CN102670584A

CN102670584A - 没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗良性前列腺增生药物中的应用

Info

Publication number: CN102670584A
Application number: CN2011100657024A
Authority: CN
Inventors: 温尧林; 李鹏; 李坤
Original assignee: JIANGSU KAIJI BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: JIANGSU KAIJI BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2011-03-18
Filing date: 2011-03-18
Publication date: 2012-09-19

Abstract

本发明公开了一种没食子儿茶素没食子酸酯在制备防治良性前列腺增生药物中的应用，通过丙酸睾酮诱导的去势大鼠前列腺增生模型，选用没食子儿茶素没食子酸酯作为治疗药物，观察对大鼠前列腺重量、指数的影响及前列腺组织的病理学改变。研究结果表明，没食子儿茶素没食子酸酯能够显著降低模型动物的前列腺重量与前列腺指数，改善前列腺组织的病理学症状。

Description

没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗良性前列腺增生药物中的应用

技术领域

本发明属于制药领域，涉及没食子儿茶素没食子酸酯的新的医药用途，具体涉及没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗良性前列腺增生药物中的应用。

背景技术

良性前列腺增生^[1](benign prostatic hyperplasia，BPH)是老年男性常见的生理病变，近年来发病率呈明显上升的趋势；据统计，60岁以上男性中该病的发病率达70％以上，严重影响老年患者的身体健康与生活质量。临床上用于治疗BPH的药物主要有^[2]：α1-肾上腺受体拮抗剂、5α-还原酶抑制剂与天然产物制剂等。由于天然产物制剂不良反应少，适合长期使用，近年来引起了人们的广泛关注。

没食子儿茶素没食子酸酯((-)-Gallocatechin gallate，GCG)结构式如下图所示，分子式：C₂₂H₁₈O₁₁，美国化学文摘收录号(CASNo.)：4233-96-9；是绿茶中儿茶素类化合物的主要组成部分，具有抗氧化、降低胆固醇与甘油三酯等作用^[3]。但未见单体化合物GCG用于制备抗良性前列腺增生药物的报道。

以下为GCG的分子结构式：

参考文献：

[1]Untergasser G.，Madersbacher S.，Berger P.Benign prostatic hyperplasia：age-related tissue-remodeling[J].Experimental Gerontology，2005，40(3)：121-128

[2]魏强，李涛.良性前列腺增生的药物治疗.中华老年医学杂志[J].2006，25(7)：557-559

[3]Lee S.M.，Kim C.W.，Kim，J.K et al.GCG-Rich Tea Catechins are Effective in Lowering Cholesterol andTriglyceride Concentrations in Hyperlipidemic Rats[J].Lipids，2008，43(5)：419-429

[4]温尧林，李坤.一种非表型儿茶素单体的制备方[P]，中国专利：201010022636.8，2010-01-11

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于寻找一种安全、可靠，能够有效降低BPH患者前列腺重量与前列腺指数，改善前列腺组织的病理学改变。从而能够有效预防及治疗良性前列腺增生。本发明针对上述技术问题提供一种没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗良性前列腺增生药物中的应用。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗良性前列腺增生药物中的应用。

上述的应用，没食子儿茶素没食子酸酯作为药效成分用于制备抗良性前列腺增生作用药物，可单独或与制药可接受的助剂结合，按照常规方法制成医药上可接受的任意一种剂型。所述的剂型优选为口服液、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、片剂或脂质体。更进一步优选为胶囊剂、片剂或脂质体。

本发明人采用丙酸睾酮诱导的去势大鼠前列腺增生为模型，对众多候选化合物进行筛选，发现没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)能显著降低模型动物的前列腺重量与前列腺指数，改善前列腺组织病理学症状，显示出良好的应用前景。

本发明涉及的没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)可在市场上购买获得，如美国sigma公司的纯度98％没食子儿茶素没食子酸酯((-)-Gallocatechin gallate，GCG)等。也可以自行制备，其制备方法在申请号为201010022636.8的中国专利中已经公开^[4]。

本发明涉及的没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)用于制备防治良性前列腺增生(BPH)的药物，可制成口服液、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、片剂、脂质体等剂型。

附图说明

图1为各组大鼠前列腺腹叶组织病理切片结果(HE，×100)。

其中A、正常；B、模型；C、GCG低剂量组；D、GCG高剂量组；E、非那雄胺。

具体实施方式

下面的实施例可以使本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠前列腺的影响

1、实验动物

雄性健康SD(Sprague-Dawley)大鼠，清洁级，体重250±20g，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，合格证编号：00800160568，生产许可证号：SCXK(沪)2008-0016。

2、造模、分组与给药

上述大鼠35只，普通饲养一周以适应环境。经普通观察无异常后，随机取7只作正常对照组，其余28只进行造模。先用乙醚麻醉后，无菌条件下，常规消毒皮肤，经阴囊摘除双侧睾丸，残端处结扎，以确保止血，缝合皮肤，滴加一定量的氧氟沙星注射液，以防止感染。肌肉注射(im)青霉素40万u/只，连续3天。

手术1周后将去势大鼠随机分为模型组、没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)低剂量组、没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)高剂量组、阳性药非那雄胺组，每组7只。从去势第8天起，每只大鼠皮下注射(sc)溶解在橄榄油中的丙酸睾酮4mg/kg·d，正常组sc橄榄油，连续30天。同时灌胃给药。各供试品及对照药组以蒸馏水作溶剂，加5％CMC-Na作为混悬剂，配置成一定浓度的混悬液。从去势第8天起，按1mL/100g体重分别给予一定浓度的样品，正常组与模型组给相同体积的蒸馏水，每日1次，连续30天。

3、取材及称重

给药30天，于末次给药24h后，每组大鼠称体重、麻醉后，断颈处死大鼠，迅速取出前列腺各叶组织(腹叶和背侧叶)，用滤纸吸除表面液体，剥离脂肪组织，电子天平称其湿重。计算大鼠前列腺及各叶指数。

4、前列腺组织病理学检测

大鼠前列腺组织病理学观察采用常规苏木素-伊红(HE)染色，光镜下观察前列腺组织形态学和结构变化，包括腺腔、上皮细胞及间质水肿、充血和炎细胞浸润情况。具体操作步骤如下：

(1)取材与固定：上述大鼠前列腺组织称重后，取腹叶一半组织固定于10％中性福尔马林溶液中。

(2)脱水、透明、浸蜡：采用自动脱水机，程序设置为：AF液90min→85％乙醇90min→95％乙醇I 90min→95％乙醇II 90min→无水乙醇I 90min→无水乙醇II 90min→二甲苯I 30min→二甲苯II 30min→石蜡I 90min→石蜡II 90min→石蜡III 90min。

(3)石蜡包埋。

(4)切片与贴片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，连续切片，厚4μm，50℃水中烫平，再贴到载玻片上。

(5)烤片：60℃烤片30min。

(6)HE染色：过程如下，二甲苯I 5min→二甲苯II 5min→无水乙醇2min→95％乙醇2min→80％乙醇2min→流水冲洗2min→蒸馏水1min→苏木素染色6min→流水冲3min→盐酸酒精分化2s→流水冲洗2min→氨水反蓝5s→水洗1min→伊红10s→蒸馏水1s→80％乙醇2s→95％乙醇2s→无水乙醇2s(2遍)→二甲苯2s

(7)中性树胶封片

前列腺组织学改变病评判标准：正常为“-”，病变范围占全视野1/4以下为“+”；病变改变明显，范围占1/3左右为“++”；病变严重，范围占全视野1/2左右为“+++”。

5、统计学处理

所有结果均采用SPSS11.5统计软件处理，前列腺重量及指数计量资料均以MEAN±S.E.M表示，组间差异采用单因素方差分析(F检验)，方差具有齐性，两两比较则采用LSD检验，以P＜0.05为显著性差异标准，P＜0.01为非常显著性差异标准。组织病理改变为等级资料，因此统计分析采用秩和检验，所有组比较采用Kruskal-Wallis H检验，其他组与模型组多重比较采用Mann-Whitney U检验，用Bonferroni法对检验水准进行校正，校正后的检验水准为0.004，即P＜0.004视为有统计学意义。

6、试验结果

6.1对大鼠前列腺各叶重量的影响

表1各处理组对去势大鼠前列腺各叶重量的影响(MEAN±S.E.M)

注：与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

6.2对大鼠前列腺各叶指数的影响

表2各处理组对去势大鼠前列腺各叶指数的影响(MEAN±S.E.M)

注：与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

6.3、对大鼠前列腺组织病理学的影响

表3各处理组对丙酸睾酮致BPH大鼠前列腺腹叶病理改变的影响

注：与模型组比较，P＜0.004视为有统计学意义

图1为各组大鼠前列腺腹叶组织病理切片结果(HE，×100)。其中，A为正常；B为模型；C为GCG低剂量组；D为GCG高剂量组；E为非那雄胺。

6.4结果总结

试验结果表明，没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)具有显著降低丙酸睾酮诱导的去势大鼠前列腺前列腺重量、前列腺指数，改善模型大鼠前列腺病理变化，与模型组相比，差异具有显著性(^*P＜0.05)和非常显著性(^**P＜0.01)；与阳性药非那雄胺接近，具有良好的应用前景。

实施例2没食子儿茶素没食子酸酯脂质体的制备

将卵磷脂与胆固醇以及没食子儿茶素没食子酸酯按质量为3g∶1g∶0.1g的比例溶解在无水乙醇和氯仿(无水乙醇和氯仿的体积比为1∶1，总体积为15ml)的混合溶液中并加入维生素E 2mg得到溶液A，将适量叶酸33mg溶解在330μl二甲亚砜中得溶液B，将溶液A、B混合并加入9g乳糖得混合物C，将该溶液C除去溶剂得到磷脂膜；将所得磷脂膜溶于水，经水化后得到脂质体，将该脂质体通过0.2μm滤膜过滤，将脂质体溶液在高压均质机中在压力200-400Mpa下逐级增压均质2h，得到的脂质体为澄明均一的溶液。将得到的脂质体溶液冷冻干燥除去溶剂，得到冻干的没食子儿茶素没食子酸酯脂质体。

将冻干的没食子儿茶素没食子酸酯脂质体粉末加双蒸水振摇溶解，并用Ls-230型激光散射粒度测定仪(美国Beckman Coulter公司)测定粒径。脂质体的粒径分别为90.8nm±5.2nm(n＝3)。用扫描电子显微镜观察所得脂质体。在电子显微镜下观察到脂质体为圆球，大小与用粒度仪测定的结果相吻合。用超滤法测定脂质体包封率为90.3％，48h渗漏率为1.2％。

实施例3没食子儿茶素没食子酸酯胶囊剂的制备

处方：没食子儿茶素没食子酸酯500g，淀粉15g，硬脂酸镁5g(0.5％左右)，制成1000粒。

制备：将没食子儿茶素没食子酸酯、淀粉、硬脂酸镁过80目筛后，混合均匀，装入空胶囊中，即得。

实施例4没食子儿茶素没食子酸酯片剂的制备

处方：没食子儿茶素没食子酸酯500g，淀粉40g，10％淀粉浆24g，干淀粉23g(4％左右)，硬脂酸镁3g(0.5％左右)制成1000片。

制备：将没食子儿茶素没食子酸酯过80目筛，与淀粉混匀，加淀粉浆制成软材，用14目筛制粒后，置70～80℃干燥后于12目筛整粒，加入干淀粉及硬脂酸镁混匀后，压片，即得。

Claims

1.没食子儿茶素没食子酸酯在制备防治良性前列腺增生药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：没食子儿茶素没食子酸酯作为药效成分用于制备抗良性前列腺增生作用药物，可单独或与制药可接受的助剂结合，按照常规方法制成医药上可接受的任意一种剂型。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的药物剂型为：口服液、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、片剂或脂质体。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的药物剂型为：胶囊剂、片剂或脂质体。