CN102749240A - 一种从南极磷虾中提取虾青素的方法及检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从南极磷虾中提取虾青素的方法：取南极磷虾，加入正己烷，搅拌提取、过滤，沉淀后滤渣在同样条件下再反复提取2次，合并3次提取液过滤；滤液旋转蒸发去除正己烷得虾油；虾油用丙酮萃取，虾青素溶于丙酮相；10000转/min离心，得深色沉淀和红色上清液，重复离心3～5次至上清液透明，上清液旋转蒸发去除丙酮得红色固体物，即为含虾青素的样品。本发明还提供了一种虾青素的高效薄层扫描检测方法，利用高效薄层扫描测定样品中虾青素的含量。本发明的从南极磷虾中提取虾青素的方法，提取过程简单易行、操作简单；本发明的虾青素的高效薄层扫描检测方法，检测过程时间短，溶剂用量少，特异性强，灵敏度高，检测结果可靠。

Description

一种从南极磷虾中提取虾青素的方法及检测方法

技术领域

本发明涉及一种从南极磷虾中提取虾青素的方法及检测方法。

背景技术

南极磷虾是地球上数量最大的单种生物资源，据估计南极磷虾的生物量有5-50亿吨（估计的方法不一样有差异），可捕捞量在1亿吨以上，与目前全球鱼类和甲壳动物总捕捞量（0.99亿吨）相当。随着近海渔业的减少，开发丰富的远洋渔业资源日益受到重视。在其他国家南极磷虾捕捞后主要用作饲料，饵料，在日本更多地是用作日本料理等。不管世界上哪个国家，南极磷虾利用的附加值都比较低。这也是我国南极磷虾捕捞后深加工面临的重大研究课题。

虾青素是类胡萝卜素家族成员，但由于结构上的差异，其抗氧化能力差异大，实验发现虾青素的抗氧化能力是β-胡萝卜素的10倍，叶黄素的4倍，比维生素E抗氧化能力强许多倍，是抵抗自由基、延缓衰老很好的抗氧化营养素。虾青素对脑和神经系统的健康是极为有益的，可以穿过血脑屏障，脑和中枢神经系统可直接利用。另外由于虾青素具有很强的抗氧化作用，可以保护遗传物质DNA，减少其氧化和降解，降低嘌呤和尿酸的形成，虾青素由于可降低人体内尿酸形成的作用，可用于治疗痛风。

虾青素还具有增强免疫和抗癌作用，可以调节基因的活性、抑制恶性肿瘤的转移，可以有效地预防和减缓癌症，对口腔癌、膀胱癌有预防作用，对抑制肝癌有显著效果。研究表明，虾青素抑制肿瘤发生的效应在于对肿瘤增殖的抑制。

虾青素能够促进生长繁殖，水生动物的卵子中虾青素的含量很高。这种高含量的虾青素可削弱鱼对光的敏感度，促进鱼类的生长繁殖，它作为激素能促进鱼卵受精，减少胚胎发育的死亡率，加快个体生长，增加成熟速度和生殖力。虾青素在体内具有升高高密度脂蛋白和降低低密度脂蛋白的功效。

虾青素也可作为新型化妆品的原料以其优良的性能广泛用于膏霜、乳剂、唇用香脂、护肤品等名类化妆品中，具有抗衰老、除皱、防晒美白以及除去因年龄所致的黄褐斑。虾青素作为脂溶性色素在化妆品中不仅能有效地起到保色、保味、保质等作用，而且还可以作为长时间保持的着色剂如唇膏和口红等。

许多动物体内不能合成虾青素，而且绝大多数动物也不能把类胡萝卜素转化成虾青素。因此必须从食物中摄取，据不完全测算，目前全球每年对天然虾青素的需求量为750吨（按纯虾青素计），随着科技的进步，虾青素会有更新、更大、更广阔的用途，其需求量还要大大增大，而截至2005年底，全球的虾青素的总产量不到4吨，仅为需求量的0.5％，作为保健品和化妆品的原料，天然虾青素的价格每公斤在4-10万元人民币。

虾青素具有巨大的应用市场和开发潜力，尤其南极磷虾的捕捞利用可解决虾青素生产加工的资源问题。但是虾青素生产和含虾青素产品的检测仍然主要采用高压液相分析方法，溶剂用量大，时间长，尤其虾青素含量少的产品，检测前处理过程不一且复杂。因此，虾青素的快速、准确检测是虾青素生产和新产品开发所面临的迫切需要解决的问题。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种从南极磷虾中提取虾青素的方法，及虾青素的高效薄层扫描检测方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种从南极磷虾中提取虾青素的方法，步骤如下：

（1）取1公斤干的南极磷虾，加入5～7升正己烷，搅拌提取1～2h，提取液过滤，再反复提取2次，合并3次的滤液；

（2）上述得到的滤液在25～35℃下旋转蒸发去除正己烷，得红色虾油；

（3）向上述得到的红色虾油中加5～7倍体积的丙酮萃取，虾青素溶于丙酮相；

（4）将上述得到的丙酮相在10000转/min下离心3～5min，得深色沉淀和红色上清液，倒出上清液，沉淀再用与倒出的上清液同体积量的丙酮重复清洗、离心3～5次至上清液透明，合并上清液，在20～30℃下旋转蒸发去除丙酮，得红色固体物，即为含虾青素的样品。

一种虾青素的高效薄层扫描检测方法，步骤如下：

（1）取上述方法制备的1g虾青素样品溶于10mL二氯甲烷得样品液。同时准确称量0.93g虾青素标准品溶于10mL甲醇：二氯甲烷=3∶1（V/V）的混合液中作为标准品液；

（2）用10μL微量点样器分别取样品液和标准品溶液各2μL点在5cm×10cm的固定相为硅胶GF254的高效薄层板上，在距离高效薄层板下端1cm的地方点成直径为3mm的圆点，点与两侧的边缘以及点与点之间的距离为8mm；

（3）将点样板放在5cm×12cm×15cm的展开缸内展开，展开剂为正己烷：丙酮（V/V）=7∶1～3，展距6cm，展开时间在10min内；

（4）展毕后将展板放在薄层扫描仪上可见Rf值=0.32，在反射/吸收模式下由薄层扫描仪对标准品进行全波长扫描，最大检测波长476nm，扫描狭缝规格为6.00×9.00mm²，扫描速度为40mm/s，数据分辨率为100μm/step，检测灯为氘灯和钨灯（D2&W）；每个板的扫描都重复五次，通过峰面积进行线性回归计算得虾青素含量。薄层扫描软件为WinCats1.4.1。

以上检测方法的标准曲线的绘制：

取标准品溶液2μL，4μL，6μL，8μL，10μL，在高效薄层板上距下缘1cm以点距8mm点样，在5cm×12cm×15cm的展开缸内，用正己烷：丙酮（V/V）=7:1～3混合溶液作展开剂展开6cm，展毕后以上述同样方法扫描，得线性方程Y=1309.2935+47.9693X，相关系数r=0.9990，RSD（相对标准偏差）为2.56%。

精密度测量：

1.板间精密度和板内精密度分别为0.52±0.15和1.47±0.21，标志该方法稳定可靠。

2.避光条件下，板在1天内的变异RSD≤1.68%，天与天之间的变异RSD≤5.07%。

3.虾青素的平均回收率为98.53%。标志该方法的准确性。

4.样品与标准品最大吸收波长相同，均为476nm。标志着该方法的特异性。

5.该方法虾青素的最低检测限为0.046μg,最大检测量为1μg，标志着该检测方法的灵敏性。

从样品制备到检测全过程均在避光条件下进行。

本发明的从南极磷虾中提取虾青素的方法，提取过程简单易行、操作简单；本发明的虾青素的高效薄层扫描检测方法，检测过程时间短，溶剂用量少，特异性强，灵敏度高，检测结果可靠。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

称取100g干南极磷虾，加入正己烷600mL，搅拌提取1h，过滤得提取液，滤渣在同样条件下再反复提取2次，合并3次的提取液过滤，滤液在30°C旋蒸蒸发去除正己烷，得5g虾油。向虾油中加入30mL丙酮混匀萃取，然后在10000转/min高速离心机离心3min，倒出上清液，沉淀再用同量丙酮重复清洗离心3次至上清液透明。合并上清液，在25°C旋转蒸发除去丙酮，得1.49g固体物。取1g固体物，将其溶解在10mL二氯甲烷中做样品液。

取0.93g虾青素标准品溶解于10mL甲醇：二氯甲烷=3:1（V/V）的混合液中作为标准品溶液。

用10μL的微量点样器分别吸取样品液和标准品液各2μL在5×10cm²的硅胶GF₂₅₄高效薄层板上点样。样点为3mm，点间距为8mm，点距薄层板下缘1cm。将薄层板放在5×12×15cm³展开缸内，用正己烷：丙酮（V/V）=7:2作为展开剂展开，展程6cm，展时8min。

展毕后取出薄层板放在Camag薄层扫描仪3上，板重复扫描5次，通过峰面积进行线性回归计算得虾青素含量。

标准曲线的绘制：

取标准品溶液2μL，4μL，6μL，8μL，10μL，在高效薄层板上距下缘1cm以点距8mm点样，在5cm×12cm×15cm的展开缸内，用正己烷：丙酮（V/V）=7:2混合溶液作展开剂展开6cm，展毕后以上述同样方法扫描，得线性方程Y=1309.2935+47.9693X，相关系数r=0.9990，RSD（相对标准偏差）为2.56%。

实施例2

称取100g干南极磷虾，加入正己烷500mL，搅拌提取2h，过滤得提取液，滤渣在同样条件下再反复提取2次，合并3次的提取液过滤，滤液在25°C旋蒸蒸发去除正己烷，得5g虾油。向虾油中加入30mL丙酮混匀萃取。然后在10000转/min高速离心机离心4min，倒出上清液，沉淀再用同量丙酮重复清洗离心4次至上清液透明。合并上清液，在20°C旋转蒸发除去丙酮得1.58g固体物。取1g固体物，将其溶解在10mL二氯甲烷中做样品液。

取0.93g虾青素标准品溶解于10mL甲醇：二氯甲烷=3:1（V/V）的混合液中作为标准品溶液。

用10μL的微量点样器分别吸取样品液和标准品液各2μL在5×10cm²的硅胶GF₂₅₄高效薄层板上点样。样点为3mm，点间距为8mm，点距薄层板下缘1cm。将薄层板放在5×12×15cm³展开缸内，用正己烷：丙酮（V/V）=7:1作为展开剂展开，展程6cm，展时9min。

展毕后取出薄层板放在Camag薄层扫描仪3上，板重复扫描5次，通过峰面积进行线性回归计算得虾青素含量。

标准曲线的绘制同实施例1。

实施例3

称取100g干南极磷虾，加入正己烷700mL，搅拌提取2h，过滤得提取液，滤渣在同样条件下再反复提取2次，合并3次的提取液过滤，滤液在35°C旋蒸蒸发去除正己烷，得5g虾油。向虾油中加入30mL丙酮混匀萃取。然后在10000转/min高速离心机离心5min，倒出上清液，沉淀再用同量丙酮重复清洗离心5次至上清液透明。合并上清液，在30°C旋转蒸发除去丙酮，得1.72g固体物。取1g固体物，将其溶解在10mL二氯甲烷中做样品液。

取0.93g虾青素标准品溶解于10mL甲醇：二氯甲烷=3:1（V/V）的混合液中作为标准品溶液。

用10μL的微量点样器分别吸取样品液和标准品液各2μL在5×10cm²的硅胶GF₂₅₄高效薄层板上点样。样点为3mm，点间距为8mm，点距薄层板下缘1cm。将薄层板放在5×12×15cm³展开缸内，用正己烷：丙酮（V/V）=7:3作为展开剂展开，展程6cm，展时10min。

展毕后取出薄层板放在Camag薄层扫描仪3上，板重复扫描5次，通过峰面积进行线性回归计算得虾青素含量。

标准曲线的绘制同实施例1。

Claims (3)

1.一种从南极磷虾中提取虾青素的方法，其特征在于：步骤如下：

（1）取1公斤干的南极磷虾，加入5～7升正己烷，搅拌提取1～2h，提取液过滤，再反复提取2次，合并3次的滤液；

（2）上述得到的滤液在25～35℃下旋转蒸发去除正己烷，得红色虾油；

（3）向上述得到的红色虾油中加5～7倍体积的丙酮萃取，虾青素溶于丙酮相；

（4）将上述得到的丙酮相在10000转/min下离心3～5min，得深色沉淀和红色上清液，倒出上清液，沉淀再用丙酮重复清洗、离心3～5次至上清液透明，合并上清液，在20～30℃下旋转蒸发去除丙酮，得红色固体物，即为含虾青素的样品。

2.一种虾青素的高效薄层扫描检测方法，其特征在于：步骤如下：

（1）取1g虾青素样品溶于10mL二氯甲烷得样品液，同时准确称量0.93g虾青素标准品溶于10mL甲醇：二氯甲烷=3∶1的混合液中作为标准品液；

（2）用10μL微量点样器分别取样品液和标准品溶液各2μL点在5cm×10cm的固定相为硅胶GF254的高效薄层板上，在距离高效薄层板下端1cm的地方点成直径为3mm的圆点，点与两侧的边缘以及点与点之间的距离为8mm；

（3）将点样板放在5×12×15cm的展开缸内展开，展开剂为正己烷：丙酮=7∶1～3，展距6cm，展开时间在10min内；

（4）展毕后将展板放在薄层扫描仪上可见Rf值=0.32，在反射/吸收模式下由薄层扫描仪对标准品进行全波长扫描，最大检测波长476nm，扫描狭缝规格为6.00×9.00mm²，扫描速度为40mm/s，数据分辨率为100μm/step，检测灯为氘灯和钨灯；每个板的扫描都重复五次，通过峰面积进行线性回归计算得虾青素含量；

所述虾青素样品是通过以下制备方法得到的：

（1）取1公斤干的南极磷虾，加入5～7升正己烷，搅拌提取1～2h，提取液过滤，再反复提取2次，合并3次的滤液；

（2）上述得到的滤液在25～35℃下旋转蒸发去除正己烷，得红色虾油；

（3）向上述得到的红色虾油中加5～7倍体积的丙酮萃取，虾青素溶于丙酮相；

（4）将上述得到的丙酮相在10000转/min下离心3～5min，得深色沉淀和红色上清液，倒出上清液，沉淀再用丙酮重复清洗、离心3～5次至上清液透明，合并上清液，在20～30℃下旋转蒸发去除丙酮，得红色固体物，即为含虾青素的样品。

3.根据权利要求2所述的一种虾青素的高效薄层扫描检测方法，其特征在于：全过程均在避光条件下进行。