CN101022853A - 用于预防前列腺癌和治疗前列腺肥大（bph）的提取自中国绿茶或其它植物的儿茶素甚至多酚类的混合物 - Google Patents

Abstract

描述了具有下述特性的制剂和药物制剂的使用形式。该制剂为一种包括提取自中国绿茶或其它植物的儿茶素或多酚类的混合物的产品，已经在临床初步研究中，在处于发生疾病风险的受试者组中证实了能不借助于其它常用药物或治疗方案和无副作用的情况下，以足够全身剂量给药时的化学预防前列腺癌的有效性。在本研究的受试者中，当以足够剂量全身给药时，可不借助于其它药物或常用治疗方案且无副作用，并证实该制剂同样可有效减轻良性前列腺肥大症状且尤其是与排尿困难相关的情况。

Description

用于预防前列腺癌和治疗前列腺肥大（BPH）的提取自中国绿茶或其它植物的儿茶素甚至多酚类的混合物

发明背景

自古代以来就已知中国绿茶(茶属(Camellia sinensis))的药用特性。基于现代医学知识，茶具有大量有益特性，其中有刺激、消化、利尿、止痛和解毒特性。归因于绿茶的对健康的有益作用是因如下事实所致：不同于红茶或其它类型的茶，它是按照能够避免发酵过程并且能够更好地保存大量物质以及叶中的活性成分的操作步骤制备的，并且其中绿茶对男性健康的积极作用的良好部分特别归因于儿茶素，即具有强抗氧化作用并且能够消除自由基的多酚类化合物。

儿茶素为一族属于不同分子的化合物。实际上，绿茶的多酚含量约占30％干重并且由黄烷醇类、黄烷双醇、类黄酮和酚酸类组成。中国绿茶由此为大量纯化儿茶素的极佳主要来源，并且已知这些分子还可提取自可提供少量它们的其它植物，而获得的物质表现出与获自中国茶的物质相同的特性。在任何情况下，黄烷醇类占绿茶多酚类的较大部分并且通常称作儿茶素的名称。绿茶中最重要的儿茶素如下：

(-)-表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)；

(-)-表没食子儿茶素(EGC)；

(-)-表儿茶素-3-没食子酸酯(ECG)；

(+)-没食子儿茶素-3-没食子酸酯(GCG)；

(-)-表儿茶素(EC)；

(+)-没食子儿茶素(GC)；

(+)-儿茶素(C)。

生物碱类，如咖啡因、可可碱和茶碱约占茶叶干重的4％并且在我们如下描述的制剂中，它们被除去以防止被施用和可能不理想的作用(参见下文)。一般而言，一杯绿茶(200ml)含有80-90g儿茶素，其中的EGCG大于50％(1)。黄烷醇类易于被氧化并且构成相应的0-醌类。黄酮醇类和醌类可以作为氢的受体或供体起作用。此外，茶的多酚类有效地与氧的活性种反应。在黄酮醇类的结构中，在5-7位上的羟基和1位上的氧使得6和8位上的碳原子在酶促和非酶促氧化过程中成为高度亲核性的。茶的黄酮醇类可以在氧化聚合反应中通过形成C-O键或C-C进行氧化缩合。存在三种机制，通过它们多酚类发挥其抗氧化作用，即：

a)′儿茶酚′结构的存在对茶的儿茶素赋予强镇静能力，它们可以连接游离铁和亚铁离子，这些离子是形成氧的反应基所必需的并且降低其细胞浓度；

b)EGCG、EGC和ECG在消除超氧化物和氢氧化物阴离子基团中起着极为有效的作用，所述的超氧化物和氢氧化物阴离子基团即可以损害DNA和细胞的其它分子并且可以启动脂质过氧化反应的更具反应性的氧种类中的两种；和

c)茶黄烷醇类可以与过氧基反应并且这种方式终止了脂质过氧化的链反应。反应性氧种类可以通过DNA损害、基因表达或影响生长和细胞分化而满足癌发生中的重要作用。

近来的研究已经证实以绿茶输注或粉末形式给予的多酚类化合物在胃水平被快速吸收并且分布在血浆的蛋白质部分和含有高密度脂蛋白(HDL)的部分中。血浆中的儿茶素含量与吸收的量成正比增加。EGCG在血浆中的半衰期稍超过5小时。已经在血浆和尿中鉴定了甲基化化合物或与葡糖醛酸或硫酸酯共轭形式的儿茶素的不同代谢物。由于考虑到已经证实血浆中的抗氧化能力可以持续比摄取的多酚类的平均寿命长的时间期限，所以认为儿茶素的代谢物具有有益于人的特性。在任何情况下，将所述的制剂每隔6小时给药1次可以确保活性成分且特别是EGCG的恒定提供，EGCG看起来是活性最大的组分。

上述作为强力抗氧化剂起作用的能力具有多酚类且尤其是EGCG作为强力抗应激和抗老化因子的效果，这种效果针对的是均在病理情况，如某些与男性衰老明确相关的前列腺癌中起致病作用的情况。此外，必须理解EGCG和其它儿茶素揭示出它们自身在不同的实验模型中能够抑制睾酮的作用。已知产生男性征的作用也涉及前列腺病理情况且特别是前列腺癌的发生。这构成了证实全身给予能够提供足够剂量的EGCG和儿茶素如何可以有效地对处于风险中的患者中化学预防前列腺癌的科学推理。

额外的原理来源于已经表现出这些化合物可能的抗增殖和抗肿瘤作用的大量体外研究。这些对实验室动物和人的相同研究再次显示出每天给予至多1g儿茶素不存在毒性或其它间接作用。

具有这类有意义特性的这些分子不仅以中国绿茶为典型，而且存在于大量其它类型的植物中，诸如葡萄藤和以地中海环境为典型产生的植物。因此，显然利用甚至来自其它非中国绿茶的来源的这些化合物或某些纯化分子的混合物的任意产品都属于本专利知识产权的范围。

发明内容

EGCG和儿茶素(多酚类)的混合物在化学预防前列腺癌发作中的有效性的实验证据

我们自身在体外和临床前期动物模型中证实了EGCG和儿茶素的化学预防有效性的证据。

在通过稳定表达抗原SV40(PNTIa)无限增殖化的人前列腺上皮细胞系中的正常人前列腺上皮细胞(EPIT)和分离自骨转移灶(PC-3)的前列腺癌细胞中进行的研究证实了EGCG依赖于PNTIa和PC-3的选择性作用。通过对上述培养中的细胞给予增加量的EGCG的剂量进行的剂量响应研究表明，尽管EPIT的生长在治疗后无显著改变，但是EGCG在PNTIa中的IC₅₀远低于PC-3，从而证实尤其是无限增殖化细胞(对肿瘤发生而言较不明显)进入增殖阻滞并且通过编程性细胞死亡达到细胞死亡。这提示EGCG和儿茶素可特别有效地抑制致瘤性转化的初发期。

为了证实这种推定的可靠性，我们对狗或前列腺的临床前期动物模型继续进行了研究。用于体内前列腺肿瘤研究的多种重要临床前期模型之一由转基因小鼠TRAMP组成。这些动物在重组同型接合子时在成年期中发生前列腺癌的几率为100％。疾病的发展可以概括为人体疾病的特发的发作期和进行期。实际上，它从前列腺上皮内瘤形成(PIN)类损害开始，随后产生完全扩展的瘤形成组织损害，随后发展成雄激素不敏感和攻击性表型，然后在晚期发展到前列腺外和转移病灶。我们在我们的实验室中证实给予与下述在饮用水中一种特性相似的从绿茶中提取的儿茶素制剂在化学预防大鼠TRAMP前列腺癌中极为有效。这种瘤形成在治疗动物中的发作减少为80％(在100个瘤形成中有20个病例，与之相比，在未治疗动物中的100个瘤形成中有100个病例)。此外，化学预防证实无效的动物在任何情况下均表现出限于前列腺而无转移病灶的存在的肿瘤损害。

我们在体外和我们未证实任何不良或间接作用的动物模型中获得的结果提示服用儿茶素可以导致阻断肿瘤过程且由此有利地对体内疾病的任何进展产生作用。这种必要条件对尝试化学预防男性的前列腺癌是合理的。

我们由此计划和进行研究以便验证这一推定。为了这一目的，使用双盲随机化操作步骤，用下述制剂600mg/天与安慰剂(每天分3次给药)给具有发生瘤形成疾病的高危受试者人群(通过前列腺针吸活组织检查证实高度瘤前病变PIN的受试者)治疗总计1年期限。

在对高度PIN的初次试验后，每隔3个月召集1次受试者定时接受9盒胶囊，该量足以持续3个月的治疗。每位受试者已经预先包括在传入泌尿科完成的′注意等候′程序中。每隔3个月召回1次各位受试者完成病历、客观检查、总和游离PSA。从本研究开始的第6和12个月开始，由泌尿科进行病史、客观检查、经直肠的声象图检查和前列腺作图。活组织检查样品的数量在8-18之间。在观察期过程中，进行最初的前列腺针吸活组织检查以便显示高度的PIN，在6个月时1次并且在1年时1次，除外如下病例：PSA突然上升、其它临床参数改变或由受试者在客观检查过程中报告的特征症状发作提示进行早期检查的合理必要性。

在诊断出腺癌的情况下，患者立即退出本研究(化学预防失败)并且被送入相关泌尿科医师提示的推荐疗法中。

将受试者随访至少1年的期限并且在本研究过程中，在6和12个月时进行如下评价：

-在本研究的两个分组(治疗组与安慰剂组)中前列腺癌发作的病例数；

-癌发作与PIN诊断日期相比的平均时间；

-客观症状；

-Gleason程度；

-临床阶段；

-PSA图的变化形式；

-前列腺体积。

在客观检查过程中的每次检查时，医师需要注意在使用儿茶素治疗过程中可能的间接作用或不良反应。

结果：在受试者的治疗分组中，经验证从治疗开始后6个月和1年后均无前列腺癌发作病例，而在使用安慰剂治疗的分组中，分别有30％和40％发作，这一数值与预计的结果极为接近。实际上，从对受试者的科学文献的调查中可以推断前列腺癌在具有高度PIN的受试者中的风险度在1年内为50％。

总之，证实下述制剂在6个月和1年治疗后可极为有效地预防具有高风险度发作(高度PIN)的患者前列腺癌的发作。

极为重要的是强调全身给予上述剂量的为本专利主题的制剂在整个治疗过程中未对患者表现出任何风险，也无任何的间接作用或不良反应，且由此所述的作用与不存在毒性风险或任何其它间接作用相关。这种治疗特别被受试者充分接受；后者普遍报告感觉良好和更具有活力。

所述产品在良性前列腺肥大(BPH)中的作用和治疗特性

作为极为强力的抗氧化剂和抗应激和抗老化因子起作用的前言中提及的能力提示其对前列腺肥大症状的有益作用。实际上，已知这类情况在前列腺肥大中起致病作用，前列腺肥大显然与男性衰老相关。此外，应强调证实这些化合物能够在不同实验模型中抑制睾酮的作用。产生男性征的作用也涉及前列腺病理情况和肥大的发生。这构成了证实全身给予能够提供足够剂量的儿茶素的制剂如何可以有效预防和减轻与良性前列腺肥大相关的症状的科学推理。另外极为重要的是强调全身给予下述剂量的为本专利主题的制剂在治疗过程中始终未对患者表现出任何风险且由此所述的作用与不存在毒性风险或任何其它间接作用相关。

由我们自身对足够数量的临床病例进行的实验表明每日给予3粒含有上述制剂的胶囊而不借助于其它方案或药物因如下效果而在治疗3个月后证实有效：明显减轻了前列腺症状且特别是改善排尿困难(持续时间、等待时间、膀胱排空)和减轻了晚间排尿困难，同时能够进行连续的睡眠且由此对患者的生活质量带来了明显改善。记录的有益作用证实与使用已知和常用的治疗方案获得的那些有益作用相差无几或通常优于它们，所述的常用治疗方案如α-结石药、植物保健品和抗-生男性征药(phinasterids)。

产品描述

对志愿的人体受试者给予的产品表现为各自含有200mg如下提取自来源于中国最佳地区的绿茶或如上所述的其它植物来源的多酚类(儿茶素)并且如下构成的混合物的胶囊或片剂。

总儿茶素(EC，ECG，EGC，GCG，EGCG)：	不低于80
		其中的EGCG：	不低于50
咖啡因：	低于1.5
		没食子酸，其它儿茶素和儿茶素的氧化衍生物	低于20

正如可以观察到的，给该提取物除去咖啡因以使咖啡因含量降至极低水平(低于1.5％)，它相当于含有低于半杯茶中平均值的数值。这种处理允许使用制剂，而不会产生激发态并且就晚间全身给药而言不会干扰睡眠。推荐的剂量为每天3粒胶囊，持续第一个3个月，这相当于5-10杯绿茶中的多酚含量，能够与主食一起服用。该剂量考虑到了如下事实：在东方国家(其中前列腺病理情况、BPH和前列腺癌的发生率远低于西方国家)中，典型的消费为每天10杯绿茶。此外，据科学文献中报导，每天对21-71岁年龄的男性和女性志愿者给予1g儿茶素无有害作用。

具有这类有意义特性的这些分子不仅以中国绿茶为典型，而且存在于大量其它类的植物、肉和藤本植物产品以及以地中海环境为典型的植物产品中。因此，显然利用甚至来自非中国绿茶的来源的这些化合物或某一种或某些纯化分子的混合物的任意产品都属于本发明的保护范围。

客观了解的产品的作用和治疗特性

由我们对足够数量的临床病例进行的实验表明每日给予3粒含有上述制剂的胶囊而不借助于其它治疗方案或药物在治疗6个月和1年后将处于风险(高度PIN)中的患者中的前列腺癌发作减至0。

为了预防男性中前列腺癌的发作并且对良性前列腺肥大获得有益效果，基于上述描述，要求保护上述制剂和不同比例的成分和活性植物特性的所有可能的组合及变型且尤其是儿茶素的知识产权，因为我们发现使用不同比例的儿茶素或使用纯化的EGCG或其它各纯化的儿茶素获得的类似产品仍然保持有益特性，不过，我们的实验看起来显示出我们自身使用的组合和比例在有效性、吸收与代谢、产品可储存性和结果的再现性方面提供了更大优势。此外，甚至上述中的其它类植物作为纯化儿茶素的主要来源的应用也属于本专利的范围，因为已知决定所述产品有益特性的活性成分为儿茶素(多酚类)且特别是EGCG，并且这些分子甚至可以不同的量和不同的效率，甚至自其它与分类学术语中的茶密切相关的其它植物并且与如葡萄藤及其产品和以地中海类营养物为典型的很多其它植物中提取。

要求保护所述制剂在上述治疗目的中的应用。特别地，由此要求保护所述的制剂在生产药物和非处方药产品或天然或同种疗法药物在用于化学预防和治疗目的的治疗良性前列腺肥大(BPH)及其症状和预防男性前列腺癌发作中的应用，无论是将载体或赋形剂加入到制剂中，还是给药方式或剂量和使用或保存的不同操作步骤。

因为完成了从体外细胞模型到临床前期动物模型，一直到男性人体的我们的研究，所以鉴定了在化学预防人类前列腺癌和治疗良性前列腺肥大症状中的有效性活性成分，它们属于不依赖于采用的纯化操作步骤的这一权利要求的范围，因为是其应用表现出了有益特性。由此要求保护在男性中表现出相同有益特性的类似合成物的知识产权。

权利要求书(按照条约第19条的修改)

1.化合物的混合物制备口服给药组合物用于预防诊断具有瘤前病变PIN的个体中前列腺癌发作的用途，其中：

(a)所述化合物的混合物包括至少80％的总儿茶素，其中至少50％的总儿茶素是EGCG，少于20％的总儿茶素是没食子酸和其它儿茶素；其中：

(b)使用一种方案并以有效预防个人中前列腺癌发作的浓度施用所述组合物至少6个月。

2.权利要求1的用途，其中所述化合物分离自绿茶。

3.权利要求1的用途，其中所述化合物与分离自绿茶的化合物相同。

4.权利要求2的用途，其中所述混合物被配制成用于口服的胶囊。

5.权利要求4的用途，其中所述胶囊包括200mg的混合物。

6.权利要求5的用途，其中所述方案包括每日施用三次剂量。

7.权利要求6的用途，其中在至少6个月的时间内持续施用所述胶囊。

8.权利要求6的用途，其中在至少12个月的时间内持续施用所述胶囊。

9.提供能够在诊断患有瘤前病变PIN的个体中有效防止前列腺癌发作的产品的方法，包括：

接收包括至少80％的总儿茶素，其中至少50％的总儿茶素是EGCG，少于20％的总儿茶素是没食子酸和其它儿茶素的化合物的混合物在诊断患有瘤前病变PIN的个体中能有效防止前列腺癌发作的信息；

将所述混合物包括在产品中；和

将所述产品提供给诊断患有瘤前病变PIN的个体。

10.权利要求9的方法，其中所述接受的信息是来自人类临床试验。

11.权利要求9的方法，其中所述人类临床试验显示在至少10位诊断患有瘤前病变PIN的患者中有8位前列腺癌的发作被预防。

12.权利要求9的方法，其中所述化合物的混合物来自绿茶提取物。

13.药物或营养组合物，包括：

具有至少80％的总儿茶素，其中至少50％的总儿茶素是EGCG，少于20％的总儿茶素是没食子酸和其它儿茶素的化合物的混合物；

其中所述混合物被配制成用于口服给药；和

与用所述混合物以大约600mg/天在至少6个月的时间内施用完全预防了诊断患有瘤前病变PIN的个体中前列腺癌发作有关的信息。

14.权利要求13的药物或营养组合物，其中以大约600mg/天在至少12个月的时间内施用所述混合物预防了诊断患有瘤前病变PIN的个体中前列腺癌的发作。

15.权利要求13的药物或营养组合物，其中所述施用是200mg，每天三次施用。

16.权利要求13的药物或营养组合物，其中所述信息进一步包括前列腺症状得到改善的信息。

17.多酚化合物的混合物制备口服给药组合物以预防诊断患有瘤前病变PIN的个体中前列腺癌发作的用途，其中所述混合物包括绿茶儿茶素提取物，当混合物以总剂量600mg/天，一天三次口服施用至少6个月时，被证实能够在患有瘤前病变PIN的个体中有效预防前列腺癌的发作。

18.权利要求17的用途，其中所述口服施用的所述组合物能够进一步改善前列腺症状。

19.化合物的混合物制备口服给药组合物用于预防诊断具有瘤前病变PIN的个体中前列腺癌发作的用途，其中：

(a)所述口服施用组合物包括至少480mg的总儿茶素，其中至少300mg的总儿茶素是EGCG，少于120mg的总儿茶素是没食子酸和其它儿茶素；且其中：

(b)使用一种方案并以有效预防个体中前列腺癌发作的浓度施用所述组合物至少6个月。

20.权利要求19的用途，其中所述方案包括每天三次口服给药。

21.绿茶儿茶素的混合物制备口服给药组合物用于阶段特异性预防人类前列腺癌的用途，其中所述阶段是高阶段瘤前病变PIN，其中，当混合物以有效预防发作的剂量和方案口服施用至少6个月时，被证实能够在高阶段瘤前病变PIN的个体中预防前列腺癌的发生。

Claims (10)

1.提取自中国绿茶或其它植物的儿茶素或多酚类的制剂，其具有预防前列腺癌发作并且获得对良性前列腺肥大症状的有益性的化学预防功效，其特征在于它们包括如下成分：

 总儿茶素(EC，ECG，EGC，GCG，EGCG)：     不低于80  其中的EGCG：     不低于50  咖啡因：     低于1.5  没食子酸，其它儿茶素和儿茶素的氧化衍生物     低于20

其中：

(-)-表没食子儿荼素-3-没食子酸酯(EGCG)；

(-)-表没食子儿荼素(EGC)；

(-)-表儿茶素-3-没食子酸酯(ECG)，

(+)-没食子儿茶素-3-没食子酸酯(GCG)；

(-)-表没食子儿茶素(EC)；

(+)-没食子儿茶素(GC)；

(+)-没食子儿茶素(C)。

2.权利要求1的制剂，其特征在于不同比例的成分和活性植物成分中且尤其是儿荼素的所有可能的组合和变化形式均用于预防男性前列腺癌发作的目的。

3.权利要求1的制剂，其特征在于EGCG和另一种儿茶素单独或以彼此不同的相互关系存在。

4.权利要求1的制剂，其特征在于将上述那些中的其它植物种类用作纯化儿茶素的主要来源，因为已知确定所述产品的有益特性的活性成分为儿茶素(多酚类)且特别是EGCG，并且这些分子也是可提取的，即使以不同量和不同功效从与分类学术语中的茶极为相关的其它植物、和从如葡萄藤的其它植物及其产品和以地中海类营养物为典型的大量植物中提取。

5.上述权利要求的制剂，其特征在于合成物在男性中表现出相同的有益特性。

6.使用不同比例的儿荼素或纯化的EGCG或其它按照上述权利要求纯化的各儿茶素获得的产品。

7.上述权利要求中一项或多项中的不同比例的成分和活性植物成分中所有可能的组合和变化形式的制剂在用于化学预防和治疗目的的预防男性前列腺癌发作中的应用。

8.上述权利要求中的多项之一所述的制剂在生产药物和非处方药产品或草药或天然或同种疗法药物用于化学预防和治疗目的的治疗良性前列腺肥大(BPH)及其症状和预防男性前列腺癌发作中的应用，无论是将载体或赋形剂加入到制剂中，还是给药方式或剂量和使用或保存的不同操作步骤。

9.上述权利要求中的多项之一所述的制剂的应用与上述植物中其它类植物作为纯化儿茶素的主要来源的应用的组合。

10.上述权利要求中的多项之一的使用有效活性成分的制剂在化学预防人前列腺癌和治疗良性前列腺肥大症状中的应用，其中所述的有效活性成分不依赖于采用的纯化操作步骤和在男性中表现相同有益特性的合成类似物。