CN102706820B - 一种蛋黄中酮基类胡萝卜素的定性检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种蛋黄中酮基类胡萝卜素的定性检测方法，用于定性鸡蛋蛋黄中是否含有化工合成的酮基类胡萝卜素；该方法首先分离出蛋黄，蛋黄用有机溶剂提取出蛋黄提取液作为分析样品，分析样品用分光光度计在400-500nm光波下扫描，读取最大吸收波长λmax，最大吸收波长λmax作为蛋黄中是否含有酮基类胡萝卜素的定性检测参数；本发明的方法对仪器、试剂要求低，过程简便，成本低。
Description
技术领域
本发明涉及一种食品检测技术，尤其涉及一种鸡蛋蛋黄中类胡萝卜素的定性检测方法。
背景技术
通常认为，蛋黄的颜色越黄越深，蛋品的质量就越好。蛋黄中的呈色物质为类胡萝卜素，来源于饲料玉米、干草所含的天然叶黄素、玉米黄质。目前规模养殖中，因日粮配制较单一，玉米新鲜度低等因素，日粮中类胡萝卜素含量低，蛋黄色泽呈淡黄色，明显影响销售。在蛋鸡日粮中添加着色剂，能明显改善蛋黄色泽。目前着色剂主要有二类，一是玉米、万寿菊等植物提取物，其成分是叶黄素及其酯，呈黄色，添加后蛋黄不可能产生令人喜爱的橙红色；二是着色效果较好的酮基类胡萝卜素，如角黄素、虾青素。虾青素，化学名为3,3’-二羟基-4,4’-二酮基-β,β’-胡萝卜素，属酮基类胡萝卜素或其酯，无论是藻类提取、化工合成物，均不允许用于家禽产品的着色。角黄素，又称斑蝥黄，化学名为4,4’-二酮基-β,β’-胡萝卜素，天然存在较少，在饲料产品中使用的多为化工合成。合成角黄素在我国允许使用，是目前用量最大的动物产品着色添加剂，但已经发现，人过多摄入时存在对视力的损伤风险。角黄素在国外限量使用，我国较多的地方性鸡蛋标准、有机食品生产上也明确规定不得使用。目前，凭蛋黄的表观色泽，很难区分蛋品中是否含合成酮基类胡萝卜素。类胡萝卜素的实验室分析，常用的AOAC法，用于测定样品中总类胡萝卜素浓度，不能区分类胡萝卜素的种类；高效液相色谱法，能对不同结构的类胡萝卜素进行定量检测，但设备等条件要求高，试剂成本高。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种蛋黄中酮基类胡萝卜素的定性检测方法，用于判别蛋黄中是否含有合成角黄素、虾青素等酮基类胡萝卜素成分。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种蛋黄中酮基类胡萝卜素的定性检测方法，包括以下步骤：
（1）一次抽样同一批次4-6枚测试蛋，将所有抽样的测试蛋分离出蛋黄、除去蛋黄膜，搅拌均匀；
（2）称取4-8 g步骤1搅拌均匀的蛋黄，放入100 ml具塞离心管，并加入无水乙醇50-60ml，200W超声波40℃水浴20-30min后，冷却至室温；
（3）3000r/min离心5min，分离出蛋黄提取液；
（4）残余蛋黄中加无水乙醇10ml振荡、3000r/min离心5min，分离出蛋黄提取液；
（5）重复1-2次步骤4；合并所有测试蛋品的蛋黄提取液，加无水硫酸钠10-15g吸去水分，以无水乙醇定溶至100ml;
（6）用紫外可见分光光度计进行光谱分析，扫描波长设为400-500nm，以无水乙醇为参比液，读取测试蛋品的蛋黄提取液的最大吸收波长λmax；
（7）若λmax大于450，则判断测试蛋的蛋黄中含有酮基类胡萝卜素。
本发明的有益效果是：本发明的方法测定样品蛋黄提取液λmax，与对照品λmax比较，二者间差值用于判别蛋黄中是否含有酮基类胡萝卜素。本发明设备条件要求低，试剂用量少，在生产上实用性较强。本发明能有效区分蛋品中是否含较高的酮基类胡萝卜素，如角黄素、虾青素等。
具体实施方式
本发明的原理是：与含天然色素蛋黄相比，含酮基类胡萝卜素蛋黄的有机溶剂提取液在400-500nm波长间的λmax会明显升高。
本发明蛋黄中酮基类胡萝卜素的定性检测方法，包括以下步骤：
1、一次抽样同一批次4-6枚测试蛋，将所有抽样的测试蛋分离出蛋黄、除去蛋黄膜，搅拌均匀。
2、称取4-8 g步骤1搅拌均匀的蛋黄，放入100 ml具塞离心管，并加入无水乙醇50-60ml，200W超声波40℃水浴20-30min后，冷却至室温。
3、3000r/min离心5min，分离出蛋黄提取液。
4、残余蛋黄中加无水乙醇10ml振荡、3000r/min离心5min，分离出蛋黄提取液。
5、重复1-2次步骤4；合并所有测试蛋品的蛋黄提取液，加无水硫酸钠10-15g吸去水分，以无水乙醇定溶至100ml。
6、用紫外可见分光光度计进行光谱分析，扫描波长设为400-500nm，以无水乙醇为参比液，读取测试蛋品的蛋黄提取液的最大吸收波长λmax。
7、若λmax大于450，判断测试蛋的蛋黄中含有酮基类胡萝卜素。
下面根据本发明对生产上常见的含酮基类胡萝卜素鸡蛋进行检测，以说明本发明的目的和效果。
实施例1
1 材料与方法
1.1 蛋鸡饲喂试验设计
试验鸡的品种为海兰商品蛋鸡，产蛋率85%。选取体重、生产性能基本一致的海兰商品蛋鸡960羽，设1个对照组与4个试验组，每组192羽。对照组饲喂基础日粮；试验组在基础日粮中分别添加角黄素、虾青素饲料添加剂，用量分别为2、4mg/kg日粮。角黄素、虾青素系商品型饲料添加剂，含量均为10%。
基础日粮的组成与配比为，玉米63%+豆粕20%+麸皮5%+石粉8%+复合预混料4%。日粮主要营养指标符合国家GB/T5916-2008标准要求。
试验鸡群同处一幢半开放式鸡舍，饲养条件基本一致，三层笼养，按常规生产进行管理。饲喂21天时每组取蛋品进行分析。
1.2 分析方法
每组各取30枚鲜蛋，分离出蛋黄，除去蛋黄膜，以每5枚蛋黄混合均匀，作为1个样本，每组6个样本。
精确称取蛋黄5±0.01g，加60ml无水乙醇，100W超声、40℃水浴中提取20min，冷却。倒出提取乙醇；沉淀用无水乙醇洗涤2次；合并上述乙醇提取液。在提取液中加无水硫酸钠15g吸水，收集上清液加入100ml棕色容量瓶，加无水乙醇定容。上述试剂均为分析纯，操作过程尽可能避光。
提取液在1cm比色杯中，用SP-756P型紫外可见分光光度计，以无水乙醇为参比，在400-500nm下扫描，读取大吸光度时的波长λmax。结果数据以X±SD表示。
2 试验结果
表1：各试验组蛋黄提取液的λmax测定值，单位：nm
| 样品来源 | λ max |
| 对照组 | 445.8±1.2 |
| 试验1组（角黄素2mg） | 450.0±0.9 |
| 试验2组（角黄素4 mg） | 453.7±1.6 |
| 试验3组（虾青素2 mg） | 451.5±1.9 |
| 试验4组（虾青素4 mg） | 455.7±2.0 |
由表1可见，对照组（不含酮基类胡萝卜素）的最大吸收波长λmax小于450.试验组蛋黄提取液的最大吸收波长明显高于对照组，均大于450，且随着角黄素、虾青素添加量增加，蛋黄提取液的吸收波长数值增大。
实施例2
1 材料与方法
1.1 饲喂试验设计
试验鸡的品种为海兰商品蛋鸡，产蛋率85%。选取体重、生产性能基本一致的海兰商品蛋鸡576羽，设A、B、C三个试验组，每组192羽。基础日粮相同；各组色素添加剂用量见表2。叶黄素添加剂为商品型，万寿菊提取物，类胡萝卜素标示量2.0%。角黄素、虾青素系商品型饲料添加剂，含量均为10%，同实施例1。
表2：色素添加剂用量：mg/kg日粮
| 叶黄素 | 角黄素 | 虾青素 | |
| A组 | 5.0 | 0 | 0 |
| B组 | 5.0 | 2.0 | 0 |
| C组 | 5.0 | 0 | 2.0 |
基础日粮为小麦-豆粕型，不含基础叶黄素，其组成与配比为，小麦71%+豆粕16%+石粉8%+复合预混料5%。日粮主要营养指标符合国家GB/T5916-2008标准要求。
试验鸡群同处一幢半开放式鸡舍，饲养条件基本一致，三层笼养，按常规生产进行管理。饲喂21天后每组取蛋品进行分析。
1.2 指标分析方法
指标方析同实施例1，其中蛋黄重量改为8g。
2 试验结果
由表3可见，各组蛋黄提取液的λmax测定值间有明显的差异性，与A组相比，B、C组的结果显著提高。
表2-2各试验组蛋黄提取液的λ max测定值 nm
| 试验组 | λ max |
| A组 | 446.3±1.5 |
| B组 | 455.2±2.2 |
| C组 | 462.2±1.2 |
A组（含有叶黄素，但不含酮基类胡萝卜素）的最大吸收波长λmax小于450，B组（含有叶黄素和角黄素）和C组（含有叶黄素和虾青素）最大吸收波长明显高于A组，且均大于450。
上述实施例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权利要求的保护范围内，对本发明作出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种蛋黄中酮基类胡萝卜素的定性检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
（1）一次抽样同一批次4-6枚测试蛋，将所有抽样的测试蛋分离出蛋黄、除去蛋黄膜，搅拌均匀；
（2）称取4-8 g步骤（1）搅拌均匀的蛋黄，放入100 ml具塞离心管，并加入无水乙醇50-60ml，200W超声波40℃水浴20-30min后，冷却至室温；
（3）3000r/min离心5min，分离出蛋黄提取液；
（4）残余蛋黄中加无水乙醇10ml振荡、3000r/min离心5min，分离出蛋黄提取液；
（5）重复1-2次步骤（4）；合并所有测试蛋品的蛋黄提取液，加无水硫酸钠10-15g吸去水分，以无水乙醇定溶至100ml;
（6）用紫外可见分光光度计进行光谱分析，扫描波长设为400-500nm，以无水乙醇为参比液，读取测试蛋品的蛋黄提取液的最大吸收波长λmax；
（7）若λmax大于450，则判断测试蛋的蛋黄中含有酮基类胡萝卜素。
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