES 20 mM (pH 7.4), NaCl 100 mM, MgCl₂ 5 mM, GDP 1 μM, BSA 0.1% (w/v), DMSO 2.5% (v/v),

7) 冲洗液: NaH₂PO₄ 10 mM (pH 7.4)

仪器

1) 细胞培养超净台

2) 细胞打碎机

3) Beckman 离心机

4) 微孔（MicroBeta）96 孔收集器

5) 2450 MicroBeta² _TM 液闪检测仪

试验方法

1) 化合物溶解在DMSO内并制备浓度为20mM

2) 检测的化合物的浓度为0.3 nM到20 µM

3) 对照组: 10MS1P和SEW2871为阳性对照并购与Tocris公司, 结合缓冲液为阴性对照。

4) 试验方法：用Saponin 溶液湿润膜，准备4X [³⁵S]-鸟苷酸γ硫于结合液内。待测化合物准备于4X 的最终浓度。然后在100% DMSO内进行3X系列稀释。收集高表达S1P1细胞膜在5毫升结合缓冲液，加入50μL (含5μg高表达S1P1细胞膜蛋白) 到96孔。加入25 μL的待测化合物；该膜在室温下孵育30分钟的化合物，然后加入25μL [³⁵S]-鸟苷酸γ硫，启动试验。96孔检测板在室温下孵育1小时，然后用filtermat B过滤并用洗涤液冲洗3次。在50℃干燥1小时后，加入8 毫升液闪液，并用闪烁计数器计数。

结果分析及 50% 抑制时的浓度（ IC50 ）的确定：

利用棱镜４（Prism 4）软件计算IC50，可获得化合物50%抑制时的浓度（IC50）.

表1列出一些代表化合物及其活性：

2．鞘氨醇₁磷酸受体₁β休止素(S₁P₁Beta arrestin)试验

2.1 材料 : 路径狩猎者快速表达鞘氨醇 1 －磷酸受体 1 休止素试剂（ PathHunter eXpress CHO-K1 EDG1 B-arrestin GPCR Assay ）购于 DiscoveRx, 试剂盒含有 CHO-EDG-1 细胞，缓冲液，底物 -1 ，底物 -2 ，细胞培养液， 96- 孔细胞培养板。

2.2 仪器

1) 细胞培养超净台

2) Evision 2104 细胞板计数器

3) 37 C孵育器

2.3 试验方法

1) 化合物溶解在DMSO内并制备浓度为20mM

2) 检测的化合物的浓度为0.3 nM - 20 µM

3) 对照组: 0.045nM -3µM S1P购与Tocris公司, 结合缓冲液为阴性对照。

4) 试验过程：在37C水育箱预热OCC培养液，将细胞从液氮罐内取出，放于干冰上，在37C水育箱内溶化。加入0.5ml OCC培养液并缓慢混匀。将细胞稀释于11.5mL OCC培养液, 向96孔板每孔内加入100µL细胞悬液（含8333个细胞）。将96孔板在37 C，5% CO2内培养8小时；加入10μL 溶解在DMSO的待测化合物，10μL DMSO为阴性对照；将细胞板在37 C孵育90分钟后, 每孔加入55μL的检测液。将细胞板在室温孵育90分钟后，用EnVision读取。

2.4 结果分析及细胞 50% 被激活时的浓度（ Ｅ C50 ）的确定：

利用棱镜４（Prism 4）软件计算EC50。

3. 实例-21和实例-22对小鼠外周血淋巴细胞的影响

3.1 实验材料:

1）15%EDTA、PBS、EP管、15 ml离心管、毛细管、枪尖购自上海生物技术有限公司。血球分析试剂购自上海Sysmex 公司。

2）35只雌性Babl/c，20-22g由吉林大学实验动物中心提供。

3）自动血液分析仪（pocH-100iV Diff）购自日本神户Sysmex 公司

3.2 实验方法：

1）生理盐水配制实例-21和实例-22储存液分别为2mg/ml 和20mg/ml。

2）将小鼠分成5组分别为对照组，低剂量实验组，高剂量实验组，称重、编号做好标记

3）给药前眶上静脉采血20μl/只，加入含EDTA的抗凝管中混合均匀。用pocH-100分析淋巴细胞数。

4）然后对照组给生理盐水；低剂量实验组给与实例-21和实例-225毫克/公斤体重/天（mg/kg/d）；高剂量实验组给与实例-21和实例-22 30 mg/kg/d, 液体量500μl/只，灌胃。连续四天给药，每天一次。在第一次及第四次给药后3.5 h，分别采血，pocH-100分析淋巴细胞数的变化。

3.3 结论：

实例-21和实例-22在连续给药4天，体内生物标记物：小鼠外周血淋巴细胞数较给药前分别下降92%和78%，而FTY720通常能使外周血淋巴细胞下降70-80%；给药前后小鼠行为及体重未见异常，用药剂量高达30 mg/kg/d 未见毒性反应。

表明本试验可做为鞘氨醇1磷酸受体1的体内生物标记物试验。

4. 实验性自身免疫性多发性硬化症 4.1 材料

1) SJL/J小鼠，8-9周，雌性，购自JAX实验室。

2) PLP139- 151（HSLGKWLGHPDKF酰胺）从Biosource国际（QCB）订购。

3) 非完全福氏佐剂（IFA）购自Difco公司

4) 结核分枝杆菌H37购自Difco公司

5) 大肠杆菌百日咳毒素购自Calbiochem公司,

6) 1.0毫升胰岛素注射器号、10毫升注射器、三通连接器 4.2 免疫小鼠 1）制备完全福氏佐剂(CFA)：将结核分枝杆菌H37加入非完全弗氏佐剂（IFA）, 制成含8.0毫克/毫升结核分枝杆菌的CFA。 2）溶解PLP多肽在PBS液体，制备成10毫克/ml，工作浓度为2.0mg/ml。 3）PLP多肽抗原混合于CFA。

4）免疫小鼠，每个鼠接种100微克多肽PLP139-151和0.4毫克结核分枝杆菌。 5）在免疫当天和免疫后第二天向小鼠腹腔注射注射100纳克的百日咳毒素。

4.3 实验方法：

1）用20%的2 -羟丙基-β-环糊精配制实例-21和实例-22储存液分别为2mg/ml 和20mg/ml。

2）将小鼠分成5组分别为对照组，低剂量实验组，高剂量实验组，称重、编号做好标记。

3）对照组给20%的2 -羟丙基-β-环糊精；低剂量实验组给与实例-21或实例-22 5毫克/公斤体重/天（mg/kg/d）；高剂量实验组给与F实例-21或实例-22 30 mg/kg/d, 液体量500μl/只，灌胃。在免疫后的第一天开始给药，连续30天给药，每天一次。每天记录动物疾病的变化。 4.3 疾病的评分标准：0，正常；1，尾瘫痪；2，后肢无力；3, 后肢瘫痪；4，加上前肢后肢瘫痪；5，垂死或死亡。

4.4 实验结果：实例-21和实例-22能明显抑制自身免疫性多发性硬化症的诱导及发病。 5. 实验性类风湿关节炎

5.1 材料

1）10mM乙酸， 0.2微米过滤器；

2）不完全弗氏佐剂（IFA）、结核分枝杆菌（灭活菌株H37Ra株），购于Difco公司。

3）DBA/1JLacJ小鼠（杰克逊实验室）

4）小牛II型胶原蛋白购于Chondrex公司

5.2 制备抗原 1）小牛II型胶原溶化在10mM乙酸, 在4°C的过夜 2) 用研钵和杵捻磨热灭活的结核杆菌细，并制备成4毫克/毫升的最终浓度的完全弗氏佐剂（CFA）。

5.3 实验方法：

2) 将小鼠分成5组分别为对照组，低剂量实验组，高剂量实验组，称重、编号做好标记。对照组给20%的2 -羟丙基-β-环糊精；低剂量实验组给与实例-21或实例-22 5毫克/公斤体重/天（mg/kg/d）；高剂量实验组给与实例-21或实例-22 30 mg/kg/d, 液体量500μl/只，灌胃。在免疫后的第一天开始给药，连续30天给药，每天一次。每天记录动物疾病的变化。 5.4 免疫小鼠关节炎的发展和评估：向每只小鼠注射由100微克结核分枝杆菌和100微克小牛II型胶原的混合物。

5.5 评估发展的关节炎：关节炎通常在3至5周后出现，在6周达高峰。

5.6 实验结果：实例-21和实例-22能明显抑制实验性类风湿关节炎的诱导及发病。