CN102716143A

CN102716143A - 龙胆苦苷在治疗炎症性肠病药物中的应用

Info

Publication number: CN102716143A
Application number: CN2012102196328A
Authority: CN
Inventors: 孙文基; 赵文娜; 谢人明; 孙琛; 余静洁
Original assignee: Northwest University
Current assignee: Northwest University
Priority date: 2012-06-29
Filing date: 2012-06-29
Publication date: 2012-10-10

Abstract

一种龙胆苦苷在制备治疗炎症性肠病药物中的应用。活性成分用龙胆苦苷制备的药物为片剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、糖浆剂，按常规制备方法制成。药效试验表明：灌胃给予25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg连续七天后，相对于模型组小鼠体重下降，给药组小鼠体重恢复，具有非常显著意义（p<0.01）；结肠损伤评分相对于模型组，给药组经统计学处理结果有非常显著性意义（p<0.01）随着剂量增高评分降低；血清中的细胞因子给药组与模型组相比较具有显著性和非常显著意义（抑制作用p<0.01-0.05）。表明用龙胆苦苷制备的药物能有效地缓解炎症性肠病小鼠体重降低症状，对致病的小鼠的结肠有显著的治疗作用。

Description

龙胆苦苷在治疗炎症性肠病药物中的应用

技术领域

本发明属于不分明结构的医用配制品技术领域，具体涉及到来源于植物的材料。

背景技术

炎症性肠病，包含溃疡性结肠炎和克罗恩病。以反复发生的肠道溃疡为特征，临床主要表现为腹泻、腹痛和黏液脓血便，多呈反复发作慢性过程。其发病多与遗传、环境及免疫反应异常有关，是一种多基因参与的作用于免疫系统和靶器官的疾病。

目前，炎症性肠病的传统治疗药物主要包括氨基水杨酸制剂、糖皮质激素和免疫抑制剂，柳氮磺胺吡啶（SASP）是治疗炎症性肠病的常用药。这些药物能够非特异性地对炎症活动进行干预，但长期应用有一定副作用，部分患者仍无法获得维持缓解。生物制剂能够特异性地阻断促炎因子，疗效优于上述药物，但费用昂贵，且维持缓解的疗效仍然欠佳，生物制剂同时存在增加感染、肿瘤发生的几率很高，临床应用受到一定的限制。在临床上，当前需要迫切解决得一个技术问题是提供一种疗效显著、毒副作用小、产品成本低的的治疗炎症性肠病的药物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于为以龙胆苦苷提供一种新用途。

龙胆苦苷是从我国常用中药秦艽中提取分离得到的一种化合物。龙胆苦苷的制备方法如下：

取秦艽，用5～20倍量水煎煮三次，每次15分钟，合并煎煮液，离心取上清液；水煎液上D101大孔树脂柱，每克树脂上0.8 ml药液，大孔树脂用2～6倍量的水洗脱，弃去水洗液，大孔树脂再用3～10倍质量分数为30%的乙醇洗脱，回收洗脱液中的乙醇，减压抽干，得残留物，将残留物用水溶解后再按上述方法上大孔树脂，用质量分数为30%的乙醇洗脱，回收洗脱液后的残留物溶于2～5倍量的质量分数为95%的乙醇中，过滤，回收乙醇并抽干，得龙胆总苷，龙胆总苷再用质量分数为95%的乙醇溶解，再抽干，最后溶于乙醇中，放置直到析出结晶，过滤后得到质量分数为98%以上的龙胆苦苷。

活性成分龙胆苦苷在制备治疗炎症性肠病药物中的质量含量为5%～95%。

活性成分龙胆苦苷在制备治疗炎症性肠病药物中的优选质量含量为10%～90%。

活性成分用龙胆苦苷制备治疗炎症性肠病的药物用常规药用制剂的形式来使用。所述的常规药用制剂含作为活性成分的龙胆苦苷，该活性成分在制剂中与药学上可接受的载体如适宜于胃肠内给药的有机或无机的固体或液体赋形剂混合。该药用制剂可以是固体形式如片剂、颗粒剂、胶囊剂；也可以是液体形式如注射剂、糖浆剂、乳剂等。

上述制剂中可含有辅助物质、稳定剂、润湿剂和其它常用的添加剂，如乳糖、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、硬脂酸镁、石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、花生油、橄榄油、可可脂、乙二醇、抗坏血酸、甘露醇等。

上述的制剂可按照各种制剂常规的制备工艺制成。

采用本发明实施例5制备的药物经过药效试验表明：灌胃给予25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg连续七天后，相对于模型组小鼠体重下降，给药组小鼠体重恢复，并具有非常显著意义（p<0.01）。结肠损伤评分相对于模型组，给药组经统计学处理结果有非常显著性意义（p<0.01），随着剂量增高评分降低。血清中的细胞因子给药组与模型组相比较，具有显著性和非常显著意义。表明用龙胆苦苷制备的治疗炎症性肠病的药物能有效地缓解炎症性肠病小鼠体重降低症状，对致病的小鼠的结肠有显著的治疗作用。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。

实施例1

以生产龙胆苦苷片剂产品1000片为例所用原料和辅料及其质量配比如下：

其制备工艺按制剂学片剂的常规工艺进行，每片重0.3 g，每片含龙胆苦苷100 mg。每日口服2次，每次1片。

龙胆苦苷的制备工艺如下：

取秦艽，用5～20倍量水煎煮三次，每次15分钟，合并煎煮液，离心取上清液；水煎液上D101大孔树脂柱，每克树脂上0.8 ml药液，大孔树脂用2～6倍量的水洗脱，弃去水洗液，大孔树脂再用3～10倍质量分数为30%的乙醇洗脱，回收洗脱液中的乙醇，减压抽干，得残留物，将残留物用水溶解后再按上述方法上大孔树脂，用质量分数为30%的乙醇洗脱，回收洗脱液后的残留物溶于2～5倍量的质量分数为95%的乙醇中，过滤，回收乙醇并抽干，得龙胆总苷，龙胆总苷再用质量分数为95%的乙醇溶解，再抽干，最后溶于乙醇中，放置直到析出结晶，过滤后得到质量分数为98%以上的龙胆苦苷

实施例2

以生产龙胆苦苷胶囊剂产品1000粒为例所用原料和辅料及其质量配比如下：

其制备方法按制剂学胶囊剂的常规方法进行，每粒重0.3g，每粒含龙胆苦苷100mg。每日口服2次，每次1粒。

实施例3

以生产龙胆苦苷颗粒剂产品1000g为例所用原料和辅料及其质量配比如下：

龙胆苦苷20g

蔗糖400g

糊精加至1000g

其制备方法按制剂学颗粒剂的常规方法进行，每袋重5g，每袋含龙胆苦苷100 mg。每日口服2次，每次1袋。

实施例4

以生产龙胆苦苷糖浆剂产品1000mL为例所用原料和辅料及其质量配比如下：

龙胆苦苷10g

蔗糖600g

蒸馏水加至1000ml

其制备方法按制剂学糖浆剂的常规方法进行，每瓶10 ml，每瓶含龙胆苦苷100 mg。每日口服2次，每次1瓶。

实施例5

以生产龙胆苦苷注射剂产品1000支为例所用原料和辅料及其质量配比如下：

龙胆苦苷200g

注射用甘露醇20g

其制备方法按制剂学注射剂的常规方法进行，每支重0.22g，每支含龙胆苦苷200mg。静脉滴注一日一次，每次1支，溶解在250 ml注射用生理盐水注射液中。

为了验证龙胆苦苷在治疗炎症性肠病方面的显著效果，申请人委托陕西省生物医药重点实验室制备了龙胆苦苷注射剂冻干粉（试验时用药品名称：秦龙苦素），并在西北大学陕西省生物医药重点实验室SPF级新药评价中心进行了药效试验，各种试验情况如下：

实验药物：龙胆苦苷注射剂冻干粉，白色粉末，由陕西省生物医药重点实验室提供，批号为20110105；阳性药物为柳氮磺胺吡啶肠溶片，黄色片剂，由上海中西三维药业有限公司生产，批号为20110207。

实验动物：Balb/c品系小白鼠，雄性，体重18～22g，西安交通大学医学院实验动物中心提供。动物许可证号：SCXK（陕）2007-001。

实验试剂：生理盐水，由西安京西双鹤药业有限公司生产，批号为120218174；三硝基苯磺酸（TNBS）购自西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司（sigma）。

试验方法：

1、配制药剂

造模药物三硝基苯磺酸乙醇溶液的配制：按常规方法配制质量百分为50%的三硝基苯磺酸乙醇溶液，阳性药柳氮磺胺吡啶肠溶片用生理盐水配成浓度为25 mg/ml溶液；龙胆苦苷用生理盐水配成浓度为1.25 mg/ml、2.5 mg/ml、5.0 mg/ml的溶液，4℃冰箱保存备用。

2、动物模型的建立

Balb/c 小鼠随机分为六组，分别为对照组、三硝基苯磺酸模型组、柳氮磺胺吡啶肠溶片阳性组、龙胆苦苷低剂量组、龙胆苦苷中剂量组，龙胆苦苷大剂量组，每组 10只。造模前小鼠在动物房饲养 1周，采用所配制好的三硝基苯磺酸乙醇溶液灌肠诱导小鼠炎症性肠病模型，小鼠禁食、不禁饮 24 小时后，乙醚麻醉小鼠，3.5F 导管从肛门插入肠道深约 6.0 cm，对照组每只小鼠灌注质量分数为50%酒精灌肠剂100 μ1，其它组每只小鼠灌注质量分数为50%的三硝基苯磺酸乙醇溶液100 μ1，将小鼠都倒置 30 秒以防止药液外流。

3、药物治疗试验

除对照组外，小鼠造模 24 小时后即出现血便、稀便、少动、毛发无光泽、身体蜷缩、食量减少、体重下降等情况，说明造模成功。此后七天每日观察小鼠的体重，并且单独对各组小鼠体重变化情况进行测定和比较。对照组和模型组每日按体重给予0.1 ml/10g生理盐水灌胃，柳氮磺胺吡啶肠溶片阳性对照组每日按体重500 mg/kg给药,龙胆苦苷25 mg/kg小剂量组、50 mg/kg中剂量组、100 mg/kg大剂量组分别每日灌胃给药。

4、标本采集和处理

连续给药七天，小鼠于治疗后第八天，取血，分离血清，-70℃保存待检，处死小鼠后，观察肠壁和腹膜有无粘连，分离结肠，沿肠系膜缘剪开肠腔，用冰生理盐水冲洗粪便，在距肛门 2cm 处取结肠组织，观察结肠损伤情况并进行宏观损伤评分，称重并量全结肠长度，取1cm结肠组织经质量分数为10%的福尔马林固定，剩下的部分-70℃冷冻保存用于测髓过氧化酶（MPO）。

试验结果：

1、龙胆苦苷对小鼠体重变化情况见表1

表1 小鼠体重变化情况

与对照组相比^#P<0.05, ^##P<0.01；与模型组相比^*P<0.05，^**P<0.01。

从表1可以看出，各组小鼠造模前体重基本相同，造模后两天各组小鼠体重持续下降，给药组于第三天体重开始缓慢回升，但模型组小鼠体重却持续下降直到试验结束。给药组与对照组相比，能显著缓解三硝基苯磺酸乙醇溶液导致的小鼠炎症性肠病症状。各给药组从第五天开始，与模型组体重对比具有显著差异（P<0.05）。

2、龙胆苦苷对各组小鼠肠道病变的影响

目测各组小鼠肠道，对照组结肠形态正常；三硝基苯磺酸肠炎动物模型组中，以结肠末端病变为主，可涉及全结肠，表现为小鼠病变结肠连续性水肿及充血，肠道扭曲，透壁性坏死，溃疡及肠黏连。按照表2的评分标准对每只小鼠结肠进行评分。

表2 结肠黏膜损伤评分标准

参照表2的标准分别对对照组，三硝基苯磺酸模型组，阳性药柳氮磺胺吡啶栓组以及龙胆苦苷小剂量，中剂量和大剂量组的小鼠结肠评分，评分结果见表3。统计结果可以看出，模型组与对照组相比结肠损伤非常严重，各给药组治疗后缓解了结肠损伤程度。

表3 小鼠结肠黏膜损伤评分

在表3中，与对照组相比^##P<0.01；与模型组相比，^**P<0.01。

3、龙胆苦苷对各组小鼠胸腺、结肠质量及结肠长度的变化的影响

三硝基苯磺酸模型组小鼠与对照组相比较胸腺严重萎缩，阳性药柳氮磺胺吡啶肠溶片及龙胆苦苷治疗后缓解了症状。由于造模后结肠高度充血水肿，肠壁增厚，溃疡，结肠也显著增重，给药后能减轻水肿及溃疡症状，使质量减小。各组指标见表4。

表4 各组小鼠胸腺、结肠质量及结肠长度比较

与对照组相比^#P<0.05, ^##P<0.01; 与模型组相比^*P<0.05，^**P<0.01。

4、龙胆苦苷在三硝基苯磺酸诱导结肠炎小鼠体内对血清炎症因子的影响

各组小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介-8（IL-8）及结肠组织中髓过氧化酶（MPO）比较见表5。

表5 小鼠血清炎症因子及结肠组织中髓过氧化酶的含量

在表5中，与对照组相比^#P<0.05, ^##P<0.01；与模型组相比^*P<0.05，^**P<0.01。

实验结论：以龙胆苦苷为主要成分的药物（秦龙苦素）对质量分数为50%的三硝基苯磺酸乙醇溶液诱导的小鼠炎症性肠病试验结果表明：造模后第一天开始模型组相对于对照组小鼠体重具有显著意义（P<0.05），此后几天，对照组小鼠体重一直呈上升趋势，但模型组小鼠因为血便、稀便、食量减小的原因体重一直下降，从第三天到第七天，体重与对照组相比，统计学处理具有非常显著意义（P<0.01）。龙胆苦苷各给药组由于治疗作用，体重最终恢复，与模型组对比均具有非常显著意义（P<0.01）。小鼠结肠解剖观察，模型组小鼠结肠高度充血水肿，表面有坏死及溃疡形成，肠壁增厚或表面有坏死及炎性息肉或者更严重者结肠重度充血水肿，黏膜坏死，多个溃疡形成或全肠壁坏死，阳性药和龙胆苦苷各剂量对结肠的症状治疗效果显著，与模型组结肠评分比较均具有非常显著意义（P<0.01）。成人用量每日200 mg。

龙胆苦苷药物的功能：抗血清炎症因子

龙胆苦苷药物主治：炎症性肠病

龙胆苦苷药物的规格：片剂每片重0.3 g，每片含龙胆苦苷100 mg；颗粒剂每袋重5 g，每袋含龙胆苦苷100 mg；胶囊剂每粒重0.3g，每粒含龙胆苦苷100 mg；糖浆剂每瓶10 ml，每瓶含龙胆苦苷100mg；注射剂每支重0.22 g，每支含龙胆苦苷200 mg。

用法用量：口服药物每日服2次，每次口服片剂1片或胶囊剂1粒或颗粒剂1袋或糖浆剂1支，小儿酌减；注射剂，静脉滴注一日一次，每次1支，溶解在250 ml注射用生理盐水注射液中，小儿酌减。

储藏：密封阴凉干燥处储藏。

有效期：两年。

Claims

1.活性成分龙胆苦苷在制备治疗炎症性肠病药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的活性成分龙胆苦苷在制备治疗炎症性肠病药物中的用途，其特征在于：活性成分龙胆苦苷在制备治疗炎症性肠病药物中的质量含量为5%～95%。

3.根据权利要求2所述的活性成分龙胆苦苷在制备治疗炎症性肠病药物中的用途，其特征在于：活性成分龙胆苦苷在制备治疗炎症性肠病药物中的质量含量为10%～90%。