CN102641314A - 一种预防和/或治疗妇科疾病的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种预防和/或治疗妇科疾病的药物组合物,该药物组合物包含蛇床子素提取物以及药学上可接受的辅料,其中在所述蛇床子素提取物中,蛇床子素的质量为蛇床子素提取物总质量的99.0%以上,优选为99.5%~99.9%。该药物组合物的活性成分的含量和稳定性均得到提高且能有效预防和/或治疗由微生物感染引起的妇科疾病,例如阴道炎、宫颈炎和外阴瘙痒等疾病。
Description
技术领域
本发明涉及一种预防和/或治疗妇科疾病的药物组合物,具体涉及一种预防和/或治疗由微生物感染引起妇科疾病,例如阴道炎、宫颈炎和外阴瘙痒等妇科疾病的包含蛇床子素提取物药物组合物。
背景技术
霉菌性阴道炎是由念珠菌引起的,所以又称念珠菌性阴道炎。念珠菌可寄生于阴道、口腔和肠道内,这三个部位的念珠菌可相互传染,当机体及阴道局部的细胞免疫力下降、阴道内糖原增加、酸度增高时,适宜的念珠菌大量繁殖,出现炎症症状,其主要表现为:外阴瘙痒,灼痛,严重时还可伴有尿路感染等症状。霉菌性阴道炎的主要特征是具有白色稠厚、呈凝乳或豆腐渣样的白带。现有的霉菌性阴道炎的治疗方法以局部治疗为主,一般疗效较好,但容易复发。
滴虫性阴道炎(trichomonalvaginitis)也是常见的阴道炎,其由阴道毛滴虫引起。滴虫呈梨形,后端尖,约为多核,大小为白细胞的2~3倍。虫体顶端有4根鞭毛,体部有波动膜,后端有轴柱凸出。活的滴虫透明无色,呈水滴状,鞭毛随波动膜的波动而摆动。滴虫的生活史简单,只有滋养体而无包囊期。滋养体的生存力较强,能在3~5℃下生存2日,在46℃下生存20~60分钟,在半干燥环境下约生存10小时,即使在普通肥皂水中也能生存45~120分钟,在pH 5以下或7.5以上的环境中则不生长。滴虫阴道炎患者的阴道pH值一般为5.1~5.4。隐藏在腺体及阴道皱襞中的滴虫常于月经前后繁殖,引起炎症的发作,并消耗或吞噬阴道上皮细胞内的糖原,阻碍乳酸生成。滴虫不仅寄生于阴道,还常侵入尿道或尿道旁腺。甚至膀胱、肾盂以及男性的包皮褶、尿道或前列腺中。
现有的用于治疗阴道炎的中药洗液具有不同程度的疗效,如洁尔阴、妇炎洁等洗液在临床上已得到认可和广泛使用。这些中药洗液一般由多种药材提取、配制而成,制备这些洗液的药材包括蛇床子、苦参、黄柏、百 部、黄连、茵陈等,例如妇洁洗液的原料就由蛇床子、百部、黄柏、苦参等十位药材组成,导致其成分复杂、杂质含量高,影响了有效成分的活性和稳定性。
发明内容
因此,本发明的目的是提供一种活性成分的含量和稳定性均得到提高且能有效预防和/或治疗由微生物感染引起的妇科疾病,例如阴道炎、宫颈炎和外阴瘙痒等疾病的药物组合物。
本发明提供的用于预防和/或治疗由微生物感染引起的妇科疾病的药物组合物包含蛇床子素提取物以及药学上可接受的辅料,其中在所述蛇床子素提取物中,蛇床子素的质量为蛇床子素提取物总质量的99.0%以上,优选为99.5%~99.9%。
在上述药物组合物中,优选地,蛇床子素提取物的质量为药物组合物总质量的0.1%~2%。
在上述药物组合物中,药学上可接受的辅料可以选自赋形剂;溶剂,例如水、乙醇、丙二醇、甘油、二甲基亚砜;防腐剂,苯甲酸或其盐、对羟基苯甲酸酯、氯已定、苯扎溴铵、山梨酸或其盐;pH调节剂和增溶剂中的一种或多种。
优选地,上述药物组合物为溶液;更优选地,溶液的溶剂为水;进一步优选地,溶液中的蛇床子素提取物的浓度为40μg~4mg/ml。
优选地,上述药物组合物为栓剂;更优选地,栓剂的赋形剂选自可可豆脂、脂肪酸甘油酯、甘油明胶和聚乙二醇中的一种或多种;进一步优选地,栓剂中的蛇床子素的质量为栓剂总质量的1.25%~12.5%。
上述引起妇科疾病的微生物可以选自金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、粪肠球菌、滴虫、绿脓杆菌和白色念珠菌中的一种或多种。
上述由微生物感染引起的妇科疾病可以选自滴虫和/或真菌引起的阴道炎、宫颈炎和外阴瘙痒中的一种或多种。
优选地,上述蛇床子素提取物的制备方法包括以下步骤:
(1)将蛇床子素粗提物加热溶解于95%(体积/体积)乙醇水溶液,冷却析出晶体;
(2)将步骤(1)得到的晶体加热溶解于体积比为50∶1的乙酸乙酯和石油醚的混合溶液,冷却析出晶体;
(3)将步骤(2)得到的晶体加热溶解于无水乙醇,冷却析出晶体。
更优选地,上述蛇床子素提取物的制备方法包括以下步骤:
(1)将蛇床子素粗提物加热溶解于95%(体积/体积)乙醇水溶液,活性碳脱色后过滤,-10℃下静置析出晶体;
(2)将步骤(1)得到的晶体加热溶解于体积比为50∶1的乙酸乙酯和石油醚的混合溶液,再加热回流后过滤,0℃下静置析出晶体;
(3)将步骤(2)得到的晶体加热溶解于无水乙醇,再加热回流后过滤,室温下静置析出晶体。
另一方面,本发明还提供了蛇床子素提取物在制备预防和/或治疗由微生物感染引起的妇科疾病的药物中的用途,其中所述蛇床子素的质量为蛇床子素提取物总质量的99%以上,优选为99.5%~99.9%。
上述引起妇科疾病的微生物可以选自金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、粪肠球菌、滴虫、绿脓杆菌和白色念珠菌中的一种或多种。
优选地,上述蛇床子素提取物的制备方法包括以下步骤:
(1)将蛇床子素粗提物加热溶解于95%(体积/体积)乙醇水溶液,冷却析出晶体;
(2)将步骤(1)得到的晶体加热溶解于体积比为50∶1的乙酸乙酯和石油醚的混合溶液,冷却析出晶体;
(3)将步骤(2)得到的晶体加热溶解于无水乙醇,冷却析出晶体。
更优选地,上述蛇床子素提取物的制备方法包括以下步骤:
(1)将蛇床子素粗提物加热溶解于95%(体积/体积)乙醇水溶液,活性碳脱色后过滤,-10℃下静置析出晶体;
(2)将步骤(1)得到的晶体加热溶解于体积比为50∶1的乙酸乙酯和石油醚的混合溶液,再加热回流后过滤,0℃下冷却析出晶体;
(3)将步骤(2)得到的晶体加热溶解于无水乙醇,再加热回流后过滤,室温下静置析出晶体。
本发明经研究发现,现有的中药洗液多由蛇床子、百部、黄柏、苦参等十多味药材组成,复杂的药物成分之间相互影响,导致药物活性成分的稳定性下降,容易发生降解,直接影响到这类产品的运输、保存和使用。本发明确定了蛇床子素能够作为预防和/或治疗由微生物感染引起的妇科疾病的药物的活性成分,并将其应用于制备相应的药物组合物。该药物组合物可在1分钟内迅速杀灭金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、滴虫和白色念珠 菌等多种致病菌,蛇床子素提取物的最低抑菌浓度为40μg/ml,经口染毒小鼠LD50>5500mg/kg,毒性分级属试剂无毒;10%浓度下对家兔阴道粘膜的刺激指数为2.0,刺激强度属极轻刺激。本发明采用的蛇床子素提取物是由蛇床子素粗提物进行进一步纯化、精制和重结晶等步骤制备而成的,这使得蛇床子素的纯度高达99%(重量/重量)以上,且每种杂质含量均在0.5%(重量/重量)以下,总杂质含量在1%(重量/重量)以下。实验表明,该药物活性成分单一、疗效确定,去除了大量产生不良影响的杂质成分,使得活性成分蛇床子素更加稳定,不易发生降解,从而延长了保存和使用时间,为传统的中药制剂转变为符合国际药用标准的现代中药制剂奠定了基础。
附图说明
以下,结合附图来详细说明本发明的实施方案,其中:
图1为实施例1制备的蛇床子素提取物的HPLC图谱,对应的峰值如下:
峰值表-通道1
图2为妇洁洗液中蛇床子素水解产物的氢谱。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述,给出的实施例仅为了阐明本发明,而不是为了限制本发明的范围。
实施例1蛇床子素提取物的制备
准确称取100克含量为80%(重量/重量)的蛇床子素粗品(购自西安滕华生物科技有限公司),放入配备回流冷凝装置的圆底烧瓶,再加入300ml的95%(体积/体积)乙醇水溶液,在水浴上加热至溶解后,加入约3%(重量/重量)的活性炭,继续加热回流二十分钟脱色。趁热过滤,在滤液放在-10℃下静置,析出白色柱状晶体,抽滤、真空干燥后得到76克固体,HPLC测得蛇床子素含量为89%(重量/重量)。
将制得的晶体加到200ml乙酸乙酯和石油醚(体积比=50∶1)的混合溶液中,在水浴上加热至溶解,继续加热回流1小时,趁热过滤,滤液在冷冻条件下静置析晶,析出白色针状晶体,抽滤后真空干燥得到58克晶体,HPLC测得蛇床子素含量为96.2%(重量/重量)。
再将制得的晶体加到具有回流冷凝装置的圆底烧瓶中,然后加入80ml 无水乙醇,在水浴上加热回流至晶体完全溶解,继续加热回流10分钟,滤液在室温下静置析晶,析出白色针状晶体,过滤后真空干燥得到46克晶体,HPLC测得蛇床子素含量为99.73%(重量/重量)(见图1)。
实施例2溶液剂
称取实施例1制备的蛇床子素提取物0.04g置于容器中,加入100ml乙醇使之完全溶解后,加入5ml助溶剂吐温-80,再加入650ml蒸馏水,加入适量的防腐剂苯甲酸钠,调节pH值至3.5,补加蒸馏水至1000ml即可。
实施例3溶液剂
按照与实施例2类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是乙醇用量为200ml,调节pH至4.0。
实施例4溶液剂
按照与实施例2类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是乙醇用量为250ml,调节pH至3.5。
实施例5溶液剂
按照与实施例2类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是乙醇用量为100ml,调节pH至4.0。
实施例6溶液剂
按照与实施例2类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是乙醇用量为250ml,调节pH至4.5。
实施例7溶液剂
称取实施例1制备的蛇床子素提取物4g置于容器中,加入100ml丙二醇使蛇床子素提取物完全溶解后,加入50ml助溶剂吐温-80,加入650ml蒸馏水,加入适量的防腐剂苯甲酸钠,调节pH值至3.5,补加蒸馏水至1000ml即可。
实施例8溶液剂
按照与实施例7类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是丙二醇的用量为150ml,调节pH至3.5。
实施例9溶液剂
按照与实施例7类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是丙二醇的用量为150ml,调节pH至4.5。
实施例10溶液剂
按照与实施例7类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是丙二醇的用量为250ml,调节pH至4.0。
实施例11溶液剂
按照与实施例7类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是丙二醇的用量为100ml,调节pH至4.5。
实施例12溶液剂
称取实施例1制备的蛇床子素1.0g置适量容器中,加入200ml的丙三醇/乙醇(体积比=75∶25)的混合溶液使蛇床子素提取物完全溶解后,加入650ml蒸馏水,加入适量的防腐剂羟基苯甲酸酯,调节pH值至3.5,补加蒸馏水至1000ml即可。
实施例13溶液剂
按照与实施例12类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是丙三醇/乙醇(体积比=75∶25)的混合溶液的用量为210ml,调节pH至3.5。
实施例14溶液剂
按照与实施例12类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是丙三醇/乙醇(体积比=75∶25)的混合溶液的用量为250ml,调节pH至3.5。
实施例15溶液剂
按照与实施例12类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是丙三醇/乙醇(体积比=75∶25)的混合溶液的用量为200ml,调节pH至4.5。
实施例16溶液剂
按照与实施例12类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是丙三醇/乙醇(体积比=75∶25)的混合溶液的用量为230ml,调节pH至4.0。
实施例17溶液剂
称取实施例1制备的蛇床子素提取物0.8g置于容器中,加入150ml聚乙二醇400使蛇床子素提取物完全溶解后,加入650ml蒸馏水,加入适量防腐剂苯甲酸钠,调节pH值至3.5,补加蒸馏水至1000ml即可。
实施例18溶液剂
按照与实施例17类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是聚乙二醇400的用量为200ml,调节pH至3.5。
实施例19溶液剂
按照与实施例17类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是聚乙二醇400的用量为250ml,调节pH至3.5。
实施例20溶液剂
按照与实施例17类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是聚乙二醇400的用量为150ml,调节pH至4.5。
实施例21溶液剂
按照与实施例17类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是聚乙二醇400的用量为200ml,调节pH至4.0。
实施例22溶液剂
称取实施例1制备的蛇床子素提取物0.08g置于容器中,加入100ml二甲基亚砜使蛇床子素提取物完全溶解后,加入650ml蒸馏水,加入50ml的增溶剂聚乙二醇400,加入适量防腐剂苯甲酸钠,调节pH值至3.5,补加蒸馏水至1000ml即可。
实施例23溶液剂
按照与实施例22类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是二甲基亚砜的用量为200ml,调节pH至4.5。
实施例24溶液剂
按照与实施例22类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液,不同的是二甲基亚砜的用量为150ml,调节pH至4.0。
实施例25溶液剂
按照与实施例22类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液剂,不同的是二甲基亚砜的用量为150ml,调节pH至3.5。
实施例26溶液剂
按照与实施例22类似的方法制备包含蛇床子素提取物的溶液剂,不同的是二甲基亚砜的用量为100ml,调节pH至4.5。
实施例27栓剂
处方:蛇床子素提取物50g,甘油明胶基质200g,甘油150g,制成100粒。
取实施例1制备的蛇床子素提取物50g,与100g甘油研磨成细粉,加入已加热熔化的甘油明胶基质200g中,用剩余量的甘油将乳钵冲净,一并混入基质中,迅速搅拌至将冷凝(40~50℃),注入栓模中,凝固、刮平,取出包装,每粒含蛇床子素提取物0.5g。
实施例28栓剂
处方:蛇床子素5g,聚乙二醇200g,甘油195g,制成100粒。
取实施例1制备的蛇床子素提取物5g,与100g甘油研磨成细粉,加入已加热熔化的聚乙二醇基质200g中,用剩余量的甘油将乳钵冲净,一并混入基质中,迅速搅拌至将冷凝(40~50℃),注入栓模中,凝固,刮平,取出包装,每粒含蛇床子素提取物0.5g。
实施例29蛇床子素提取物的最低抑菌浓度的测定:
1.1材料
检测药:实施例12制备的溶液剂
实验菌株:购自中国药品生物制品检定所
培养基:琼脂和肉汤培养基(北京双旋微生物培养基制品厂)
将76gMH培养基干粉溶于1000ml水中,加热至沸腾溶解,然后在121℃下压力蒸汽灭菌15min,再置于45℃~50℃水浴中备用。该培养基将用于稀释药物溶液。
2.方法
将58株经多次传代、分离纯化和鉴定的病原体菌株接种于培养基中培养18~24h,其中滴虫培养48~72h,配成病原体悬液(参见:吴玲等,双相一步法培养基分离溶脲脲原体的实验研究,中化微生物学与免疫学杂志,1996;16:(2):27-30;龚立杰等,介绍两种鉴定白色念珠菌的方法。中华医学检验杂志,1994;17:51-53)
药物稀释:将实施例12制备的溶液用液体培养基稀释成不同浓度(起始浓度为100μg/ml),分别取1ml不同浓度的药液移至无菌试管中。
取菌液1ml加至含有1ml药液的试管中,充分摇匀,置于37℃温箱中培养,确定各种病原体的MIC、MBC(参照:汪复,奈替米星与庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星体外抗菌活性的比较,抗生素,1987;12(6):411)。
表1:蛇床子素溶液对不同病原体的杀灭结果(μg/ml):
病原体 | 株数 | MIC(μg/ml) | MIC50(μg/ml) | MIC90(μg/ml) | MBC(μg/ml) |
白色念珠菌 | 10 | 50 | 50 | 50 | 100 |
阴道毛滴虫 | 10 | 100 | 100 | 100 | 100 |
大肠杆菌 | 10 | 50 | 50 | 50 | 100 |
[0116]
乳酸杆菌 | 10 | 50 | 50 | 50 | 100 |
金黄色葡萄球菌 | 10 | 100 | 100 | 100 | 100 |
粪肠球菌 | 8 | 100 | 100 | 100 | 100 |
实施例30妇洁洗液和蛇床子素溶液活性成分含量检测
试验采用HPLC测定法,条件为色谱柱:Dikma C18(4.6×250mm,5μm);流动相:乙腈-水(体积比=65∶35);流速:1.0ml/min;检测波长322nm;进样量10μl,柱温为室温。检测药品:妇洁洗液、实施例2制备的溶液液(本品),室温观察0、1、3、6、9、12月后的蛇床子素含量变化。该法操作简便、快速,分离度好,重现性好,结果准确可靠,可用于妇洁洗液和本发明的蛇床子素的含量测定。
表2妇洁洗液与本品的稳定性试验结果
结果说明本发明中的洗液,由于蛇床子素存在环境发生了变化,因此稳定性有了大幅度的提高,而妇洁洗液中的蛇床子素则最终发生了50%以上的分解。
分析:中药妇科洗液——妇洁洗液(购自中山大学附属第三医院)是由蛇床子、百部、黄柏、苦参等十余味药材提取而成的中药溶液剂,其说明书中记载的使用方法为:外用,用药前用水清洗阴部后擦干,取10ml药液于稀释瓶中,加温开水至100ml,摇匀,用稀释后的药液冲洗外阴和阴道,一日2次,连用七天。
经实验检测该妇洁洗液中含有蛇床子素为15μg/ml,重量比为0.0015%,按其说明书稀释10倍后的浓度为0.15μg/ml,重量比为0.00015%,我们发现蛇床子素的最低抑菌浓度(MIC)为50μg/ml(白色念珠菌、滴虫),稀释以后的洗液中的蛇床子素浓度远远小于其最小抑菌浓度,因此不能说明在妇洁洗液中起主要作用的活性成分为蛇床子素。
另外通过在常温下观察妇洁洗液中蛇床子素的含量(浓度)的变化, 发现在妇洁洗液中的部分蛇床子素水解为其他化合物(其氢谱参见图2)。这表明,随着蛇床子素的水解,蛇床子素含量降低。究其原因,可能是由于由十余种药材提取物制成的妇洁洗液含有多种成分,其中的某些成分起了促进水解的作用。而在本发明的含有纯度为99%(重量/重量)以上单一活性成分蛇床子素的药物组合物中并没有观察到水解现象,浓度没有明显的变化。
Claims (10)
1.一种用于预防和/或治疗由微生物感染引起的妇科疾病的药物组合物,该药物组合物包含蛇床子素提取物以及药学上可接受的辅料,其中在所述蛇床子素提取物中,蛇床子素的质量为蛇床子素提取物总质量的99.0%以上,优选为99.5%~99.9%。
2.根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于,所述蛇床子素提取物的质量为药物组合物总质量的0.1%~2%。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物,其特征在于,所述药学上可接受的辅料选自赋形剂;溶剂,例如水、乙醇、丙二醇、甘油、二甲基亚砜;防腐剂,苯甲酸或其盐、对羟基苯甲酸酯、氯己定、苯扎溴铵、山梨酸或其盐;pH调节剂和增溶剂中的一种或多种。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物为溶液;优选地,所述溶液的溶剂为水;更优选地,所述溶液中的蛇床子素提取物的浓度为40μg~4mg/ml。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物为栓剂;优选地,所述栓剂的赋形剂选自可可豆脂、脂肪酸甘油酯、甘油明胶和聚乙二醇中的一种或多种;更优选地,所述栓剂中的蛇床子素的质量为栓剂总质量的1.25%~12.5%。
6.蛇床子素提取物在制备预防和/或治疗由微生物感染引起的妇科疾病的药物中的用途,其中所述蛇床子素的质量为蛇床子素提取物总质量的99%以上,优选为99.5%~99.9%。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的药物组合物或根据权利要求6所述的用途,其特征在于,所述引起妇科疾病的微生物选自金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、粪肠球菌、滴虫、绿脓杆菌和白色念珠菌中的一种或多种。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的药物组合物或根据权利要求6所述的用途,其特征在于,所述由微生物感染引起的妇科疾病选自滴虫和/或真菌引起的阴道炎、宫颈炎和外阴瘙痒中的一种或多种。
9.根据权利要求1至5中任一项所述的药物组合物或根据权利要求6所述的用途,其特征在于,所述蛇床子素提取物的制备方法包括以下步骤:
(1)将蛇床子素粗提物加热溶解于95%(体积/体积)乙醇水溶液,冷却析出晶体;
(2)将步骤(1)得到的晶体加热溶解于体积比为50∶1的乙酸乙酯和石油醚的混合溶液,冷却析出晶体;
(3)将步骤(2)得到的晶体加热溶解于无水乙醇,冷却析出晶体。
10.根据权利要求1至5中任一项所述的药物组合物或根据权利要求6所述的用途,其特征在于,上述蛇床子素提取物的制备方法包括以下步骤:
(1)将蛇床子素粗提物加热溶解于95%(体积/体积)乙醇水溶液,活性碳脱色后过滤,-10℃下静置析出晶体;
(2)将步骤(1)得到的晶体加热溶解于体积比为50∶1的乙酸乙酯和石油醚的混合溶液,再加热回流后过滤,0℃下静置析出晶体;
(3)将步骤(2)得到的晶体加热溶解于无水乙醇,再加热回流后过滤,室温下静置析出晶体。
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2011
- 2011-02-22 CN CN2011100424486A patent/CN102641314A/zh active Pending
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