CN102759584B - 高效液相色谱法测定焦性没食子酸 - Google Patents

Abstract

一种通过使用焦性没食子酸的主要原料没食子酸作为内标物质，使用高效液相色谱内标定量分析，精准检测焦性没食子酸的方法。该发明有效克服了由于焦性没食子酸标准样品难以制备和保存的不利因素，同时避免了采用外标法作为定量分析时测定焦性没食子酸含量时仪器不稳定带来的检测不确定度，也避免了采用归一法作为定量分析方法时由于各类物质在同一检测条件下灵敏度不一致所带来的检测不确定度，该方法方便快速，检测结果准确可靠。

Description

高效液相色谱法测定焦性没食子酸

技术领域

本发明涉及一种采用内标法作为定量分析方法的高效液相色谱法测定焦性没食子酸的新方法，属于化学分析方法技术领域。

背景技术

焦性没食子酸，又名焦倍酚，连苯三酚，是以五倍子为原料的精深加工的多用途化工产品。它广泛用于农药、医药、化妆品、液晶材料、染料中间体、橡塑助剂、化学分析试剂等领域。

对于焦性没食子酸的检测，现有文献报道的方法有比色法、气相色谱法、薄层色谱法、分光光度法和高效液相色谱外标法。

日本焦性没食子酸产品工业标准中对焦性没食子酸的测定采用气相色谱法，但由于焦性没食子酸在高温条件下容易发生分解，经检测结构的准确性带来了一定的影响。

文献《精细化工中间体》1996.26（4）：49-51；《高效液相法测定焦酸》1999.29（4）：43-44。中所报道的高效液相色谱法测定焦性没食子酸方法，定量方法采用外标法。使用外标法，必须要有焦性没食子酸的标样，但焦性没食子酸标样不仅难以制备，且容易氧化变质，不易保存。

采用高效液相色谱测定焦性没食子酸时，定量方法也有采用归一法的，但由于在检测条件下，焦性没食子酸与没食子酸、单宁酸等杂质的灵敏度不一样，所以检测的结果不确定性大导致结果不准确。

发明内容

本发明的目的是提供一种能克服现有焦性没食子酸检测技术中要么标准样品难以获取和保存，要么检测结果不确定度大，准确度低等各方面的不足，即提供一种高效液相色谱内标定量检测技术，该方法简单、结果准确可靠。

其技术方案是：以没食子酸及酚类物质及其衍生物或苯甲酸及其衍生物的标样作为内标物质，用液相色谱仪在一定的色谱操作条件下，采用内标法对焦性没食子酸进行定量检测。包括配制焦性没食子酸标准溶液，没食子酸标样，测定没食子酸含量求焦性没食子酸与没食子酸色谱响应值校正因子，焦性没食子酸含量的测定。

1.选择仪器和试剂：

液相色谱仪LC-10ATVP，带色谱工作站和紫外检测器；色谱柱；Diamonsiltm,C18,250×4.6mm；甲醇（色谱纯）通过0.45um孔径的滤膜过滤；焦性没食子酸已知样：99.5%；没食子酸标样：99.9%。

2.实验方法

2.1控制高效液相色谱仪的操作条件：流动相各成分按体积百分比为色谱纯甲醇∶纯净水∶试剂级磷酸=30～50∶50～70∶0.1～1.0，流动相通过0.45um孔径的滤膜过滤；流速1.0ml/min；检测波长：280um；柱温：室温；进样量20ul。保留时间，焦性没食子酸3.35min，没食子酸2.94min。

2.2酸制标准溶液。

2.2.1焦性没食子酸标准溶液：20mg/ml。

2.2.2没食子酸标样：0.1mg/ml。

2.2.3测定没食子酸的含量。

准确称取5.0～15.0g样品于容量瓶中，宜取50ml容量瓶，以流动相溶解并定容，摇匀得试样溶液A。

分别准确移取试样溶液A4-6ml于两个容量瓶中，其中一个以流动相直接定容后摇匀，另一个准确加入0.01mg/ml没食子酸标样4-6ml，以流动相摇匀，在色谱操作条件下检测，分别测定其没食子酸成分的色谱峰面积。

样品中没食子酸的质量百分含量X1%按照下式计算：

$X_1\%=\frac{C_0\×A_1\×100}{A_2\×m_0\×1000}\×100\%$

式中：C₀—测试的加标样品溶液中所加入的没食子酸标样的浓度（mg/ml）；

A₁—样品溶液测定所得的没食子酸成分的色谱峰面积值；

A₂—加标溶液测定所得的没食子酸成分的色谱峰面积值；

m₀—称取的样品质量（g）。

2.2.4测定焦性没食子酸含量；

1）首先测定焦性没食子酸与没食子酸色谱响应值校正因子，求得校正因子平均值。

分别准确移取4-6ml焦性没食子酸溶液（20mg/ml）于5个容量瓶中，分别准确加入1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml、20ml没食子酸标准溶液（0.1mg/ml），以流动相定容后摇匀，在以上色谱操作条件下检测，分别进行测定，根据测定结果计算焦性没食品子酸与没食子酸两种成分与其色谱响应值峰面积比值之间的校正因子，求得校正因子平均值f。

2）焦性没食子酸含量测定；

准确称取0.08-0.12g样品（称准至0.0002g）于容量瓶中，以流动相定容后摇匀。准确移取4-6ml此溶液于容量瓶中，准确加入1.8-2.2ml没食子酸标准溶液（0.1mg/ml），以流动相定容并摇匀后，进行液相色谱测定。

样品中焦性没食子酸的质量百分比X%按照下式计算；

$X\%=\frac{29.79\×A4\×(c\×V+m\×X_1/100)}{A3\×m\×1000}\×100\%---\left(2\right)$

式中：X₁-样品中没食子酸的质量百分含量（%）

A₃-样品溶液测定所得的没食子酸成分的色谱峰面积值；

A₄-样品溶液测定所得的焦性没食子酸成分的色谱峰面积值；

c-试样溶液中加入的没食子酸标样的浓度mg/ml；

v-试样溶液体积（ml）；

m-称取的样品质量（g）。

本发明于高效液相色谱法中采用了内标法定量检测技术，解决了目前焦性没食子酸日常检测中存在的标准样品难以获取与保存和检测结果准确度低的问题。首先，解决了内标物质的选择问题。一般来说，高效液相色谱分析中很少使用内标法作为定量分析方法，原因是由于不同物质在不同波长下吸收值不一样，很难找到在主成分检测所选择的波长处有合适灵敏度并满足其它条件的内标物质。本发明通过使用焦性没食子酸的主要生产原料没食子酸作为内标物质，解决了这一难题。其次，解决了焦性没食子酸中本来含有的没食子酸的测定问题，排除了其对焦性没食子酸检测结果产生的影响。最终实现了对焦性没食子酸的准确检测。方法标准偏差0.059，变异系数0.036，线性相关系数0.9999，回收率101.2%。方法精密度好，准确度高。

由以上可知，本发明为一种焦性没食子酸检测方法，其优点包括：

（1）虽然同是采用高效液相色谱法检测焦性没食子酸，但本发明利用内标法作为定量分析方法，检测结果比现有焦性没食子酸检测方法采用的外标法、归一法作为定量分析的结果更加准确可靠，方法更加科学、先进；

（2）标准物质更易获取与保存。没食子酸标样比焦性没食子酸标样容易制备并且其物化性质更加稳定，标样易于保存。

（3）本发明实现了内标法作为定量分析方法在高效液相色谱分析中应用的突破。有效避免了外标法中由于仪器不稳定所带来的测定不确定度。

（4）本发明以标准加入法检测焦性没食子酸中的没食子酸，同时解决了焦性没食子酸生产中没食子酸转化率的控制分析问题。

具体实施方式

1.用本发明技术内容中所采用的仪器和试剂。

2.采用本发明技术内容中所采用的高效液相色谱流动相操作条件。

3.配制标准溶液；

本发明采用焦性没食子酸的主要原料没食子酸作内标物容量检测。

3.1焦性没食子酸标准溶液：20mg/ml。准确称取含焦性没食子酸2.00g（准确至0.0002g）的已知样于100ml容量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀备用。

3.2没食子酸标样：0.1mg/ml。准确称取含没食子酸0.10g（准确至0.0002g）的标样于1000ml容量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀备用。

4.测定没食子酸含量：准确称取10.0g（准确至0.0002g）没食子酸标样于50ml容量瓶中，以流动相溶解并定容，摇匀得试样溶液A。

分别准确移取试样溶液A5ml于于两个50ml的容量瓶中，其中一个以流动相直接定容后摇匀，

另一个准确加入5ml没食子酸标样0.01mg/ml，以流动相定容后摇匀，在以上色谱操作条件下检测，分别测定其没食子酸成分的色谱峰面积。用公式（1）测得样品中没食子酸的质量百分含量X1%。

5.焦性没食子酸含量的测定；

5.1焦性没食子酸与没食子酸色谱响应值校正因子的测定；

分别准确移取5ml焦性没食子酸标准溶液（20mg/ml）于5个50ml的容量瓶中，分别准确加入1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml、20ml没食子酸标准溶液0.1mg/ml，以流动相定容后摇匀，在以上色谱操作条件下检测，分别进行测定，根据测定结果计算焦性没食子酸与没食子酸两种成分的浓度与其色谱响应值面积比值之间的校正因子，求得校正因子平均值f=29.79。

5.2焦性没食子酸含量的测定；

准确称取0.1g样品（称准至0.0002g）于100ml容量瓶中，以流动相定容后摇匀。准确移取5ml此溶液于50ml容量瓶中，准确加入2ml没食子酸标准溶液0.1mg/ml以流动相定容后摇匀，进行液相色谱测定。用公式（2）测得焦性没食酸的质量百分比X。

以上的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定。在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。

Claims (1)

1.一种高效液相色谱测定焦性没食子酸的方法，其特征在于：以没食子酸标样作为内标物质，用液相色谱仪在一定的色谱操作条件下，采用内标法对焦性没食子酸进行定量检测；选择仪器和操作条件流动相：液相色谱仪LC-10ATVP，带色谱工作站和紫外检测器；色谱柱：Diamonsiltm,C18,250×4.6mm；色谱操作条件的流动相为：色谱纯甲醇、纯净水、试剂级磷酸按照体积百分比30-50∶50-70∶0.1-1.0混合，通过0.45um孔径的滤膜过滤，流速0.8-1.2ml/min；检测波长：260-300nm；柱温：室温；进样量：20ul；

保留时间：焦性没食子酸3.35min，没食子酸2.94min；具体步骤如下：

(1)焦性没食子酸标准溶液的配制，20mg/ml：准确称取含焦性没食子酸2.00g已知样，称准至0.0002g，置于100ml容量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；没食子酸标样0.1mg/ml：准确称取含没食子酸0.10g标样，称准至0.0002g，置于1000ml容量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀备用；

(2)没食子酸含量的测定：准确称取10.0g没食子酸标样，称准至0.0002g，置于50ml容量瓶中，以流动相溶解并定容，摇匀得试样溶液A，再分别准确移取试样溶液A5ml于两个50ml的容量瓶中，其中一个以流动相直接定容后摇匀，另一个准确加入5ml没食子酸标样0.01mg/ml，以流动相定容后摇匀，

在以上色谱操作条件下检测，分别测定其没食子酸成分的色谱峰面积；用公式(1)计算出样品中没食子酸的质量百分含量X₁%：

$X_1\%=\frac{C_0\×A_1\×100}{A_2\×m_0\×100}---\left(1\right)$

式中：C₀—测试的加标样品溶液中所加入的没食子酸标样的浓度，mg/ml；

A₁—试样溶液测定所得的没食子酸成分的色谱峰面积值；

A₂—加标溶液测定所得的没食子酸成分的色谱峰面积值；

m₀—称取的样品质量，g；

(3)测定焦性没食子酸与没食子酸色谱响应值校正因子:

分别准确移取4-6ml焦性没食子酸标准溶液，20mg/ml于5个50ml的容量瓶中，分别准确加入1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml、20ml没食子酸标准溶液0.1mg/ml，以流动相定容后摇匀，在以上色谱操作条件下检测，分别进行测定，根据测定结果计算焦性没食子酸与没食子酸两种成分的浓度与其色谱响应值峰面积比值之间的校正因子，求得校正因子平均值f＝29.79；

(4)测定焦性没食子酸含量

准确称取0.1g样品，称准至0.0002g，置于100ml容量瓶中，以流动相定容后摇匀；准确移取5ml此溶液于50ml容量瓶中，准确加入1.8-2.2ml没食子酸标准溶液0.1mg/ml，以流动相定容并摇匀后，进行液相色谱测定，样品中焦性没食子酸的质量百分比X%按照公式(2)计算得出：

$X\%=\frac{29.79\×A4\×(c\×V+m\×X_1/100)}{A3\×m\×1000}\×100\%---\left(2\right)$

式中：X₁—样品中没食子酸的质量百分含量，%；

A₃—样品溶液测定所得的没食子酸成分的色谱峰面积值；

A₄—样品溶液测定所得的焦性没食子酸成分的色谱峰面积值；

c—试样溶液中加入的没食子酸标样的浓度，mg/ml；

V—试样溶液体积，ml；

m—称取的样品质量，g。