CN102735790B - 一种从燕窝中提取牛磺酸的方法及其检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从燕窝中提取牛磺酸的方法及其检测方法：用超声波提取法从燕窝中提取牛磺酸，经离心除杂和浓缩制备样品液，同牛磺酸标准品液采用外标一点法，在涂有硅胶GF₂₅₄高效薄层板上展开，展开剂为按比例配制的正丙醇、无水乙醇、水和冰乙酸的混合液。水合茚三酮的乙醇溶液为染色液，其中水合茚三酮浓度为1～2％。展完后的展板，用染色液喷雾染色。将板放进烘箱里5分钟，温度为110℃。以485nm吸收波长进行薄层扫描，计算得到燕窝中牛磺酸含量。本发明检测燕窝中牛磺酸的含量，作为检测真假燕窝的指标之一，操作简单，快速，准确，可靠。

Description

一种从燕窝中提取牛磺酸的方法及其检测方法

技术领域

本发明涉及一种从燕窝中提取牛磺酸的方法及其检测方法。

背景技术

燕窝是一种名贵的传统中药和保健食品，来源于雨燕科动物金丝燕及多种同属燕类用唾液与绒羽等混合凝结所筑成的巢窝。在《本草纲目》上对燕窝的药用价值的，评价为：味甘淡平，大养肺阴，化痰止嗽，补而能清，为调理虚损劳瘵之圣药。一切病之由于肺虚不能清肃下行者，用此皆可治之；开胃气，已劳痢，益小儿痘疹，可入煎药，或单煮汁服。燕窝的产地主要是马来西亚和印尼，因为燕窝的产量少，药用价值高，加上燕窝的价格昂贵。市面上很多不法商贩，利用不同的原料，进行添加和造假燕窝。检测氨基酸的含量作为真假燕窝的依据受到大多数商家认可。目前现有技术中尚无一种行之有效的检测方法。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种从燕窝中提取牛磺酸的方法及其检测方法。本发明检测燕窝中牛磺酸的含量，作为检测真假燕窝的指标之一，操作简单，快速，准确，可靠。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种从燕窝中提取牛磺酸的方法，步骤如下：

（1）取燕窝，粉碎，按燕窝（W）：水（V）=1：3～9（单位g：ml）的比例加入水，在常温下超声（40MHz）提取1～3次，每次时间为30～60分钟，提取之后进行离心（9000rpm，10分钟），合并上清液；

（2）向上述离心好的上清液中按上清液（W）：无水乙醇（V）=3：5～7（单位g：ml）的比例加入无水乙醇，在闭光的容器内放置0.5～1小时，然后取出上清液（直接倒出或虹吸或过滤）；

（3）上述上清液在50～65℃条件下旋转蒸发浓缩，得到浓缩液，干燥后即得到含牛磺酸的粉末状物质。

一种牛磺酸的薄层层析检测方法，步骤如下：

（1）取样品液（即上述步骤（3）得到的浓缩液）10μl点在涂有硅胶GF₂₅₄的高效薄层板（10cm×10cm）上，以正丙醇（v）：无水乙醇（v）：水（v）：冰乙酸（v）=5～7：0.5～1：1～2：1～2作为展开剂，在展开缸（10cm×12cm×15cm）内展开，展距为6cm，并采用外标一点法点1μl（0.12，0.192，0.24，0.36，0.48mg／ml）牛磺酸标准品溶液，同时展开，展开的时间为60分钟，展开的距离为6cm；

（2）展完后取出展板晾干，以质量浓度为1～2％的水合茚三酮的乙醇溶液为染色液喷雾染色在板上，放进烘箱里烘干5分钟，温度为110℃，其R_f=0.62。

（3）将烘干后的展板放在薄层扫描仪上，以485nm吸收波长进行扫描，通过检测样品和标准品的吸光度并计算得到燕窝中牛磺酸的含量。

上述检测方法，还需要进行以下辅助工作：绘制标准曲线：

取Sigma公司销售的牛磺酸标准品溶解于水，其浓度分别为0.12，0.192，0.24，0.36，0.48mg／ml，在高效薄层板上各点1μl，用Camag薄层扫描仪3，以485nm的吸收波长扫描，经扫描仪的软件Wincats1.4.1统计，得到的线性方程Y=4234.5154+20.6178X，相关系数r=0.99928，RSD=1.87％。

经多次检测和计算，真品燕窝中的牛磺酸含量为12.620～12.720μg／g。

本发明的牛磺酸的薄层层析检测方法，其精确度、板内变异、板间变异、加样回收率等情况如下：

1.精确度的测定

制备0.24mg／ml牛磺酸标准溶液，在同一块高效薄层板上点四个点，每点为1μl，分别在0，2，4，6和8小时扫描测量，证明了4小时后才稳定，如表1所示。

2.板内变异和板间变异

在板上分别滴1μl即0.24mg／ml和0.48mg／ml标准品溶液每隔12小时扫描定量，共测定2天。测得板内变异为0.94％～2.45％，而板间变异为0.33％～2.78％，如表2所示。

3.加样回收率

向提取配制的样品液中，加50，100和150％的牛磺酸标准品，其加样平均回收率为99.68％，如表3所示。

表1精确度

表2板内变异和板间变异

表3加样回收率

本发明利用了超声波提取法，增加了燕窝中牛磺酸的提取率，再用无水乙醇减少了杂质对检测牛磺酸的干扰，得到了一个很好的分离和检测的效果。以正丙醇、无水乙醇、水和冰乙酸的混合液按本发明的配比混合而成的展开剂，使样品液中的牛磺酸和其他成分分离清楚，斑点圆、标准品点和样品点准确对应，Rf值相同，是燕窝中牛磺酸展开分离的良好配方。水合茚三酮作为染色剂，可以让斑点和背景对比明显达到定性的目的，还可以让牛磺酸产生485nm的吸收波长，从而解决了牛磺酸对紫外吸收不灵敏的现象。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1：

按粉粹的燕窝（W）：水（V）=1：3的比例，在常温下超声（40MHz）提取1次，每次时间为30分钟，之后进行离心（9000rpm，10分钟）。将离心好的上清液（W）：无水乙醇（V）=3：5的比例，在闭光的容器放置0.5小时，然后取上清液。将上清液用旋转蒸发浓缩，在50℃条件下进行，得到浓缩液（即样品液）。将浓缩的提取液（即样品液）10μl点在涂有硅胶GF₂₅₄高效薄层板（10cm×10cm）上，并采用外标一点法点牛磺酸标准品为1μl（0.12，0.192，0.24，0.36，0.48mg／ml）。展开剂为以正丙醇（v）：无水乙醇（v）：水（v）：冰乙酸（v）=5：0.5：1：1，在10cm×12cm×15cm展开缸内展开，展距6cm，展开时间为60分钟。展完后取出展板晾干，然后将水合茚三酮和无水乙醇混合，配成染色液，其中水合茚三酮浓度为1％。然后喷雾染色在板上，放进烘箱里5分钟，温度为110℃。R_f值为0.62。冷却后放入Camag薄层扫描仪3扫描，扫描波长为485nm。经检测和计算得燕窝中牛磺酸含量为12.620μg/g。

实施例2：

按粉粹的燕窝（W）：水（V）=1：6的比例，在常温下超声（40MHz）提取2次，每次时间为40分钟，之后进行离心（9000rpm，10分钟）。将离心好的上清液（W）：无水乙醇（V）=3：6的比例，在闭光的容器放置0.8小时，然后取上清液。将上清液用旋转蒸发浓缩，在60℃条件下进行，得到浓缩液（即样品液）。将浓缩的提取液（即样品液）10μl点在涂有硅胶GF₂₅₄高效薄层板（10cm×10cm）上，并采用外标一点法点牛磺酸标准品为1μl（0.12，0.192，0.24，0.36，0.48mg／ml）。展开剂为以正丙醇（v）：无水乙醇（v）：水（v）：冰乙酸（v）=6：0.8：1.5：1.5，在10cm×12cm×15cm展开缸内展开，展距6cm，展开时间为60分钟。展完后取出展板晾干，然后将水合茚三酮和无水乙醇混合，配成染色液，其中水合茚三酮浓度为1.5％。然后喷雾染色在板上，放进烘箱里5分钟，温度为110℃。R_f值为0.62。冷却后放入Camag薄层扫描仪3扫描，扫描波长为485nm。经检测和计算得燕窝中牛磺酸含量为12.625μg/g。

实施例3：

按粉粹的燕窝（W）：水（V）=1：9的比例，在常温下超声（40MHz）提取3次，每次时间为60分钟，之后进行离心（9000rpm，10分钟）。将离心好的上清液（W）：无水乙醇（V）=3：7的比例，在闭光的容器放置1小时，然后取上清液。将上清液用旋转蒸发浓缩，在65℃条件下进行，得到浓缩液（即样品液）。将浓缩的提取液点（即样品液）10μl点在涂有硅胶GF₂₅₄高效薄层板（10cm×10cm）上，并采用外标一点法点牛磺酸标准品为1μl（0.12，0.192，0.24，0.36，0.48mg／ml）。展开剂为以正丙醇（v）：无水乙醇（v）：水（v）：冰乙酸（v）=7：1：2：2，在10cm×12cm×15cm展开缸内展开，展距6cm，展开时间为60分钟。展完后取出展板晾干，然后将水合茚三酮和无水乙醇混合，配成染色液，其中水合茚三酮浓度为2％。然后喷雾染色在板上，放进烘箱里5分钟，温度为110℃。R_f值为0.62。冷却后放入Camag薄层扫描仪3扫描，扫描波长为485nm。经检测和计算得燕窝中牛磺酸含量为12.720μg/g。

Claims (2)

1.一种从燕窝中提取牛磺酸的方法，其特征在于：步骤如下：

（1）取燕窝，粉碎，按每1克燕窝加3～9ml水的比例加入水，在常温下超声提取1～3次，每次时间为30～60分钟，提取之后进行离心，离心条件为：9000rpm，10分钟；合并上清液；

（2）向上述上清液中按每1克上清液加5～7ml无水乙醇的比例加入无水乙醇，在闭光条件下放置0.5～1小时，然后取出上清液；

（3）上述上清液在50～65℃条件下旋转蒸发浓缩，得到浓缩液，即为含有牛磺酸的样品液，干燥后即得到含牛磺酸的粉末状物质。

2.一种牛磺酸的薄层层析检测方法，其特征在于：步骤如下：

（1）取样品液10μl点在涂有硅胶GF254的高效薄层板上，以体积比为正丙醇：无水乙醇：水：冰乙酸=5～7：0.5～1：1～2：1～2的混合液作为展开剂，在展开缸内展开，展距为6cm，并采用外标一点法点1μl牛磺酸标准品溶液，同时展开，展开的时间为60分钟，展开的距离为6cm；所述外标一点法中各个点的浓度分别为0.12,0.192,0.24,0.36,0.48mg/ml；

（2）展完后取出展板晾干，以质量浓度为1～2%的水合茚三酮的乙醇溶液为染色液喷雾染色在板上，放进烘箱里烘干5分钟，温度为110℃；

（3）将烘干后的展板放在薄层扫描仪上，以485nm吸收波长进行扫描，通过检测样品和标准品的吸光度并计算得到燕窝中牛磺酸的含量；

所述样品液是通过以下方法制备得到的：

（1）取燕窝，粉碎，按每1克燕窝加3～9ml水的比例加入水，在常温下超声提取1～3次，每次时间为30～60分钟，提取之后进行离心，离心条件为：9000rpm，10分钟；合并上清液；

（2）向上述上清液中按每1克上清液加5～7ml无水乙醇的比例加入无水乙醇，在闭光条件下放置0.5～1小时，然后取出上清液；

（3）上述上清液在50～65℃条件下旋转蒸发浓缩，得到浓缩液，即为样品液。