CN109541098A - 麦冬指纹图谱、其构建方法及麦冬质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及药品检测技术领域，具体而言，涉及一种麦冬指纹图谱、其构建方法及麦冬质量检测方法。麦冬指纹图谱的构建方法主要包括：取对照品溶液以及由麦冬制成的供试品溶液，用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试品溶液；其中，色谱条件为：选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈为流动相A，以三氟乙酸水溶液为流动相B，分别对对照品溶液和供试品溶液进行梯度洗脱；本实施例提供的指纹图谱能够系统、全面地反应麦冬中各个化学成分，共有峰相对保留时间稳定，该麦冬指纹图谱稳定性好。简化麦冬药材及其制剂的分析流程，对其相关性作出更精确的评价，实现了麦冬药材至制剂的质量可控。
Description
技术领域
本发明涉及药品检测技术领域，具体而言，涉及一种麦冬指纹图谱、其构建方法及麦冬质量检测方法。
背景技术
麦冬(学名：Ophiopogon japonicus(Linn.f.)Ker-Gawl.)百合科沿阶草属多年生常绿草本植物。麦冬的小块根是中药，有生津解渴、润肺止咳之效。现阶段麦冬在《中国药典》中只是对麦冬的质量评价方式单一，不足以系统、完整地表明麦冬及其制剂的整体质量。
发明内容
本发明的目的在于提供一种麦冬指纹图谱、其构建方法及麦冬质量检测方法，其旨在改善现有技术中对麦冬的质量评价方式单一，不足以系统、完整地表明麦冬及其制剂的整体质量的问题。
本发明第一方面提供一种麦冬指纹图谱的构建方法，其主要包括：
取对照品溶液以及由麦冬制成的供试品溶液，以乙腈为流动相A，以0.058-0.062vol％三氟乙酸水溶液为流动相B，选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱用高效液相色谱法分别对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行梯度洗脱；
其中，所述对照品溶液的溶剂为4-6vol％的甲醇水溶液，溶质为尿苷，所述尿苷浓度为48μg/ml-52μg/ml；
所述进行梯度洗脱步骤中：
t＝0min-12min时，所述流动相A为0％，所述流动相B为100％；
t＝12min-20min时，所述流动相A为0％→2％，所述流动相B为100％-98％；
t＝20min-30min时，所述流动相A为2％，所述流动相B为98％；
t＝30min-40min时，所述流动相A为2％→12％，所述流动相B为98％→88％；
t＝40min-48min时，所述流动相A为12％，所述流动相B为88％；
t＝48min-50min时，所述流动相A为12％→95％，所述流动相B为88％→5％；
t＝50min-75min时，所述流动相A为95％，所述流动相B为5％；
t＝75min-85min时，所述流动相A为95％→0％，所述流动相B为5％→100％；
t＝85min-90min时，所述流动相A为0％，所述流动相B为100％。
通过上述麦冬指纹图谱的构建方法构建的指纹图谱能够系统、全面地反应麦冬中各个化学成分，共有峰相对保留时间稳定，该麦冬指纹图谱稳定性好。简化麦冬药材及其制剂的分析流程，对其相关性作出更精确的评价，实现了麦冬药材至制剂的质量可控。
在洗脱过程中控制流动相A的体积占流动相总量的比例，最终得到的指纹图谱重现性好，各个特征峰清晰度高。
在不同进样时间改变流动相A与流动相B的配比，可以得到13个特征峰，各个特征峰的保留时间稳定，不产生漂移，且在上述时间以及配比下，各个特征峰相互独立，相互分离，避免一些峰不能分离开的问题。
在本发明第一方面的一些实施例中，梯度洗脱步骤中，控制柱温为38℃-42℃、流速为0.59mL/min-0.61mL/min、检测波长为278nm-282nm。
在上述柱温、流速使最终得到的指纹图谱稳定，耐受性能好，重现性佳。
在本发明第一方面的一些实施例中，流动相B为0.06vol％的三氟乙酸水溶液。
在本发明第一方面的一些实施例中，供试品溶液通过以下步骤制得：称量麦冬粉末，采用10-25倍麦冬粉末体积的水提取后过滤得到供试品溶液。
在本发明第一方面的一些实施例中，采用15倍所述麦冬粉末体积的水提取后过滤得到所述供试品溶液。
采用水提将麦冬粉末内的有效成分尽可能的提取至供试品溶液中，再通过梯度洗脱进行洗脱。采用15倍所述麦冬粉末积的水提取后过滤得到所述供试品溶液，可以使麦冬中的有效成分进入水中。
在本发明第一方面的一些实施例中，供试品溶液通过WS3-B-2865-98-2011的生脉注射液制备工艺制得。
麦冬通过煎煮、浓缩、醇沉、碱析、水沉、脱炭后获得麦冬澄明水液作为制剂供试品溶液。含有麦冬药剂的溶液中，大多采用生脉注射液制备工艺提取麦冬中的有效成分，因此，采用WS3-B-2865-98-2011提供的方法制备供试品溶液，可以有利于直接采用麦冬图谱对生脉注射液制备工艺提取的麦冬药剂进行检测，达到准确精准的作用。
本发明第二方面提供一种麦冬指纹图谱，麦冬指纹图谱由本发明第一方面各个实施例提供的麦冬指纹图谱的构建方法检测构建而成。
进一步地，本发明第二方面的一些实施例中，麦冬指纹图谱包括13个特征峰，以5号峰尿苷为参照峰，各特征峰的相对保留时间为及相对峰面积如下：1号峰：对保留时间为0.660-0.667；相对峰面积为6.175-8.871；2号峰：相对保留时间为0.698-0.708；相对峰面积为2.091-4.043；3号峰：相对保留时间为0.725-0.736；相对峰面积为0.910-1.511；4号峰：相对保留时间为0.859-0.868；相对峰面积为0.712-0.882；5号峰：相对保留时间为1；相对峰面积为1；6号峰：相对保留时间为1.825-1.832；相对峰面积为0.580-0.846；7号峰：相对保留时间为1.942-0.1.972；相对峰面积为1.275-1.586；8号峰：相对保留时间为2.015-2.022；相对峰面积为0.591-0.859；9号峰：相对保留时间为2.379-2.385；相对峰面积为0.849-4.606；10号峰：相对保留时间为3.886-4.006；相对峰面积为1.354-1.825；11号峰：相对保留时间为4.059-4.069；相对峰面积为0.495-0.933；12号峰：相对保留时间为4.146-4.153；相对峰面积为0.772-1.061；13号峰：相对保留时间为4.524-4.542；相对峰面积为0.963-1.296。
采用上述麦冬指纹图谱与麦冬的高效液相色谱图谱进行对比，可以准确地检测出麦冬的质量。
在本发明第二方面的一些实施例中，麦冬指纹图谱包括6个特征峰，以2号峰尿苷为参照峰，各特征峰的相对保留时间为：1号峰：相对保留时间为0.859-0.868；相对峰面积为0.434-0.517；2号峰：相对保留时间为1；相对峰面积为1；3号峰：相对保留时间为1.235-1.242；相对峰面积为0.158-0.289；4号峰：相对保留时间为1.763-1.769；相对峰面积为1.417-2.165；5号峰：相对保留时间为2.034-2.040；相对峰面积为0.351-0.442；6号峰：相对保留时间为2.382-2.388；相对峰面积为0.996-4.277。
进一步地，生脉注射液制备工艺提取的麦冬药剂得到的指纹图谱包括6个特征峰，可以对麦冬液的质量进行检测。
本发明第三方面还提供一种麦冬质量检测方法，包括将待检测的麦冬的高效液相色谱图谱与本发明第二方面提供的麦冬指纹图谱进行比较。
上述麦冬质量检测方法将麦冬作为一个整体对待，通过与指纹图谱中各个特征峰进行比较，可以得出麦冬药材之间的差异，有利于对麦冬的真假和品质进行控制。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例1建立的麦冬的指纹图谱；
图2为本发明实施例1提供的11批次麦冬的高效液相特征图谱；
图3为本发明实施例2建立的麦冬的指纹图谱；
图4为本发明实施例2提供的11批次麦冬的高效液相特征图谱；
图5为试验例提供的不同洗脱梯度下麦冬的高效液相特征图谱。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的麦冬指纹图谱的构建方法进行具体说明。
麦冬指纹图谱的构建方法，其主要包括：
取对照品溶液以及由麦冬制成的供试品溶液，以乙腈为流动相A，以0.058-0.062vol％三氟乙酸水溶液为流动相B，选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱用高效液相色谱法分别对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行梯度洗脱；
其中，所述对照品溶液的溶剂为4-6vol％的甲醇水溶液，溶质为尿苷，所述尿苷浓度为48μg/ml-52μg/ml；
进一步地，在本发明的一些实施例中，对照品溶液溶剂为5vol％的甲醇水溶液，溶质为尿苷，尿苷浓度为50μg/ml。梯度洗脱过程中流动相B为0.06vol％三氟乙酸水溶液，在梯度洗脱的过程中控制柱温为40℃、流速为0.60mL/min；检测波长为278nm-280nm。
所述进行梯度洗脱步骤中：
t＝0min-12min时，所述流动相A为0％，所述流动相B为100％；
t＝12min-20min时，所述流动相A为0％→2％，所述流动相B为100％-98％；
t＝20min-30min时，所述流动相A为2％，所述流动相B为98％；
t＝30min-40min时，所述流动相A为2％→12％，所述流动相B为98％→88％；
t＝40min-48min时，所述流动相A为12％，所述流动相B为88％；
t＝48min-50min时，所述流动相A为12％→95％，所述流动相B为88％→5％；
t＝50min-75min时，所述流动相A为95％，所述流动相B为5％；
t＝75min-85min时，所述流动相A为95％→0％，所述流动相B为5％→100％；
t＝85min-90min时，所述流动相A为0％，所述流动相B为100％。
在洗脱过程中控制流动相A的体积占流动相总量的比例，最终得到的指纹图谱重现性好，各个特征峰清晰度高。
麦冬药材的指纹图谱方法对梯度耐受性不佳，仅在上述条件下才能避免峰的偏移重叠等问题的发生。采用上述时间以及流动相A与流动相B的配比，使各个特征峰的保留时间稳定，不产生漂移，且在上述时间以及配比下，各个特征峰相互独立，相互分离，避免一些峰不能分离开的问题。
进一步地，在本发明中采用的色谱柱为Wters Bridge(5μm，4.6×250mm Column)；采用该色谱柱，分离效果较佳。通过上述麦冬指纹图谱的构建方法构建的指纹图谱能够系统、全面地反应麦冬中各个化学成分，共有峰相对保留时间稳定，该麦冬指纹图谱稳定性好。简化麦冬药材及其制剂的分析流程，对其相关性作出更精确的评价，实现了麦冬药材至制剂的质量可控。
在本发明第一方面的一些实施例中，供试品溶液通过以下步骤制得：称量麦冬粉末，采用10-25倍麦冬粉末体积的水提取后过滤得到供试品溶液。优先地，采用15倍所述麦冬粉末体积的水提取后过滤得到供试品溶液。
详细地，精密称定麦冬，干燥、粉碎；置具塞锥形瓶中，加入15倍体积水，称重，煎煮2h，冷却，补重，过滤即得供试品溶液。
采用水提将麦冬粉末内的有效成分尽可能的提取至供试品溶液中，再通过梯度洗脱进行洗脱。
在本发明第一方面的一些实施例中，供试品溶液通过WS3-B-2865-98-2011的生脉注射液制备工艺制得。
麦冬通过煎煮、浓缩、醇沉、碱析、水沉、脱炭后获得麦冬澄明水液作为制剂供试品溶液。含有麦冬药剂的溶液中，大多采用生脉注射液制备工艺提取麦冬中的有效成分，因此，采用WS3-B-2865-98-2011提供的方法制备供试品溶液，可以有利于直接采用麦冬图谱对生脉注射液制备工艺提取的麦冬药剂进行检测，达到准确精准的作用。
需要说明的是，在本发明的其他实施例中，供试品溶液也可以通过其他制备方式制得，例如，采用醇提的方式，或者供试品溶液也可以直接进行购买。
本发明第二方面提供一种麦冬指纹图谱，麦冬指纹图谱由本发明第一方面各个实施例提供的麦冬指纹图谱的构建方法检测构建而成。
本发明提供的麦冬指纹图谱，具有较佳的参照性，该麦冬指纹图谱共有峰相对保留时间稳定，该麦冬指纹图谱稳定性好。
进一步地，本发明第二方面的一些实施例中，麦冬指纹图谱包括13个特征峰，以5号峰尿苷为参照峰，各特征峰的相对保留时间为及相对峰面积如下：1号峰：对保留时间为0.660-0.667；相对峰面积为6.175-8.871；2号峰：相对保留时间为0.698-0.708；相对峰面积为2.091-4.043；3号峰：相对保留时间为0.725-0.736；相对峰面积为0.910-1.511；4号峰：相对保留时间为0.859-0.868；相对峰面积为0.712-0.882；5号峰：相对保留时间为1；相对峰面积为1；6号峰：相对保留时间为1.825-1.832；相对峰面积为0.580-0.846；7号峰：相对保留时间为1.942-0.1.972；相对峰面积为1.275-1.586；8号峰：相对保留时间为2.015-2.022；相对峰面积为0.591-0.859；9号峰：相对保留时间为2.379-2.385；相对峰面积为0.849-4.606；10号峰：相对保留时间为3.886-4.006；相对峰面积为1.354-1.825；11号峰：相对保留时间为4.059-4.069；相对峰面积为0.495-0.933；12号峰：相对保留时间为4.146-4.153；相对峰面积为0.772-1.061；13号峰：相对保留时间为4.524-4.542；相对峰面积为0.963-1.296。
采用上述麦冬指纹图谱与麦冬的高效液相色谱图谱进行对比，可以准确地检测出麦冬的质量。
在本发明第二方面的一些实施例中，麦冬指纹图谱包括6个特征峰，以2号峰尿苷为参照峰，各特征峰的相对保留时间为：1号峰：相对保留时间为0.859-0.868；相对峰面积为0.434-0.517；2号峰：相对保留时间为1；相对峰面积为1；3号峰：相对保留时间为1.235-1.242；相对峰面积为0.158-0.289；4号峰：相对保留时间为1.763-1.769；相对峰面积为1.417-2.165；5号峰：相对保留时间为2.034-2.040；相对峰面积为0.351-0.442；6号峰：相对保留时间为2.382-2.388；相对峰面积为0.996-4.277。
进一步地，生脉注射液制备工艺提取的麦冬药剂得到的指纹图谱包括6个特征峰，可以对麦冬液的质量进行检测。
发明人在实验过程中发现，生脉注射液制备工艺提取的供试品溶液的6个特征峰较为稳定，可能是因为生脉注射液制备工艺制备过程中将供试品溶液与一些“杂质”分离了。
本发明第三方面还提供一种麦冬质量检测方法，包括将待检测的麦冬的高效液相色谱图谱与本发明第二方面提供的麦冬指纹图谱进行比较。
上述麦冬质量检测方法将麦冬作为一个整体对待，通过与指纹图谱中各个特征峰进行比较，可以得出麦冬药材之间的差异，有利于对麦冬的真假和品质进行控制。简化麦冬药材及其制剂的分析流程，对其相关性作出更精确的评价，实现了麦冬药材至制剂的质量可控。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供了一种麦冬指纹图谱，其包括以下步骤进行构建：
配制供试品溶液：精密称取麦冬2.0g，干燥、粉碎；置具塞锥形瓶中，加入15倍体积水，称重，煎煮2h，冷却，补重，过滤即得供试品溶液。
配制对照品溶液：精密称取尿苷对照品适量，用5％甲醇水溶液制成每1ml含50μg尿苷的溶液。
高效液相色谱分析
按照高效液相色谱法(2015年版《中国药典》三部通则0512)试验。
色谱条件：色谱柱为Wters Bridge(5μm，4.6×250mm Column)；流动相：A：乙腈；B：0.058％三氟乙酸；采用梯度洗脱；柱温：40℃；检测波长：280nm；流速：0.6mL·min-1。理论板数按尿苷峰计算应不低于10000。按下表1进行梯度洗脱。
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，获得麦冬的指纹图谱，利用对照品的测定结果，对麦冬特征图谱的特征峰进行指认，其中，5号峰为尿苷峰峰。
表1实施例1的洗脱参数
构建麦冬的特征图谱
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对11批供试品指纹图谱的检测结果进行分析，生成对照指纹图谱；通过对特征峰的识别和指认，得到的麦冬药材HPLC指纹图谱特征峰13个。如图1所示。其中，参照峰为5号峰(尿苷峰)。
以5号峰为参照峰，各特征峰的相对保留时间为：
1号峰：对保留时间为0.660-0.667；相对峰面积为6.175-8.871；2号峰：相对保留时间为0.698-0.708；相对峰面积为2.091-4.043；3号峰：相对保留时间为0.725-0.736；相对峰面积为0.910-1.511；4号峰：相对保留时间为0.859-0.868；相对峰面积为0.712-0.882；5号峰：相对保留时间为1；相对峰面积为1；6号峰：相对保留时间为1.825-1.832；相对峰面积为0.580-0.846；7号峰：相对保留时间为1.942-0.1.972；相对峰面积为1.275-1.586；8号峰：相对保留时间为2.015-2.022；相对峰面积为0.591-0.859；9号峰：相对保留时间为2.379-2.385；相对峰面积为0.849-4.606；10号峰：相对保留时间为3.886-4.006；相对峰面积为1.354-1.825；11号峰：相对保留时间为4.059-4.069；相对峰面积为0.495-0.933；12号峰：相对保留时间为4.146-4.153；相对峰面积为0.772-1.061；13号峰：相对保留时间为4.524-4.542；相对峰面积为0.963-1.296。
麦冬的质量检测方法
将麦冬按实施例1的条件进行测定，得到待测麦冬的HPLC特征图谱，与上述麦冬指纹图谱进行比较，与麦冬指纹图谱中的13个特征峰相对应；
采用药典委员会编制的指纹图谱相似度评价软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”，根据11批麦冬药材HPLC色谱图生成对照指纹图谱。麦冬药材指纹图谱与标准指纹图谱相比较，以特征峰计算相似度，相似度不得低于0.85。结果见表2以及图2。图2中，S1：150402；S2：150403；S3：150502；S4：160502；S5：160503；S6：160504；S7：160505；S8：160506；S9：170501；S10：170502；S11：170504。
表2 11批麦冬药材指纹图谱相似度
从图2以及表2中可以看出，实施例1提供的指纹图谱共有峰相对保留时间稳定，该麦冬指纹图谱稳定性好。其采用该指纹图谱与麦冬药材指纹图谱进行对照，相似度均大于0.95。
实施例2
实施例2与实施例1的区别之一在于实施例2采用的供试品溶液不相同，在实施例2中，供试品溶液采用WS3-B-2865-98-2011的生脉注射液制备工艺制得。
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对11批供试品指纹图谱的检测结果进行分析，生成对照指纹图谱；通过对特征峰的识别和指认，得到的麦冬中间品HPLC指纹图谱特征峰6个，指纹图谱如图2所示，以2号峰尿苷为参照峰，各特征峰的相对保留时间为：1号峰：相对保留时间为0.859-0.868；相对峰面积为0.434-0.517；2号峰：相对保留时间为1；相对峰面积为1；3号峰：相对保留时间为1.235-1.242；相对峰面积为0.158-0.289；4号峰：相对保留时间为1.763-1.769；相对峰面积为1.417-2.165；5号峰：相对保留时间为2.034-2.040；相对峰面积为0.351-0.442；6号峰：相对保留时间为2.382-2.388；相对峰面积为0.996-4.277。
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对11批供试品指纹图谱的检测结果进行分析，生成对照指纹图谱；麦冬中间品指纹图谱与标准指纹图谱相比较，以特征峰计算相似度，相似度不得低于0.85。结果见表3，图4。图4中，S1：XT-170601；S2：XT-170801；S3：XT-170802；S4：XT-170803；S5：XT-170804；S6：XT-170805；S7：XT-170806；S8：XT-170807；S9：XT-170809；S10：XT-170812；S11：XT-171001-1。
表3 11批麦冬中间品指纹图谱相似度
根据11批麦冬药材HPLC色谱图生成对照指纹图谱。麦冬药材指纹图谱与标准指纹图谱相比较，以特征峰计算相似度，相似度不得低于0.85。从图4以及表3中可以看出，其采用该指纹图谱与麦冬药材指纹图谱进行对照，相似度均大于0.9。
实施例3
实施例3与实施例1的区别之一在于，色谱条件不同。色谱条件为：选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.06vol％三氟乙酸水溶液为流动相B，分别对对照品溶液和供试品溶液进行梯度洗脱，并且在梯度洗脱的过程中控制柱温为42℃、流速为0.61mL/min；检测波长为278nm。
实施例3与实施例1的区别之二在于，对照品溶液不同；
对照品溶液：溶剂为5vol％的甲醇水溶液，溶质为尿苷，尿苷浓度为51μg/ml。
实施例3与实施例1的区别之三在于配制供试品溶液不同，在实施例3中，配制供试品溶液：精密称取麦冬2.0g，干燥、粉碎；置具塞锥形瓶中，加入10倍体积水，称重，煎煮3h，冷却，补重，过滤即得供试品溶液。
实施例4
实施例4与实施例1的区别点之一在于，色谱条件不同。实施例4的色谱条件为：选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.058vol％三氟乙酸水溶液为流动相B，分别对对照品溶液和供试品溶液进行梯度洗脱，并且在梯度洗脱的过程中控制柱温为38℃、流速为0.59mL/min；检测波长为282nm；
实施例4与实施例1的区别点之二在于，对照品溶液不同；
对照品溶液：溶剂为6vol％的甲醇水溶液，溶质为尿苷，尿苷浓度为52μg/ml。
实施例4与实施例1的区别之三在于配制供试品溶液：精密称取麦冬2.0g，干燥、粉碎；置具塞锥形瓶中，加入15倍体积水，称重，煎煮4h，冷却，补重，过滤即得供试品溶液。
实施例5
实施例5与实施例1的区别之一在于，色谱条件不同。色谱条件为：选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.6vol％三氟乙酸水溶液为流动相B，分别对对照品溶液和供试品溶液进行梯度洗脱，并且在梯度洗脱的过程中控制柱温为39℃、流速为0.60mL/min；检测波长为281nm；
实施例5与实施例1的区别之二在于，对照品溶液不同；
对照品溶液：溶剂为4vol％的甲醇水溶液，溶质为尿苷，尿苷浓度为48μg/ml。
实施例5与实施例1的区别之三在于配制供试品溶液步骤不同，在实施例5中配制供试品溶液：精密称取麦冬2.0g，干燥、粉碎；置具塞锥形瓶中，加入25倍体积水，称重，煎煮3h，冷却，补重，过滤即得供试品溶液。
试验例
本试验例验证不同洗脱梯度对麦冬原料的指纹图谱影响。
取麦冬1份，按实施例1提供的方法，以A(乙腈)-B(0.06％三氟乙酸)，分别采用表5不同洗脱参数的梯度(乙腈比例±1％)检测分析。
表4不同洗脱参数
洗脱后的图谱见图5，从图5中可以看出，洗脱参数为梯度A与梯度B最终的图谱与洗脱参数为梯度1得到的结果相差很大，峰不稳定，且漂移。在12-40min对麦冬原料的指纹图谱影响较大，麦冬原料对梯度变化耐受性较差，说明在麦冬指纹图谱构件过程中，流动相A与流动相B的比例不能有较大的拨动。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种麦冬指纹图谱的构建方法，其特征在于，主要包括：
取对照品溶液以及由麦冬制成的供试品溶液，以乙腈为流动相A，以0.058vol％-0.062vol％三氟乙酸水溶液为流动相B，选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱用高效液相色谱法分别对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行梯度洗脱；
其中，所述对照品溶液的溶剂为4vol％-6vol％的甲醇水溶液，溶质为尿苷，所述尿苷浓度为48μg/ml-52μg/ml；
所述进行梯度洗脱步骤中：
t＝0min-12min时，所述流动相A为0％，所述流动相B为100％；
t＝12min-20min时，所述流动相A为0％→2％，所述流动相B为100％-98％；
t＝20min-30min时，所述流动相A为2％，所述流动相B为98％；
t＝30min-40min时，所述流动相A为2％→12％，所述流动相B为98％→88％；
t＝40min-48min时，所述流动相A为12％，所述流动相B为88％；
t＝48min-50min时，所述流动相A为12％→95％，所述流动相B为88％→5％；
t＝50min-75min时，所述流动相A为95％，所述流动相B为5％；
t＝75min-85min时，所述流动相A为95％→0％，所述流动相B为5％→100％；
t＝85min-90min时，所述流动相A为0％，所述流动相B为100％。
2.根据权利要求1所述的麦冬指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱步骤中，控制柱温为38℃-42℃、流速为0.59mL/min-0.61mL/min、检测波长为278nm-282nm。
3.根据权利要求1所述的麦冬指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述流动相B为0.06vol％的三氟乙酸水溶液。
4.据权利要求1所述的麦冬指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述供试品溶液通过以下步骤制得：取麦冬粉末，采用10-25倍所述麦冬粉末体积的水提取后过滤得到所述供试品溶液。
5.据权利要求4所述的麦冬指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述采用15倍所述麦冬粉末体积的水提取所述麦冬粉末。
6.据权利要求1所述的麦冬指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述供试品溶液通过WS3-B-2865-98-2011的生脉注射液制备工艺制得。
7.一种麦冬指纹图谱，其特征在于，所述麦冬指纹图谱由权利要求1-6任一项所述的麦冬指纹图谱的构建方法检测构建而成。
8.一种麦冬指纹图谱，其特征在于，所述麦冬指纹图谱包括13个特征峰，以5号峰尿苷为参照峰，各特征峰的相对保留时间为及相对峰面积如下：1号峰：对保留时间为0.660-0.667；相对峰面积为6.175-8.871；2号峰：相对保留时间为0.698-0.708；相对峰面积为2.091-4.043；3号峰：相对保留时间为0.725-0.736；相对峰面积为0.910-1.511；4号峰：相对保留时间为0.859-0.868；相对峰面积为0.712-0.882；5号峰：相对保留时间为1；相对峰面积为1；6号峰：相对保留时间为1.825-1.832；相对峰面积为0.580-0.846；7号峰：相对保留时间为1.942-0.1.972；相对峰面积为1.275-1.586；8号峰：相对保留时间为2.015-2.022；相对峰面积为0.591-0.859；9号峰：相对保留时间为2.379-2.385；相对峰面积为0.849-4.606；10号峰：相对保留时间为3.886-4.006；相对峰面积为1.354-1.825；11号峰：相对保留时间为4.059-4.069；相对峰面积为0.495-0.933；12号峰：相对保留时间为4.146-4.153；相对峰面积为0.772-1.061；13号峰：相对保留时间为4.524-4.542；相对峰面积为0.963-1.296。
9.一种麦冬指纹图谱，其特征在于，所述麦冬指纹图谱包括6个特征峰，以2号峰尿苷为参照峰，各特征峰的相对保留时间为：1号峰：相对保留时间为0.859-0.868；相对峰面积为0.434-0.517；2号峰：相对保留时间为1；相对峰面积为1；3号峰：相对保留时间为1.235-1.242；相对峰面积为0.158-0.289；4号峰：相对保留时间为1.763-1.769；相对峰面积为1.417-2.165；5号峰：相对保留时间为2.034-2.040；相对峰面积为0.351-0.442；6号峰：相对保留时间为2.382-2.388；相对峰面积为0.996-4.277。
10.一种麦冬质量检测方法，其特征在于，包括将待检测的麦冬的高效液相色谱图谱与权利要求7-9任一项所述的麦冬指纹图谱进行比较。
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