CN102759582A - 川麦冬药材中黄酮类成分的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种川麦冬药材中黄酮类成分的测定方法,该方法包括以下步骤:步骤1、对照品溶液的制备,分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A适量,加甲醇溶解,分别制成甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B,6-醛基异麦冬黄烷酮A三种对照品溶液;步骤2、供试品溶液的制备,取川麦冬药材粉末用甲醇溶解,过C18柱,甲醇洗脱得供试品溶液;步骤3、将步骤1和步骤2注入HPLC仪器中,得到色谱图;步骤4、对图谱的相似性进行比较相似为含量合格。
Description
技术领域:
本发明涉及一种中药测定方法,特别涉及一种川麦冬药材中黄酮类成分的含量测定方法。
背景技术:
川麦冬:主产于四川绵阳地区,以涪江冲积平原所产麦冬为佳品,又称涪江麦冬,含多种甾体皂甙:麦冬皂甙A、B、C、D,甙元均为假叶树皂甙元,另含麦冬皂甙B’、C’、D’,甙元均为薯蓣皂甙元;尚含多种黄酮类化合物:如麦冬甲基黄烷酮A、B,麦冬黄烷酮A、麦冬黄酮A、B,甲基麦冬黄酮A,B;另分得5个高异黄酮类化合物.
麦冬具有养阴生津,润肺清心的功能。用于肺燥干咳,虚痨咳嗽,津伤口渴,心烦失眠,内热消渴,肠燥便秘;咽白喉。目前已有一些文献报道麦冬的指纹图谱分析方法,但尚缺少对麦冬药材中黄酮类成分指纹图谱的研究,因此本实验对麦冬药材中黄酮类成分进行了指纹图谱的研究,以期为全面控制麦冬药材的质量提供参考依据。
川麦冬药材中黄酮类成分的含量测定目前主要使用滴定法,该法操作复杂,精密度差,目前尚无更精确的测定方法,本发明采用HPLC法,获得了川麦冬药材中黄酮类成分指纹图谱,同时使用该法测定川麦冬药材中黄酮类成分的含量,取得了良好的效果。
发明内容:
本发明提供一种川麦冬药材中黄酮类成分的含量测定,该方法包括以下步骤:
步骤1、对照品溶液的制备,分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A适量,加甲醇溶解,分别制成甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B,6-醛基异麦冬黄烷酮A三种对照品溶液;
步骤2、供试品溶液的制备,取川麦冬药材粉末用甲醇溶解,过C18柱,甲醇洗脱得供试品溶液;
步骤3、将步骤1和步骤2注入HPLC仪器中,得到色谱图;
步骤4、对图谱的相似性进行比较相似为含量合格。
本发明中所述指纹图谱是HPLC的色谱图。
另一种方法为:
(A)取合格的川麦冬药材粉末,按照上述方法建立川麦冬药材粉末标准指纹图谱;
(B)取待检川麦冬药材粉末,按照上述方法得到指纹图谱;
(C)将步骤(B)得到的指纹图谱和步骤(A)得到的标准指纹图谱进行比对,符合即为合格产品,不符合即为不合格产品。
优选的本发明的测定方法,步骤如下:
步骤1、对照品溶液的制备,分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A适量,加甲醇溶解,分别制成甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B,6-醛基异麦冬黄烷酮A三种对照品溶液。
步骤2、供试品溶液的制备,取川麦冬药材粉末约6.0g,精密称定,用甲醇超声提取3次,每次30min,每次加甲醇50mL,合并提取液,过滤,蒸干,加水50mL使溶解,上自制C18小柱富集(80~100目,内径1cm,柱高为2cm,单个柱体积约为6ml,上样前用0.5mol·L-1NaOH溶液处理,再加水平衡),首先上样(流速0.5ml·min-1),用4倍柱体积50%甲醇除去杂质(流速0.5ml·min-1),再用5倍柱体积甲醇洗脱目标物质(流速0.3ml·min-1),将所得甲醇液蒸干,加甲醇溶解至5mL容量瓶,即得供试品溶液。
步骤3、将步骤1和步骤2的溶液分别注入HPLC仪器中,得到色谱图,对图谱的相似性进行比较。
步骤4、相似为含量合格。
本发明的色谱条件如下:
色谱柱:Waters symeteryC18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相:A(0.05%磷酸)-B(乙腈),梯度洗脱(见表1),柱温30℃,流速1.0mL·min-1,检测波长296nm,进样量10μL。
表1液相梯度洗脱条件
本发明的方法是经过筛选获得的,研究过程如下:
1.仪器与试药
Waters Alliance2695高效液相色谱仪,Waters2998检测器,Empower色谱工作站(美国Waters公司),AL204电子天平,XS105梅特勒精密电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司),KQ-500DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。乙腈为色谱纯,水为重蒸水,其他试剂均为分析纯。甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A对照品(自制,经光谱与色谱鉴定,纯度均达到98%以上)。10批川麦冬药材为市售药材,均来自四川雅安,经天津天士力之骄药业有限公司叶正良研究员鉴定为川麦冬。
2.方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱:Waters symeteryC18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相:A(0.05%磷酸)-B(乙腈),梯度洗脱(见表1),柱温30℃,流速1.0mL·min-1,检测波长296nm,进样量10μL。色谱图见图1。
表1液相梯度洗脱条件
2.2 对照品溶液的制备
分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A适量,加甲醇溶解,分别制成甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B,6-醛基异麦冬黄烷酮A三种对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取川麦冬药材粉末约6.0g,精密称定,用甲醇超声提取3次,每次30min,每次加甲醇50mL,合并提取液,过滤,蒸干,加水50mL使溶解,上自制C18小柱富集(80~100目,内径1cm,柱高为2cm,单个柱体积约为6ml,上样前用0.5mol·L-1NaOH溶液处理,再加水平衡),首先上样(流速0.5ml·min-1),用4倍柱体积50%甲醇除去杂质(流速0.5ml·min-1),再用5倍柱体积甲醇洗脱目标物质(流速0.3ml·min-1),将所得甲醇液蒸干,加甲醇溶解至5mL容量瓶,即得供试品溶液。
2.4 精密度试验
取同一供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件连续进样6次,记录色谱图,结果各共有峰相对峰面积比值的RSD小于2.82%,相对保留时间的RSD小于0.20%,说明仪器的精密度较好。
2.5 重复性试验
取同一批样品,按“2.2”项下制备6份供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件分别进样,记录色谱图,结果见表2和表3。结果各共有峰相对峰面积比值的RSD小于3.01%,相对保留时间的RSD小于0.31%,说明实验方法的重现性较好。
表2重复性试验相对峰面积(n=6)
表3重复性试验相对保留时间
2.6 稳定性试验
取同一供试品溶液,分别放置0、2、4、8、12、24小时,按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录色谱图,结果各共有峰相对峰面积比值的RSD小于3.09%,相对保留时间的RSD小于0.33%,表明供试品溶液在24小时内稳定。
2.7 结果
10批具有代表性的川麦冬药材黄酮类成分的指纹图谱见图2,3。由表4可见,10批药材与对照指纹图谱的相似性较好,在0.960~0.995,说明得到的共有模式图具有代表性,可反映川麦冬药材中黄酮类成分的指纹特征。
表4 10批川麦冬药材比较的相似度测定结果
3 讨论
3.1 共有指纹峰相对保留时间及相对峰面积比值 本实验根据《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》[3],采用HPLC法对川麦冬药材黄酮类成分的指纹图谱进行了研究。结果表明,所建立的方法操作简单、重复性好,为川麦冬药材的质量评价提供了参考。川麦冬中甲基麦冬黄烷酮A的含量高于甲基麦冬黄烷酮B[4],本实验选定甲基麦冬黄烷酮A为参照峰(S)的相对保留时间和峰面积为1,进行了方法学验证,经分析,符合技术要求的有关规定。
3.2 从川麦冬中黄酮类物质的指纹图谱相似度计算结果可以看出:各样品生成谱图的对照指纹图谱比较,相似度都大于0.96,说明在该产区中的样品质量基本一致,由10批川麦冬药材生成的对照指纹图谱有13个共有峰,在指纹图谱中可以指认出甲基麦冬黄烷酮A,甲基麦冬黄烷酮B,6-醛基异麦冬黄烷酮A等三种已知物质。
3.3 作者对供试品溶液制备方法,检测波长,色谱柱选择,流动相选择都进行了相关考察,最终确定本实验中所选择的甲醇超声,C18小柱富集为最适宜提取方法;通过3D数据分析确定样品在296nm处有最大吸收;经过与Phenomenex LunaC18(4.6mm×250mm,5μm)和Diamonsil C18(4.6mm×250mm,5μm)进行对比,确定Waters Symmetry C18色谱柱最为适;通过与乙腈-水[5]流动相洗脱效果对比,确定以乙腈-0.05%磷酸水溶液梯度洗脱溶剂系统所得图谱的峰形较好、分离度大,确定为为本试验的流动相系统。
3.4 川麦冬药材是天津天士力之骄药业有限公司产品注射用益气复脉(冻干)的重要原料药,企业要求原料药产地固定,质量稳定,本实验经过对10批原料药的指纹图谱研究表明,原料药材质量稳定可控,为产品的质量标准建立提供了有力保障。
本发明效果好,操作简单,易于推广。
附图说明
图1对照品的色谱图(1.甲基麦冬黄烷酮A,2.甲基麦冬黄烷酮B,3.6-醛基异麦冬黄烷酮A)
图2 10批川麦冬药材黄酮类指纹图谱
图3 10批川麦冬药材黄酮类指纹图谱共有模式
具体实施方式:
以下通过实施例,进一步说明本发明,但不作为对本发明的限制。
实施例1
步骤1、对照品溶液的制备,分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A适量,加甲醇溶解,分别制成甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B,6-醛基异麦冬黄烷酮A三种对照品溶液。
步骤2、供试品溶液的制备,取川麦冬药材粉末约6.0g,精密称定,用甲醇超声提取3次,每次30min,每次加甲醇50mL,合并提取液,过滤,蒸干,加水50mL使溶解,上自制C18小柱富集(80~100目,内径1cm,柱高为2cm,单个柱体积约为6ml,上样前用0.5mol·L-1NaOH溶液处理,再加水平衡),首先上样(流速0.5ml·min-1),用4倍柱体积50%甲醇除去杂质(流速0.5ml·min-1),再用5倍柱体积甲醇洗脱目标物质(流速0.3ml·min-1),将所得甲醇液蒸干,加甲醇溶解至5mL容量瓶,即得供试品溶液。
步骤3、将步骤1和步骤2的溶液分别注入HPLC仪器中,得到色谱图,对图谱的相似性进行比较。
步骤4、相似为含量合格。
Claims (7)
1.一种川麦冬药材中黄酮类成分的测定方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
步骤1、对照品溶液的制备,分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A适量,加甲醇溶解,分别制成甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B,6-醛基异麦冬黄烷酮A三种对照品溶液;
步骤2、供试品溶液的制备,取川麦冬药材粉末用甲醇溶解,过C18柱,甲醇洗脱得供试品溶液;
步骤3、将步骤1和步骤2注入HPLC仪器中,得到色谱图;
步骤4、对图谱的相似性进行比较相似为含量合格。
本发明中所述指纹图谱是HPLC的色谱图。
2.根据权利要求1的测定方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
步骤1、对照品溶液的制备,分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、B、6-醛基异麦冬黄烷酮A适量,加甲醇溶解,分别制成甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B,6-醛基异麦冬黄烷酮A三种对照品溶液。
步骤2、供试品溶液的制备,取川麦冬药材粉末约6.0g,精密称定,用甲醇超声提取3次,每次30min,每次加甲醇50mL,合并提取液,过滤,蒸干,加水50mL使溶解,上自制C18小柱富集(80~100目,内径1cm,柱高为2cm,单个柱体积约为6ml,上样前用0.5mol·L-1NaOH溶液处理,再加水平衡),首先上样(流速0.5ml·min-1),用4倍柱体积50%甲醇除去杂质(流速0.5ml·min-1),再用5倍柱体积甲醇洗脱目标物质(流速0.3ml·min-1),将所得甲醇液蒸干,加甲醇溶解至5mL容量瓶,即得供试品溶液。
步骤3、将步骤1和步骤2的溶液分别注入HPLC仪器中,得到色谱图,对图谱的相似性进行比较。
步骤4、相似为含量合格。
3.一种川麦冬药材中黄酮类成分的测定方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
(A)取合格的川麦冬药材粉末,按照上述方法建立川麦冬药材粉末标准指纹图谱;
(B)取待检川麦冬药材粉末,按照上述方法得到指纹图谱;
(C)将步骤(B)得到的指纹图谱和步骤(A)得到的标准指纹图谱进行比对,符合即为合格产品,不符合即为不合格产品。
5.根据权利要求1的测定方法,其特征在于,该方法精密度较好。
6.根据权利要求1的测定方法,其特征在于,该方法重现性较好。
7.根据权利要求1的测定方法,其特征在于,该方法在24小时内稳定。
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