CN100522158C - 古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素在制备治疗关节炎药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体为古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素在制备治疗关节炎药物中的应用。试验表明，上述化合物的一种或多种组合具有明显的抗风湿性疾病的作用，因此，可以用于制备治疗风湿性和类风湿性关节炎的药物。该药物可以是由上述化合物为活性成分，配以药学可接受的载体组成的组合物，其中，活性成分的重量含量为1-99.5%。药物剂型可以是片剂、包衣片、胶囊、栓剂、鼻喷雾剂、贴剂或注射剂。

Description

古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素在制备治疗关节炎药物中的应用

技术领域

本发明属医药技术领域，具体涉及古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素的医药新用途，尤其涉及古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素在制备预防和治疗风湿、类风湿性关节炎药物中的应用。

背景技术

风湿性疾病是一个世界性疾病，可以发生在不同的年龄、性别、种族、气候地理环境及社会人群中。世界上大约每7个人就有1个风湿性病患者，几乎每个人在一生的某个时期出现个风湿性疾病的症状。风湿性疾病的症状多种多样，迁延反复，可以持续几天或数年，可以无不良影响，也可以造成严重残疾。类风湿关节炎是一种自身免疫性疾病，是以慢性进行性关节滑膜及关节软骨损坏为特征的炎症性疾病，几乎影响世界人口的1％。风湿性关节炎是一种多发性常见病，其发病与机体免疫系统的多种细胞功能及其分泌的细胞因子失调密切相关。治疗自身免疫性疾病的最佳方案是帮助机体恢复应有的自身免疫耐受状态，但目前人工诱导免疫耐受的方法尚不成熟，这一目标尚难实现。风湿性疾病的治疗方法有多种，其中药物治疗占有重要的地位。但目前治疗风湿性疾病的药物种类不多，更缺乏特效药物。而且，治疗风湿性疾病的药物不良反应较多。越来越多的临床数据表明中医药治疗风湿性、类风湿性关节炎具有良好疗效。

近年来，中药的抗炎免疫作用己受到广泛的关注。临床及实验证实很多中药具有抗风湿性疾病的作用，通过止痛、活血化瘀对风湿病起了缓解病情作用，但不能达到改变病程的作用，而且还有一定的毒性。我国中医药学具有悠久的历史，中医学者运用经验方治疗风湿性、类风湿性关节炎的趋势在不断上升。在这些中草药有效成分中，推测极有可能存在治疗风湿性疾病的活性物质，所以，从天然产物中筛选具有抗风湿性疾病活性的先导化合物不失为一理想途径；进而通过进行先导化合物的结构修饰及全合成，再从一系列衍生化合物中筛选活性较强的单体，并结合抗风湿性疾病活性的构效关系研究，最终发现具有临床应用前景的药物。

金果榄为防己科青牛胆属植物青牛胆(Tinospora sagittata(Oliv.)Gagnep.)或金果榄(Tinospora capillipes Gagnep.)的干燥块根，又名九牛胆、金银袋(广西)、地苦胆(四川)、九牛子(江西)、地蛋(湖南)。为中国药典历版所收载，有清热解毒、利咽止痛之功效。用于咽喉肿痛，痈疽疔毒，泄泻，痢疾，脘腹热痛。(中国药典(一部.2005年版)：150-151.北京：化学工业出版社)。

金果榄胶囊经临床验证270例，其中上呼吸道感染76例，急性扁桃腺炎10例，咽喉炎78例，急性胃肠炎24例，肺炎40例，气管炎42例，治愈136例，占50.4％；有效120例，占44.4％；无效14例，占5.25％；总有效率为94.8％。金果榄酒精浸物外敷治疗输液性静脉炎78例，治愈64例，占82.2％；好转12例，占15.2％；无效2例.占2.6％；总有效率为97.4％。与对照组硫酸镁相比，治愈率和有效率经统计学处理均有显著性差异(P<0.01，P<0.05)。

虽然金果榄有如此好的临床应用效果，但由于对其化学成分研究不深入，药理筛选不足，导致活性成分不明确。我们通过对金果榄药材进行系统的化学成分分离、纯化、结构鉴定，发现金果榄中主要含有大量的二萜内酯及原小檗碱型生物碱，进一步的药理活性筛选证明，二萜内酯中主要为古伦宾(columbin)、异古伦宾(isocolumbin)、去氧黄藤苦素(fibleucin)，是其抗风湿性疾病的活性成分。

发明内容

本发明的目的在于提出古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素在制造用于预防和治疗风湿性、类风湿性关节炎药物中的应用。

本发明所说的古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素的结构式为：

古伦宾结构式    异古伦宾结构式   去氧黄藤苦素结构式

本发明提出的古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素可从金果榄药材或其他植物中提取，经分离纯化得到，也可以是经化学合成的方法制备得到。

实验研究证明，古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素之一种或几种的组合具有明显的抗风湿性疾病的作用。

古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素一种或向种组合为活性成分，加上一种或多种药学上可以接受的载体可以制备成用于临床治疗的药物组合物，用于治疗人体正气不足，风寒湿燥等外邪侵袭引起的肢体关节肌肉疼痛、重着、麻木、肿胀、屈伸不利、甚则关节变形，或累及脏腑为特征的一类病症，或用于治疗以关节滑膜炎症为特征的慢性全身性自身免疫性结缔组织疾病疾病，包括治疗风湿性和类风湿性关节炎。

上文所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等；填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。所述药物中，上述活性成分的重量含量为1-99％。

古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素的制剂可以通过口服，经皮，鼻吸入、直肠、肠胃外、静脉或肌肉给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、丸剂、胶囊等，或制成液体制剂如水或油悬浮剂，或其它液体制剂如糖浆、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。优选的形式是片剂、包衣片剂、胶囊、栓剂、鼻喷雾剂、贴剂和注射剂。

下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

具体实施方式

实施例1：

金果榄干燥药材2.5kg，用95％溶液50升回流提取2次，每次2小时，合并两次提取液，减压浓缩得到浸膏120g，用2升水分散后，以6L氯仿分三次萃取；减压浓缩萃取部位，得到粗品20g，将粗品用500毫升甲醇加热溶解，趁热过滤，滤液置4℃冰箱中冷藏过夜，析出古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素组合物结晶，滤纸过滤，干燥，得到组合物12g，取组合物10g，与50g硅胶混合拌样，加到已装好的硅胶柱顶端，以石油醚：氯仿(20:1～5:1)系统梯度洗脱，TLC跟踪，合并含成分相同的洗脱液，减压浓缩至干，得到古伦宾单体200mg，异古伦宾3.7g，去氧黄藤苦素3.0g。

实施例2：

片剂：活性成分(三种单体或组合物)       17g

乳糖                                   200g

玉米淀粉                               50g

硬脂酸镁                               3g

制成1000片

制备方法：将活性成分、乳糖和淀粉混合，用水均匀湿润制成软材，把湿润后的混合物制粒，过20目筛，80℃烘干，加入硬脂酸镁，再过筛，然后将混合物压片，每片重270mg，活性成分含量为17mg。

实施例3：

输液：活性成分    2g

氯化钠            9g

注射用水          100000ml

制成1000瓶

制备方法：将活性成分和氯化钠溶解于100000ml的注射用水中，加0.01％活性炭吸附，中间体检测，0.45um膜过滤，分装，100ml/瓶，灭菌，检验即得。

实施例4：

古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素对大鼠佐剂性关节炎防治作用。

1实验动物

SD大鼠，雌雄兼用，体重180-220g。

2.实验模型和测试方法

取大鼠80只，随机分成8组，用排水法测定正常状态下右关节以下的溶积(ml)，然后于每鼠左后足踝皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂致炎，分别于致炎后6、12、18、24、48h同法测量致炎足的容积，以致炎前后差值表示其肿胀度，以观察药物对大鼠佐剂性关节炎原发病变的影响。并分别于致炎后的第12、15、19d同法测定非致炎足(右足)的容积变化，以观察药物对大鼠佐剂性关节炎大鼠继发性炎症肿胀的影响。致炎前3d按表6所示的剂量灌胃给药，对照组给予等容量的生理盐水，每日一次，连续给药至取材之日的前一天。

大鼠致炎19d后处死，在非致炎侧踝关节上方0.5cm处摘取肿胀足爪，纵向切开，放入存有5ml生理盐水的试管中，4℃浸泡过夜，离心取上清，-20℃保存待测。PGE2的含量测定采用放免法，按试剂盒说明书操作。

3统计分析：

全部实验结果均以均数±标准误表示。用student t-检验比较两组间数据的显著性差异，P<0.05，表示差异有显著性意义。

4试验结果：

表1.古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素对大鼠佐剂性关节炎原发性炎症的影响(n＝10)

a与空白对照比较，p<0.05.b与空白对照比较，p<0.01.

结果表明，与对照组比较，古伦宾高剂量组，异古伦宾高剂量组，去氧黄藤苦素高剂量组在致炎后6-48h均有显著抑制大鼠佐剂性关节炎原发足肿胀的作用。

表2.古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素对大鼠佐剂性关节炎继发性足肿胀的影响(n＝10)

a与空白对照比较，p<0.05.b与空白对照比较，p<0.01.

结果表明，对于大鼠佐剂性关节炎继发性关节炎的足肿胀，与对照组比较，古伦宾高剂量组，异古伦宾高剂量组，去氧黄藤苦素高低剂量组在11d，15d，19d均有显著抑制作用。

表3.古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素对大鼠关节浸液内PEG₂的影响(n＝10)

a与空白对照比较，p<0.05.

结果表明，对于治疗19d后的非致炎足关节液中的PEG₂的含量古伦宾高剂量组，异古伦宾高剂量组，去氧黄藤苦素高低剂量均有显著下调作用。

实施例5：

古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素对II型胶原(CIA)诱导的关节炎的抑制作用

1 实验动物

Wistar大鼠，130-150g。

2.模型复制和动物分组

随机从130只大鼠中选10只作为正常对照，其余用于模型复制。参照文献的方法配制成II型胶原乳剂，沿大鼠背部及尾根部分五点皮内注射，每点0.05ml，15d后分两点皮内激发注射。正常对照组予以9.0g/L氯化钠注射液同法注射。初次免疫30d后参照关节炎指数评分标准对模型复制效果进行评估，评分达6分以上的大鼠(约50％)被用于继续实验。将模型复制成功的大鼠随机分为7组，每组10只，分别作为CIA模型组和给药组。给药剂量按下表并预先用丙二醇配制成注射液。3天用药1次。

3 取材

大鼠称质量，用20ml/L戊巴比妥钠2.5ml/kg腹腔麻醉，腹主动脉采血，常规分离血清，用于检测细胞因子；大鼠仰位固定，打开膝关节腔，用9.0g/L氯化钠注射液1ml冲洗关节腔，收集关节腔液，用于检测细胞因子。

4 细胞因子的检测

按照ELISA试剂盒公司提供的说明进行操作。

5 统计学方法

用SPSS 11.5统计软件进行统计分析，组间差异采用t检验，结果用均值±方差表示。

6 试验结果

表4 各组外周血和关节腔中TNFα含量

a与模型组比较，p<0.01.b与空白对照比较，p<0.05.

CIA模型组中，外周血和关节腔内的TNFα含量最高，经给药治疗后，大鼠外周血和关节腔内TNFα水平明显下降，表明药物能降低TNFα水平(P<0.01)。

表5 各组外周血和关节腔中IL-6含量

a与模型组比较，p<0.01.b与空白对照比较，p<0.05.

CIA模型组中，外周血和关节腔内的IL-6含量最高，经给药治疗后，大鼠外周血和关节腔内IL-6水平明显下降，表明药物能降低IL-6水平(P<0.01)。

表6 各组外周血和关节腔中IL-10含量

a与模型组比较，p<0.01.b与空白对照比较，p<0.05.

CIA模型组中，外周血和关节腔内的IL-10含量显著降低，经给药治疗后，大鼠外周血和关节腔内IL-10水平明显上升，表明药物能提高IL-10水平(P<0.01)。

Claims (1)

1、古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素中的一种或几种在制备治疗关节炎药物中的应用，所述古伦宾、异古伦宾、去氧黄藤苦素为从植物中分离纯化得到的化合物或化学合成的化合物，所述关节炎为风湿性或类风湿性关节炎。