CN103690782B - 一种治疗更年期综合症的中药组合物、制备方法与质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗更年期综合症的中药组合物、其制备方法与质量检测方法，其由以下重量份的组分制成：女贞子25-45份，黄精10-20份，山茱萸10-20份，枸杞子10-20份墨旱莲10-20份，制何首乌13-23份，黄连5-15份，知母10-22份，龙骨10-22份，牡蛎5-14份，娑罗子8-18份，佛手5-15份，玄参5-15份，香橼6-18份，合欢皮5-14份。制备方法科学合理。质量标准包括鉴别枸杞子、黄连、知母的方法，和对齐墩果酸进行含量测定的方法。药效学试验取得了良好试验结果，毒理试验表明临床拟用剂量是安全的，是一种治疗更年期综合症的安全、有效的药物，具有治则准确，配方新颖，功效针对性强，临床疗效确切，无明显毒副作用特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗更年期综合症的中药组合物，具体地说是以中草药为原料制备的胶囊剂，本发明还涉及该中药组合物的制备方法和质量检测方法。
背景技术
更年期综合征是妇女绝经前后出现的一种常见症候群，近年来由于社会、精神、心理等导致生活压力的增加及工作家庭难以两全的矛盾，及其他诸多因素，致使该病发病率呈急剧上升趋势，据初步分析，我国现在50岁以上的妇女就有1.5亿人以上，到2005年将达到1.6亿，到2010年达1.8亿，此病虽不直接危及人们的生命，但却给患者带来很大的痛苦，严重的影响人们的健康和生存质量。目前对该病的治疗尚无理想方法，国外治疗该病大多采用体外补充激素以治疗更年期综合症，即雌激素替代疗法（ERT），但随着时间的推移，人们发现，接受ERT的妇女患子宫内膜癌的概率大大上升，虽然加用孕激素后，症状有所改善，但还是面临诸多难以解决的问题。如：乳房胀疼，不规则出血，白带增多，恶心呕吐，血压升高，体重增加，身体浮肿等副作用。而且产生潜在致癌危险，使子宫内膜癌的发生率增加2.31倍，若服用时间延长，发病率将会升到8.8倍，并可使乳腺癌的发病风险增加2-6倍。近年来中医药发挥在治疗慢性疾病方面的独特优势，从改善机体内在环境入手，温补肾阳，滋补肝肾，活血化瘀，疏肝解郁，镇静安神，增强机体抗病能力等多层次、全方位进行治疗，真可谓整体调整，标本兼治。但从这类药物的临床观察中发现，目前已上市的中成药，虽然数量不少，但有的疗效欠佳，有的剂型落后，患者不宜接受，也有的价格偏高，而且由于本病人群逐渐增多，药物需要量大，目前已上市的治疗更年期综合症的中成药还不能满足市场需要，因此研制高效低毒的具有广阔市场前景的该类药物是十分必要的。
发明内容
本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种治疗更年期综合症的中药组合物。
本发明的另一目的是提供该中药组合物的制备方法。
本发明的再一目的是提供该中药组合物的质量检测方法。
为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：
本发明技术方案来源和依据：本方为我院治疗更年期综合征的临床协定有效经验方，本方是根据长期临床实践，精心配伍确定的，经动物药效学试验、急性毒性试验和长期毒性试验，表明采用本方剂制成的胶囊具有滋补肝肾，泻火安神，理气解郁之功效，对肝肾阴虚型的更年期综合征具有较理想的治疗效果，安全无明显毒副作用。
祖国医学认为更年期综合症应属“绝经前后诸证”的范畴，其病机多为肾气渐衰，元气不充，阴阳失调，天癸日竭，冲任二脉及脏腑亏虚，因肝藏血，肾主精，肝肾同源，精血同源，肾阴不足水不涵木，必然导致肝阴不足，反过来肝阴不足又会使肾阴进一步亏损。依据《素问.三部九候论》“虚者补之”；《素问.至真要大论》“燥者润之”、“热者寒之”、“温者清之”；等治则，确立滋补肝肾，泻火安神，理气解郁的治法，本方以古方为基础，吸取现代最新科学成果，精心配伍，组成治疗更年期综合征的新药处方。
本发明的药物组合物是由以下重量份的原料药制成的：
女贞子25-45份；黄精10-20份；山茱萸10-20份；枸杞子10-20份；墨旱莲10-20份；制何首乌13-23份；黄连5-15份；知母10-22份；龙骨10-22份；牡蛎5-14份；娑罗子8-18份；佛手5-15份；玄参5-15份；香橼6-18份；合欢皮5-14份。
本发明药物组合物的最佳重量份配比是：
女贞子35份；黄精15份；山茱萸15份；枸杞子15份；墨旱莲15份；制何首乌18份；黄连10份；知母16份；龙骨16份；牡蛎9份；娑罗子13份；佛手10份；玄参10份；香橼12份；合欢皮9份。
所述女贞子、黄精、山茱萸等14味药材均为《中国药典》2010年版（一部）收载的品种，其质量均符合各品种项下有关的各项规定，龙骨为《山东省中药材标准》（2002年版）收载的品种，其质量符合《山东省中药材标准》（2002年版）第47页龙骨项下的各项规定。拣除杂质后，直接投料。
所述中药组合物还包括辅料淀粉和β-环糊精。其质量均符合《中国药典》2010年版（二部）各品种项下有关的各项规定。
本发明的中药组合物可以采用本领域的公知技术制成各种剂型，如片剂、丸剂、散剂、胶囊剂和颗粒剂等药学上可接受的剂型，优选为胶囊剂。
本发明的中药组合物可以采用以下制备方法：
按处方比例称取以上15味药物，黄连、山茱萸、女贞子加入8倍量（mL/g）85%（体积浓度）乙醇回流提取3h，滤过，药渣再加入6倍量（mL/g）同等浓度的乙醇，同上回流提取2次，每次2小时，滤过，合并三次醇提取液，减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.30～1.35（50℃测）的稠膏，药渣备用；佛手、香橼、2味药物，加入8倍量（mL/g）的水，蒸馏提取挥发油5～6小时（以挥发油的提取量不再明显增加为止），分出挥发油，用β-环糊精包结，置45～50℃干燥，粉碎，置阴凉干燥处备用。滤出提取挥发油后的水液，另器收集，药渣及上述醇提取后药渣合并于黄精、枸杞子、墨旱莲、制何首乌、知母、龙骨、牡蛎、娑罗子、玄参、合欢皮10味水煎药物中，加入8倍量（mL/g）的水煎煮2小时，滤过，药渣再加入6倍量（mL/g）的水，同上煎煮2小时，合并2次水煎液及上述提取挥发油后的水液，减压浓缩至相对密度1.06～1.10（50℃测）的药液，在充分搅拌下缓缓加入乙醇，使药液含醇量（mL/mL）为65%，加完后继续搅拌30分钟，置0～4℃静止24小时，滤过，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30～1.35℃（50℃测）的稠膏，与上述醇提取膏合并，按每个处方加入淀粉12份，混匀，置60～65℃真空干燥，粉碎，过60目筛，将β-环糊精挥发油包结物，用递增法与以上干膏粉混匀按每粒0.48g装入胶囊中，分装，即得。
本发明制剂的性状：本品为硬胶囊，内容物为棕褐色至深褐色粉末，偶见白色微粒；气微香，味微苦。
本发明对中药组合物的各主要组分进行了检测，提出了所述中药组合物的质量检测方法，包括鉴别方法、检查和含量测定方法，具体方法如下：
【鉴别】（1）取本品内容物2.5g，置100mL锥形瓶中，加水30mL溶解，转移至分液漏斗中，以乙酸乙酯提取2次（30，20mL），合并乙酸乙酯液，挥干，残渣以乙酸乙酯5mL使溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1g，加水30mL煎煮15分钟，放冷，滤过，滤液用乙酸乙酯提取2次（30，20mL），合并乙酸乙酯液，浓缩至1mL，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积分数比为4:3:0.8:0.2的甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
（2）取本品内容物2g，研细，加入1g硅藻土拌匀，置圆底烧瓶中，加甲醇50mL，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄连对照药材50mg，加甲醇5mL，加热回流15分钟，滤过，滤液补加甲醇至5mL，作为对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液5～10μL，对照药材溶液和对照品溶液各1μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积分数比2：3：4：0.5：2的甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个黄色荧光斑点。
（3）取本品内容物4g，加硅藻土3g拌匀，以三氯甲烷100mL回流提取1小时，放冷，滤过，药渣挥干，加入无水乙醇50mL回流提取1小时，放冷，滤过，加入浓度为36%-38%（g/ml）盐酸5mL加热回流提取1小时，以浓度为40%（g/ml）氢氧化钠调PH至中性，浓缩至无醇味，加水30mL，以乙醚萃取2次，每次20mL，合并乙醚液，以2%（g/ml）氢氧化钠洗涤2次每次20mL，再以水洗2次，每次20mL，弃去水液，乙醚液以无水硫酸钠10g脱水，放置10分钟，滤过，挥尽乙醚，残渣以甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取菝葜皂苷元对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液5μL，对照品溶液3μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为9:1的苯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积份数比为0.4:1.5:8的香草醛-硫酸-无水乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
【检查】应符合胶囊剂项下硬胶囊的有关各项规定（中国药典2010年版一部附录IL）。
【含量测定】照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥD测定）。
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水（体积份数比为85:15，含0.2%磷酸和0.04%三乙胺）；流速1.0mL.min-1；检测波长为210nm；柱温：25-30℃。理论板数按齐墩果酸峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备：精密称取齐墩果酸对照品适量，置10mL量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品内容物适量，研细，取约2g，精密称定，加硅藻土3g，置索氏提取器中，加甲醇100mL，加热回流5小时，提取液蒸干，残渣用10%（g/ml）盐酸40mL使溶解，100℃水浴加热2小时，取下，冷却，定量转移至分液漏斗中，分别用50，40，40mL乙醚萃取3次，合并乙醚液，用蒸馏水60mL洗涤1次，弃去水洗液，乙醚液挥干，残渣用甲醇溶解并定容至10mL量瓶中，摇匀，再精密量取该溶液3mL至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含女贞子以齐墩果酸（C30H48O3）计，不得少于2.0mg。
本发明所述的中药组合物具有滋补肝肾，泻火安神，理气解郁之功效；主治肝肾阴虚型的更年期综合征。口服，温开水送服，一次5粒，一日三次。
本发明以中医理论为指导，在长期临床实践中总结出来的治疗更年期综合症的有效经验方及其制剂，本发明疗效显著，且未见明显的毒副作用。为将其研制成中药新药，按《药品注册管理办法》申报的技术要求，进行了制备工艺、质量标准、稳定性考察、毒理学、主要药效学等各项基础试验，确定了科学合理的制备工艺，制订了可控性强的质量标准，主要药效学试验取得了与临床疗效相吻合的良好试验结果，毒理试验表明临床拟用剂量是安全的，因此本品是一种具有滋养肝肾，宁心除烦，除蒸退热之功效，又能舒肝解郁润肠通便，用于治疗更年期综合症的药物，现已按6类中药新药的技术要求，完成了申报临床前的各项基础试验，本品种与上市的同类品种相比，具有治则准确，配方新颖，功效针对性强，无明显毒副作用等特点。
为证明本发明的中药组合物的治疗效果，发明人提供了主要药效学试验资料：
（一）实验材料
1.实验动物与饲料
Wistar大鼠，3-5月龄；自然更年期大鼠，13-15月龄，SPF级，雌性，山东大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（鲁）20030004。
昆明种小鼠，SPF级，雌雄各半，山东大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（鲁）20030004。
实验动物标准饲料：山东省实验动物中心提供，许可证号：SCXK(鲁)0040021。
2.药品与试剂
妇更乐胶囊：本院制剂室提供，采用实施例1的药物组合物，批号：20070302。
更年安胶囊：沈阳东新药业有限公司生产，国药准字Z20054101，批号：080502。
0.9%氯化钠注射液，山东鲁抗辰欣药业有限公司，批号080715703。
戊巴比妥钠，union进口分装，上海化学试剂采购供应站分装厂，批号：86-01-22。
复方新洁尔灭消毒液，山东利尔康消毒科技有限公司，批号：080303。
硫酸庆大霉素注射液，山东鲁抗辰欣药业有限公司，批号：080304306。
热性中药：制附片20g、干姜20g，水煎制成50%煎剂备用；95%乙醇，国营山东单县有机化工厂，批号：061023。
无水乙醇，天津市化学试剂一厂，批号：061118。
雌二醇（E2）试剂盒，批号18245103，有效期至：2009-08。
促卵泡激素（FSH）试剂盒，罗氏诊断（上海）有限公司生产，批号：18224303，有效期至：2009-07。
黄体生成激素（LH）试剂盒，罗氏诊断（上海）有限公司生产，批号：15046801，有效期至：2009-11。
5-羟色胺(5-HT)标准品，Sigma公司，含量在99.0%以上。
去甲肾上腺素（NE）标准品，Sigma公司，含量在99.0%以上。
过氧化脂(LPO)测试盒，南京建成生物工程研究所提供，批号：20081110。
超氧化物歧化酶(SOD)测试盒，南京建成生物工程研究所提供，批号：20081122。
丙二醛(MDA)测试盒，南京建成生物工程研究所提供，批号：20081121。
ACTH放免试剂盒，北京北方生物技术研究所提供，批号：20080601。
活性炭粉，广东汕头市西陇化工厂生产。
3.仪器
DDL-5型冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂制造。
GB303电子天平，Mettler-Totado公司生产。
NikonM-35FA显微镜，日本尼康公司生产。
RocheElecsys2010全自动电化学发光分析仪，罗氏诊断（上海）有限公司生产。
2100分光光度计，上海和利仪器有限公司制造。
RF-5301PC荧光分光光度计，日本岛津制造。
YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪，山东省医学科学院设备站制造。
KNOEPRO型全自动生化分析仪，芬兰康艺仪器公司制造。
（二）方法及结果
1.妇更乐胶囊对“更年期”并阴虚内热症大鼠的影响
采用切除双侧卵巢加灌服热性中药的二步造模方法进行造模：
3～4月龄Wistar雌性大鼠60只，体重200±20g左右，用1%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉，腹位固定。取最末肋骨下，腋中线上，约距脊柱2cm处，剪毛，切开皮肤和背肌约1.5-2.0cm，切口视野中可见一乳白色发亮的脂肪团，分离脂肪团，便可见到粉红色或黄红色的卵巢。剪取时，先将卵巢下输卵管（包括脂肪团）用丝线结扎，再摘除卵巢，双层缝合手术伤口。同法摘除另一侧卵巢。另取10只大鼠进行手术暴露卵巢但不切除，然后双层缝合手术伤口作为假手术对照组。术后庆大霉素抗感染。卵巢摘除第4、5、6、7天逐只进行阴道涂片检查，以检查卵巢摘除是否完全，涂片呈现动情期反应(涂片反应的标准见下)的动物弃除不用，选择去势完全的动物供实验用。涂片方法为以左手背位固定，右手取一预先吸有生理盐水0.1-0.2mL的钝头吸管，细心插入大鼠阴道内3mm，反复抽吸3次，滴一滴于载玻片上，置显微镜下进行细胞学检查，判断去势是否完全。动情周期从阴道涂片细胞学变化可分为四期，按下述标准判断：
1)间情期(dioestrus，D)：主要是大量的多核白细胞，也有少量的上皮细胞。
2)动情前期(pro-oestrus，P)：有大量的上皮细胞呈粒状胞浆，尚有少量角化(无核)的上皮细胞，但无白细胞。
3)动情期(oestrus，O)：主要是大量角化上皮细胞，形状大而不规则，间有少量上皮细胞。
4)动情后期(mefoestrus，M)：有大量白细胞，亦有融合的角化上皮细胞。
术后第7天选取无动情期变化的大鼠灌胃热性中药20mL/kg，假手术对照组灌胃相同体积的生理盐水，每天1次，连续14天。
将造模大鼠随机分为5组，每组10只。假手术对照组、模型对照组灌胃等体积的生理盐水，更年安胶囊组（阳性药对照），灌胃更年安胶囊0.729g/kg，为临床用药量的3倍；妇更乐胶囊3个剂量组，分别灌胃妇更乐胶囊0.648g/kg、1.296g/kg、1.944g/kg，据“实验动物与人按表面积等效量换算比率”折算，依次为临床用药量的1、1.5、3倍。各给药组均在末次灌服热性中药24小时后，开始治疗性给药，连续15天。观察及测定指标包括：毛发、舌质、体重，饮水量，肛温测量，阴道上皮细胞角化检测，血清E2、FSH、LH测定，子宫、肾上腺指数测定，脑组织5-HT、NE测定，血清LPO、SOD、MDA测定。结果如下：
（1）假手术对照组和给药组大鼠毛色均匀有光泽，模型对照组大鼠略显萎顿，有2-3只大鼠体毛干枯，毛色偏黄不均匀。动物造模后，模型鼠呈现舌尖色红，体重增长减慢，饮水量增加等变化。各组大鼠造模前、后及治疗后体重变化见表1。
表1试验前后动物体重的变化
*P＜0.05，**P＜0.01与假手术对照组比较；△P＜0.05，△△P＜0.01与模型对照组比较
由表1结果可见，造模后各组体重增长减慢，体重增长值与假手术对照组比较，差异均具有显著性（P＜0.05）；治疗15天后，妇更乐胶囊组体重增长值大于模型对照组（P＜0.05或P＜0.01），更年安胶囊组体重增长值亦大于模型对照组（P＜0.05）。
表2试验前后动物饮水量的变化
*P＜0.05与假手术对照组比较；△P＜0.05与模型对照组比较
表2结果显示：大鼠造模后饮水量明显增加，其差值与假手术对照组比较，差异均具有显著性（P＜0.05）；治疗15天后，妇更乐胶囊组和更年安胶囊组大鼠饮水量明显较少，与模型对照组比较，差异均具有显著性（P＜0.05）。
（2）测量大鼠造模前、造模后、治疗后的肛温，测前禁食12小时，肛表插入深度为3cm，每次测3分钟。结果见表3。
表3妇更乐胶囊对模型大鼠肛温的影响
*P＜0.05，**P＜0.01与假手术对照组比较；△P＜0.05，△△P＜0.01与模型对照组比较
表3结果显示：造模后大鼠肛温明显上升，上升幅度与假手术对照组比较，差异具有显著性（P＜0.05或P＜0.01）；治疗15天后，妇更乐胶囊肛温下降幅度大于模型对照组（P＜0.05或P＜0.01）。
（3）分别于造模后、治疗后作阴道涂片，以Nikon光学显微镜，20×镜下，计数100个上皮细胞中角化细胞和未角化细胞所占百分数，比较各组间差异，结果见表4。
表4妇更乐胶囊对模型大鼠阴道上皮细胞角化程度的影响
***P＜0.001与假手术对照组比较；△P＜0.05，△△P＜0.01与模型对照组比较
模型对照组较假手术对照组阴道上皮细胞角化程度明显下降，妇更乐胶囊各组与更年安胶囊组较模型对照组阴道上皮细胞角化程度明显升高。
（4）于末次给药并禁食12小时后，各组大鼠用1%的戊巴比妥钠溶液按30mg/kg体重进行腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，3000r/min离心15min，取血清，采用放射免疫分析法测定E2、FSH、LH含量，按各药盒说明书操作。结果见表5。
表5妇更乐胶囊对模型大鼠血清性激素的影响
**P＜0.05，**P＜0.01与假手术对照组比较；△P＜0.05，△△P＜0.01与模型对照组比较
假手术对照组比较，模型对照组大鼠血清E2水平明显降低（P＜0.05），血清FSH、LH水平明显升高（P＜0.05；P＜0.01）。用药治疗15天后妇更乐胶囊高剂量组血清E2含量较模型对照组升高（P＜0.05），血清FSH、LH水平明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。
（5）处死大鼠后，立即剖取子宫、肾上腺，用电子天平称湿重，按下式计算上述脏器指数。结果见表6。
脏器指数=脏器重量（mg）/体重（g）
表6妇更乐胶囊对模型大鼠子宫指数、肾上腺指数的影响
*P＜0.05，**P＜0.01与假手术对照组比较；△P＜0.05与模型对照组比较
由表6可以看出：模型对照组与假手术组相比，子宫指数、肾上腺指数均明显降低，妇更乐胶囊对“更年期”拟阴虚内热证大鼠子宫指数具有增高趋势，对肾上腺指数具有显著提高作用。
（6）处死大鼠后，于冰盘上迅速取脑组织，称湿重后液氮保存，采用荧光分光光度法，参照文献操作，测定脑组织中5-HT、NE水平，并计算5-HT/NE值。结果见表7。
与假手术对照组比较，模型对照组大鼠脑组织NE含量明显降低，5-HT含量、5-HT/NE值明显升高。用药治疗15天后妇更乐胶囊可使模型大鼠脑组织中降低的NE水平明显增高（P＜0.05或P＜0.01），升高的5-HT明显降低（P＜0.05或P＜0.01），明显降低5-HT/NE值（P＜0.01或P＜0.001）。与对照药物更年安胶囊组相比，相同临床用量的情况下，妇更乐胶囊对大鼠脑组织NE含量的提升，5-HT含量、5-HT/NE值的降低具有更为明显的作用。
表7妇更乐胶囊对模型大鼠脑组织5-HT、NE的影响
**P＜0.01,***P＜0.01与假手术对照组比较；△P＜0.05，△△P＜0.01,△△△P＜0.001与模型对照组比较
（7）于末次给药并禁食12小时后，各组大鼠用1%的戊巴比妥钠溶液按30mg/kg体重进行腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，静置凝固后3000r/min，离心10min，分离血清，分装，-20℃储存，备测脂质过氧化物(LPO)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛（MDA）含量。LPO、MDA含量测定用硫代巴比妥酸法，SOD活性测定用邻苯三酚自氧化法，按各试剂盒说明书操作，结果见表8。
表8妇更乐胶囊对模型大鼠血清LPO、SOD、MDA的影响
**P＜0.01,***P＜0.01与假手术对照组比较；△P＜0.05，△△P＜0.01与模型对照组比较
与假手术对照组比较，模型对照组大鼠血清SOD活性明显降低（P＜0.01），血清LPO、MDA水平明显升高（P＜0.01或P＜0.001）。用药治疗15天后妇更乐胶囊可使模型大鼠血清SOD活性明显升高（P＜0.05或P＜0.01），血清LPO、MDA水平明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。
结论：妇更乐胶囊能明显升高“更年期”拟阴虚内热证大鼠阴道上皮细胞角化程度；明显升高模型大鼠血清E2水平，降低FSH、LH水平；对模型大鼠子宫指数具有增高趋势，对肾上腺指数具有显著提高作用；可使模型大鼠脑组织NE水平明显增高，5-HT水平、5-HT/NE值明显降低；使模型大鼠血清SOD活性明显升高，血清LPO、MDA水平明显降低。提示妇更乐胶囊治疗更年期综合征的作用机制与调节“更年期”拟阴虚内热症大鼠生殖内分泌及体内自由基代谢作用相关。
2.妇更乐胶囊对自然更年期大鼠的影响
以自然更年期Wistar大鼠为观察对象，以血清雌二醇（E2）、促卵泡生成素（FSH）、促黄体生成素（LH）及脑组织单胺类神经递质（去甲肾上腺素NE、5-羟色胺5-HT）和子宫、肾上腺指数等的改变为观察指标，进一步探讨妇更乐胶囊对更年期综合征的作用机理。
购进大鼠后，常规适应性饲养一周，观察一般状态，对自然更年期大鼠进行阴道分泌物涂片，进行动情周期观察，选取连续5天不出现动情期的大鼠进行实验。将合格大鼠随机分为5组，即更年期组、更年安胶囊组、妇更乐胶囊低剂量组、妇更乐胶囊中剂量组、妇更乐胶囊高剂量组，每组10只，另设青年对照组大鼠10只。青年对照组、更年期组灌胃等体积的生理盐水，更年安胶囊组（阳性药对照），灌胃更年安胶囊0.729g/kg，为临床用药量的3倍；妇更乐胶囊3个剂量组，分别灌胃妇更乐胶囊0.648g/kg、1.296g/kg、1.944g/kg，据“实验动物与人按表面积等效量换算比率”折算，依次为临床用药量的1、1.5、3倍。每日给药一次，连续15天。观察及测定指标包括：阴道上皮细胞角化检测，血清E2、FSH、LH测定，子宫、肾上腺指数测定，脑组织5-HT、NE测定，血浆ACTH测定。
（1）分别于药前、治疗15天后作阴道涂片，以Nikon光学显微镜，20×镜下，计数100个上皮细胞中角化细胞和未角化细胞所占百分数，比较各组间差异。结果见表9及图1-5。
由表9及图1-5可以看出：更年期对照组大鼠较青年对照组大鼠阴道上皮细胞角化程度明显下降，妇更乐胶囊中、高剂量组较更年期对照组大鼠阴道上皮细胞角化程度明显升高。
（2）于末次给药并禁食12小时后，各组大鼠用1%的戊巴比妥钠溶液按30mg/kg体重进行腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，3000r/min离心15min，取血清，采用放射免疫分析法测定E2、FSH、LH含量，按各药盒说明书操作，结果见表10。
表9妇更乐胶囊对更年期大鼠阴道上皮细胞角化程度的影响
***P＜0.001与青年对照组比较；△P＜0.05与更年期对照组比较
表10妇更乐胶囊对更年期大鼠血清性激素的影响
**P＜0.01与青年对照组比较；△P＜0.05与更年期对照组比较
由表10可以看出：更年期对照组与青年对照组相比，血清E2含量明显降低（P＜0.01）。妇更乐胶囊高剂量组及更年安胶囊组与更年期对照组相比，E2含量明显上升，有显著性差异（P＜0.05），说明妇更乐胶囊可升高血清E2水平。更年期对照组与青年对照组相比，血清FSH、LH含量明显升高（P＜0.01），经治疗后，妇更乐胶囊中、高剂量组可使更年期大鼠升高的血清FSH、LH含量明显下降（P＜0.05），说明妇更乐胶囊可降低血清FSH、LH水平。
（3）大鼠处死后，立即剖取子宫、肾上腺，用电子天平称湿重，按下式计算上述脏器指数。结果见表11。
脏器指数=脏器重量（mg）/体重（g）
表11妇更乐胶囊对更年期大鼠子宫指数、肾上腺指数的影响
**P＜0.01与青年对照组比较；△P＜0.05与更年期对照组比较
更年期对照组与青年对照组相比，子宫指数、肾上腺指数均明显降低，妇更乐胶囊对更年期大鼠子宫指数具有增高趋势，对肾上腺指数具有显著提高作用。
（4）处死大鼠后，于冰盘上迅速取脑组织，称湿重后液氮保存，采用荧光分光光度法，参照文献操作，测定脑组织中5-HT、NE水平，并计算5-HT/NE值。结果见表12。
表12妇更乐胶囊对更年期大鼠脑组织5-HT、NE的影响
*P＜0.05,**P＜0.01与青年对照组比较；△P＜0.05与更年期对照组比较
与青年对照组比较，更年期模型组大鼠脑组织NE含量明显降低，5-HT含量、5-HT/NE值明显升高。用药治疗15天后妇更乐胶囊可使模型大鼠脑组织中降低的NE水平明显增高（P＜0.05），升高的5-HT明显降低（P＜0.05），明显降低5-HT/NE值（P＜0.05）。
（5）于末次给药并禁食12小时后，各组大鼠用1%的戊巴比妥钠溶液按30mg/kg体重进行腹腔注射麻醉，腹主动脉取血2mL，加入盛有100μL12%EDTA试管中抗凝，立即放入冰水浴中，1小时后取出，置入低温离心机4℃离心15min，1500r/min，取出血浆，分装，-20℃保存，备测血浆ACTH，按试剂盒说明书操作，结果见表13。
表13妇更乐胶囊对更年期大鼠血浆ACTH的影响
**P＜0.01与青年对照组比较；△P＜0.05与更年期对照组比较
与青年对照组比较，模型组大鼠血浆ACTH含量明显升高（P＜0.01）。用药治疗15天后妇更乐胶囊高剂量和更年安胶囊可使模型大鼠升高的血浆ACTH明显降低（P＜0.05）。
结论：妇更乐胶囊能明显升高更年期大鼠阴道上皮细胞角化程度；明显升高更年期大鼠血清E2水平，降低FSH、LH水平；对更年期大鼠子宫指数具有增高趋势，对肾上腺指数具有显著提高作用；可使更年期大鼠脑组织NE水平明显增高，5-HT水平、5-HT/NE值明显降低；能明显降低更年期大鼠血浆ACTH水平。提示妇更乐胶囊治疗更年期综合征的作用机制与调节更年期大鼠生殖内分泌及脑组织神经递质释放作用有关。
3妇更乐胶囊对小鼠自主活动次数的影响
昆明种小鼠50只，雌雄各半，按体重随机分为5组，每组10只。正常对照组灌服等体积生理盐水；更年安胶囊组（阳性药对照），灌服更年安胶囊1.053g/kg，为临床用药量的3倍；妇更乐胶囊3个剂量组，分别灌服妇更乐胶囊0.936g/kg、1.404g/kg、2.808g/kg，据“实验动物与人按表面积等效量换算比率”折算，依次为临床用药量的1、1.5、3倍。每日给药，连续7天，末次给药后1小时，将小鼠放入自主活动记录仪内，适应3分钟后，记录小鼠5分钟内活动次数。结果见表14。
表14妇更乐胶囊对小鼠自主活动的影响
*P<0.05与正常对照组比较
由表14看出，与正常对照组比较，妇更乐胶囊高剂量组小鼠自主活动次数明显减少（P<0.05），妇更乐胶囊中剂量组对小鼠自主活动次数具有减少趋势。
结论：妇更乐胶囊能明显减少小鼠自主活动次数，提示本品具有明显的镇静作用。
4.妇更乐胶囊对小鼠汗腺分泌的影响
昆明种小鼠50只，雌雄各半，按体重随机分为5组，每组10只。正常对照组灌服等体积生理盐水；更年安胶囊组（阳性药对照），灌服更年安胶囊1.053g/kg，为临床用药量的3倍；妇更乐胶囊3个剂量组，分别灌服妇更乐胶囊0.936g/kg、1.404g/kg、2.808g/kg，据“实验动物与人按表面积等效量换算比率”折算，依次为临床用药量的1、1.5、3倍。每日给药，连续7天，末次给药后1小时，将小鼠仰位固定，用75%的酒精清洁两后足掌，然后均匀涂2%碘酊，并以电吹风吹干，再撒上薄薄的一层干燥淀粉，然后用30倍放大镜观察记录足掌的兰色汗点数，结果见表15。
表15妇更乐胶囊对小鼠足跖汗腺分泌的影响
*P<0.05，**P<0.01与正常对照组比较
妇更乐胶囊中、高剂量组均能明显抑制小鼠足跖汗腺的分泌。
结论：妇更乐胶囊能明显抑制小鼠足跖汗腺的分泌，提示本品具有明显的抑制汗液分泌作用。
5.妇更乐胶囊对小鼠小肠推进长度的影响
昆明种小鼠50只，雌雄各半，按体重随机分为5组，每组10只。正常对照组灌服等体积生理盐水；更年安胶囊组（阳性药对照），灌服更年安胶囊1.053g/kg，为临床用药量的3倍；妇更乐胶囊3个剂量组，分别灌服妇更乐胶囊0.936g/kg、1.404g/kg、2.808g/kg，据“实验动物与人按表面积等效量换算比率”折算，依次为临床用药量的1、1.5、3倍。每日给药，连续7天，在进行炭墨推进实验前小鼠禁食12小时，将含10%炭粉的药物给小鼠灌胃，给药后20分钟脱颈椎处死动物，打开小鼠腹腔分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲部的小肠，置于托盘上轻轻将小肠拉成直线，测量小肠长度作为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿的距离作为“墨汁在肠内推进长度”，按下列公式计算墨汁推进率，结果见表16。
表16妇更乐胶囊对小鼠小肠推进长度的影响
*P<0.05，**P<0.01与正常对照组比较
妇更乐胶囊低、中、高剂量组小鼠的墨汁推进率均高于正常对照组，且妇更乐胶囊高剂量组作用优于同等高剂量的更年安胶囊组，表明妇更乐胶囊具有促进小鼠小肠运动的作用。
结论：妇更乐胶囊能使小鼠小肠内墨汁推进距离及墨汁推进率明显增加，提示本品具有明显的润肠通便作用。
综上所述，妇更乐胶囊对“更年期”并阴虚内热症大鼠和自然更年期大鼠具有升高其阴道上皮细胞角化程度，血清E2水平，降低FSH、LH水平，提高模型大鼠子宫指数、肾上腺指数和脑组织NE水平的作用；对昆明种小鼠具有明显的镇静作用，抑制汗液分泌作用和润肠通便作用。与本药物滋养肝肾，宁心除烦，除蒸退热之功效，又能舒肝解郁，润肠通便之功效相吻合。
本发明进一步提供了大剂量妇更乐胶囊灌胃后动物的急性毒性反应，为临床应用提供安全性依据。
经预试无法测出LD50，故改测其最大给药量。取健康昆明种小鼠40只，雌雄各半，禁食12小时（不禁水），随机分为给药组和对照组，每组20只。给药组按0.4ml/10g（即相当于给胶囊内容物量为14.17g/kg，相当于生药量64.96g/kg）给小鼠灌胃，一日两次，使一日内给胶囊内容物总量达28.34g/kg（相当生药量129.92g/kg）。对照组给予小鼠同等体积的蒸馏水灌胃，均连续观察14天。注意观察记录动物的饮食、活动、大小便及有无死亡等情况。结果见表17-18。
表17给药前后小鼠体重变化
表18小鼠最大给药量测定结果
*一日给胶囊内容物为28.34g/kg，相当于生药量129.92g/kg。
给药之后小鼠活动自如，未发现明显异常反应，无死亡。小鼠灌胃给药14天后全部存活，活动自如，毛发光滑，饮食正常，粪便在给药2小时后为软便，给药24小时后粪便即成形，呼吸道、眼及口腔等处无异常分泌物，体重均有增加，无明显差异，未发现中毒症状及死亡，尸检小鼠重要脏器未见明显病理变化。
根据国家食品药品监督管理局新药审评办法《有关中药部分的修订和补充规定》附件五“毒理研究的技术要求”，在一次给药无法测出LD50时，可作动物最大给药量测定。妇更乐胶囊对小鼠最大给药量测定结果为：灌服妇更乐胶囊溶液0.4ml/10g，一日两次，累计给药胶囊内容物为28.34g/kg（相当生药量为129.92g/kg），相当于临床成人拟用量的236.2倍，小鼠在该剂量下无明显异常，无一只死亡，表明本药物临床拟用剂量安全范围较大。
为验证其临床用药的安全性，我们进行了6个月大鼠口服给药的长期毒性试验，现将试验方法及结果报告如下：
妇更乐胶囊由本院制剂室研制，为保证临床用药的安全，我们采用大鼠对其长期毒性进行了试验研究，旨在发现动物因连续给药产生的长期毒性反应；了解药物毒性反应的靶器官；确定无毒性反应的安全剂量；观察停药后毒性反应的恢复情况。方法：取健康Wistar大鼠120只，6～7周龄，体重75g左右，雌雄各半，实验前观察适应2周，随机分四组：空白对照组、妇更乐胶囊高、中、低剂量组。每组雌雄各15只，分笼饲养，每笼5只。妇更乐胶囊高、中、低剂量组分别按生药26.4g/kg、13.2g/kg、6.6g/kg剂量灌胃给药，灌胃容量为1.5ml/100g体重，空白对照组灌胃等容量的水，各组连续灌胃给药6个月（26周），实验期间注意观察动物的饮食、活动及大小便有无异常。每周称1次体重，同时根据体重及时调整给药量。实验第13周每组随机取10只（雌雄各半）测血常规及血生化，取血后解剖各鼠，取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、子宫、卵巢等脏器，计算其脏器系数，并经10%福尔马林固定进行病理检查；第26周每组随机取12只动物（雌雄各半），测血常规、血生化，取血后解剖各鼠，取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、子宫、卵巢等脏器，称重，计算其脏器系数，并经10%福尔马林固定进行病理检查；余下动物（每组8只）停止给药继续饲养4周，重复以上实验检查，实验结果由t检验进行统计处理。结果见表19-27。
表19：实验13周大鼠血常规的变化
与对照组比较P>0.05
表20：实验第13周大鼠血生化的变化
与对照组比较P>0.05
从表19、表20中看出，给药13周各剂量组的血常规、血生化各项指标与对照组比较无明显变化。
表21：实验第26周大鼠血常规的变化
与对照组比较p>0.05
从表21看出，给药26周各剂量组血常规各项指标与对照组比较差别无显著意义。
表22：实验第26周大鼠血生化的变化
与对照组比较P>0.05
从表22看出，给药各组血生化各项指标与对照组比较差别无显著意义。
表23：实验第13周大鼠主要脏器的脏体比值
与对照组比较P>0.05
由表23看出，给妇更乐胶囊13周大鼠各主要脏器系数与对照组比较均无明显变化。
表24：实验第26周大鼠的主要脏器的脏体比值
与对照组比较：P>0.05
由表24看出，给妇更乐胶囊26周大鼠各主要脏器系数与对照组比较无明显变化。
病理组织学实验结果表明，口服妇更乐胶囊13周、26周，其高、中、低剂量对大鼠主要脏器组织结构均无明显损伤；对大鼠主要脏器系数无明显影响。
表25：对停药恢复饲养8周后大鼠血常规的影响
从表25看出，停药恢复4周，各给药组大鼠的血常规与对照组比均无显著性差异。
表26：对停药恢复饲养4周后大鼠血生化的影响
与对照组比较均P>0.05
从表26看出，停药恢复4周，各给药组大鼠的血生化与对照组比均无显著性差异。
病理组织检查显示，停药4周后各给药组主要脏器的组织结构与对照组相似，无明显病理改变。
表27：对大鼠恢复期的脏器系数的影响
与对照组比较均P>0.05
从表27看出，停药恢复4周，给药各组大鼠的主要脏器系数与对照组比较差别均无显著意义。
以上结果显示，大鼠停药饲养4周后，对照组及妇更乐胶囊高、中、低剂量组的大鼠血常规、血生化及组织病理学检查均无明显异常。表明长期应用妇更乐胶囊停药后4周，无延迟毒性反应。
结论：给大鼠每日灌胃妇更乐胶囊，连续26周，其高剂量26.4g/kg达临床用量的50倍，对大鼠一般状况，血常规，肝肾功能及主要脏器均无毒性反应，体重随试验周期增加，表明妇更乐胶囊大剂量长期应用无明显毒性反应，临床应用其常用量是安全的。药后26周，停药恢复8周与对照组比较，妇更乐胶囊高、中、低剂量组的大鼠血常规、血生化及组织病理学检查均无明显异常。表明：长期应用妇更乐胶囊停药后8周，无延迟毒性反应。
附图说明
图1为青年对照组大鼠阴道涂片照；
图2为更年期模型组大鼠阴道涂片照片；
图3为更年安胶囊组大鼠阴道涂片照片；
图4a为妇更乐胶囊高剂量组大鼠阴道涂片照片；
图4b为妇更乐胶囊中剂量组大鼠阴道涂片照片；
图4c为妇更乐胶囊低剂量组大鼠阴道涂片照片；
图5为处方中枸杞子的薄层鉴别图，其中，1.实施例1样品，2.实施例2样品，3.实施例3样品，4.枸杞子对照药材，5.缺枸杞子空白溶液；
图6为处方中黄连的薄层鉴别图，其中，1.实施例1样品，2.实施例2样品，3.实施例3样品，4.黄连对照药材，5.盐酸小檗碱对照品，6.缺黄连空白溶液；
图7为处方中知母的薄层鉴别图，其中，1.实施例1样品，2.实施例2样品，3.实施例3样品，4.知母对照药材，5.菝葜皂苷元对照品，6.缺知母空白溶液；
具体实施方式
下面通过具体实例对本发明进行进一步的阐述，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。
实施例1一种治疗更年期综合症的中药组合物
【配方】女贞子350g黄精150g山茱萸150g
枸杞子150g墨旱莲150g制何首乌180g
黄连100g知母160g龙骨160g
牡蛎90g娑罗子130g佛手100g
玄参100g香橼120g合欢皮90g
其中，女贞子、黄精、山茱萸等14味药材均为《中国药典》2010年版（一部）收载的品种，其质量均符合各品种项下有关的各项规定，龙骨为《山东省中药材标准》（2002年版）收载的品种，其质量符合《山东省中药材标准》（2002年版）第47页龙骨项下的的各项规定。
还包括辅料淀粉，β-环糊精，其质量均符合《中国药典》2010年版（二部）各品种项下有关的各项规定。
采用如下制备方法将中药组合物制成胶囊剂：
【制法】按处方量称取以上15味药物，黄连、山茱萸、女贞子加入8倍量（mL/g）85%（体积浓度）乙醇回流提取3小时，滤过，药渣再加入6倍量（mL/g）同等浓度的乙醇，同上回流提取2次，每次2小时，滤过，合并三次醇提取液，减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.30～1.35（50℃测）的稠膏，药渣备用；佛手、香橼2味药物，加入8倍量（mL/g）的水，蒸馏提取挥发油5～6小时（以挥发油的提取量不再明显增加为止），分出挥发油，加入2倍量的95%乙醇使溶解，供包结备用，另称取相当于9倍量挥发油的β-环糊精，加入相当于β-环糊精20倍量的水，微热使溶解，在充分搅拌下缓缓滴入上述备用挥发油乙醇液，滴完后继续搅拌3小时，冷至室温，置0～4℃静止12小时以上，滤出包结物，置45～50℃干燥，粉碎，置阴凉干燥处备用。滤出提取挥发油后的水液，另器收集，药渣及上述醇提取后药渣合并于黄精、枸杞子、墨旱莲、制何首乌、知母、龙骨、牡蛎、娑罗子、玄参、合欢皮10味水煎药物中，加入8倍量（mL/g）的水煎煮2小时，滤过，药渣再加入6倍量（mL/g）的水，同上煎煮2小时，合并2次水煎液及上述提取挥发油后的水液，减压浓缩至相对密度1.06～1.10（50℃测）的药液，在充分搅拌下缓缓加入乙醇，使药液含醇量（mL/mL）为65%，加完后继续搅拌30分钟，置0～4℃静止24小时，滤过，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30～1.35℃（50℃测）的稠膏，与上述醇提取膏合并，按每个处方加入淀粉12份，混匀，置60～65℃真空干燥，粉碎，过60目筛，将β-环糊精挥发油包结物，用递增法与以上干膏粉混匀按每粒0.48g装入1000粒胶囊中，分装，即得。
本发明制剂的性状：本品为硬胶囊，内容物为棕褐色至深褐色粉末，偶见白色微粒；气微香，味微苦。
【鉴别】（1）取本品内容物2.5g，置100mL锥形瓶中，加水30mL溶解，转移至分液漏斗中，以乙酸乙酯提取2次（30，20mL），合并乙酸乙酯液，挥干，残渣以乙酸乙酯5mL使溶解，作为供试品溶液。模拟样品的制备工艺和供试品溶液的制备方法，制得缺枸杞子空白溶液。另取枸杞子对照药材1g，加水30ml煎煮15分钟，放冷，滤过，滤液用乙酸乙酯提取2次（30，20mL），合并乙酸乙酯液，浓缩至1mL，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积分数比为4:3:0.8:0.2的甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。结果表明，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而缺枸杞子空白溶液则无此对应斑点，见图5。
（2）取本品内容物2g，研细，加入1g硅藻土拌匀，置圆底烧瓶中，加甲醇50mL，加甲醇20mL，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。模拟样品的制备工艺和供试品溶液的制备方法，制得缺黄连空白溶液。另取黄连对照药材50mg，加甲醇5mL，加热回流15分钟，滤过，滤液补加甲醇至5mL，作为对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液、缺黄连空白溶液各5～10μL，对照药材溶液和对照品溶液各1μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积分数比为2：3：4：0.5：2的甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而缺黄连空白溶液则无此对应斑点，2010年版见图6。
（3）取本品内容物4g，加硅藻土3g拌匀，以三氯甲烷100mL回流提取1小时，放冷，滤过，药渣挥干，加入无水乙醇50mL回流提取1小时，放冷，滤过，加36%-38%（g/ml）盐酸5mL加热回流提取1小时，以40%（g/ml）氢氧化钠调PH至中性，浓缩至无醇味，加水30mL，以乙醚萃取2次，每次20mL，合并乙醚液，以2%（g/ml）氢氧化钠洗涤2次每次20mL，再以水洗2次，每次20mL，弃去水液，乙醚液以无水硫酸钠10g脱水，放置10分钟，滤过，挥尽乙醚，残渣以甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。取知母对照药材1g，加水30ml煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液用乙醚萃取2次，每次20mL，合并乙醚液，以2%（g/ml）氢氧化钠洗涤2次每次20mL，再以水洗2次，每次20mL，弃去水液，乙醚液以无水硫酸钠10g脱水，放置10分钟，滤过，挥尽乙醚，残渣以甲醇2mL使溶解，作为对照药材溶液。模拟样品的制备工艺和供试品溶液的制备方法，制得缺知母空白溶液。另取菝葜皂苷元对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液5μL，空白溶液5μL，对照品溶液3μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为9:1的苯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积份数比为0.4:1.5:8的香草醛-硫酸-无水乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。结果表明，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而缺知母空白溶液则无此对应斑点，见图7。
【检查】应符合胶囊剂项下硬胶囊的有关各项规定（中国药典2010年版一部附录IL）。
【含量测定】照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥD测定）。
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水（体积份数比为85:15，含0.2%磷酸和0.04%三乙胺）；流速1.0mL.min-1；检测波长为210nm；柱温：25-30℃。理论板数按齐墩果酸峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备：精密称取齐墩果酸对照品适量，置10mL量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品内容物适量，研细，取约2g，精密称定，加硅藻土3g，置索氏提取器中，加甲醇100mL，加热回流5小时，提取液蒸干，残渣用10%（g/ml）盐酸40mL使溶解，100℃水浴加热2小时，取下，冷却，定量转移至分液漏斗中，分别用50，40，40mL乙醚萃取3次，合并乙醚液，用蒸馏水60mL洗涤1次，弃去水洗液，乙醚液挥干，残渣用甲醇溶解并定容至10mL量瓶中，摇匀，再精密量取该溶液3mL至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含牛膝、女贞子以齐墩果酸（C30H48O3）计，不得少于2.0mg。
本发明制备的中药组合物具有滋补肝肾，泻火安神，理气解郁之功效；主治肝肾阴虚型的更年期综合征。口服，温开水送服，一次5粒，一日三次。
实施例2一种治疗更年期综合症的中药组合物，其由以下重量份的原料药制成：女贞子250g，黄精200g，山茱萸100g，枸杞子200g，墨旱莲100g，制何首乌230g，黄连50g，知母220g，龙骨100g，牡蛎50g，娑罗子180g，佛手50g，玄参150g，香橼60g，合欢皮140g。
其中，女贞子、黄精、山茱萸等14味药材均为《中国药典》2010年版（一部）收载的品种，其质量均符合各品种项下有关的各项规定，龙骨为《山东省中药材标准》（2002年版）收载的品种，其质量符合《山东省中药材标准》（2002年版）第47页龙骨项下的各项规定。2010年版还包括辅料淀粉，β-环糊精，其质量均符合《中国药典》2010年版（二部）各品种项下有关的各项规定。
制备方法和质量检测方法同实施例1。
实施例3一种治疗更年期综合症的中药组合物，其由以下重量份的原料药制成：女贞子450g，黄精100g，山茱萸200g，枸杞子100g，墨旱莲200g，制何首乌130g，黄连150g，知母100g，龙骨220g，牡蛎140g，娑罗子80g，佛手150g，玄参50g，香橼180g，合欢皮50g。
其中，女贞子、黄精、山茱萸等14味药材均为《中国药典》2010年版（一部）收载的品种，其质量均符合各品种项下有关的各项规定，龙骨为《山东省中药材标准》（2002年版）收载的品种，其质量符合《山东省中药材标准》（2002年版）第47页龙骨项下的的各项规定。2010年版还包括辅料淀粉，β-环糊精，其质量均符合《中国药典》2010年版（二部）各品种项下有关的各项规定。
制备方法和质量检测方法同实施例1。
Claims (9)
1.一种治疗更年期综合症的中药组合物，其特征在于，其由以下重量份的原料制成：
女贞子25-45份；黄精10-20份；山茱萸10-20份；枸杞子10-20份；墨旱莲10-20份；制何首乌13-23份；黄连5-15份；知母10-22份；龙骨10-22份；牡蛎5-14份；娑罗子8-18份；佛手5-15份；玄参5-15份；香橼6-18份；合欢皮5-14份。
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，其由以下重量份的原料制成：
女贞子35份；黄精15份；山茱萸15份；枸杞子15份；墨旱莲15份；制何首乌18份；黄连10份；知母16份；龙骨16份；牡蛎9份；娑罗子13份；佛手10份；玄参10份；香橼12份；合欢皮9份。
3.如权利要求1或2所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物还包括辅料淀粉和β-环糊精。
4.如权利要求3所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物制备的剂型为胶囊剂。
5.权利要求1或2所述的治疗更年期综合症的中药组合物的制备方法，其特征在于，按处方比例称取以上15味药物，黄连、山茱萸、女贞子加入体积浓度为85%的乙醇回流提取3小时，85%乙醇与黄连、山茱萸、女贞子总量的配比为8:1，单位为mL/g，滤过，药渣再加入6倍量同等浓度的乙醇，同上回流提取2次，每次2小时，滤过，合并三次醇提取液，减压回收乙醇，并浓缩至在50℃时测得相对密度为1.30～1.35的稠膏，药渣备用；佛手、香橼2味药物，加入8倍量的水，蒸馏提取挥发油5～6小时，分出挥发油，用β-环状淀粉包结，置45～50℃干燥，粉碎，置阴凉干燥处备用，滤出提取挥发油后的水液，另器收集，药渣及上述醇提取后药渣合并于黄精、枸杞子、墨旱莲、制何首乌、知母、龙骨、牡蛎、娑罗子、玄参、合欢皮10味水煎药物中，加入8倍量的水煎煮2小时，滤过，药渣再加入6倍量的水，同上煎煮2小时，合并2次水煎液及上述提取挥发油后的水液，减压浓缩至在50℃时测得相对密度为1.06～1.10的药液，在充分搅拌下缓缓加入乙醇，使药液含醇量为65%，加完后继续搅拌30分钟，置0～4℃静止24小时，滤过，减压回收乙醇并浓缩至在50℃时测得相对密度为1.30～1.35℃的稠膏，与上述醇提取膏合并，按每个处方加入淀粉12份，混匀，置60～65℃真空干燥，粉碎，将β-环糊精挥发油包结物与干膏粉混匀，即得。
6.权利要求1所述的治疗更年期综合症的中药组合物的质量检测方法，其特征在于，它包括采用薄层鉴别方法定性鉴别枸杞子、黄连、知母的方法，和采用高效液相色谱法对齐墩果酸进行含量测定的方法。
7.如权利要求6所述的质量检测方法，其特征在于，所述枸杞子鉴别：取本品内容物2.5g，置100mL锥形瓶中，加水30mL溶解，转移至分液漏斗中，以乙酸乙酯提取2次，第一次30mL，第二次20mL，合并乙酸乙酯液，挥干，残渣以乙酸乙酯5mL使溶解，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材1g，加水30mL煎煮15分钟，放冷，滤过，滤液用乙酸乙酯提取2次，第一次30mL，第二次20mL，合并乙酸乙酯液，浓缩至1mL，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积分数比为4:3:0.8:0.2的甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
所述黄连鉴别：取本品内容物2g，研细，加入1g硅藻土拌匀，置圆底烧瓶中，加甲醇50mL，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；另取黄连对照药材50mg，加甲醇5mL，加热回流15分钟，滤过，滤液补加甲醇至5mL，作为对照药材溶液；再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5～10μL，对照药材溶液和对照品溶液各1μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积分数比2：3：4：0.5：2的甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；
所述知母鉴别：取本品内容物4g，加硅藻土3g拌匀，以三氯甲烷100mL回流提取1小时，放冷，滤过，药渣挥干，加入无水乙醇50mL回流提取1小时，放冷，滤过，加入质量浓度为36%～38%盐酸5mL加热回流提取1小时，以质量浓度为40%氢氧化钠调PH至中性，浓缩至无醇味，加水30mL，以乙醚萃取2次，每次20mL，合并乙醚液，以质量浓度为2%氢氧化钠洗涤2次，每次20mL，再以水洗2次，每次20mL，弃去水液，乙醚液以无水硫酸钠10g脱水，放置10分钟，滤过，挥尽乙醚，残渣以甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；另取菝葜皂苷元对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μL，对照品溶液3μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为9:1的苯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积份数比为0.4：1.5：8的香草醛-硫酸-无水乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
8.如权利要求6所述的质量检测方法，其特征在于，所述齐墩果酸的含量测定方法包括以下步骤：
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；含0.2%磷酸和0.04%三乙胺，体积份数比为85:15的甲醇-水作为流动相；流速1.0mL.min-1；检测波长为210nm；柱温25-30℃；理论板数按齐墩果酸峰计算不低于2500；
对照品溶液的制备：精密称取齐墩果酸对照品适量，置10mL量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物适量，研细，取约2g，精密称定，加硅藻土3g，置索氏提取器中，加甲醇100mL，加热回流5小时，提取液蒸干，残渣用质量浓度为10%盐酸40mL使溶解，100℃水浴加热2小时，取下，冷却，定量转移至分液漏斗中，分别用50，40，40mL乙醚萃取3次，合并乙醚液，用蒸馏水60mL洗涤1次，弃去水洗液，乙醚液挥干，残渣用甲醇溶解并定容至10mL量瓶中，摇匀，再精密量取该溶液3mL至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
9.如权利要求8所述的质量检测方法，其特征在于，对于药品规格为0.48g/粒的胶囊剂，测得每粒胶囊含女贞子以齐墩果酸计，不得少于2.0mg。
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