CN102759596A - 一种低分子肝素的离子对反相色谱质谱联用检测方法 - Google Patents

一种低分子肝素的离子对反相色谱质谱联用检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102759596A
CN102759596A CN2012102353954A CN201210235395A CN102759596A CN 102759596 A CN102759596 A CN 102759596A CN 2012102353954 A CN2012102353954 A CN 2012102353954A CN 201210235395 A CN201210235395 A CN 201210235395A CN 102759596 A CN102759596 A CN 102759596A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mass spectrum
mobile phase
lmwhs
ion
error amount
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2012102353954A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102759596B (zh
Inventor
迟连利
李道远
王章杰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
HEBEI CHANGSHAN BIOCHEMICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Original Assignee
Shandong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong University filed Critical Shandong University
Priority to CN201210235395.4A priority Critical patent/CN102759596B/zh
Publication of CN102759596A publication Critical patent/CN102759596A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102759596B publication Critical patent/CN102759596B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及一种低分子肝素的离子对反相色谱与高分辨质谱联用检测方法，该方法利用离子对反相色谱与高分辨质谱进行联用检测低分子肝素的各个组分，通过离子对反相色谱分离样品中各主要组分，并通过高分辨质谱获得精确的分子量，计算出其糖链序列信息，包括两端结构、糖链长度、乙酰基及硫酸基取代数量，从而对低分子肝素的结构进行比较精细的表征。本发明对于提高肝素的检测水平、保障药品安全具有极大的实用价值。

Description

一种低分子肝素的离子对反相色谱质谱联用检测方法
技术领域
本发明涉及一种低分子肝素的离子对反相色谱与高分辨质谱联用检测方法，属于药物、原料药、原料检测技术领域。
背景技术
肝素是一种糖胺聚糖类药物，具有强抗凝作用，是治疗血栓栓塞性疾病的首选药物。低分子肝素是肝素经化学方法或者酶法降解制备而成，常见的有依诺肝素钠（Enoxaparin）、那屈肝素钙（Nadroparin）和达肝素钠（Dalteparin）等。与肝素相比，低分子肝素抗血栓活性较高、抗凝活性较低，具有出血副作用小、生物利用度高、体内半衰期长等优势，受到越来越广泛的关注和应用。
由于肝素及低分子肝素具有强极性、不均一性、硫酸基团不稳定等特点，其结构表征十分困难。通常分析低分子肝素的方法有凝胶电泳（Cowman M K,et al.Biochemical Journal,1984,221(3):707-716.）及HPSEC法（Ahsan A,et al.Journal of Pharmaceutical Sciences,1995,84(6):724-727.），但通过这些方法仅能获得非常粗略的分子量信息。用肝素酶将低分子肝素降解成肝素二糖，然后用离子对反相色谱与质谱联用技术分析二糖组成是近年来比较常用的表征方法（Zhang F,et al.Analytical and Bioanalytical Chemistry，2011,401(9):2793-2803.），但由于检测样品为降解后的肝素二糖，导致该方法不能鉴定未经破坏的完整低分子肝素糖链的结构。
除以上提及的方法外，美国药典、欧洲药典和中国药典规定的低分子肝素的检测方法也都是分析低分子肝素混合物，只能对混合物进行表征，而不能对其中的各单一组分进行直接的分析。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种低分子肝素的离子对反相色谱与高分辨质谱联用检测方法，可用于全谱图鉴定低分子肝素原料药和注射剂中主要肝素糖链的结构。
发明概述
本发明利用离子对反相色谱与高分辨质谱进行联用检测低分子肝素的各个组分，通过离子对反相色谱分离样品中各主要组分，并通过高分辨质谱获得精确的分子量，计算出其糖链序列信息，包括两端结构、糖链长度、乙酰基及硫酸基取代数量，从而对低分子肝素的结构进行比较精细的表征。
发明详述
一种低分子肝素的离子对反相色谱质谱联用检测方法，步骤如下：
（1）将胺类离子对试剂溶解于去离子水，用pH调节试剂调pH值至5.5～8.5，制得浓度为10～30mM的流动相A；本步骤中所述浓度是指胺类离子对试剂中溶质在流动相A中的摩尔浓度；
（2）将胺类离子对试剂溶解于体积百分比为75%的乙腈或体积百分比为75%甲醇溶液，用pH调节试剂调pH值至5.5～8.5，制得浓度为10～30mM的流动相B；本步骤中所述浓度是指胺类离子对试剂中溶质在流动相B中的摩尔浓度；
（3）将待测低分子肝素样品溶于流动相A，配制成浓度为6～10mg/mL的待测溶液，经过滤后，使用C18反相色谱柱；在流速8～12μL/min，洗脱梯度为：0～5min，80%流动相A，20%流动相B；5～65min，40～80%流动相A，20～60%流动相B，检测器波长为232nm的条件下进行检测，得到紫外检测色谱图；
（4）然后，通过在正离子模式或负离子模式下用高分辨质谱仪进行检测，得到高分辨质谱图；
（5）通过紫外检测色谱图确定低分子肝素的种类，然后根据步骤（4）获得的高分辨质谱图获得主要峰的质荷比M，经如下公式计算组分的精确分子量m：
正离子模式：m=zM-nX-zY
负离子模式：m=zM-nX+zY
其中：z表示电荷数，n表示离子对试剂分子个数，X表示离子对试剂的分子量，Y表示质子氢的分子量；
（6）然后使用计算机辅助方法进行解谱，具体过程为：通过计算机生成各肝素组分的分子量数据库，数据库变量为肝素链长度、乙酰基及硫酸基取代数量，用步骤（5）中得到的精确分子量与数据库中的理论分子量进行比对获得误差值I，按误差值I的大小对数据库中的数据进行排列，然后，根据质谱仪检测标准品的误差值II与误差值I进行比对，选取误差值II与误差值I最为接近的数据库中的理论样品，通过该理论样品的信息即可获知待测低分子肝素样品的低分子肝素种类、肝素糖链长度、乙酰基及硫酸基取代数量信息。
所述步骤（1）中的胺类离子对试剂选自：正丙胺、三正丙胺、正戊胺、正丁胺、正己胺。
所述步骤（1）中的pH调节试剂为：六氟异丙醇、甲酸。
所述步骤（4）中的高分辨质谱如采用离子阱时间飞行串联质谱仪（IT-TOF），设定参数为：正离子模式喷雾电压：+3.6kV；负离子模式喷雾电压：-3.0kV；喷雾气流速：1.5L/min；扫描质量范围：50～5000；如果采用四级杆时间飞行串联质谱仪（Q-TOF），设定参数为：正离子模式喷雾电压：+5.5kV；负离子模式喷雾电压：-4.0kV；帘气压25psi；喷雾气压：30psi；扫描质量范围：50～4000。
有益效果
本发明可以检测低分子肝素的种类和各单一组分的两端结构、糖链长度、乙酰基及硫酸基取代数量，解决了现有技术中检测低分子肝素分子量不精确、无法检测各单一组分的问题，对于提高肝素的检测水平、保障药品安全具有极大的实用价值。
附图说明
图1欧盟依诺肝素钠对照品的紫外检测色谱图；
图2欧盟依诺肝素钠对照品的总离子流图；
图3欧盟依诺肝素钠对照品的高分辨质谱图示例；
图4依诺肝素钠注射液样品的紫外检测色谱图；
图5依诺肝素钠注射液样品的总离子流图；
图6欧盟那屈肝素钙对照品的紫外检测色谱图；
图7欧盟那屈肝素钙对照品的总离子流图；
图8欧盟达肝素钠对照品的紫外检测色谱图；
图9欧盟达肝素钠对照品的总离子流图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明所保护范围不限于此。
液相色谱仪为Agilent 1100 series毛细管液相色谱仪，检测器为二极管阵列检测器，工作站为Agilent ChemStation；质谱为岛津IT-TOF型高分辨质谱，工作站为LC-Solution。
实施例1：
一种低分子肝素的离子对反相色谱质谱联用检测方法，步骤如下：
1.1将正戊胺溶解于去离子水，用甲酸调pH值至7.0，制得正戊胺浓度为15mM的流动相A；
1.2将正戊胺溶解于溶解于体积百分比为75%的乙腈溶液，用甲酸调pH值至7.0，制得正戊胺浓度为15mM的流动相B；
1.3称取一定量欧盟依诺肝素钠对照品（批号：Batch/lot n°4），用流动相A配置成8mg/mL的待测溶液，用0.22μm的水相膜过滤后备用；
1.4使用填料粒径为5μm、色谱柱内径为0.5mm、色谱柱长度为250mm的C18反相色谱柱；在流速10μL/min，洗脱梯度为：0～5min，80%流动相A，20%流动相B；5～65min，40～80%流动相A，20～60%流动相B，检测器波长为232nm的条件下进行检测，得到紫外检测色谱图；
1.5使用岛津IT-TOF高分辨质谱在正离子模式下进行检测，得到高分辨质谱图，设定参数为：喷雾电压：+3.6kV；喷雾气流速：1.5L/min；扫描质量范围：50～5000。
1.6根据步骤1.5中获得的高分辨质谱图中获得的主要峰的质荷比M，经如下公式计算组分的精确分子量m：
m=zM-nX-zY
其中：z表示电荷数，n表示离子对试剂分子个数，X表示离子对试剂的分子量，Y表示质子氢的分子量。
1.7通过计算机生成依诺肝素各组分的分子量数据库，数据库变量为肝素链长度、乙酰基及硫酸基取代数量，用步骤1.6中得到的精确分子量与数据库中的理论分子量进行逐一比对，获得误差值I，其计算公式如下：
误差值I=（实测分子量-理论分子量）/理论分子量
按误差值I的大小对数据库中的数据进行排列，然后，根据质谱仪检测标准品的误差值II与误差值I进行比对，选取误差值II与误差值I最为接近的数据库中的理论样品，通过该理论样品的信息即可获知待测低分子肝素样品的低分子肝素种类、肝素糖链长度、乙酰基及硫酸基取代数量信息。总离子流图（TIC）中所标依诺肝素钠样品各组分的结构信息如表1所示。
表1
  编号   寡糖大小   硫酸取代基数目
  1   dp4   *1OS,2NS
  2   dp4   *3OS,2NS
  3   dp4   3OS,2NS
  4   dp6   3OS,1NS
  5   dp6   *3OS,2NS
  6   dp6   3OS,2NS
  7   dp6   *3OS,3NS
  8   dp6   3OS,3NS
  9   dp6   *4OS,2NS
  10   dp6   4OS,2NS
  11   dp8   *3OS
  12   dp8   *3OS,2NS
  13   dp8   3OS,2NS
  14   dp8   4OS,1NS
  15   dp10   *3OS,1NS
  16   dp10   3OS,1NS
  17   dp10   4OS,1NS
  18   dp10   *3OS,4NS
  19   dp10   4OS,2NS
  20   dp10   *4OS,3NS
  21   dp10   *5OS,2NS
  22   dp10   *5OS,3NS
  23   dp10   5OS,3NS
  24   dp12   5OS,1NS
  25   dp12   *5OS,2NS
  26   dp12   5OS,2NS
  27   dp12   6OS,2NS
  28   dp14   *6OS,3NS
  29   dp16   7OS,2NS
  30   dp18   7OS,3NS
  31   dp18   8OS,3NS
  32   dp18   9OS,3NS
  33   dp20   9OS,4NS
  34   dp22   *6OS,5NS
  35   dp24   7OS,6NS
  36   dp26   *3OS,12NS
注：“*”表示糖链末端含内醚结构，“OS”表示“-O-SO3H”,“NS”表示“-NH-SO3H”，如“*6OS,5NS”则表示这种组分还原末端含1,6内醚结构，有6个“-O-SO3H”结构，5个“-NH-SO3H”结构。
依诺肝素钠对照品的紫外检测色谱结果如图1，由于依诺肝素钠各组分在非还原端有不饱和双键，故其在232nm处有紫外吸收。依诺肝素钠对照品的质谱分析示例如图2，各组分的归属如图3。通过本方法成功检测到依诺肝素钠对照品中从四糖到二十六糖的36种主要组分，并对其糖链长度、末端结构及“-O-SO3H”和“-NH-SO3H”数目进行确定。
实施例2：
与实施例1的分析方法相同，不同之处在于所分析的样品为依诺肝素钠注射液（克赛，购自法国AVENTIS Pharma Specialites公司，分装批号：7910）经48h透析后冷冻干燥获得的药物有效成分。TIC中所标依诺肝素钠注射液样品各组分的结构信息如表2所示。
表2
  编号   寡糖大小   硫酸取代基数目
  1   dp4   *1OS,2NS
  2   dp4   *3OS,2NS
  3   dp4   3OS,2NS
  4   dp4   3OS
  5   dp4   4OS
  6   dp4   5OS
  7   dp6   3OS,1NS
  8   dp6   *3OS,3NS
  9   dp6   3OS,3NS
  10   dp8   *3OS
  11   dp8   2OS,2NS
  12   dp8   *3OS,2NS
  13   dp8   3OS,2NS
  14   dp10   *3OS,1NS
  15   dp10   4OS,1NS
  16   dp10   4OS,2NS
  17   dp10   4OS,3NS
  18   dp10   *6OS,3NS
  19   dp10   6OS,3NS
  20   dp12   5OS,1NS
  21   dp12   *5OS,2NS
  22   dp12   5OS,2NS
  23   dp12   6OS,2NS
  24   dp14   *6OS,3NS
  25   dp16   7OS,2NS
  26   dp18   7OS,3NS
  27   dp18   8OS,3NS
  28   dp18   9OS,3NS
  29   dp20   9OS,4NS
  30   dp22   *6OS,5NS
  31   dp24   7OS,6NS
  32   dp26   *3OS,12NS
注：“*”表示糖链末端含内醚结构，“OS”表示“-O-SO3H”,“NS”表示“-NH-SO3H”。
依诺肝素钠注射液样品的紫外检测色谱结果如图4，由于依诺肝素钠各组分在非还原端有不饱和双键，故其在232nm处有紫外吸收。依诺肝素钠注射液样品的质谱分析示例如图5。通过本方法成功检测到依诺肝素钠中从四糖到二十六糖的32种主要组分，并对其糖链长度、末端结构及“-O-SO3H”和“-NH-SO3H”数目进行确定。
实施例3：
与实施例1的分析方法相同，不同之处在于所分析的样品为欧盟那屈肝素钙对照品（批号：Batch/lot n°1）。TIC中所标那屈肝素钙样品各组分的结构信息如表3所示。
表3
  编号   寡糖大小   硫酸基、乙酰基取代基数目
  1   dp8   4S,2Ac
  2   dp8   5S,2Ac
  3   dp8   6S,2Ac
  4   dp8   7S,2Ac
  5   dp10   5S,3Ac
  6   dp10   6S,2Ac
  7   dp10   6S,3Ac
  8   dp10   7S,2Ac
  9   dp10   7S,3Ac
  10   dp10   8S,2Ac
  11   dp12   7S,3Ac
  12   dp12   7S,4Ac
  13   dp12   8S,3Ac
  14   dp12   9S,3Ac
  15   dp12   10S,2Ac
  16   dp12   10S,3Ac
  17   dp12   11S,2Ac
  18   dp12   12S,2Ac
  19   dp14   12S,3Ac
  20   dp14   13S,2Ac
  21   dp14   13S,3Ac
  22   dp16   13S,4Ac
  23   dp16   15S,3Ac
  24   dp16   17S,2Ac
  25   dp16   18S,2Ac
  26   dp20   19S,4Ac
注：“Ac”表示“-CO-CH3”,“S”表示“-SO3H”。
那屈肝素钙对照品的紫外检测色谱结果如图6，由于那屈肝素钙各组分不含不饱和双键，故在232nm处没有紫外吸收。那屈肝素钙对照品各组分的归属如图7。通过本方法成功检测到那屈肝素钙中从八糖到二十糖的26种主要组分，并对其糖链长度、“-CO-CH3”和“-SO3H”数目进行确定。
实施例4：
与实施例1的分析方法相同，不同之处在于所分析的样品为欧盟达肝素钠对照品（批号：Batch/lot n°2）。TIC中所标达肝素钠样品各组分的结构信息如表4所示。
表4
  编号   寡糖大小   硫酸基、乙酰基取代基数目
  1   dp8   6S,2Ac
  2   dp10   5S,4Ac
  3   dp10   7S,2Ac
  4   dp10   7S,3Ac
  5   dp10   8S,2Ac
  6   dp12   7S,4Ac
  7   dp14   8S,5Ac
  8   dp14   9S,4Ac
  9   dp16   8S,6Ac
  10   dp16   10S,5Ac
  11   dp16   12S,4Ac
  12   dp16   13S,4Ac
  13   dp18   15S,4Ac
  14   dp20   16S,5Ac
  15   dp20   17S,4Ac
  16   dp20   17S,5Ac
  17   dp20   18S,4Ac
  18   dp20   19S,4Ac
  19   dp22   22S,4Ac
注：“Ac”表示“-CO-CH3”,“S”表示“-SO3H”。
达肝素钠对照品的紫外检测色谱结果如图8，由于达肝素钠各组分不含不饱和双键，故在232nm处没有紫外吸收。达肝素钠样品各组分的归属如图9。通过本方法成功检测到达肝素钠对照品中从八糖到二十二糖的19种主要组分，并对其糖链长度、“-CO-CH3”和“-SO3H”数目进行确定。

Claims (5)

1.一种低分子肝素的离子对反相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，步骤如下：
（1）将胺类离子对试剂溶解于去离子水，用pH调节试剂调pH值至5.5～8.5，制得浓度为10～30mM的流动相A；
（2）将胺类离子对试剂溶解于体积百分比为75%的乙腈或体积百分比为75%甲醇溶液，用pH调节试剂调pH值至5.5～8.5，制得浓度为10～30mM的流动相B；
（3）将待测低分子肝素样品溶于流动相A，配制成浓度为6～10mg/mL的待测溶液，经过滤后，使用C18反相色谱柱；在流速8～12μL/min，洗脱梯度为：0～5min，80%流动相A，20%流动相B；5～65min，40～80%流动相A，20～60%流动相B，检测器波长为232nm的条件下进行检测，得到紫外检测色谱图；
（4）然后，通过在正离子模式或负离子模式下用高分辨质谱仪进行检测，得到高分辨质谱图；
（5）通过紫外检测色谱图确定低分子肝素的种类，然后根据步骤（4）获得的高分辨质谱图获得主要峰的质荷比M，经如下公式计算组分的精确分子量m：
正离子模式：m=zM-nX-zY
负离子模式：m=zM-nX+zY
其中：z表示电荷数，n表示离子对试剂分子个数，X表示离子对试剂的分子量，Y表示质子氢的分子量；
（6）然后使用计算机辅助方法进行解谱，具体过程为：通过计算机生成各肝素组分的分子量数据库，数据库变量为肝素链长度、乙酰基及硫酸基取代数量，用步骤（5）中得到的精确分子量与数据库中的理论分子量进行比对获得误差值I，按误差值I的大小对数据库中的数据进行排列，然后，根据质谱仪检测标准品的误差值II与误差值I进行比对，选取误差值II与误差值I最为接近的数据库中的理论样品，通过该理论样品的信息即可获知待测低分子肝素样品的低分子肝素种类、肝素糖链长度、乙酰基及硫酸基取代数量信息。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中的胺类离子对试剂选自：正丙胺、三正丙胺、正戊胺、正丁胺、正己胺。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中的pH调节试剂为：六氟异丙醇、甲酸。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（4）中的高分辨质谱采用离子阱时间飞行串联质谱仪，设定参数为：正离子模式喷雾电压：+3.6kV；负离子模式喷雾电压：-3.0kV；喷雾气流速：1.5L/min；扫描质量范围：50～5000。
5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（4）中的高分辨质谱采用四级杆时间飞行串联质谱仪，设定参数为：正离子模式喷雾电压：+5.5kV；负离子模式喷雾电压：-4.0kV；帘气压25psi；喷雾气压：30psi；扫描质量范围：50～4000。 
CN201210235395.4A 2012-07-09 2012-07-09 一种低分子肝素的离子对反相色谱质谱联用检测方法 Active CN102759596B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210235395.4A CN102759596B (zh) 2012-07-09 2012-07-09 一种低分子肝素的离子对反相色谱质谱联用检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210235395.4A CN102759596B (zh) 2012-07-09 2012-07-09 一种低分子肝素的离子对反相色谱质谱联用检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102759596A true CN102759596A (zh) 2012-10-31
CN102759596B CN102759596B (zh) 2014-08-20

Family

ID=47054118

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201210235395.4A Active CN102759596B (zh) 2012-07-09 2012-07-09 一种低分子肝素的离子对反相色谱质谱联用检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102759596B (zh)

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103149170A (zh) * 2013-01-30 2013-06-12 深圳赛保尔生物药业有限公司 邻菲罗啉-硫酸锌紫外光谱法测定那曲肝素钙的溶液浓度
CN103454372A (zh) * 2013-09-10 2013-12-18 山东大学 一种低分子肝素部分降解产物的离子对反相色谱质谱联用检测方法
CN103675144A (zh) * 2013-12-12 2014-03-26 中国海洋大学 一种化学降解肝素及检测肝素二糖组成的方法
CN104086673A (zh) * 2014-07-28 2014-10-08 常州千红生化制药股份有限公司 一种那屈肝素钙的制备工艺
CN104483418A (zh) * 2014-12-30 2015-04-01 深圳市天道医药有限公司 一种rp-ip-hplc法收集依诺肝素寡糖的方法
ITMI20131876A1 (it) * 2013-11-12 2015-05-13 Chemi Spa Metodi analitici per la determinazione di polisaccaridi
CN104914205A (zh) * 2015-06-23 2015-09-16 福州大学 一种含n-非取代葡萄糖胺硫酸类肝素二糖的分离分析方法
CN105431733A (zh) * 2013-07-11 2016-03-23 台湾神隆股份有限公司 用于检测硫酸化寡糖的分析方法
CN105548415A (zh) * 2016-01-08 2016-05-04 东营天东制药有限公司 一种利用高效液相鉴别低分子肝素中寡糖的分析方法
CN108318602A (zh) * 2018-05-03 2018-07-24 东营天东制药有限公司 一种快速检测肝素和/或低分子肝素中肝素二糖含量的方法
CN109154604A (zh) * 2016-04-24 2019-01-04 沃特世科技公司 用于对用两亲强碱性部分改性的聚糖进行分析的带电表面反相色谱材料方法
CN111050873A (zh) * 2017-11-06 2020-04-21 株式会社岛津制作所 使用超临界流体色谱仪的组分分离方法
CN113393904A (zh) * 2021-06-22 2021-09-14 山东大学 低分子肝素糖链序列检测方法、系统及测序试剂盒

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1181929A (zh) * 1996-11-08 1998-05-20 山东医科大学 低分子肝素脂质体喷胶剂及制备工艺
WO2003078960A2 (en) * 2002-03-11 2003-09-25 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Analysis of sulfated polysaccharides
CN1703519A (zh) * 2002-09-23 2005-11-30 安万特医药股份有限公司 测定构成肝素的特殊基团的方法
US7790466B1 (en) * 2007-01-26 2010-09-07 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Evaluating mixtures of low molecular weight heparins by chain profiles or chain mapping
WO2011090948A1 (en) * 2010-01-19 2011-07-28 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Evaluating heparin preparations
CN102277396A (zh) * 2010-06-13 2011-12-14 黄欣 特定长度的肝素寡糖的制备方法及用途

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1181929A (zh) * 1996-11-08 1998-05-20 山东医科大学 低分子肝素脂质体喷胶剂及制备工艺
WO2003078960A2 (en) * 2002-03-11 2003-09-25 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Analysis of sulfated polysaccharides
CN1703519A (zh) * 2002-09-23 2005-11-30 安万特医药股份有限公司 测定构成肝素的特殊基团的方法
US7790466B1 (en) * 2007-01-26 2010-09-07 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Evaluating mixtures of low molecular weight heparins by chain profiles or chain mapping
WO2011090948A1 (en) * 2010-01-19 2011-07-28 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Evaluating heparin preparations
CN102277396A (zh) * 2010-06-13 2011-12-14 黄欣 特定长度的肝素寡糖的制备方法及用途

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CATALIN E. DONEANU ET AL: "Analysis of Oligosaccharides Derived from Heparin by Ion-Pair Reversed-Phase Chromatography/Mass Spectrometry", 《ANALYTICAL CHEMISTRY》, vol. 81, no. 9, 1 May 2009 (2009-05-01), pages 3485 - 3499, XP055133568, DOI: doi:10.1021/ac802770r *
CHARUWAN THANAWIROON ET AL: "Liquid Chromatography/Mass Spectrometry Sequencing Approach for Highly Sulfated Heparin-derived Oligosaccharides", 《JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY》, vol. 279, no. 4, 23 January 2004 (2004-01-23), pages 2608 - 2615, XP002297923, DOI: doi:10.1074/jbc.M304772200 *

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103149170A (zh) * 2013-01-30 2013-06-12 深圳赛保尔生物药业有限公司 邻菲罗啉-硫酸锌紫外光谱法测定那曲肝素钙的溶液浓度
CN103149170B (zh) * 2013-01-30 2015-01-21 深圳赛保尔生物药业有限公司 邻菲罗啉-硫酸锌紫外光谱法测定那曲肝素钙的溶液浓度
CN105431733A (zh) * 2013-07-11 2016-03-23 台湾神隆股份有限公司 用于检测硫酸化寡糖的分析方法
CN103454372A (zh) * 2013-09-10 2013-12-18 山东大学 一种低分子肝素部分降解产物的离子对反相色谱质谱联用检测方法
ITMI20131876A1 (it) * 2013-11-12 2015-05-13 Chemi Spa Metodi analitici per la determinazione di polisaccaridi
WO2015071335A1 (en) * 2013-11-12 2015-05-21 Chemi S.P.A. Analytic methods for the determination of polysaccharides, especially glycosaminoglycans
CN103675144B (zh) * 2013-12-12 2015-06-17 中国海洋大学 一种化学降解肝素及检测肝素二糖组成的方法
CN103675144A (zh) * 2013-12-12 2014-03-26 中国海洋大学 一种化学降解肝素及检测肝素二糖组成的方法
CN104086673A (zh) * 2014-07-28 2014-10-08 常州千红生化制药股份有限公司 一种那屈肝素钙的制备工艺
CN104483418A (zh) * 2014-12-30 2015-04-01 深圳市天道医药有限公司 一种rp-ip-hplc法收集依诺肝素寡糖的方法
CN104483418B (zh) * 2014-12-30 2016-09-14 深圳市天道医药有限公司 一种rp-ip-hplc法收集依诺肝素寡糖的方法
CN104914205A (zh) * 2015-06-23 2015-09-16 福州大学 一种含n-非取代葡萄糖胺硫酸类肝素二糖的分离分析方法
CN104914205B (zh) * 2015-06-23 2017-01-11 福州大学 一种含n-非取代葡萄糖胺硫酸类肝素二糖的分离分析方法
CN105548415A (zh) * 2016-01-08 2016-05-04 东营天东制药有限公司 一种利用高效液相鉴别低分子肝素中寡糖的分析方法
CN109154604A (zh) * 2016-04-24 2019-01-04 沃特世科技公司 用于对用两亲强碱性部分改性的聚糖进行分析的带电表面反相色谱材料方法
CN111050873A (zh) * 2017-11-06 2020-04-21 株式会社岛津制作所 使用超临界流体色谱仪的组分分离方法
CN108318602A (zh) * 2018-05-03 2018-07-24 东营天东制药有限公司 一种快速检测肝素和/或低分子肝素中肝素二糖含量的方法
CN113393904A (zh) * 2021-06-22 2021-09-14 山东大学 低分子肝素糖链序列检测方法、系统及测序试剂盒
CN113393904B (zh) * 2021-06-22 2022-10-18 山东大学 低分子肝素糖链序列检测方法、系统及测序试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
CN102759596B (zh) 2014-08-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102759596B (zh) 一种低分子肝素的离子对反相色谱质谱联用检测方法
Wei et al. Characterization and quantification of highly sulfated glycosaminoglycan isomers by gated-trapped ion mobility spectrometry negative electron transfer dissociation MS/MS
CN103454372B (zh) 一种低分子肝素部分降解产物的离子对反相色谱质谱联用检测方法
Chai et al. Characterization of heparin oligosaccharide mixtures as ammonium salts using electrospray mass spectrometry
CN103630647B (zh) 一种低分子肝素完全降解产物结合柱前衍生的反相色谱质谱联用检测方法
Li et al. Separation of chito-oligomers with several degrees of polymerization and study of their antioxidant activity
Capek et al. Characterization of immunomodulatory polysaccharides from Salvia officinalis L.
CN105431733B (zh) 用于检测硫酸化寡糖的分析方法
CN105699578B (zh) 一种玻璃酸钠组成糖型指纹图谱分析方法
Laremore et al. High-resolution preparative separation of glycosaminoglycan oligosaccharides by polyacrylamide gel electrophoresis
Ye et al. Characterization of currently marketed heparin products: key tests for LMWH quality assurance
US11325987B2 (en) Solid state nanopores aided by machine learning for identification and quantification of heparins and glycosaminoglycans
Tian et al. Application of 1-alkyl-3-methylimidazolium-based ionic liquids as background electrolyte in capillary zone electrophoresis for the simultaneous determination of five anthraquinones in Rhubarb
Chen et al. Optimized hydrolysis and analysis of Radix Asparagi polysaccharide monosaccharide composition by capillary zone electrophoresis
CN104297406A (zh) 一种广谱鉴定β-受体激动剂类药物的方法
CN105891343A (zh) 一种舒洛地特组分精细结构分析检测方法
CN107991399A (zh) 一种同时测定复方丹参提取物或相关药材中31种成分的方法
CN104345102A (zh) 一种测定特定聚合度范围壳寡糖含量的方法
Zhang et al. Use of chiral ionic liquid as additive for synergistic enantioseparation of basic drugs in capillary electrophoresis
CN105548378A (zh) 一种卡格列净α、β异构体的分离方法
Laremore et al. Glycosaminoglycan characterization by electrospray ionization mass spectrometry including Fourier transform mass spectrometry
Figueiredo et al. Monitoring of κ-carrageenan depolymerization by capillary electrophoresis and semisynthesis of oligosaccharide alditols
Li et al. Characterization of saccharides and phenolic acids in the Chinese herb Tanshen by ESI‐FT‐ICR‐MS and HPLC
CN107144623A (zh) 一种在线快速筛选和定量中药中抗氧化活性成分的方法
CN103245741B (zh) 美罗培南中杂质的检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20180322

Address after: 050800 Shijiazhuang City, Hebei Province, Zhengding New District Yinchuan Street North Head

Patentee after: Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd.

Address before: Licheng Alexander Road in Ji'nan City, Shandong province 250100 No. 27

Patentee before: Shandong University

TR01 Transfer of patent right
CP02 Change in the address of a patent holder

Address after: 050800 No.71, Menglong street, South District, Zhengding high tech Industrial Development Zone, Zhengding District, China (Hebei) pilot Free Trade Zone, Shijiazhuang City, Hebei Province

Patentee after: HEBEI CHANGSHAN BIOCHEMICAL PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Address before: 050800 north head of Yinchuan street, Zhengding new area, Shijiazhuang City, Hebei Province

Patentee before: HEBEI CHANGSHAN BIOCHEMICAL PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

CP02 Change in the address of a patent holder