CN102766692A - 一种点篮子鱼染色体的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种点篮子鱼染色体的制备方法，包括：（1）从点篮子鱼中取出头肾组织置于盛有生理盐水的培养皿中，清洗除去血块及其他组织，剪碎头肾组织；然后将头肾组织充分匀浆制成细胞悬液；（2）低渗、固定；（3）固定离心后，滴片；（4）染色；待玻片干燥后，置于显微镜下观察，选取染色体分散良好的中期细胞进行显微摄影。本发明操作简便，结果稳定，而且无须昂贵的试剂和特殊的仪器，可以通过制片获得数目完整、分散良好、长度适中、着丝粒清楚、两条单体适度分开、形态清晰的点篮子鱼染色体中期分裂相。
Description
技术领域
本发明属于鱼类染色体的制备领域，特别涉及一种点篮子鱼染色体的制备方法。
背景技术
点篮子鱼(Siganus guttatus)，隶属于硬骨鱼纲(Osteichthyes)，辐鳍亚纲(Actinopterygii)，鲈形目(Perciformes)，刺尾鱼亚目(Acanthuroidei)，篮子鱼科(Siganidae)，篮子鱼属，是一种杂食、广盐、暖水性鱼类，从珊瑚礁到河口水域都有分布。点篮子鱼肉质鲜美，经济及营养价值高，在我国的广东、香港及东南亚、中东和斐济等国家和地区深受广大消费者喜爱。
染色体核型分析是鱼类细胞遗传学研究的重要内容之一，不仅对认识鱼类的分类系统、进化关系及染色体演化过程具有重要意义，还可为鱼类遗传育种提供细胞遗传学依据。20世纪70年代，我国才开始进行鱼类染色体核型分析研究，起步较晚，而我国海洋鱼类染色体核型研究就更晚。目前鱼类染色体核型研究方法主要有压片法、胚胎细胞制片法、外周血培养或肾细胞短期培养法、活体注射法等。从实验原理来看，可大致分为活体注射法和细胞培养法两类。细胞培养法借鉴了哺乳动物染色体制备技术，有丝分裂指数较高，但操作繁杂，不易稳定操作。相比较而言，活体注射法较为快速简便。不同鱼类，在制片过程、观察方法等都不尽相同。目前，涉及点篮子鱼染色体的研究未见报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有海水鱼类的染色体数目多且小，再加上同一细胞在分裂中期的染色体形态差别往往不是很明显等问题，本发明提供一种点篮子鱼染色体的制备方法，可以为探讨点篮子鱼细胞遗传学特性，种质资源保护、系统演化与分类及开展杂交育种试验提供可靠的技术手段。
本发明的一种点篮子鱼染色体的制备方法，包括：
（1）从点篮子鱼中取出头肾组织置于盛有生理盐水的培养皿中，清洗除去血块及其他组织，剪碎头肾组织；然后将头肾组织充分匀浆制成细胞悬液；
（2）在上述细胞悬液中加入KCl溶液，于37~38℃低渗30~40min，离心；收集低渗后的细胞，加入预冷至4~5℃的卡诺氏固定液，吹打均匀后4~5℃下静置，离心后再固定一次；离心后，弃去上清液，加入预冷至4~5℃的固定液，吹打均匀后4~5℃下静置；
（3）离心后，弃去上清液，重新加入1~2ml预冷至4~5℃的固定液，吹打均匀后用预冷冻的玻片滴片，每片1-2滴，烘干；
（4）待上述玻片干燥后，用吉姆萨染液染色20-30min，将染色后的玻片依次用磷酸缓冲液和蒸馏水冲洗，烘干；待玻片干燥后，置于显微镜下观察，选取染色体分散良好的中期细胞进行显微摄影。
所述步骤（1）中的生理盐水的质量百分比浓度为0.9%。
所述步骤（2）中的KCl溶液的浓度为0.075mol/L。
所述步骤（2）中的卡诺氏固定液由体积比为3:1的甲醇和冰醋酸配制。
所述步骤（2）和（3）中的固定液由体积比为1:1的甲醇和冰醋酸配制。
所述步骤（4）中的吉姆萨染液的浓度为10wt%，pH值为6.8，由磷酸缓冲液配制。
所述步骤（4）中的磷酸缓冲液的pH值为6.8。
所述步骤（3）和（4）中的烘干为自然干燥或放入40℃烘箱中烘干。
有益效果
（1）本发明可以通过制片获得数目完整、分散良好、长度适中、着丝粒清楚、两条单体适度分开、形态清晰的点篮子鱼染色体中期分裂相；
（2）本发明操作简便，结果稳定，而且无须昂贵的试剂和特殊的仪器；
（3）目前还未见点篮子鱼染色体的研究，本发明可以为探讨点篮子鱼细胞遗传学特性，种质资源保护、系统演化与分类及开展杂交育种试验提供可靠的技术手段。
附图说明
图1为本发明得到的点篮子鱼染色体中期分裂相。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
1）从点篮子鱼中取出头肾组织，置于盛有0.9wt%生理盐水的培养皿中，清洗2-3遍，除去血块及其他组织，用剪刀剪碎头肾组织。
2）用吸管将充分剪碎的头肾组织移入10ml玻璃匀浆器中，充分匀浆制成细胞悬液。
3）用吸管将细胞悬液移入10ml离心管中，加入0.075mol/L KCl溶液，放入37℃恒温水浴箱中低渗30min，1000r/min离心8min。
4）收集低渗后的细胞，加入预冷至4℃卡诺氏固定液(甲醇:冰醋酸=3:1配制，现用现配)，用吸管吹打均匀后4℃下静置30min，1000r/min离心8min，离心后再固定1次。
5）固定离心后，弃去上清液，加入预冷至4℃固定液(甲醇:冰醋酸=1:1配制，现用现配)，用吸管吹打均匀后4℃下静置30min。
6）固定离心后，弃去上清液，重新加入1ml预冷至4℃固定液(甲醇:冰醋酸=1:1配制，现用现配)，用滴管吹打均匀，用干净的预冷冻玻片滴片，每片1-2滴，滴片后自然干燥或放入40℃烘箱中烘干。
7）待玻片干燥后，用10wt%吉姆萨(Giemsa)染液(pH=6.8，磷酸缓冲液配制)染色20min，染色后的玻片依次用磷酸缓冲液(pH=6.8)和蒸馏水冲洗，自然干燥或放入40℃烘箱中烘干。
8）待玻片干燥后，置于显微镜下观察，选取染色体分散良好的中期细胞进行显微摄影。
Claims (8)
1.一种点篮子鱼染色体的制备方法，包括：
（1）从点篮子鱼中取出头肾组织置于盛有生理盐水的培养皿中，清洗除去血块及其他组织，剪碎头肾组织；然后将头肾组织充分匀浆制成细胞悬液；
（2）在上述细胞悬液中加入KCl溶液，于37~38℃低渗30~40min，离心；收集低渗后的细胞，加入预冷至4~5℃的卡诺氏固定液，吹打均匀后4~5℃下静置，离心后再固定一次；离心后，弃去上清液，加入预冷至4~5℃的固定液，吹打均匀后4~5℃下静置；
（3）离心后，弃去上清液，重新加入1~2ml预冷至4~5℃的固定液，吹打均匀后用预冷冻的玻片滴片，每片1-2滴，烘干；
（4）待上述玻片干燥后，用吉姆萨染液染色20-30min，将染色后的玻片依次用磷酸缓冲液和蒸馏水冲洗，烘干；待玻片干燥后，置于显微镜下观察，选取染色体分散良好的中期细胞进行显微摄影。
2.根据权利要求1所述的一种点篮子鱼染色体的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中的生理盐水的质量百分比浓度为0.9%。
3.根据权利要求1所述的一种点篮子鱼染色体的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中的KCl溶液的浓度为0.075mol/L。
4.根据权利要求1所述的一种点篮子鱼染色体的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中的卡诺氏固定液由体积比为3:1的甲醇和冰醋酸配制。
5.根据权利要求1所述的一种点篮子鱼染色体的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）和（3）中的固定液由体积比为1:1的甲醇和冰醋酸配制。
6.根据权利要求1所述的一种点篮子鱼染色体的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中的吉姆萨染液的浓度为10wt%，pH值为6.8，由磷酸缓冲液配制。
7.根据权利要求1所述的一种点篮子鱼染色体的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中的磷酸缓冲液的pH值为6.8。
8.根据权利要求1所述的一种点篮子鱼染色体的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）和（4）中的烘干为自然干燥或放入40℃烘箱中烘干。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103091140A (zh) * | 2013-01-04 | 2013-05-08 | 上海海洋大学 | 一种虾类生殖细胞染色体的制备方法 |
| CN106244693A (zh) * | 2016-08-11 | 2016-12-21 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 快速制备海洋珍稀鱼类或贝类中期分裂相染色体的方法 |
Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN101974627A (zh) * | 2010-10-13 | 2011-02-16 | 大连海洋大学 | 鱼类卵巢生殖细胞染色体的制备方法 |
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