CN102665747A - 含有三桠乌药提取物作为有效成分的改善血液循环的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及含有三桠乌药提取物作为有效成分的改善血液循环的组合物，更详细地，涉及含有三桠乌药提取物作为有效成分的通过改善血液循环来预防及治疗血栓疾病的药物组合物及保健食品。本发明的三桠乌药提取物及粗纯化物(crude purified product)可以使用水、乙醇、甲醇、丁醇等多种溶剂进行提取而获得。提取物及粗纯化物不仅对试管内通过多种凝集诱导而诱导的血小板凝集具有优异的阻碍效果，而且对活体内急剧的血栓生成具有优异的阻碍效果，因此，可有效地用于预防和治疗血液循环障碍引起的疾病，如血栓栓塞等。

Description

含有三桠乌药提取物作为有效成分的改善血液循环的组合物
技术领域
本发明涉及含有三桠乌药提取物作为有效成分的改善血液循环的组合物，更详细地，涉及含有三桠乌药提取物作为有效成分的通过改善血液循环来预防及治疗血栓疾病的药物组合物及保健食品。
背景技术
人类具有治疗伤口部位及避免血液损失的活体系统，其由称作血小板和血浆的凝固、纤维素分解以及凝固抑制的复杂过程的调节和均衡形成。但是，由于各种因素这种平衡状态被打破时，血液的流动会受到阻碍，从而产生血栓疾病，组织功能产生障碍。
血栓形成(thrombosis)是指由于血管内侧产生块或血栓，从而堵塞血液流通。血管受到损伤时，血管会收缩，由于血小板会粘附在向伤口部位露出的胶原纤维(collagen gibrers)上，从而释放作为血管收缩物质的血清素(serotonin)、二磷酸腺甙(adenosine diphosphate，ADP)以及血栓素(Thromboxane)A2。ADP使更多的血小板粘附，血栓素A2的作用为使血小板凝集，从而使血管收缩。通过这样的一次性止血后，形成血液凝固作用(blood coagulation)。止血后产生的纤维蛋白(fibrin)通过纤维素溶解作用(fibrinolysis)而溶解，组织型纤维蛋白溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator，t-PA)和尿激酶(Urokinase，UK)起到将血纤维蛋白溶酶原(plasminogen)转换成血纤维蛋白溶酶(plasmin)并分解纤维蛋白的作用。在正常的情况下，这样的血液凝集(blood coagulation)和纤维素分解(fibrinolysis)保持均衡，但当这种均衡被打破的情况下，血管内会产生纤维素块沉积并产生由血液循环障碍而引起的血栓形成((蓝思汉M.，胸腔，2003年9月；124：33S-9S(Nesheim M.，Chest.，2003 Sep；124：33S-9S))。
血栓形成引起动脉血栓形成(atherothrombotic diseases)、静脉血栓形成(Phlebothbombosis)、门静脉血栓形成(hepatic protal vein thrombitis)、肺动脉栓塞(Pulmonary thromboembolism)、慢性静脉缺血(chronic limb ischemia)、静脉曲张(Varicose vein)、深静脉血栓形成(deep vein thrombosis diseases)、心绞痛(angina pectoris)、脑梗塞(cerebral infarction)、脑出血(cerebral hemorrhage)等，还会引起感染或血管损伤、术后并发症以及凝固性疾病等。
现今，在血栓疾病的预防与治疗中，正在使用的有抗血小板剂、抗凝固剂以及对形成的血栓进行治疗的血栓溶解剂等。具代表性的抗血小板剂阿司匹林虽然具有优异的效果，但已知其会引起胃肠道出血和消化性溃疡等副作用。并且，除此之外的用作抗凝固剂或高止血症治疗剂的药物大部分不能口服，并且对血栓的选择性低，如长期服用会出现溶血现象、免疫反应、发热、过敏等多种副作用。不但具有这些副作用，效果微乎其微，而且这些市售的治疗剂的价格非常昂贵，从而产生了患者使用困难的问题。因此，迫切需要开发出血小板的活化、抑制凝固以及血栓溶解活性等对于阻碍血栓生成具有很高的选择性，并且使副作用最小化的治疗剂。
另一方面，三桠乌药(Lindera obtusiloba)为樟树科的落叶灌木。高2-3m左右、开花期为3-4月，结果期为9月。果实榨油后，用作女士用的头油。摘下叶子或树枝会有生姜味道，因此称为生姜树，也被称为假冬柏或黄梅木。具有活血、疏筋、消肿等功效，已知可以治疗擦伤淤血肿痛，主要是捣碎后敷在伤口部位。主要用于腹痛，也用作退烧药与咳嗽药。在民间作为退烧药或咳嗽药，将叶子和苗像茶一样用热水泡开后饮用(大韩植物图鉴，李昌复1980；韩国民间药图鉴，朴忠熙2005，乡药大辞典)。
在三桠乌药成分的研究中，权学哲等(配药学研究档案，22，第417-422页，1999(Archives of Pharmacal Research，22，p.417-422，1999))分离了阿提福林(actifolin)、新木脂体柄果脂素(pluviatilol)、5，6-二氢罗汉松树脂酚(5，6-dihydromatairesinol)、(+)-丁香脂素((+)-syringaresinol)、反式麦麸-二甲氧基落叶松树脂醇(9-O-trans-feruloyl-5，5-dimethoxylariciresinol)等。报导有分离的成分具有杀死癌细胞的作用、抗炎作用等功效(药用植物，69，610-616，2003；配药学研究档案，22，第417-422页，1999(Planta Medica，69，610-616，2003；Archives of Pharmacal Research，22，p.417-422，1999))。
在上述文献中，对于三桠乌药提取物的阻碍血小板凝集、阻碍血栓生成、以及治疗及预防效果没有任何的公开或教示。
发明内容
要解决的技术问题
本发明人以多个植物提取物作为对象，对血液循环改善剂进行研究后发现：三桠乌药提取物具有非常优异的阻碍血小板凝集、阻碍活体内血栓生成、以及预防功效，从而完成了本发明。
本发明是基于上述发现而获得，其目的在于，提供含有三桠乌药提取物作为有效成分，并且通过改善血液循环来用于预防及治疗血栓疾病的药物组合物。
本发明的再一目的在于，提供含有三桠乌药提取物作为有效成分的用于预防及治疗血栓疾病的健康功能食品。
技术方案
为了实现上述目的，本发明的通过改善血液循环的用于预防及治疗血栓的组合物的特征为，含有三桠乌药提取物作为有效成分。
并且，所述三桠乌药提取物优选提取自树枝、叶子或它们的混合物。
并且，所述三桠乌药提取物优选使用选自水、C1至C5的低级醇及它们的混合物中的溶剂进行提取。
并且，所述C1至C5的低级醇优选为甲醇、乙醇或丁醇。
并且，所述三桠乌药提取物优选使用30至95重量％的乙醇水溶液进行提取。
并且，所述三桠乌药粗提物优选在30至95℃下提取。
并且，优选地，所述三桠乌药提取物使用选自水、C1至C3的低级醇及它们的混合物中的溶剂进行提取后，用丁醇进行再次提取。
并且，优选地，所述三桠乌药提取物为使用选自水、C1至C3的低级醇及它们的混合物中的溶剂进行提取及浓缩并获得粗提物后，将所述粗提物悬浮于水中，然后按照己烷、乙酸乙酯及丁醇的顺序进行再次提取。
并且，优选地，所述粗提物和水按照1∶5～25的体积比进行混合悬浮。
此外，所述三桠乌药提取物的特征为，其具有阻碍血小板凝集作用。
此外，所述三桠乌药提取物的特征为，其具有阻碍活体内血栓生成的活性。
此外，所述血栓疾病选自动脉血栓形成、静脉血栓形成、门静脉血栓形成、肺动脉栓塞、慢性静脉缺血、静脉曲张、深静脉血栓形成、心绞痛、脑梗塞、脑出血、术后血管并发症及凝固性疾病。
另一方面，本发明的通过改善血液循环来用于预防血栓疾病的健康功能食品的特征为，含有三桠乌药提取物作为有效成分。
如上所述，本发明的三桠乌药提取物不仅对试管内通过多种的凝集诱导而诱导的血小板凝集具有优异的阻碍效果，而且对活体内急剧的血栓生成具有优异的阻碍效果，因此，可有效地用于预防和治疗血液循环障碍引起的疾病，如血栓栓塞等。
附图说明
图1为使用胶原蛋白作为血小板凝集诱导剂的情况下，对本发明一个实施例的提取物的血小板凝集阻碍效果进行比较的图。
图2为使用ADP作为血小板凝集诱导剂的情况下，对本发明一个实施例的提取物的血小板凝集阻碍效果进行比较的图。
图3为对三桠乌药提取物的细胞毒性程度进行测定的图。
具体实施方式
下面，对于本发明的优选实施例进行详细说明。并且，在下面的说明中图示了具体构成要素等多个特定事项，这只是为了更加有助于对本发明的整体理解，对于本领域技术人员来说即使没有这些特定事项也能够实施本发明是显而易见的。但是，在说明本发明时，判断为：相关的公知功能或构成的具体说明会给本发明的主旨带来不必要的影响的情况下，将省略其详细的说明。
本发明的三桠乌药提取物可通过下述方法获得。
对于所述三桠乌药的使用没有限制，可以使用地上部位，更具体地可以使用摘取、养殖或市售的叶子或树枝。用于提取的溶剂选自水、C1至C5的低级醇及它们的混合物。本发明人用水将三桠乌药的树枝和叶子清洗，以去除异物和盐分，然后进行干燥后，用三桠乌药试样重量的约5～50倍，优选达10～30倍体积的水及甲醇、乙醇、丁醇等C1至C5的低级醇的极性溶剂或它们的混合比约为1∶0.1至1∶10的混合溶剂，优选为30至95重量％的乙醇水溶液在50～95℃下提取1小时至7天，该过程重复实施2～5次，更优选为重复实施3次。或者是，更优选地，用这样的水或低级醇水溶液提取后，用丁醇再次提取。然后将上述提取物进行减压浓缩及/或冷冻干燥，从而获得三桠乌药粗提物。
此外，本发明的提取物中的非极性溶剂可溶提取物可以通过下述方法获得。将上述粗提物悬浮于蒸馏水后，将其加入到体积为悬浮液体积的0.1～100倍，优选约为1～5倍体积的己烷、乙酸乙酯、三氯甲烷等非极性溶剂中进行1～10次非极性溶剂提取并分离，优选为2～5次。此外，还可以进一步实施通常的分流工序(哈本.J.B.，植物化学方法：种植分析现代技术指南，第3版，第6-7页，1998(Harborne.J.B.，Phytochemical medthods：A guide to modern techniques of plant analysis，3rd Ed.，pp.6-7，1998))。
更优选地，对于由上述工序获得的三桠乌药粗提物，优选在三桠乌药乙醇水溶液提取物中用正丁醇、己烷、乙酸乙酯等有机溶剂进行溶剂分流、减压浓缩，所述有机溶剂按照极性由低至高的顺序，优选按照己烷、乙酸乙酯及正丁醇的顺序进行溶剂分流、减压浓缩，从而获得三桠乌药的己烷、乙酸乙酯及正丁醇流分物。
本发明提供含有通过上述制备方法获得的三桠乌药提取物、粗提物、非极性溶剂可溶提取物或分流物作为有效成分的用于预防及治疗血栓疾病的药物组合物。
本发明的用于预防及治疗血栓疾病的药物组合物，相对于组合物总重量含有0.1至99重量％的所述提取物。
本发明的含有三桠乌药提取物的组合物还可以包含制备组合物时通常使用的适当的载体、赋形剂及稀释剂。
本发明提取物的医药学给药形态可以使用药学上允许的盐的形态，或者可以单独或与其它药学活性化合物进行结合或以集合形态使用。
含有本发明的提取物的药物组合物可以使用通常的方法制剂化为散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮液、乳剂、糖浆、气溶胶等经口给药剂型、外用药、栓剂及灭菌注射溶液。
含有提取物的组合物中可以包含的载体、赋形剂及稀释剂例如有，乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、海藻酸盐、明胶、磷酸氢钙、磷酸二氢钙、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟苯甲酯、羟苯丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油。
在制剂化的情况下，使用通常使用的填充剂、增量剂、结合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或赋形剂进行制备。
用于经口给药的固体制剂中包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，这些固体制剂至少混合一种以上的如淀粉、碳酸钙(calcium carbonate)、蔗糖(sucrose)或乳糖(lactose)、明胶、微晶纤维素等赋形剂来制备。此外，除了单纯的赋形剂之外，也可以使用硬脂酸镁、滑石等润滑剂。
作为经口给药的液体制剂有悬浮液、内溶液剂、乳剂、糖浆剂等，可以含有通常使用的单纯稀释剂水、流动石蜡外，还可以含有如润湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等赋形剂。
用于非经口给药的制剂包括灭菌的水溶液、非水性溶剂、悬浮剂、乳剂、冷冻干燥制剂及栓剂。非水溶剂、悬浮剂可以使用如丙二醇(propylene glycol)、聚乙二醇、橄榄油等植物性油、油酸乙酯等可以注射的酯等。栓剂的基质可以使用饱和脂肪酸混合物的甘油酯(Witepsol)、聚乙二醇(macrogol)、吐温(tween)类、可可脂、水石梓(laurinum)、甘油明胶等。
本发明的提取物的优选给药量根据患者的状态及体重、疾病的程度、药物形态、给药路径及期间而不同，但本领域技术人员可以适当地选择。但是，为了获得优选效果，本发明的提取物的优选给药量为1日0.0001～100mg/kg，更有选为0.001～100mg/kg。给药可以一天给药一次，也可以分多次给药。上述给药量在任何方面都不会限定本发明的范围。
本发明提供含有对血栓疾病起到预防效果的所述提取物及食品学上允许使用的食品辅助添加剂的健康功能食品。
可添加所述三桠乌药提取物的健康功能食品例如有各种一般食品类、饮料、口香糖、茶叶、维生素复合剂等。
此外，以预防血栓生成为目的，所述三桠乌药提取物可加入到食品或饮料中。此时，食品或饮料中的所述提取物的加入量可以为食品总重量的0.01～15重量％，以100g健康饮料组合物为基准，可以按照0.02～5g的比例加入，优选以0.3～1g的比例加入。
本发明的健康功能性饮料组合物除了按照所指示的比例含有作为必需成分的上述提取物外，对于其它的成分没有特别限制，可以同通常的饮料一样含有各种香味剂或天然碳水化合物等附加成分。上述天然碳水化合物的例子有如葡萄糖、果糖等单糖；如麦芽糖、蔗糖等二糖；以及多糖，如糊精、环糊精等一般的糖以及木糖醇、山梨醇、赤藓糖醇等糖醇。除了上述之外，作为香味剂还可以有利地加入作为天然香味剂的奇异果甜蛋白、甜叶菊提取物，例如甜菊糖A、甘草甜素等；以及合成香味剂，例如糖精、阿斯巴甜等。上述天然碳水化合物的比例为每100g本发明的组合物中约为1～20g，优选地，约为5～12g。
除了上述之外，本发明的提取物还可以含有各种营养剂、维生素、矿物(电解质)、合成及天然风味剂、着色剂及填充剂(奶酪、巧克力等)、果胶酸及其盐、藻酸及其盐、有机酸、保护性胶质增粘剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇、用于碳酸饮料中的碳酸化剂等。除此之外，本发明的提取物还可以含有用于制备天然果汁、果汁饮料及蔬菜饮料的果肉。可以对这些成分进行单独或组合使用。此时，添加剂的比例虽然不是很重要，但一般优选为每100g本发明的提取物中约为0.01～20重量份。
下面，通过实施例及试验例对本发明进行更加具体的说明。
实施例
实施例1：三桠乌药粗提物的制备
将在江原道地区采摘的三桠乌药树枝和叶子用水清洗，以去除异物和盐分，然后干燥后粉碎，在提取容器中分别加入25g的树枝和25g叶子，然后加入总量为500mL的70重量％的乙醇水溶液，进行回流冷却并在70℃下进行3小时，进行加热提取，重复3次。然后用滤纸过滤，将该滤液在40℃的水浴中进行减压浓缩及冷冻干燥，从而获得6.4g的三桠乌药残枝粗提物及7.0g的三桠乌药叶子粗提物。
实施例2：三桠乌药粗提物的流分物的制备
将实施例1中获得的三桠乌药5g叶子与5g树枝各自的粗提物悬浮于50mL的精制水中，然后按照顺序加入50mL的己烷、乙酸乙酯及正丁醇，进行溶剂分流，各实施3次溶剂分流后，获得了各个溶剂流分，将其进行减压浓缩，从而获得三桠乌药的己烷、乙酸乙酯及正丁醇流分物。
试验例1：三桠乌药提取物的阻碍血小板凝集的效果测定
1-1.准备实验动物及清洗的血小板(washed platelet)
将大鼠(rat)用乙醚(ethyl ether)麻醉，用含有0.15M的柠檬酸钠(sodium citrate)的注射器从腹动脉进行采血，使柠檬酸钠与血液的比例为1∶9(v/v)。富血小板血浆(Platelet rich plasma，PRP)是在200xg下进行10分钟离心分离获得上清液的PRP，继续在800xg下进行15分钟的离心分离，然后用清洗缓冲液(清洗缓冲液(washing buffer)，137mM NaCl、2.9mM KCl、1mM MgCl2、5mM葡萄糖、12mM NaHCO3、0.34mM Na2HPO4、1mM EDTA、20mM HEPES、0.25％BSA、pH7.4)对沉淀的血损清洗2次，然后在悬浮缓冲液(悬浮缓冲液，137mM NaCl、2.9mM KCl、1mM MgCl2、5mM葡萄糖、12mM NaHCO3、0.34mM Na2HPO4、20mM HEPES、0.25％BSA、pH 7.4)中悬浮后，准备了清洗的血小板。使用用于测定血小板凝集阻碍能力的清洗血小板细胞计数器(细胞计数器，Hema-vet HV950FS，Drew scientific公司，美国)对血小板计数，用缓冲液稀释，调整血小板为3x108血小板/mL。由于血小板在低温下凝集，因此上述实验是在常温下进行的。
1-2.血小板凝集程度测定
大鼠的血小板凝集阻碍能力是使用凝集计(Chrono-Log有限责任公司，哈弗敦，宾夕法尼亚州，美国)，采用浊度测定法进行测定的。将清洗的血小板在37℃下培养3分钟后，按照浓度用试样进行处理，2分钟后，用诱导血小板凝集的物质ADP(22μM)和胶原蛋白(20μg/mL)诱导凝集，测定10分钟后，计算了阻碍程度。将没有用试样进行处理的作为对照组，用下述方法求得。
表1三桠乌药提取物的血小板凝集阻碍效果
Figure BDA00001656302100101
如上所示，三桠乌药树枝提取物对于通过胶原蛋白诱导的血小板凝集的阻碍效果的情况下，在0.1mg/mL、0.3mg/mL、1mg/mL下，分别显示为-7.41、83.33、87.04％，此时，IC50(50％下的抑制浓度(Inhibitory concentration))值为0.28μg/mL，确认为非常低。此外，三桠乌药提取物对于通过ADP诱导的血小板凝集的阻碍效果的情况下，在0.1mg/mL、0.3mg/mL、1mg/mL下，分别显示为15.91、68.18、81.82％，此时，IC50值为0.26μg/mL，确认为非常低。三桠乌药叶子提取物对于通过胶原蛋白诱导的血小板凝集阻碍效果的情况下，在0.1mg/mL、0.3mg/mL、1mg/mL下，分别显示为7.41、57.41、88.89％，此时，IC50值为0.28μg/mL，确认为较低。此外，三桠乌药提取物对于通过ADP诱导的血小板凝集的阻碍效果的情况下，在0.1mg/mL、0.3mg/mL、1mg/mL下，分别显示为9.09、54.55、95.45％，此时，IC50值为0.28μg/mL，确认为较低。总体上，确认三桠乌药树枝提取物及叶子提取物比现在用作血栓形成阻碍剂的阿司匹林的效能要高。在此，IC50为阻碍50％血小板凝集的浓度值，其值越低阻碍力越高。
上述结果可以由图1与图2来确认。图1与图2为显示三桠乌药树枝及叶子提取物通过胶原蛋白、ADP诱导的血小板凝集的阻碍效果的图。
试验例2：三桠乌药提取物的血栓栓塞阻碍效能测定
动物的实验性血栓诱导以Diminno等的试验方法为基准。在小鼠尾静脉上注射血小板凝集诱导剂，在短时间内肺动脉会诱导大量的血栓形成，会使动物死亡，通过观察能否将其恢复来测定血栓生成阻碍程度。使血小板凝集诱导剂胶原蛋白(collagen.Chrono-Log)与肾上腺素(epinephrine.Chrono-Log)的混合溶液(20μg/小鼠+2μg/小鼠)包含在200μL的生理盐水中，将该溶液注射于小鼠的尾静脉。为了得知抗血栓效果，在注射血小板凝集诱导剂1小时前，将药剂悬浮液或生理盐水按照体重的比例进行经口给药。抗血栓效果是以百分率来进行计算。所述百分率为从由注射血小板凝集诱导剂而引起的小鼠后腿麻痹或死亡中获得保护的实验动物数的百分率。注射后，通过观察15分钟以上的持续麻痹、死亡或是否能够从麻痹中恢复来判定试样的抗血栓效果。通过下述方法求得了各组的存活率(％)。
表2三桠乌药提取物对血栓栓塞的阻碍效果
  1次   2次   3次   和(D/C)   存活率(％)
  对照组   5/17   3/24   5/14   13/55   23
  阿司匹林   15/19   9/20   9/19   33/58   56
  三桠乌药树枝   14/19   8/18   7/20   29/57   51
  三桠乌药叶子   13/20   4/17   10/19   27/56   48
如上所示，三桠乌药树枝、叶子提取物对于血栓栓塞的阻碍效果的情况下，存活率(％)分别显示为51、48％，与对照组相比，生存率高出25～30％左右，因此可以确认，三桠乌药树枝或叶子提取物对血栓栓塞具有相当的效果。
试验例3：三桠乌药提取物的细胞毒性试验
比较了上述实施例1中制备的三桠乌药粗提物的细胞毒性程度，其结果如图3所示。
将血管动脉平滑肌细胞与最低必需培养基(minimum essentialmedium，MEM)和10％的胎牛血清(Fetal bovine serum，FBS)溶液进行混合，在5％CO2/37℃的条件下培养24小时。细胞稳定后用所述实施例1中制备的三桠乌药提取物进行处理并振荡后，反应24小时。然后加入MTS溶液(cellTiter 96 Aqueous One Solution(单溶液96孔细胞增殖检测试剂盒)，promega公司)培养1小时后，在490nm下测定了吸光度。
如上述图3中所示，没有观察到本发明的三桠乌药提取物对细胞存活有任何影响，可以确认其为非常安全的药物。
试验例4：统计处理
试验结果的显著性是将实验结果通过学生t-检验及单因素方差分析(one-way ANOVA test)，将p在0.05以下的情况判定为具有显著性差异。
下面对含有本发明提取物的药物组合物及健康功能食品的制剂例进行说明，本发明并不是为了限定这些，而仅是为了具体地进行说明。
制剂例1：散剂的制备
20mg三桠乌药提取物粉末
100mg乳糖
10mg滑石
将上述成分混合，填充至气密袋中，从而制得散剂。
制剂例2：片剂的制备
10mg三桠乌药提取物粉末
100mg玉米淀粉
100mg乳糖
2mg硬脂酸镁
将上述成分混合后，根据常规片剂制备方法进行压片，从而制得片剂。
制剂例3：胶囊剂的制备
10mg三桠乌药提取物粉末
3mg结晶纤维素
14.8mg乳糖
2mg硬脂酸镁
根据常规胶囊剂制备方法，将上述成分混合，填充到明胶胶囊中，从而制得胶囊剂。
制剂例4：注射剂的制备
10mg三桠乌药提取物粉末
180mg甘露醇
2794mg注射用灭菌蒸馏水
根据常规注射剂制备方法，以每1安瓿(2mL)上述成分的含量来制备。
制剂例5：液体剂的制备
10mg三桠乌药提取物粉末
10g异构化葡萄糖
5g甘露醇
适量的精制水
根据常规液体剂的制备方法，在精制水中加入各个成分溶解，加入适量的柠檬香，然后混合上述成分加入精制水，调节为总100mL，然后填充到褐色瓶子中进行灭菌，制得液体剂。
制剂例6：健康饮料的制备
10mg三桠乌药提取物粉末
15g维生素C
100g维生素E(粉末)
19.75g乳酸亚铁
3.5g氧化锌
3.5g烟酰胺
0.2g维生素A
0.25g维生素B1
0.3g维生素B2
适量的水
根据常规健康饮料的制备方法混合上述成分后，在85℃下搅拌加热约1小时，然后将制得的溶液过滤回收到灭菌的2L的容器中，进行密封灭菌后冷藏保存，用来制备本发明的健康饮料组合物。上述组成比是将较为适合受欢迎饮料的成分作为优选实施例来进行混合，但可以根据需求人群、需求国家、使用用途等地区和民族的喜好度而对其配比进行任意的变形也无妨。

Claims (10)

1.含有三桠乌药提取物作为有效成分的用于预防及治疗血栓疾病的药物组合物。
2.根据权利要求1所述的用于预防及治疗血栓疾病的药物组合物，其特征在于，所述三桠乌药选自树枝、叶子及它们的混合物。
3.根据权利要求1所述的用于预防及治疗血栓疾病的药物组合物，其特征在于，所述三桠乌药提取物为使用选自水、C1至C5的低级醇及它们的混合物中的溶剂进行提取。
4.根据权利要求3所述的用于预防及治疗血栓疾病的药物组合物，其特征在于，所述三桠乌药提取物为使用30至95重量％的乙醇水溶液进行提取。
5.根据权利要求3所述的用于预防及治疗血栓疾病的药物组合物，其特征在于，所述三桠乌药提取物为使用选自水、C1至C3的低级醇及它们的混合物中的溶剂进行提取后，用丁醇进行再次提取。
6.根据权利要求3所述的用于预防及治疗血栓疾病的药物组合物，其特征在于，所述三桠乌药提取物为使用选自水、C1至C3的低级醇及它们的混合物中的溶剂进行提取及浓缩并获得粗提物后，将所述粗提物悬浮于水中，然后按照己烷、乙酸乙酯及丁醇的顺序进行再次提取。
7.根据权利要求1所述的用于预防及治疗血栓疾病的药物组合物，其特征在于，所述三桠乌药提取物具有阻碍血小板凝集的活性。
8.根据权利要求1所述的用于预防及治疗血栓疾病的药物组合物，其特征在于，所述三桠乌药提取物对活体内的血栓形成具有抑制及预防活性。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的用于预防及治疗血栓疾病的药物组合物，其特征在于，所述血栓疾病选自动脉血栓形成、静脉血栓形成、门静脉血栓形成、肺动脉栓塞、慢性静脉缺血、静脉曲张、深静脉血栓形成、心绞痛、脑梗塞及脑出血。
10.含有三桠乌药提取物作为有效成分的用于预防血栓疾病的健康功能食品。
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Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101185106B1 (ko) * 2012-02-10 2012-09-21 한국과학기술연구원 생강나무속 식물 추출물을 포함하는 안압 하강용 조성물
KR101405144B1 (ko) * 2012-03-09 2014-06-13 한준섭 혈관질환 예방에 도움이 되는 건강보조식품
WO2014163416A1 (ko) * 2013-04-03 2014-10-09 (주)아모레퍼시픽 (+) 시링가레시놀을 포함하는 수명 연장용 조성물
CN104817601B (zh) * 2015-03-31 2018-04-10 浙江大学 从细梗香草中提取三个黄酮类成分混合体、制剂及其方法
KR101671847B1 (ko) 2015-04-09 2016-11-03 원광대학교산학협력단 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101801612B1 (ko) 2016-04-26 2017-11-27 경상북도(농업기술원생물자원연구소장) 흑생강 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품
KR102084503B1 (ko) * 2017-08-22 2020-03-04 안동대학교 산학협력단 생강잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품
CN108142768A (zh) * 2017-11-17 2018-06-12 浙江科技学院 一种以乌药叶为主体的固体颗粒及其生产方法
KR102428525B1 (ko) 2020-06-26 2022-08-03 제천한약영농조합법인 은행잎추출물, 홍삼농축액 및 해안소나무껍질추출물을 이용한 리큐르주의 제조방법

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006099217A2 (en) * 2005-03-10 2006-09-21 Unigen Pharmaceuticals, Inc. Formulation of a mixture of free-b-ring flavonoids and flavans as a therapeutic agent
CN1857610A (zh) * 2006-03-10 2006-11-08 陈方标 一种含乌药叶提取物的保健品及其制备方法
US20070160699A1 (en) * 2004-01-31 2007-07-12 Kiyoung Kim Composition comprising hovenia dulcis thunb. extract, lindera obtusiloba blume extract, or herbal mixture extract thereof
CN101129466A (zh) * 2007-08-31 2008-02-27 浙江大学 治疗心脑血管疾病的中药提取物的制备方法及其用途
WO2009091120A2 (en) * 2008-01-18 2009-07-23 Yang Ji Chemical Co., Ltd. Composition comprising the extracts of lindera obtusiloba for prevention and treatment of cardiovascular diseases

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS63196514A (ja) * 1987-02-10 1988-08-15 Takeda Chem Ind Ltd 原虫性疾患の予防治療剤
JPH075469B2 (ja) * 1991-12-13 1995-01-25 ナショナル・サイエンス・カウンシル ジセントリン及びその誘導体の高血圧、脈搏不整疾患、動脈硬化に対する治療用途
KR100586269B1 (ko) * 2004-01-31 2006-06-07 김기영 생강나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물
CN1739690A (zh) * 2005-09-11 2006-03-01 王浩贵 一种大透骨草外用药

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070160699A1 (en) * 2004-01-31 2007-07-12 Kiyoung Kim Composition comprising hovenia dulcis thunb. extract, lindera obtusiloba blume extract, or herbal mixture extract thereof
WO2006099217A2 (en) * 2005-03-10 2006-09-21 Unigen Pharmaceuticals, Inc. Formulation of a mixture of free-b-ring flavonoids and flavans as a therapeutic agent
CN1857610A (zh) * 2006-03-10 2006-11-08 陈方标 一种含乌药叶提取物的保健品及其制备方法
CN101129466A (zh) * 2007-08-31 2008-02-27 浙江大学 治疗心脑血管疾病的中药提取物的制备方法及其用途
WO2009091120A2 (en) * 2008-01-18 2009-07-23 Yang Ji Chemical Co., Ltd. Composition comprising the extracts of lindera obtusiloba for prevention and treatment of cardiovascular diseases
CN101951934A (zh) * 2008-01-18 2011-01-19 杨智化学（株） 用于防治心血管疾病的含有三桠乌药提取物的组合物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JONG-CHEOL PARK ET AL.: "Isolation and Structure Elucidation of Flavonoid Glycosides from Lindera obtusiloba BL.", 《J.KOREAN SOC. FOOD NUTR.》 *

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