CN102641386A - 苦参绿茶阴道泡腾片及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了苦参绿茶阴道泡腾片及其制备方法。其中，苦参绿茶阴道泡腾片包含：苦参提取物、绿茶提取物、表面活性剂、泡腾剂、填充剂、黏合剂、崩解剂和润滑剂，其中，苦参提取物是苦参的水提取物，绿茶提取物是绿茶的醇提取物。本发明的苦参绿茶阴道泡腾片对宫颈上皮内瘤变有很好的预防和治疗作用。

Description

苦参绿茶阴道泡腾片及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体地涉及苦参绿茶阴道泡腾片及其制备方法。更具体地，本发明提供了一种苦参绿茶阴道泡腾片、一种制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法以及苦参绿茶阴道泡腾片在制备预防及治疗女性宫颈上皮内瘤变的药物中的用途。

背景技术

宫颈上皮内瘤变(CIN)是包括在广义宫颈病变之中的，指宫颈非典型增生和原位癌，即所谓宫颈癌前病变，反映了宫颈癌发生发展中的连续过程。根据细胞异常的程度将CIN分为3级：CIN I、CIN II、CIN III。CIN I级相当于轻度非典型增生，异常增生的细胞仅限于上皮层下1/3；CINII级相当于中度非典型增生，异常增生的细胞限于上皮层的下2/3；CINIII级相当于重度非典型增生和原位癌，细胞异型性明显，异常增生的细胞占据上皮层的2/3以上或达全层。目前认为，从CIN发展到宫颈癌，是一个较长时间(10-15年)连续发展的过程，这个连续发展的过程的截断至关重要，积极地治疗和预防女性宫颈糜烂、轻度宫颈非典型增生、中度宫颈非典型增生，可以阻断宫颈癌前病变的病程，预防宫颈癌的发生。

然而，目前对治疗由HPV感染引起的宫颈癌前病变的药物，特别是治疗由HPV感染引起的宫颈糜烂以及轻、中度宫颈非典型增生的药物的研究，仍有待加强。

发明内容

本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

近年来，运用中医药对宫颈癌及癌前病变的研究日趋深入，但目前尚无治疗宫颈癌及癌前病变的药物应用于临床。

中药苦参具有清热燥湿，祛风杀虫的作用，多用于疮、疥、癣疾等疾病，主湿热泻痢、肠风便血、黄疸、小便不利、水肿、带下、阴痒、疥癣、麻风、皮肤瘙痒、湿毒疮疡。绿茶具有清热解毒，收敛除湿等功效，而且经研究证明，绿茶还具有抗病毒、抗菌、抗氧化、抗增生作用。

目前针对CIN，中医多采用外治法，将中药做成散剂、栓剂等剂型在胞门处进行局部治疗。但是，上述传统剂型如栓剂、散剂具有起效慢，不便贮藏，容易污染衣物，疗程长等缺点，且根治效果尚难肯定。而阴道泡腾片是一种置于阴道内通过起泡进行扩散并释放药物从而发挥药效的较新类型的特殊片剂，起效迅速，泡腾片的崩解只要3-5分钟，药物中有效成分借助泡腾的作用而迅速分散到阴道及宫颈黏膜，能够增加药物与阴道壁和子宫颈的接触面，充分与病灶接触而发挥疗效，具有起效快、生物利用度高、不良反应小、高度靶向性等优点，同时药物通过直肠吸收，不经肾脏排泄，能够避免肝脏的受过效应，并能够克服一般药片溶解缓慢，分布面窄、不均匀等缺点。

目前国内外有关苦参绿茶阴道泡腾片在制备治疗由HPV感染引起的宫颈癌前病变药物中的应用未见报道。

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。因此，本发明提供了一种苦参绿茶阴道泡腾片及其制备方法。

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种苦参绿茶阴道泡腾片。根据本发明的实施例，该苦参绿茶阴道泡腾片包含：苦参提取物、绿茶提取物、表面活性剂、泡腾剂、填充剂、黏合剂、崩解剂和润滑剂，其中，苦参提取物是苦参的水提取物，绿茶提取物是绿茶的醇提取物。根据本发明的实施例，苦参提取物是通过下列步骤制备的：将苦参进行加水提取，以便获得苦参提取液；将苦参提取液进行浓缩，以便获得苦参浓缩液；将苦参浓缩液进行pH调节；以及将经过pH调节的苦参浓缩液进行纯化，以便获得苦参提取物。根据本发明的一些实施例，将苦参进行加水提取，进一步包括：将苦参用6-12倍重量的水进行水煮2-4次，每次0.5-2小时，并合并提取液，以便获得苦参提取液。根据本发明的实施例，苦参浓缩液在50摄氏度时的相对密度为1.06～1.08。根据本发明的一些实施例，利用盐酸将苦参浓缩液进行pH调节，其中，经过pH调节的苦参浓缩液的pH为2-5。根据本发明的实施例，利用阳离子交换树脂对苦参浓缩液进行纯化。根据本发明的实施例，绿茶提取物是通过下列步骤制备的：将绿茶进行加醇提取，以便获得绿茶提取液；以及将绿茶提取液进行纯化，以便获得绿茶提取物。根据本发明的一些实施例，将绿茶进行加醇提取进一步包括：将绿茶用8-12倍重量的40-80％乙醇进行加热回流提取1-3次，每次0.5-2小时，并合并提取液，以便获得绿茶提取液。根据本发明的具体示例，将绿茶提取液进行纯化进一步包括：将绿茶提取液进行减压处理，以便除去乙醇；将绿茶提取液进行大孔树脂柱处理，以便获得经过纯化的绿茶提取液。

利用该苦参绿茶阴道泡腾片，能够对宫颈癌以及宫颈癌前病变进行有效地治疗，且能够有效用于使宫颈癌前病变细胞向良性转化。另外，发明人惊奇地发现，该苦参绿茶阴道泡腾片能够防止药物霉变，有效控制药物释放，改善药物的吸收，延长药物的作用时间及提高药物的疗效，且能够方便地通过工业生产制备。

根据本发明的实施例，在本发明的苦参绿茶阴道泡腾片中，表面活性剂可以为硬脂酸棕榈酸甘油酯和硬脂酸棕榈酸乙二醇酯的至少一种。根据本发明的具体示例，在本发明的苦参绿茶阴道泡腾片中，泡腾剂由酸剂和碱剂组成，其中，酸剂可以为选自柠檬酸、柠檬酸钠盐、酒石酸、酒石酸氢盐、苹果酸、甘氨酸、富马酸、富马酸盐、马来酸和马来酸盐的至少一种，优选酸剂为酒石酸，碱剂为碳酸钠、碳酸氢钠的至少一种。根据本发明的实施例，在本发明的苦参绿茶阴道泡腾片中，碱剂可以为碳酸钠与碳酸氢钠的混合物，其中，碳酸钠与碳酸氢钠的重量比为15∶85。根据本发明的一些实施例，填充剂可以为选自淀粉、预胶化淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、磷酸氢钙和碳酸钙的至少一种，优选填充剂为甘露醇和乳糖的至少一种。根据本发明的实施例，在本发明的苦参绿茶阴道泡腾片中，黏合剂可以为选自羟丙基甲基纤维素、聚维酮K30、甲基纤维素、乙醇、淀粉糊的至少一种，优选黏合剂为5％聚维酮K30的无水乙醇溶液。根据本发明的具体示例，在本发明的苦参绿茶阴道泡腾片中，崩解剂为选自低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠和微晶纤维素的至少一种，优选崩解剂为微晶纤维素和交联聚维酮的至少一种。根据本发明的实施例，在本发明的苦参绿茶阴道泡腾片中，润滑剂可以为选自硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、固体聚乙二醇类、十二烷基硫酸镁、十二烷基硫酸钠、苯甲酸钠、和硬脂酰富马酸钠的至少一种，优选润滑剂为聚乙二醇6000和硬脂酰富马酸钠的至少一种。

根据本发明的一些具体示例，按照重量份数，本发明的苦参绿茶阴道泡腾片可以包含：苦参提取物82-84重量份、绿茶提取物50-100重量份、表面活性剂15-100重量份、泡腾剂300-500重量份、填充剂200-400重量份、黏合剂40-80重量份、崩解剂10-100重量份、润滑剂10-30重量份。

根据本发明的实施例，按照重量份数，本发明的苦参绿茶阴道泡腾片可以包含：苦参提取物68重量份、绿茶提取物82重量份、硬脂酸棕榈酸甘油酯40重量份、酒石酸160重量份、碳酸钠24重量份、碳酸氢钠136重量份、乳糖280重量份、聚维酮K30为50重量份、交联聚维酮35重量份、聚乙二醇6000为15重量份。

根据本发明的一些具体示例，按照重量份数，本发明的苦参绿茶阴道泡腾片可以包含：苦参提取物50重量份、绿茶提取物60重量份、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯60重量份、酒石酸200重量份、碳酸钠30重量份、碳酸氢钠170重量份、甘露醇320重量份、聚维酮K30为60重量份、微晶纤维素50重量份、聚乙二醇6000为20重量份。

根据本发明的一些实施例，按照重量份数，本发明的苦参绿茶阴道泡腾片可以包含：苦参提取物68重量份、绿茶提取物82重量份、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯25重量份、硬脂酸棕榈酸甘油酯25重量份、酒石酸180重量份、碳酸钠27重量份、碳酸氢钠153重量份、甘露醇240重量份、聚维酮K30为50重量份、交联聚维酮80重量份、硬脂酰富马酸钠25重量份。

根据本发明的一个具体示例，按照重量份数，本发明的苦参绿茶阴道泡腾片可以包含：苦参提取物42重量份、绿茶提取物50重量份、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯30重量份、硬脂酸棕榈酸甘油酯20重量份、酒石酸160重量份、碳酸钠24重量份、碳酸氢钠136重量份、甘露醇400重量份、聚维酮K30为40重量份、微晶纤维素30重量份、硬脂酰富马酸钠15重量份。

根据本发明的一些实施例，按照重量份数，本发明的苦参绿茶阴道泡腾片包含：苦参提取物68重量份、绿茶提取物82重量份、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯40重量份、酒石酸160重量份、碳酸钠24重量份、碳酸氢钠136重量份、甘露醇300重量份、聚维酮K30为80重量份、微晶纤维素100重量份、聚乙二醇6000为30重量份。

根据本发明的具体示例，按照重量份数，本发明的苦参绿茶阴道泡腾片可以包含：苦参提取物70重量份、绿茶提取物75重量份、硬脂酸棕榈酸甘油酯50重量份、酒石酸200重量份、碳酸钠30重量份、碳酸氢钠170重量份、甘露醇150重量份、乳糖150重量份、聚维酮K30为60重量份、交联聚维酮70重量份、硬脂酰富马酸钠25重量份。

具体地，根据本发明的实施例，本发明的苦参绿茶阴道泡腾片，其每1000片的原料为：

由此，根据本发明的实施例的苦参绿茶阴道泡腾片可以包含：

根据本发明的实施例，在本发明的苦参绿茶阴道泡腾片中，表面活性剂可以为选自单硬脂酸甘油酯、单月桂酸甘油酯、硬脂酸棕榈酸甘油酯、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯中的一种或几种。根据本发明的具体示例，表面活性剂优选为硬脂酸棕榈酸甘油酯、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯中的一种或两种，表面活性剂的含量优选为30-60重量份。

根据本发明的实施例，在本发明的苦参绿茶阴道泡腾片中，泡腾剂由酸剂和碱剂组成，其中酸剂可以为选自柠檬酸、柠檬酸钠盐、酒石酸、酒石酸氢盐、苹果酸、甘氨酸、富马酸、富马酸盐、马来酸、马来酸盐中的一种或几种，碱剂可以为选自碳酸钠、碳酸氢钠的一种或者两者的混合物。根据本发明的具体示例，泡腾剂中酸剂优选为酒石酸，碱剂优选为碳酸钠与碳酸氢钠的混合，最优选碳酸钠与碳酸氢钠的重量比为15∶85。

根据本发明的实施例，在本发明的苦参绿茶阴道泡腾片中，填充剂可以为选自淀粉、预胶化淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、磷酸氢钙、碳酸钙中的一种或几种。根据本发明的具体示例，填充剂优选为甘露醇、乳糖中的一种或两种。

根据本发明的实施例，在本发明的苦参绿茶阴道泡腾片中，黏合剂可以为选自羟丙基甲基纤维素、聚维酮K30、甲基纤维素、乙醇、淀粉糊中的一种或几种。根据本发明的具体示例，黏合剂优选为5％聚维酮K30无水乙醇溶液。

根据本发明的实施例，在本发明的苦参绿茶阴道泡腾片中，崩解剂可以为选自低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素中的一种或几种。根据本发明的具体示例，崩解剂优选为微晶纤维素、交联聚维酮中的一种或两种。

根据本发明的实施例，在本发明的苦参绿茶阴道泡腾片中，润滑剂可以为选自硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、固体聚乙二醇类、十二烷基硫酸镁、十二烷基硫酸钠、苯甲酸钠、硬脂酰富马酸钠中的一种或几种。根据本发明的具体示例，润滑剂优选为聚乙二醇6000、硬脂酰富马酸钠中的一种或两种。

根据本发明的实施例，发明人利用本发明的苦参绿茶阴道泡腾片对家兔阴道黏膜的刺激性进行了实验，实验结果表明，苦参绿茶阴道泡腾片对家兔阴道黏膜无刺激性。

根据本发明实施例的苦参绿茶阴道泡腾片对宫颈上皮内瘤变(CIN)大鼠宫颈组织PCNA、EGFR和bcl-2表达的影响试验的结果表明，苦参绿茶阴道泡腾片是通过抑制增殖因子、EGFR以及抗凋亡因子的表达，而发挥抑制宫颈上皮异型细胞增生的作用，进而抑制宫颈上皮异型细胞的增殖，促进宫颈上皮异型细胞凋亡，使宫颈癌前病变细胞向良性转化，从而达到阻断宫颈浸润癌发生的目的，进而达到有效治疗宫颈癌前病变的目的，其可有效治疗宫颈癌前病变(宫颈上皮内瘤变)，并且可有效治疗宫颈糜烂以及轻、中度宫颈不典型增生的患者。

根据本发明的另一方面，本发明提供了一种制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：制备苦参提取物，该苦参提取物是水提取物；制备绿茶提取物，该绿茶提取物是醇提取物；以及将苦参提取物和绿茶提取物制成阴道泡腾片。根据本发明的实施例，其中，制备苦参提取物进一步包括下列步骤：将苦参进行加水提取，以便获得苦参提取液；将苦参提取液进行浓缩，以便获得苦参浓缩液；将苦参浓缩液进行pH调节；以及将经过pH调节的苦参浓缩液进行纯化，以便获得苦参提取物。根据本发明的一些实施例，将苦参进行加水提取，进一步包括：将苦参用6-12倍重量的水进行水煮2-4次，每次0.5-2小时，并合并提取液，以便获得苦参提取液。根据本发明的实施例，苦参浓缩液在50摄氏度时的相对密度为1.06～1.08。根据本发明的一些实施例，利用盐酸将苦参浓缩液进行pH调节，其中，经过pH调节的苦参浓缩液的pH为2-5。根据本发明的实施例，利用阳离子交换树脂对苦参浓缩液进行纯化。

根据本发明的实施例，制备绿茶提取物进一步包括下列步骤：将绿茶进行加醇提取，以便获得绿茶提取液；以及将绿茶提取液进行纯化，以便获得绿茶提取物。根据本发明的一些实施例，将绿茶进行加醇提取进一步包括：将绿茶用8-12倍重量的40-80％乙醇进行加热回流提取1-3次，每次0.5-2小时，并合并提取液，以便获得绿茶提取液。根据本发明的具体示例，将绿茶提取液进行纯化进一步包括：将绿茶提取液进行减压处理，以便除去乙醇；将绿茶提取液进行大孔树脂柱处理，以便获得经过纯化的绿茶提取液。

根据本发明的一些具体示例，将苦参提取物和绿茶提取物制成阴道泡腾进一步包括：将绿茶提取物与酸剂、表面活性剂、填充剂、稳定剂混合并进行制粒处理，以便获得绿茶提取物粗粒；将苦参提取物与填充剂混合并进行制粒处理，以便获得苦参提取物粗粒；将绿茶提取物粗粒、苦参提取物粗粒与填充剂、崩解剂和润滑剂混合并压制成片剂，以便获得苦参绿茶阴道泡腾剂。

发明人惊奇地发现，利用根据本发明实施例的制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法，能够有效地获得苦参绿茶阴道泡腾片，且该方法方便易行，适于大规模工业化生产，所得苦参绿茶阴道泡腾片能够防止药物霉变，有效控制药物释放，改善药物的吸收，延长药物的作用时间及提高药物的疗效。此外，根据本发明的实施例，利用该方法制备的苦参绿茶阴道泡腾片能够对宫颈癌以及宫颈癌前病变进行有效地治疗，且能够有效用于使宫颈癌前病变细胞向良性转化。

根据本发明的实施例，在本发明的制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法中，所采用的表面活性剂可以为硬脂酸棕榈酸甘油酯和硬脂酸棕榈酸乙二醇酯的至少一种。根据本发明的具体示例，在本发明的制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法中，所采用的泡腾剂由酸剂和碱剂组成，其中，酸剂可以为选自柠檬酸、柠檬酸钠盐、酒石酸、酒石酸氢盐、苹果酸、甘氨酸、富马酸、富马酸盐、马来酸和马来酸盐的至少一种，优选酸剂为酒石酸，碱剂为碳酸钠、碳酸氢钠的至少一种。根据本发明的实施例，在本发明的制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法中，所采用的碱剂可以为碳酸钠与碳酸氢钠的混合物，其中，碳酸钠与碳酸氢钠的重量比为15∶85。根据本发明的一些实施例，在本发明的制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法中，所采用的填充剂可以为选自淀粉、预胶化淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、磷酸氢钙和碳酸钙的至少一种，优选填充剂为甘露醇和乳糖的至少一种。根据本发明的实施例，在本发明的制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法中，所采用的黏合剂可以为选自羟丙基甲基纤维素、聚维酮K30、甲基纤维素、乙醇、淀粉糊的至少一种，优选黏合剂为5％聚维酮K30的无水乙醇溶液。根据本发明的具体示例，在本发明的制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法中，所采用的崩解剂可以为选自低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠和微晶纤维素的至少一种，优选崩解剂为微晶纤维素和交联聚维酮的至少一种。根据本发明的实施例，在本发明的制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法中，所采用的润滑剂可以为选自硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、固体聚乙二醇类、十二烷基硫酸镁、十二烷基硫酸钠、苯甲酸钠、和硬脂酰富马酸钠的至少一种，优选润滑剂为聚乙二醇6000和硬脂酰富马酸钠的至少一种。

根据本发明的一些具体示例，按照重量份数，该方法可以采用：苦参提取物42-84重量份、绿茶提取物50-100重量份、表面活性剂15-100重量份、泡腾剂300-500重量份、填充剂200-400重量份、黏合剂40-80重量份、崩解剂10-100重量份、润滑剂10-30重量份。

根据本发明的实施例，该方法可以采用硬脂酸棕榈酸甘油酯作为表面活性剂，其中泡腾剂由酸剂和碱剂组成，采用酒石酸作为酸剂，采用碳酸钠和碳酸氢钠的混合物作为碱剂，采用乳糖作为填充剂，采用聚维酮K30作为黏合剂，采用交联聚维酮作为崩解剂，采用聚乙二醇6000作为润滑剂，并且按照重量份数，其原料的比例为：苦参2450重量份、绿茶860重量份、硬脂酸棕榈酸甘油酯40重量份、酒石酸160重量份、碳酸钠24重量份、碳酸氢钠136重量份、乳糖280重量份、聚维酮K30为50重量份、交联聚维酮35重量份、聚乙二醇6000为15重量份。

根据本发明的一些具体示例，该方法可以采用硬脂酸棕榈酸乙二醇酯作为表面活性剂，其中泡腾剂由酸剂和碱剂组成，采用酒石酸作为酸剂，采用碳酸钠和碳酸氢钠的混合物作为碱剂，采用甘露醇作为填充剂，采用聚维酮K30作为黏合剂，采用微晶纤维素作为崩解剂，采用聚乙二醇6000作为润滑剂，并且按照重量份数，其原料的比例为：苦参1800重量份、绿茶600重量份、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯60重量份、酒石酸200重量份、碳酸钠30重量份、碳酸氢钠170重量份、甘露醇320重量份、聚维酮K30为60重量份、微晶纤维素50重量份、聚乙二醇6000为20重量份。

根据本发明的一些实施例，该方法可以采用硬脂酸棕榈酸乙二醇酯和硬脂酸棕榈酸甘油酯的混合物作为表面活性剂，其中泡腾剂由酸剂和碱剂组成，采用酒石酸作为酸剂，采用碳酸钠和碳酸氢钠的混合物作为碱剂，采用甘露醇作为填充剂，采用聚维酮K30作为黏合剂，采用交联聚维酮作为崩解剂，采用硬脂酰富马酸钠作为润滑剂，并且按照重量份数，其原料的比例为：苦参2450重量份、绿茶860重量份、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯25重量份、硬脂酸棕榈酸甘油酯25重量份、酒石酸180重量份、碳酸钠27重量份、碳酸氢钠153重量份、甘露醇240重量份、聚维酮K30为50重量份、交联聚维酮80重量份、硬脂酰富马酸钠25重量份。

根据本发明的一个具体示例，该方法可以采用硬脂酸棕榈酸乙二醇酯和硬脂酸棕榈酸甘油酯的混合物作为表面活性剂，其中泡腾剂由酸剂和碱剂组成，采用酒石酸作为酸剂，采用碳酸钠和碳酸氢钠的混合物作为碱剂，采用甘露醇作为填充剂，采用聚维酮K30作为黏合剂，采用微晶纤维素作为崩解剂，采用硬脂酰富马酸钠作为润滑剂，并且按照重量份数，其原料的比例为：苦参1500重量份、绿茶500重量份、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯30重量份、硬脂酸棕榈酸甘油酯20重量份、酒石酸160重量份、碳酸钠24重量份、碳酸氢钠136重量份、甘露醇400重量份、聚维酮K30为40重量份、微晶纤维素30重量份、硬脂酰富马酸钠15重量份。

根据本发明的一些实施例，该方法可以采用硬脂酸棕榈酸乙二醇酯作为表面活性剂，其中泡腾剂由酸剂和碱剂组成，采用酒石酸作为酸剂，采用碳酸钠和碳酸氢钠的混合物作为碱剂，采用甘露醇作为填充剂，采用聚维酮K30作为黏合剂，采用微晶纤维素作为崩解剂，采用聚乙二醇6000作为润滑剂，并且按照重量份数，其原料的比例为：苦参3000重量份、绿茶1000重量份、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯40重量份、酒石酸160重量份、碳酸钠24重量份、碳酸氢钠136重量份、甘露醇300重量份、聚维酮K30为80重量份、微晶纤维素100重量份、聚乙二醇6000为30重量份。

根据本发明的具体示例，该方法可以采用硬脂酸棕榈酸甘油酯作为表面活性剂，其中泡腾剂由酸剂和碱剂组成，采用酒石酸作为酸剂，采用碳酸钠和碳酸氢钠的混合物作为碱剂，采用甘露醇和乳糖的混合物作为填充剂，采用聚维酮K30作为黏合剂，采用交联聚维酮作为崩解剂，采用硬脂酰富马酸钠作为润滑剂，并且按照重量份数，其原料的比例为：苦参2500重量份、绿茶750重量份、硬脂酸棕榈酸甘油酯50重量份、酒石酸200重量份、碳酸钠30重量份、碳酸氢钠170重量份、甘露醇150重量份、乳糖150重量份、聚维酮K30为60重量份、交联聚维酮70重量份、硬脂酰富马酸钠25重量份。

具体地，根据本发明的一些实施例，本发明的制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法可以包括以下步骤：

a、称取处方量的苦参，每次加6-12倍体积的水，煎煮2-4次，每次0.5-2小时，以便获得苦参提取液，然后合并提取液并将其过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.06～1.08(50℃)的浓缩液。然后加盐酸调pH值至2-5，过滤，并将上清液过732型阳离子交换树脂柱，用8-12倍树脂体积的水及4-8倍树脂体积的15-40％乙醇除杂，再用1-3倍树脂体积浓氨水碱化树脂，然后用4-10倍树脂体积15-40％乙醇洗脱，并将洗脱液经减压浓缩，减压干燥，粉碎，得苦参提取物细粉。

b、称取处方量的绿茶，加入8-12倍量的40-80％乙醇50-60℃加热回流提取1-3次，每次0.5-2h，以便获得绿茶提取液，然后合并提取液并将其过滤，将滤液减压回收除去乙醇，然后进行离心，弃去残渣，滤液上D101型大孔树脂柱，用水洗脱至无醇味，然后，先用4-8个柱体积的水洗脱除杂，再用4-8个柱体积的10-30％乙醇洗脱除杂，最后用6-12倍柱体积的60-95％的乙醇洗脱，并将洗脱液减压浓缩，减压干燥，粉碎，得绿茶提取物细粉。

c、将苦参提取物、绿茶提取物及药用辅料表面活性剂、泡腾剂、填充剂、黏合剂、崩解剂和润滑剂分别过160目筛，备用；过筛后的聚维酮K30溶于无水乙醇中制备得5％聚维酮K30无水乙醇液，备用。

d、绿茶提取物与适量的酸剂、表面活性剂、填充剂、稳定剂混匀后，用黏合剂润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1-2h，16目筛整粒；备用。

e、将苦参提取物与碱剂及适量填充剂混匀，用黏合剂润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1-2h，16目筛整粒；备用。

f、将这两种干颗粒混合，加入填充剂、崩解剂和润滑剂，充分混匀，压制成椭圆形或菱形片剂，铝塑泡罩包装，以便获得苦参绿茶阴道泡腾片。

根据本发明的一个具体示例，优选地，本发明的制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法包括以下步骤：

a.称取处方量的苦参，用8倍量的水煮3次，每次1小时，以便获得苦参提取液，然后合并提取液并将其过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.06～1.08(50℃)的浓缩液。然后加盐酸调pH值至3～4，过滤，并将上清液过732型阳离子交换树脂柱，用10倍树脂体积水及6倍树脂体积的30％乙醇洗去部分杂质，再用1倍树脂体积浓氨水碱化树脂，然后用6倍树脂体积30％乙醇洗脱，并将洗脱液经减压浓缩，干燥，粉碎，得苦参提取物细粉。

b.称取处方量的绿茶，加入10倍量的60％乙醇加热回流提取两次，每次1.5小时，以便获得绿茶提取液，然后合并提取液并将其过滤，将滤液减压回收除去乙醇，然后进行离心，弃去残渣，滤液上D101型大孔树脂柱，用水洗脱至无醇味，然后，用6个柱体积的水洗脱，再用5个柱体积的15％乙醇洗脱除杂，最后用5个柱体积的70％的乙醇洗脱，并将经乙醇洗脱液部分回收，干燥，得绿茶提取物。

c.将苦参提取物、绿茶提取物及药用辅料表面活性剂、泡腾剂、填充剂、黏合剂、崩解剂和润滑剂分别过80目筛，备用；过筛后的聚维酮K30溶于无水乙醇中制备得5％聚维酮K30无水乙醇液，备用。

d.绿茶提取物与适量的酸剂、表面活性剂、填充剂混匀后，用黏合剂润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

e.将苦参提取物与碱剂及适量填充剂混匀，用黏合剂润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

f.将这两种干颗粒混合，加入填充剂、崩解剂和润滑剂，充分混匀，压制成椭圆形或菱形片剂，铝塑泡罩包装，以便获得苦参绿茶阴道泡腾片。

根据本发明的实施例，利用本发明的制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法制备的苦参绿茶阴道泡腾片，能够有效使宫颈癌前病变细胞向良性转化，能够对宫颈癌前病变(宫颈上皮内瘤变)中的宫颈糜烂以及轻度、中度宫颈不典型增生患者进行有效地治疗。

根据本发明的又以方面，本发明提供了根据前面本发明实施例的制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法所制备的苦参绿茶阴道泡腾片。

根据本发明的又一方面，本发明提供了根据本发明实施例的苦参绿茶阴道泡腾片在制备预防及治疗女性宫颈上皮内瘤变的药物中的用途，特别是用于制备由HPV感染引起的宫颈糜烂以及轻度、中度宫颈不典型增生的药物。

需要说明的是，根据本发明实施例的苦参绿茶阴道泡腾片及其制备方法的优点在于：

1、本发明的苦参绿茶阴道泡腾片，相对于一般的软膏剂而言，克服了软膏用药剂量的不准确，且泡腾片用后干净卫生，使用方便，不易流出，不污染内裤，不污染衣物，提高了患者用药的依从性。

2、本发明的制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法，克服了普通泡腾片崩解后药物细粉分布不够均匀，与阴道黏膜的接触时间短，泡沫保持时间较短，应用效果相对较差的缺点，在泡腾片中特别加入了3-6％的硬脂酸棕榈酸甘油酯或硬脂酸棕榈酸乙二醇酯的表面活性剂，压制得到的泡腾片均光洁、均匀，均可在5分钟左右崩解完全。且当药物与病灶部位接触后，微量的生理性分泌物使药片润湿，可有效控制泡腾片发泡速度，使泡腾片缓缓泡腾崩解产生细腻而持久的泡沫。

3、本发明的苦参绿茶阴道泡腾片中，苦参和绿茶有效成分的药粉可在黏膜分布均匀，增加了药物于阴道及宫颈黏膜的接触面积和接触时间，使病变部位药物浓度高，有效延长了药物的作用时间，有利于药物疗效的发挥。

4、本发明的制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法，通过采取填充剂部分外加、部分内加的方式，使颗粒具有更好的流动性和均匀性，压出的片剂外观光洁、均匀，崩解效果好。通过绿茶有效成分与酸混合制粒，苦参有效成分与碱混合制粒，再将两种颗粒进行混合并压片，能够防止苦参提取物和绿茶提取物因为酸碱性不同混合制粒可能造成的有效成分反应及药效降低，且在生产过程中，严格控制环境相对湿度在45％以下，防止相对湿度过大导致的泡腾片吸潮，稳定性降低。该方法能够显著提高药物的稳定性和药物使用的安全性，且工艺简单，易于操作，更加适合工业化大生产。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1：显示了根据本发明一个实施例的相对湿度对吸湿百分率的对照图；

图2：显示了根据本发明一个实施例的苦参绿茶阴道泡腾片的制剂工艺流程示意图；以及

图3：显示了根据本发明的实施例2与对比实施例的发泡速度曲线图，其中对比实施例指的是用与实施例2相同的方法制备得到的苦参绿茶阴道泡腾片，不同点在于对比实施例中未加入表面活性剂。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

实施例1、苦参绿茶阴道泡腾片的辅材选择及制备工艺研究

按照以下步骤骤制备在本发明实施例中所使用的苦参提取物，备用：苦参360克，用8倍量的水煮3次，每次1小时，以便获得苦参提取液，然后合并提取液并将其过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.06～1.08(50℃)的浓缩液。然后加盐酸调pH值至3～4，过滤，并将上清液过732型阳离子交换树脂柱，用10倍树脂体积水及6倍树脂体积的30％乙醇洗去部分杂质，再用1倍树脂体积浓氨水碱化树脂，然后用6倍树脂体积30％乙醇洗脱，并将洗脱液经减压浓缩，干燥，粉碎，得苦参提取物细粉10克。

然后，按照以下步骤进行苦参提取物引湿试验：取一定量的苦参提取物，置于盛有硅胶的干燥器内恒重48h，将底部盛有氯化铵饱和溶液的玻璃干燥器放在室温下24h，此时干燥器内的相对湿度为80％±2％。然后，在已恒重的称量瓶底部放入厚度为1mm的薄层，精密称量后置于干燥器内，室温放置，定时称量，按照下式计算吸湿百分率：

增重百分率％＝(吸湿后浸膏粉重量-吸湿前浸膏粉重量)/吸湿前浸膏粉重量×100％。

测定结果见表1。试验结果表明，苦参提取物极具引湿性，在制剂处方种不能选择吸湿性较大的辅料。

表1、苦参提取物的增重百分率

试验号	浸膏粉重量(g)	24小时后浸膏粉重量(g)	增重百分率(％)
				1	1.05	1.21	15.2
2	1.14	1.34	17.5
				3	1.08	1.27	17.6

平均

1.09

1.31

16.8

-

按照以下步骤骤制备在本发明实施例中所使用的绿茶提取物，备用：绿茶100克，加入10倍量的60％乙醇加热回流提取两次，每次1.5小时，以便获得绿茶提取液，然后合并提取液并将其过滤，将滤液减压回收除去乙醇，然后进行离心，弃去残渣，滤液上D101型大孔树脂柱，用水洗脱至无醇味，然后，用6个柱体积的水洗脱，再用5个柱体积的15％乙醇洗脱除杂，最后用5个柱体积的70％的乙醇洗脱，并将经乙醇洗脱液部分回收，干燥，得绿茶提取物10克。

然后，按照以下步骤进行绿茶提取物引湿试验：取一定量的绿茶提取物，置于盛有硅胶的干燥器内恒重48h，将底部盛有氯化铵饱和溶液的玻璃干燥器放在室温下24h，此时干燥器内的相对湿度为80％±2％。在已恒重的称量瓶底部放入厚度为1mm的薄层，精密称量后置于干燥器内，室温放置，定时称量，按照下式计算吸湿百分率：

增重百分率％＝(吸湿后浸膏粉重量-吸湿前浸膏粉重量)/吸湿前浸膏粉重量×100％

测定结果见表2。试验结果表明，绿茶提取物有引湿性，在制剂处方种不能选择吸湿性较大的辅料。

表2、绿茶提取物的增重百分率

试验号	浸膏粉重量(g)	24小时后浸膏粉重量(g)	增重百分率(％)
				1	0.95	1.02	7.21
2	1.01	1.08	6.93
				3	1.05	1.13	7.65
平均	1.00	1.08	7.26

然后，在上述研究结果的基础上，进行对苦参绿茶泡腾片的辅料种类的选择及制剂工艺研究。研究过程如下：

1.填充剂的选择

本发明中的苦参提取物和绿茶提取物易于引湿结块，因此应加入适当的药学上可接受的辅料加以改善。常用的填充剂有淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、甘露醇、木糖醇等，其中淀粉、糊精和微晶纤维素在水中溶解度较小，且易吸湿，故考察乳糖、甘露醇、木糖醇作为填充剂与主药混合后的流动性和吸湿性。见表3

表3、不同填充剂与提取物粉末的配伍处方

处方组成

处方1

处方2

处方3

处方4

处方5

处方6

苦参提取物

50％

15％

15％

15％

15％

15％

绿茶提取物

50％

15％

15％

15％

15％

15％

乳糖

-

70％

-

-

35％

-

甘露醇

-

-

70％

-

35％

35％

木糖醇

-

-

-

70％

-

35％

休止角的测定：

采用固定漏斗法，将2只漏斗串联，最底端距离水平放置坐标纸1.5cm处，小心地将颗粒沿漏斗壁倒入最上的漏斗中直到最厦门漏斗形成的药粉圆锥体尖端接触到漏斗下口为止，由坐标纸测定出圆锥底部的直径，计算出休止角(tgα＝H/R)，结果见表4。

表4、不同填充剂处方休止角及吸湿率测定结果

处方	休止角(度)	吸湿率(％)
			1	42.0	10.8
2	30.4	6.0
			3	29.6	5.7
4	38.2	8.9
			5	30.0	5.5
6	36.9	8.3

由表4可知，木糖醇的加入对粉体的流动性产生了不利影响，且吸湿率变化不显著，乳糖和甘露醇均明显改善了粉体的流动性，二者的吸湿率相对较小，且差别不明显，故填充剂选择乳糖、甘露醇中的一种或两种。

2.泡腾剂的选择

最常用的酸剂为柠檬酸、酒石酸、富马酸，柠檬酸易溶于水，但具有很强的吸湿性，由于本发明中的苦参提取物具引湿性，而绿茶提取物有一定的引湿性，故不宜选用。酒石酸的酸性较柠檬酸强，泡腾力度大，吸湿性小，故本发明选择酒石酸为泡腾剂的酸剂。常用的碱剂有碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钙等，其中碳酸钠和碳酸氢钠最为常用，酒石酸与碳酸钠最佳反应的质量比为1∶0.7，酒石酸与碳酸氢钠的最佳反应质量比为1∶1.1，当碳酸钠∶碳酸氢钠＝15∶85时，酒石酸与(碳酸钠∶碳酸氢钠＝15∶85)的最佳反应质量比为1∶1时，发泡较稳定。

具体筛选及实验如下。

2.1泡腾剂用量的优选试验

本发明固定酒石酸与碳酸钠、酒石酸与碳酸钠、酒石酸与(碳酸钠∶碳酸氢钠＝15∶85)的配比，固定苦参提取物与绿茶提取物的重量比例为1∶1.2，苦参、绿茶提取物总载药量为15％，比较泡腾剂总用量分别占全部物料的20％、25％、30％、40％时片剂的外观、崩解时限和发泡量，按表称取绿茶提取物粉，加入计算量的乳糖和酒石酸细粉混匀，过6号筛，无水乙醇作黏合剂，制粒，45℃烘干，整粒。再加入苦参提取物粉、计算量的碳酸氢钠、或碳酸钠、或二种按比例混合的细粉，过6号筛，无水乙醇作黏合剂，制粒，45℃烘干，整粒。将这两种干颗粒混合，再加入适量聚乙二醇6000，混匀、压片。结果见表5。

表5、不同泡腾剂用量的片剂性质比较

由结果可见，用酒石酸∶(碳酸钠∶碳酸氢钠＝15∶85)＝1∶1作为泡腾剂的崩解时间较短，发泡量较大，另外酒石酸∶(碳酸钠∶碳酸氢钠＝15∶85)＝1∶1占片剂重量的30％及40％时均能满足2010版中国药典对泡腾片发泡量和崩解时间的要求，考虑到泡腾剂比例过高对泡腾片稳定性的不利影响，故初步选择酒石酸∶(碳酸钠∶碳酸氢钠＝15∶85)＝1∶1为泡腾剂，在片剂中的比例为30％。

2.2泡腾剂不同配比的优选试验

固定苦参、绿茶提取物总载药量为15％，泡腾剂的总用量为总物料的30％后，比较酒石酸∶(碳酸钠∶碳酸氢钠＝15∶85)＝11∶1(酸过量)、1∶1(酸碱相当)、1∶11(碱过量)时的试验结果。称取绿茶提取物粉，加入计算量的甘露醇和酒石酸细粉混匀，过6号筛，无水乙醇作黏合剂，制粒，45℃烘干，整粒。再加入苦参提取物粉、计算量的碳酸氢钠、或碳酸钠、或二种按比例混合的细粉，过6号筛，无水乙醇作黏合剂，制粒，45℃烘干，整粒。将这两种干颗粒混合，再加入适量聚乙二醇6000，混匀、压片。结果见表6。

表6、泡腾剂不同配比的片剂性质比较

结果表明：当泡腾剂占片剂的重量比为305％时，酒石酸∶(碳酸钠∶碳酸氢钠＝15∶85)＝1.1∶1(酸过量)时，片剂的崩解时间更短，发泡量更多，符合泡腾片要求，故最终选择的泡腾剂为酒石酸∶(碳酸钠∶碳酸氢钠＝15∶85)＝11∶1的比例，且泡腾剂总量占片剂的重量比为30％。

3.黏合剂的选择

分别以2％聚维酮K30无水乙醇溶液、5％聚维酮K30无水乙醇溶液、8％聚维酮K30无水乙醇溶液、水、无水乙醇、75％乙醇作为黏合剂。称取绿茶提取物粉，加入计算量的甘露醇和酒石酸细粉混匀，过6号筛，使用上述不同的黏合剂，制粒，45℃烘干，整粒。再加入苦参提取物粉、计算量的碳酸氢钠、或碳酸钠、或二种按比例混合的细粉，过6号筛，无水乙醇作黏合剂，制粒，45℃烘干，整粒。将这两种干颗粒混合，再加入适量聚乙二醇6000，混匀、压片。结果见表7。

表7、黏合剂的筛选

根据颗粒硬度、颗粒流动性、压片情况，最终选择5％聚维酮K30无水乙醇溶液为黏合剂。另外聚维酮K30具有很高的毛细管活性和水合能力，在体内吸收体液，体积迅速膨胀，因此聚维酮K30在苦参绿茶阴道泡腾片中也能起到辅助崩解的作用。

4.润滑剂的选择

在压片过程中，黏冲现象较为突出，为解决此问题，发明人分别选择硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇6000、微粉硅胶、十二烷基硫酸镁、硬脂酰富马酸钠作为润滑剂，制备泡腾片，以颗粒的休止角、压片黏冲状况、片面性状为指标考察片剂的质量状况。

表8、不同种类润滑剂的压片情况

润滑剂	颗粒休止角(度)	外观	黏冲情况
				聚乙二醇6000	28.1	光洁	不黏冲
硬脂酸镁	29.4	光洁	不黏冲
				滑石粉	36.9	粗糙	黏冲
微粉硅胶	38.6	较光洁	黏冲
				十二烷基硫酸镁	35.8	粗糙	极易黏冲
硬脂酰富马酸钠	27.5	光洁	不黏冲

结果表明用聚乙二醇6000、硬脂酸镁、硬脂酰富马酸钠做为该泡腾片的润滑剂，不但颗粒流动性好，且压片外观光洁，不黏冲。但是在本发明中，将加了硬脂酸镁作为润滑剂的泡腾片用水溶解后，在水面上形成一层保护膜，不利于药物的崩解。故选择聚乙二醇-6000、硬脂酰富马酸钠中的一种或两种做为润滑剂。

5.不同填充剂及不同加入方式的优选试验

本发明优选的填充剂为甘露醇、乳糖中的一种或两种，填充剂可以采取内加法、外加法或内外加法，发明人的技术人员研究发现，填充剂的不同加入方法会对苦参绿茶泡腾片的平均发泡量和崩解时限产生影响，因此本发明对填充剂的加入方法进行了筛选，固定泡腾剂总用量为30％，酒石酸与(碳酸钠∶碳酸氢钠＝15∶85)比例为11∶1，苦参提取物与绿茶提取物粉末的总载药量为15％，填充剂的总用量为30％，苦参提取物和碱剂、填充剂、填充剂制软材后制粒、绿茶提取物和酸剂、填充剂、填充剂制软材后制粒，干燥后整粒，再将两种颗粒混合，压片，每组制备100片，对所压片剂的平均发泡量、崩解时限等指标进行考察，结果见表9。

表9、不同填充剂及不同加入方法的优选结果

结果表明，当不加填充剂时，会导致片子硬度差，脆碎度不符合要求，且平均发泡量少。填充剂采用外加法会导致细粉太多，压片后有较多的松片及裂片，外观不符合要求，采用内加法基本上能够满足泡腾片的质量检查要求，但崩解时限接近2010版中国药典二部附录的要求，而采用乳糖、甘露醇中的一种或两种，内加量为80％～95％、外加量为5％～20％时，则会加快泡腾片的崩解，故选择填充剂80％～95％的部分内加、5％～20％的部分外加来制备苦参绿茶阴道泡腾片效果较好。

6.表面活性剂的选择

在观察苦参绿茶阴道泡腾片的崩解中发现，制备的泡腾片崩解后药物细粉分布不够均匀，泡沫保持时间较短，因而与阴道黏膜的接触时间短，效果相对较差。

为了解决此问题，发明人创造性的选择加入一定量的表面活性剂来改善此状况，分别选择单硬脂酸甘油酯、单月桂酸甘油酯、硬脂酸棕榈酸甘油酯、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯为表面活性剂，加入量为3-6％，制备泡腾片，压制得到的泡腾片均光洁、均匀，均可在5分钟左右崩解完全。以泡腾片的泡沫特性、崩解时限(秒)、最大发泡量(毫升)、达到最大发泡量的时间(分钟)、泡沫维持时间(分钟)为指标考察片剂的质量状况，见表10。

表10、不同种类表面活性剂的优选

在本发明中，所用术语“崩解时限”测定是按照2010年版中国药典附录X A中泡腾片崩解时限检查方法来进行的。“发泡量”测定是按照2010年版中国药典附录I A中阴道泡腾片发泡量的检查方法来进行的。“发泡速度”是指在上述发泡量测定方法试验中，分别于不同时间测定记录具塞刻度试管中的泡沫量，并以时间为横坐标，发泡量为纵坐标，作图。泡沫维持时间是指在上述发泡量测定方法试验中，记录泡沫在具塞刻度试管中消失至最大体积的一半所需时间。

由表10可知，加入表面活性剂后，均能显著延长泡腾片达到最大发泡量的时间，增加泡沫的维持时间，且制备得到的泡腾片崩解后泡沫细腻，药粉分布均匀，上述四种表面活性剂均能够达到预期目的，其中选择硬脂酸棕榈酸甘油酯、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯这两种表面活性剂效果较好，优选本发明的表面活性剂为硬脂酸棕榈酸甘油酯、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯中的一种或两种。

7.压片前对颗粒的休止角的测定：

测定方法同上，测定结果见表11。

表11、压片前对颗粒休止角的测定

可见，颗粒休止角＜30°，本发明颗粒的流动性较好，能很好的满足大生产压片机压片的机械要求。

8.工艺过程中相对湿度的控制：

考虑到压片时受环境的影响，尤其是湿度影响，对泡腾片产品最终的质量有影响，发明人进行了颗粒临界相对湿度测定，确定在生产过程中，对相对湿度的控制范围。

其具体操作如下：分别取18份压片前的颗粒，每份约1g，精密称定，置称量瓶中，打开瓶盖，分别放入相对湿度为11.5％、22.8％、32.6％、43.5％、57.4％、68.7％、75.4％、84.4％、92.5％的环境中，在室温25℃下放置72小时后，取出称量瓶，加盖后精密称定，计算吸湿百分率，结果见表12。

表12、不同相对湿度下颗粒的吸湿百分率

饱和盐溶液种类	相对湿度(RH％)	吸湿百分率(％)
			氯化锂	11.5	2.03
醋酸钾	22.8	2.55
			氯化镁	32.6	3.54
碳酸钾	43.5	6.61
			溴化钠	57.4	14.60
碘化钾	68.7	22.78
			氯化钠	75.4	26.87
氯化钾	84.4	33.42
			硝酸钾	92.5	39.15

以相对湿度(RH％)对吸湿百分率(％)作图，结果见图1。由图1可知其RH％约47％，因此初步控制本发明所述苦参绿茶泡腾片在制备过程中，需保持环境相对湿度在45％下，以防止相对湿度过大导致的泡腾片吸潮，稳定性降低。

9.制剂工艺过程：

参照图2，按照下列的步骤进行制剂：将得到的苦参提取物、绿茶提取物及药用辅料表面活性剂、泡腾剂、填充剂、黏合剂、崩解剂和润滑剂分别过160目筛，备用。制粒采用湿法制粒，绿茶提取物与适量的酸剂、表面活性剂、填充剂混匀后，用黏合剂润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃干燥，16目筛整粒。苦参提取物与碱剂及适量填充剂混匀，用黏合剂润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃干燥，16目筛整粒备用。将这两种干颗粒混合，加入适量填充剂、崩解剂和润滑剂，充分混匀，压制成椭圆形或菱形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

总的来说，本发明采用苦参提取物和碱剂混合制粒，绿茶提取物和酸剂混合制粒，然后将两种颗粒混匀压片的制备工艺，所得片剂光洁均匀，且避免了苦参提取物与绿茶提取物间的化学反应和泡腾剂中的酸碱混合制粒在操作过程中发生的反应，不会引起酸碱反应从而失去泡腾效果，且增加了片剂的稳定性。

实施例2、苦参绿茶阴道泡腾片的制备

1)处方：

2)制备方法：

a.称取处方量的苦参2450g，用8倍量的水煮3次，每次1小时。合并提取液，浓缩至相对密度为1.06～1.08(50℃)的浓缩液。加盐酸调pH值至3～4，滤过，上清液过732型阳离子交换树脂柱，用10倍树脂体积水及6倍树脂体积的30％乙醇洗去部分杂质，再用1倍树脂体积浓氨水碱化树脂，用6倍树脂体积30％乙醇洗脱。洗脱液经减压浓缩，干燥，粉碎，得苦参提取物细粉。

b.称取处方量的绿茶，加入10倍量的60％乙醇加热回流提取两次，每次1.5小时，合并提取液。提取液减压回收除去乙醇，提取液离心，弃去残渣，滤液上D101型大孔树脂柱，用水洗脱至无醇味，用6个柱体积的水洗脱，再用5个柱体积的15％乙醇洗脱，最后用5个柱体积的70％的乙醇洗脱，将经乙醇洗脱部分回收，干燥，得绿茶提取物。

c.将苦参提取物、绿茶提取物以及各辅料分别过160目筛，聚维酮K30溶于无水乙醇中制备得5％聚维酮K30无水乙醇液，备用。

d.绿茶提取物与酒石酸160g、硬脂酸棕榈酸甘油酯40g、乳糖140g混匀后，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

e.将苦参提取物与碳酸钠24g、碳酸氢钠136g及乳糖110g混匀，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

f.将这两种干颗粒混合，加入乳糖30g、交联聚维酮35g、聚乙二醇600015g，充分混匀搅拌30min，再转移至压片机上，用椭圆形异型冲模压片，压制成椭圆形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

实施例3、苦参绿茶阴道泡腾片的制备

1)处方：

2)制备方法：

a.苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例2；

b.将苦参提取物、绿茶提取物以及各辅料分别过160目筛，聚维酮K30溶于无水乙醇中制备得5％聚维酮K30无水乙醇液，备用。

c.绿茶提取物与酒石酸160g、硬脂酸棕榈酸甘油酯40g、乳糖140g混匀后，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

d.将苦参提取物与碳酸钠24g、碳酸氢钠136g及乳糖110g混匀，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

e.将这两种干颗粒混合，加入乳糖30g、交联聚维酮35g、聚乙二醇600015g，充分混匀搅拌30min，再转移至压片机上，用椭圆形异型冲模压片，压制成椭圆形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

实施例4、苦参绿茶阴道泡腾片的制备

1)处方：

2)制备方法：

a.苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例2；

b.绿茶提取物与酒石酸200g、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯60g、甘露醇200g混匀后，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

c.将苦参提取物与碳酸钠30g、碳酸氢钠170g及甘露醇100g混匀，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

d.将这两种干颗粒混合，加入甘露醇20g、微晶纤维素50g、聚乙二醇600020g，充分混匀搅拌30min，再转移至压片机上，用菱形异型冲模压片，压制成菱形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

实施例5、苦参绿茶阴道泡腾片的制备

1)处方：

2)制备方法：

a.苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例2；

b.绿茶提取物与酒石酸200g、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯60g、甘露醇200g混匀后，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

c.将苦参提取物与碳酸钠30g、碳酸氢钠170g及甘露醇100g混匀，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

d.将这两种干颗粒混合，加入甘露醇20g、微晶纤维素50g、聚乙二醇600020g，充分混匀搅拌30min，再转移至压片机上，用菱形异型冲模压片，压制成菱形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

实施例6、苦参绿茶阴道泡腾片的制备

1)处方：

2)制备方法：

a.苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例2；

b.绿茶提取物与酒石酸180g、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯25g、硬脂酸棕榈酸甘油酯25g、甘露醇120g混匀后，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

c.将苦参提取物与碳酸钠27g、碳酸氢钠153g及甘露醇100g混匀，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

d.将这两种干颗粒混合，加入甘露醇20g、交联聚维酮80g、硬脂酰富马酸钠25g，充分混匀搅拌30min，再转移至压片机上，用菱形异型冲模压片，压制成菱形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

实施例7、苦参绿茶阴道泡腾片的制备

1)处方：

2)制备方法：

a.苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例2；

b.绿茶提取物与酒石酸180g、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯25g、硬脂酸棕榈酸甘油酯25g、甘露醇120g混匀后，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

c.将苦参提取物与碳酸钠27g、碳酸氢钠153g及甘露醇100g混匀，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，

16目筛整粒；备用。

d.将这两种干颗粒混合，加入甘露醇20g、交联聚维酮80g、硬脂酰富马酸钠25g，充分混匀搅拌30min，再转移至压片机上，用菱形异型冲模压片，压制成菱形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

实施例8、苦参绿茶阴道泡腾片的制备

1)处方：

2)制备方法：

a.苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例2；

b.绿茶提取物与酒石酸160g、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯30g、硬脂酸棕榈酸甘油酯20g、乳糖200g混匀后，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

c.将苦参提取物与碳酸钠24g、碳酸氢钠136g及乳糖160g混匀，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

d.将这两种干颗粒混合，加入乳糖40g、微晶纤维素30g、硬脂酰富马酸钠15g，充分混匀搅拌30min，再转移至压片机上，用椭圆形异型冲模压片，压制成椭圆形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

实施例9、苦参绿茶阴道泡腾片的制备

1)处方：

2)制备方法：

a.苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例2；

b.绿茶提取物与酒石酸160g、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯30g、硬脂酸棕榈酸甘油酯20g、乳糖200g混匀后，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

c.将苦参提取物与碳酸钠24g、碳酸氢钠136g及乳糖160g混匀，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

d.将这两种干颗粒混合，加入乳糖40g、微晶纤维素30g、硬脂酰富马酸钠15g，充分混匀搅拌30min，再转移至压片机上，用椭圆形异型冲模压片，压制成椭圆形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

实施例10、苦参绿茶阴道泡腾片的制备

1)处方：

2)制备方法：

a.苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例2；

b.绿茶提取物与酒石酸160g、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯40g、甘露醇150g混匀后，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

c.将苦参提取物与碳酸钠24g、碳酸氢钠136g及甘露醇120g混匀，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

d.将这两种干颗粒混合，加入甘露醇30g、微晶纤维素100g、聚乙二醇600030g，充分混匀搅拌30min，再转移至压片机上，用椭圆形异型冲模压片，压制成椭圆形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

实施例11、苦参绿茶阴道泡腾片的制备

1)处方：

2)制备方法：

a.苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例2；

b.绿茶提取物与酒石酸160g、硬脂酸棕榈酸乙二醇酯40g、甘露醇150g混匀后，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

c.将苦参提取物与碳酸钠24g、碳酸氢钠136g及甘露醇120g混匀，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

d.将这两种干颗粒混合，加入甘露醇30g、微晶纤维素100g、聚乙二醇600030g，充分混匀搅拌30min，再转移至压片机上，用椭圆形异型冲模压片，压制成椭圆形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

实施例12、苦参绿茶阴道泡腾片的制备

1)处方：

2)制备方法：

a.苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例2；

b.绿茶提取物与酒石酸200g、硬脂酸棕榈酸甘油酯50g、甘露醇75g、乳糖75g，混匀后，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

c.将苦参提取物与碳酸钠30g、碳酸氢钠170g及甘露醇50g、乳糖50g混匀，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

d.将这两种干颗粒混合，加入甘露醇25g、乳糖25g、交联聚维酮70g、硬脂酰富马酸钠25g，充分混匀搅拌30min，再转移至压片机上，用菱形异型冲模压片，压制成菱形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

实施例13、苦参绿茶阴道泡腾片的制备

1)处方：

2)制备方法：

a.苦参提取物和绿茶提取物的制备方法及各原辅料的前处理方法同实施例2；

b.绿茶提取物与酒石酸200g、硬脂酸棕榈酸甘油酯50g、甘露醇75g、乳糖75g，混匀后，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

c.将苦参提取物与碳酸钠30g、碳酸氢钠170g及甘露醇50g、乳糖50g混匀，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

d.将这两种干颗粒混合，加入甘露醇25g、乳糖25g、交联聚维酮70g、硬脂酰富马酸钠25g，充分混匀搅拌30min，再转移至压片机上，用菱形异型冲模压片，压制成菱形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

实施例14、苦参绿茶阴道泡腾片的鉴别

取按照实施例2制备的苦参绿茶阴道泡腾片10片，研细，置于具塞锥形瓶中，然后添加三氯甲烷25ml、浓氨试液0.5ml，进行超声提取45min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱、氧化苦参碱对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。利用薄层色谱法进行试验：吸取上述溶液各7μl点于同一0.4％NaOH的硅胶G薄层板，以体积比为5∶0.6∶0.3的三氯甲烷-甲醇-浓氨试液的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，然后依次喷以碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液。在供试品色谱中，其与对照品色谱相同的位置上，应出现相同颜色的斑点。结果显示：实施例2制备的苦参绿茶阴道泡腾片的供试品色谱中，其与对照品色谱相同的位置上出现相同颜色的斑点。表明所制备的苦参绿茶阴道泡腾片中含有苦参碱和氧化苦参碱。

取按照实施例2制备的苦参绿茶阴道泡腾片10片，研细，置于具塞锥形瓶中，然后添加25ml体积比为1∶4.5的氯仿∶甲醇的混合溶液，进行超声提取45min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取表没食子儿茶素没食子酸酯对照品加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。利用薄层色谱法进行试验：吸取上述溶液各8μl点于同一硅胶G板上，以体积比为13∶4∶2.5的三氯甲烷-甲醇-乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，然后喷以10％的硫酸乙醇试液，在105℃加热至斑点清晰。在供试品色谱中，其与对照品色谱相同的位置上，应出现相同颜色的斑点。结果显示：实施例2制备的苦参绿茶阴道泡腾片的供试品色谱中，其与对照品色谱相同的位置上出现相同颜色的斑点。表明所制备的苦参绿茶阴道泡腾片中含有表没食子儿茶素没食子酸酯。

实施例15、苦参绿茶阴道泡腾片的检查

重量差异：按照2010年版中国药典附录I A中片剂重量差异的检查方法进行。取按照实施例2制备的阴道泡腾片20片，精密称定总重量，求得平均片重后，再分别精密称定每片的重量，结果见表每片质量为(1000±19)mg，未发现片重超限，符合规定。同法测定实施例3-13所制备的苦参绿茶阴道泡腾片，重量差异均符合规定。

崩解时限：按照2010年版中国药典附录X A中泡腾片崩解时限检查方法进行。测定实施例2-13所制备的苦参绿茶阴道泡腾片，各片均在5分钟内崩解，符合规定。

发泡量按照2010年版中国药典附录I A中阴道泡腾片发泡量的检查方法进行，测定实施例2-13发泡量均符合规定。

发泡速度：在上述发泡量测定方法试验中，分别于不同时间测定记录具塞刻度试管中的泡沫量，并以时间为横坐标，发泡量为纵坐标，作出实施例2与下面的对比实施例的发泡速度曲线图，见图3。

泡沫维持时间：在上述发泡量测定方法试验中，记录泡沫在具塞刻度试管中消失至最大体积的一半所需时间，作为该阴道泡腾片的泡沫维持时间。

对比实施例：用与实施例2相同的方法制备对比实施例，不同点在于省略了表面活性剂的加入(即对比实施例中未加入表面活性剂)，并采用对比实施例制备得到苦参绿茶阴道泡腾片。

对比实施例的制备方法如下：

a.称取处方量的苦参2450g，用8倍量的水煮3次，每次1小时。合并提取液，浓缩至相对密度为1.06～1.08(50℃)的浓缩液。加盐酸调pH值至3～4，滤过，上清液过732型阳离子交换树脂柱，用10倍树脂体积水及6倍树脂体积的30％乙醇洗去部分杂质，再用1倍树脂体积浓氨水碱化树脂，用6倍树脂体积30％乙醇洗脱。洗脱液经减压浓缩，干燥，粉碎，得苦参提取物细粉。

b.称取处方量的绿茶，加入10倍量的60％乙醇加热回流提取两次，每次1.5小时，合并提取液。提取液减压回收除去乙醇，提取液离心，弃去残渣，滤液上D101型大孔树脂柱，用水洗脱至无醇味，用6个柱体积的水洗脱，再用5个柱体积的15％乙醇洗脱，最后用5个柱体积的70％的乙醇洗脱，将经乙醇洗脱部分回收，干燥，得绿茶提取物。

c.将苦参提取物、绿茶提取物以及各辅料分别过160目筛，聚维酮K30溶于无水乙醇中制备得5％聚维酮K30无水乙醇液，备用。

d.绿茶提取物与酒石酸160g、乳糖140g混匀后，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

e.将苦参提取物与碳酸钠24g、碳酸氢钠136g及乳糖110g混匀，用适量5％聚维酮K30无水乙醇液润湿制软材，20目筛制粒；湿颗粒在45℃下鼓风干燥1.5h，16目筛整粒；备用。

f.将这两种干颗粒混合，加入乳糖30g、交联聚维酮35g、聚乙二醇600015g，充分混匀搅拌30min，再转移至压片机上，用椭圆形异型冲模压片，压制成椭圆形片剂，铝塑泡罩包装，即得。

将对比实施例与实施例2的质量检查作比较，其中发泡速度计算至30min，具体结果见表13。

表13、实施例所制备苦参绿茶阴道泡腾片与对比实施例的质量检查比较

比较结果表明，本发明所得的苦参绿茶阴道泡腾片可有效控制泡腾片发泡速度，使泡腾片缓慢持续产生崩解，并且所得的泡沫细腻、持久，药粉分布均匀，最大发泡量增大，达到最大发泡量的时间长，产生的泡沫维持的时间长。

实施例16、苦参绿茶阴道泡腾片阴道黏膜刺激性试验

1.动物及材料

家兔，雌性未孕，体质量2.0-3.0kg，健康状况良好，由武汉大学医学院实验动物中心提供。

苦参绿茶阴道泡腾片(根据上述实施例2制备)，1.00g/片。

2.试验方法

取家兔8只，随机分为空白对照组(给予空白基质做成的空白片)和苦参绿茶阴道泡腾片给药组，每组4只。每次给药前，用温开水将家兔的阴道清洗干净。具体地，空白对照组每日放入用基质做的空白片1片于家兔的阴道，给药组每日放入苦参绿茶阴道泡腾片1粒于家兔的阴道，均连续7天。然后，每日观察记录阴道黏膜有无红肿、充血的情况，并观察记录家兔一般状况、体质量、饮食等。最后一次给药后24h处死家兔，取家兔阴道组织，并利用10％福尔马林将其固定，进行病理组织学检查。然后，按WHO推荐的Eckstein刺激性评价标准记录黏膜上发生的血管充血、炎症细胞浸润、黏膜水肿、上皮溃疡4种病变的不同程度评分，每项以1-4分记录，共16分。其中，总分值≤8分为临床可以接受的刺激性范围。

3.试验结果

两组家兔一般状况良好，毛色光洁，活动自如，饮食正常，体质量增加，阴道外观无红肿充血；病理组织学检查显示，空白对照组阴道黏膜上皮细胞形态均未见异常，固有层可见淋巴细胞和散在淋巴小结，未见血管扩张，肌层、外膜无明显炎症细胞浸润，未见明显血管扩张，给药组家兔阴道黏膜上皮完整，个别上皮细胞轻微肿胀，偶见黏膜下毛细血管及炎症细胞浸润。各组评分结果见表14，结果表明苦参绿茶阴道泡腾片多次阴道给药对家兔阴道黏膜无刺激性，临床完全可以接受。

表14、苦参绿茶阴道泡腾片对家兔阴道黏膜的刺激性作用(

n＝4)

实施例17、苦参绿茶阴道泡腾片对宫颈上皮内瘤变(CIN)大鼠宫颈组织PCNA、EGFR和bcl-2表达的影响

1.材料

实验药物及试剂：

Wistar大鼠30只，雌性，体质量250±5g，健康状况良好，由武汉大学医学院实验动物中心提供。

苦参绿茶阴道泡腾片(根据上述实施例5制备，1.01g/片)。

增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色试剂盒、表皮生长因子受体(EGFR)免疫组化染色试剂盒和细胞凋亡抑制基因bcl-2免疫组化染色试剂盒，均由北京中山生物技术有限公司提供。

2.方法

2.1动物造模方法

致癌剂棉线的制备：用苯溶剂溶解化学致癌剂二甲基苯并蒽(DMBA)得到DMBA溶液，将棉线浸入该溶液内，置于通风橱内待苯挥发后，计算棉线的含药量为0.5mg/cm。

取雌性大鼠，在动物不麻醉状态下，借助阴道扩张器及小号弯针，将浸药棉线穿入宫颈，经宫颈口由穹隆部穿出，线结固定于宫颈口(关于该技术的详细内容可以参见：施新猷.现代医学实验动物学[M].北京：人民军医出版社.2000：438，通过参照并入本文)，以获得经过DMBA处理的大鼠。

2.2动物分组及给药方法

将大鼠分为3组，每组各10只，分别标记为：空白组、模型组和治疗组，其中，分组及后续试验根据下列处理办法进行：空白组采用正常大鼠，且不用苦参绿茶阴道泡腾片处理；模型组采用上述获得的经过DMBA处理的大鼠，并且不用苦参绿茶阴道泡腾片对其进行处理；治疗组：采用上述经过DMBA处理的大鼠，并且对其给予苦参绿茶阴道泡腾片(1.01g/片，1片/只)。将上述3组大鼠进行常规喂养5月后，通过颈椎脱臼将其处死，剖取大鼠宫颈，保存标本供光镜观察。

2.3免疫组织化学检测方法

将各组大鼠的宫颈组织浸入4％多聚甲醛溶液进行固定，接着依次经过脱水、透明、浸蜡和包埋处理，接下来将所得的每个蜡块进行连续切片，各取3张切片(切片厚度5μm)，然后分别选用PCNA、EGFR和bcl-2三种抗体，利用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(S-P法)将上述各组的切片进行免疫组织化学染色，二氨基联苯胺(DAB)显色和显微镜观察。

3.结果

3.1大鼠宫颈组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平比较

采用半定量方法对前面所述的切片进行检测，以便比较各组大鼠宫颈组织增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。其中，细胞核被染成棕黄色定为阳性结果。然后，基于每张切片阳性反应颗粒的颜色深浅和占细胞总数的比例，按照下列标准，对各张切片的进行统计：

阴性(-)：无或偶见阳性颗粒，颜色呈浅黄色；

弱阳性(+)：阳性颗粒少于1/3，颜色呈淡棕黄色；

中度阳性(++)：阳性颗粒介于1/3～2/3之间，颜色介于+～+++之间；

强阳性(+++)：阳性颗粒多于2/3，颜色呈棕黄色。

根据统计结果，对各张切片进行评分，其中(-)：1分；(+)：2分；(++)：3分；(+++)：4分。每张切片观察3个视野。

结果显示：PCNA主要在细胞核上表达。模型组PCNA表达呈强阳性，与空白组相比有极显著性差异(P＜0.01)；治疗组与模型组比较有极显著性差异(P＜0.01)，结果见表15。

表15、各组大鼠宫颈组织PCNA表达水平比较

组别	n**	-	+	++	+++	阳性评分
							空白组	10	6	3	1	0	15
模型组	9	0	2	1	6	31△
							治疗组	10	6	3	1	0	13*

注：^△与空白组比较，P＜0.01；^*与模型组比较，P＜0.01；^**n为各组受检大鼠的只数。

本研究结果表明，模型组大鼠的宫颈组织PCNA表达较强，颜色较深，而治疗组仅有较少例数染色程度相对较弱的PCNA阳性表达，二者相比有极显著性差异(P＜0.01)，并且其分布渐局限于基底层，表明本发明的苦参绿茶阴道泡腾片是通过抑制增殖因子的表达而起到抑制宫颈上皮异型细胞增生作用。

3.2大鼠宫颈组织表皮生长因子(EGFR)表达水平比较

采用半定量方法对前面所述的切片进行检测，以便比较各组大鼠宫颈组织表皮生长因子(EGFR)的表达水平。其中，细胞膜/浆被染成棕黄色定为阳性结果。然后，基于每张切片阳性反应颗粒的颜色深浅和占细胞总数的比例，按照与上述PCNA检测中相同的标准，对各张切片的进行统计：

结果显示：EGFR主要在细胞膜及细胞浆上表达，且以细胞膜为主。模型组EGFR表达呈强阳性，与空白组相比有极显著性差异(P＜0.01)；治疗组与模型组比较有极显著性差异(P＜0.01)，结果见表16。

表16、各组大鼠宫颈组织EGFR表达水平比较

组别	n**	-	+	++	+++	阳性评分
							空白组	10	8	2	0	0	12
模型组	10	1	1	2	6	33△
							治疗组	10	6	3	1	0	15*

注：^△与空白组比较，P＜0.01；^*与模型组比较，P＜0.01；^**n为各组受检大鼠的只数。

本研究结果表明，治疗组大鼠宫颈组织仅有较少量的EGFR阳性表达，且染色较浅.与模型组EGFR阳性表达相比有极显著性差异(P＜0.01)，表明本发明的苦参绿茶阴道泡腾片能够抑制EGFR的表达，进而抑制宫颈上皮异型细胞的增生。

3.3大鼠宫颈组织细胞凋亡抑制基因bcl-2表达水平比较

采用半定量方法对前面所述的切片进行检测，以便比较各组小鼠宫颈组织细胞凋亡抑制基因bcl-2的表达水平。其中，细胞膜/浆被染成棕黄色定为阳性结果。基于每张切片阳性反应颗粒的颜色深浅和占细胞总数的比例，按照与上述PCNA检测中相同的标准，对各张切片进行统计。

结果显示：bcl-2主要在细胞膜及细胞浆上表达，且以细胞膜为主。模型组bcl-2表达与空白组相比有极显著性差异(P＜0.01)；治疗组与模型组比较有极显著性差异(P＜0.01)，结果见表17。

表17、各组大鼠宫颈组织bcl-2表达水平比较

组别	n**	-	+	++	+++	阳性评分
							空白组	10	8	2	0	0	12
模型组	9	0	4	2	3	26△
							治疗组	10	7	2	1	0	14*

注：^△与空白组比较，P＜0.01；^*与模型组比较，P＜0.01；^**n为各组受检大鼠的只数。

本研究结果表明，治疗组大鼠宫颈组织bcl-2的阳性表达程度减弱，数量减少。与模型组比较有极显著性差异(P＜0.01)，且阳性表达以基底层明显，说明本发明的苦参绿茶阴道泡腾片是通过抑制抗凋亡因子的表达而发挥促进宫颈上皮异型细胞凋亡的作用的。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (9)

1.一种苦参绿茶阴道泡腾片，其特征在于，包含：

苦参提取物、绿茶提取物、表面活性剂、泡腾剂、填充剂、黏合剂、崩解剂和润滑剂，

其中，

所述苦参提取物是苦参的水提取物，所述绿茶提取物是绿茶的醇提取物，

任选地，所述苦参提取物是通过下列步骤制备的：

将苦参进行加水提取，以便获得苦参提取液；

将所述苦参提取液进行浓缩，以便获得苦参浓缩液；

将所述苦参浓缩液进行pH调节；以及

将所述经过pH调节的苦参浓缩液进行纯化，以便获得所述苦参提取物，

任选地，所述将苦参进行加水提取，进一步包括：

将所述苦参用6-12倍重量的水进行水煮2-4次，每次0.5-2小时，并合并提取液，以便获得所述苦参提取液，

任选地，所述苦参浓缩液在50摄氏度时的相对密度为1.06～1.08，

任选地，利用盐酸将所述苦参浓缩液进行pH调节，其中，所述经过pH调节的苦参浓缩液的pH为2-5，

任选地，利用阳离子交换树脂对所述苦参浓缩液进行纯化，

任选地，所述绿茶提取物是通过下列步骤制备的：

将绿茶进行加醇提取，以便获得绿茶提取液；以及

将所述绿茶提取液进行纯化，以便获得所述绿茶提取物，

任选地，将绿茶进行加醇提取进一步包括：

将所述绿茶用8-12倍重量的40-80％乙醇进行加热回流提取1-3次，每次0.5-2小时，并合并提取液，以便获得所述绿茶提取液，

任选地，将所述绿茶提取液进行纯化进一步包括：

将所述绿茶提取液进行减压处理，以便除去乙醇；

将所述绿茶提取液进行大孔树脂柱处理，以便获得经过纯化的绿茶提取液。

2.根据权利要求1所述的苦参绿茶阴道泡腾片，其特征在于，所述表面活性剂为硬脂酸棕榈酸甘油酯和硬脂酸棕榈酸乙二醇酯的至少一种，

任选地，所述泡腾剂由酸剂和碱剂组成，其中，所述酸剂为选自柠檬酸、柠檬酸钠盐、酒石酸、酒石酸氢盐、苹果酸、甘氨酸、富马酸、富马酸盐、马来酸和马来酸盐的至少一种，优选所述酸剂为酒石酸，所述碱剂为碳酸钠、碳酸氢钠的至少一种，优选地，所述碱剂为碳酸钠与碳酸氢钠的混合物，其中，碳酸钠与碳酸氢钠的重量比为15∶85，

任选地，所述填充剂为选自淀粉、预胶化淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、磷酸氢钙和碳酸钙的至少一种，优选所述填充剂为甘露醇和乳糖的至少一种，

任选地，所述黏合剂为选自羟丙基甲基纤维素、聚维酮K30、甲基纤维素、乙醇、淀粉糊的至少一种，优选所述黏合剂为5％聚维酮K30的无水乙醇溶液，

任选地，所述崩解剂为选自低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠和微晶纤维素的至少一种，优选所述崩解剂为微晶纤维素和交联聚维酮的至少一种，

任选地，所述润滑剂为选自硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、固体聚乙二醇类、十二烷基硫酸镁、十二烷基硫酸钠、苯甲酸钠、和硬脂酰富马酸钠的至少一种，优选所述润滑剂为聚乙二醇6000和硬脂酰富马酸钠的至少一种。

3.根据权利要求1所述的苦参绿茶阴道泡腾片，其特征在于，按照重量份数，所述苦参绿茶阴道泡腾片包含：

任选地，按照重量份数，所述苦参绿茶阴道泡腾片包含：

任选地，按照重量份数，所述苦参绿茶阴道泡腾片包含：

任选地，按照重量份数，所述苦参绿茶阴道泡腾片包含：

任选地，按照重量份数，所述苦参绿茶阴道泡腾片包含：

任选地，按照重量份数，所述苦参绿茶阴道泡腾片包含：

任选地，按照重量份数，所述苦参绿茶阴道泡腾片包含：

4.一种制备苦参绿茶阴道泡腾片的方法，其特征在于，包括：

制备苦参提取物，所述苦参提取物是水提取物；

制备绿茶提取物，所述绿茶提取物是醇提取物；以及

将所述苦参提取物和所述绿茶提取物制成阴道泡腾片，

其中，任选地，所述制备苦参提取物进一步包括下列步骤：

将苦参进行加水提取，以便获得苦参提取液；

将所述苦参提取液进行浓缩，以便获得苦参浓缩液；

将所述苦参浓缩液进行pH调节；以及

将所述经过pH调节的苦参浓缩液进行纯化，以便获得所述苦参提取物，

任选地，所述制备绿茶提取物进一步包括下列步骤：

将绿茶进行加醇提取，以便获得绿茶提取液；以及

将所述绿茶提取液进行纯化，以便获得所述绿茶提取物，

任选地，所述将苦参进行加水提取，进一步包括：

将所述苦参用6-12倍重量的水进行水煮2-4次，每次0.5-2小时，并合并提取液，以便获得所述苦参提取液，

任选地，所述苦参浓缩液在50摄氏度时的相对密度为1.06～1.08，

任选地，利用盐酸将所述苦参浓缩液进行pH调节，其中，所述经过pH调节的苦参浓缩液的pH为2-5，

任选地，利用阳离子交换树脂对所述苦参浓缩液进行纯化，

任选地，将绿茶进行加醇提取进一步包括：

将所述绿茶用8-12倍重量的40-80％乙醇进行加热回流提取1-3次，每次0.5-2小时，并合并提取液，以便获得所述绿茶提取液，

任选地，将所述绿茶提取液进行纯化进一步包括：

将所述绿茶提取液进行减压处理，以便除去乙醇；

将所述绿茶提取液进行大孔树脂柱处理，以便获得经过纯化的绿茶提取液，

任选地，将所述苦参提取物和所述绿茶提取物制成阴道泡腾进一步包括：

将所述绿茶提取物与酸剂、表面活性剂、填充剂、稳定剂混合并进行制粒处理，以便获得绿茶提取物粗粒；

将所述苦参提取物与填充剂混合并进行制粒处理，以便获得苦参提取物粗粒；

将所述绿茶提取物粗粒、苦参提取物粗粒与填充剂、崩解剂和润滑剂混合并压制成片剂，以便获得所述苦参绿茶阴道泡腾片。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述表面活性剂为硬脂酸棕榈酸甘油酯和硬脂酸棕榈酸乙二醇酯的至少一种，

任选地，所述泡腾剂由酸剂和碱剂组成，其中，所述酸剂为选自柠檬酸、柠檬酸钠盐、酒石酸、酒石酸氢盐、苹果酸、甘氨酸、富马酸、富马酸盐、马来酸和马来酸盐的至少一种，优选所述酸剂为酒石酸，所述碱剂为碳酸钠、碳酸氢钠的至少一种，所述碱剂为碳酸钠与碳酸氢钠的混合物，其中，碳酸钠与碳酸氢钠的重量比为15∶85，

任选地，所述填充剂为选自淀粉、预胶化淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、磷酸氢钙和碳酸钙的至少一种，优选填充剂为甘露醇和乳糖的至少一种，

任选地，所述黏合剂为选自羟丙基甲基纤维素、聚维酮K30、甲基纤维素、乙醇、淀粉糊的至少一种，优选所述黏合剂为5％聚维酮K30的无水乙醇溶液，

任选地，所述崩解剂为选自低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠和微晶纤维素的至少一种，优选所述崩解剂为微晶纤维素和交联聚维酮的至少一种，

任选地，所述润滑剂为选自硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、固体聚乙二醇类、十二烷基硫酸镁、十二烷基硫酸钠、苯甲酸钠、和硬脂酰富马酸钠的至少一种，优选所述润滑剂为聚乙二醇6000和硬脂酰富马酸钠的至少一种。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，按照重量份数，所述方法采用：

任选地，采用硬脂酸棕榈酸甘油酯作为表面活性剂，所述泡腾剂由酸剂和碱剂组成，采用酒石酸作为酸剂，采用碳酸钠和碳酸氢钠的混合物作为碱剂，采用乳糖作为填充剂，采用聚维酮K30作为黏合剂，采用交联聚维酮作为崩解剂，采用聚乙二醇6000作为润滑剂，并且按照重量份数，所述原料的比例为：

任选地，采用硬脂酸棕榈酸乙二醇酯作为表面活性剂，所述泡腾剂由酸剂和碱剂组成，采用酒石酸作为酸剂，采用碳酸钠和碳酸氢钠的混合物作为碱剂，采用甘露醇作为填充剂，采用聚维酮K30作为黏合剂，采用微晶纤维素作为崩解剂，采用聚乙二醇6000作为润滑剂，并且按照重量份数，所述原料的比例为：

任选地，采用硬脂酸棕榈酸乙二醇酯和硬脂酸棕榈酸甘油酯的混合物作为表面活性剂，所述泡腾剂由酸剂和碱剂组成，采用酒石酸作为酸剂，采用碳酸钠和碳酸氢钠的混合物作为碱剂，采用甘露醇作为填充剂，采用聚维酮K30作为黏合剂，采用交联聚维酮作为崩解剂，采用硬脂酰富马酸钠作为润滑剂，并且按照重量份数，所述原料的比例为：

任选地，采用硬脂酸棕榈酸乙二醇酯和硬脂酸棕榈酸甘油酯的混合物作为表面活性剂，所述泡腾剂由酸剂和碱剂组成，采用酒石酸作为酸剂，采用碳酸钠和碳酸氢钠的混合物作为碱剂，采用甘露醇作为填充剂，采用聚维酮K30作为黏合剂，采用微晶纤维素作为崩解剂，采用硬脂酰富马酸钠作为润滑剂，并且按照重量份数，所述原料的比例为：

任选地，采用硬脂酸棕榈酸乙二醇酯作为表面活性剂，所述泡腾剂由酸剂和碱剂组成，采用酒石酸作为酸剂，采用碳酸钠和碳酸氢钠的混合物作为碱剂，采用甘露醇作为填充剂，采用聚维酮K30作为黏合剂，采用微晶纤维素作为崩解剂，采用聚乙二醇6000作为润滑剂，并且按照重量份数，所述原料的比例为：

任选地，采用硬脂酸棕榈酸甘油酯作为表面活性剂，所述泡腾剂由酸剂和碱剂组成，采用酒石酸作为酸剂，采用碳酸钠和碳酸氢钠的混合物作为碱剂，采用甘露醇和乳糖的混合物作为填充剂，采用聚维酮K30作为黏合剂，采用交联聚维酮作为崩解剂，采用硬脂酰富马酸钠作为润滑剂，并且按照重量份数，所述原料的比例为：

7.一种苦参绿茶阴道泡腾片，其特征在于，所述苦参绿茶阴道泡腾片是由如权利要求4-6任一项所述的方法制备的。

8.根据权利要求1-3或7所述的苦参绿茶阴道泡腾片在制备预防及治疗女性宫颈上皮内瘤变的药物中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述药物用于制备预防及治疗女性宫颈糜烂以及轻、中度宫颈非典型增生的药物。

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