CN102631457A - 一种降低肺动脉压力的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种有效降低肺动脉压力的药物组合物及其制备方法。本发明的一种降低肺动脉压力的药物组合物，包括黄芪80～120g，潞党参120～150g，白术50～80g，当归80～100g，红花80～100g，桃仁100～120g，牛膝80～100g，生地黄80～100g，川芎40～60g，赤芍40～60g，陈皮60～80g，柴胡40～60g，甘草25～50g。本发明的一种降低肺动脉压力的药物组合物，其成分中黄芪补肺益气为君，当归活血补血，党参补脾益气，白术有助党参益气之功，桃仁、红花入血分，助当归活血行气，柴胡、枳壳、陈皮行气降逆、川芎行气活血为佐，牛膝、地黄、赤芍等药反佐以防过于甘温，桔梗载药入肺，甘草调和诸药；具有补肺益气、活血逐瘀的效果。

Description

一种降低肺动脉压力的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，尤其是一种降低肺动脉压力的药物组合物及其制备方法。 

背景技术

现代医学公认的针对肺心病的常规治疗，如抗感染、吸氧、强心、利尿、抗凝、扩张血管治疗，仅在一定程度上控制症状，延缓发病进程。近年来，随着对血管内皮细胞研究的深入，肺心病的发病机制研究正从传统的炎症机制，转向对血管内皮细胞受损与修复的研究。 

越来越多的临床和实验研究表明，中医药的合理运用可以从多方面缓解肺心病患者的临床症状、改善患者体质，尤其是一些名老中医的验方，在临床上取得了较确切的疗效。此外，中药在减轻肺血管损伤、保护血管内皮细胞方面，已经有实验研究表明多种中药有着良好的疗效，体现出其独特的优势。因此，积极运用中医药治疗肺心病，对提高我国人民尤其是高龄人群生活质量和延长人群寿命，有着十分积极的意义。 

发明内容

本发明的目的是提供一种有效降低肺动脉压力的药物组合物及其制备方法。 

实现本发明目的之一的一种降低肺动脉压力的药物组合物，包括黄芪80～120g，潞党参120～150g，白术50～80g，当归80～100g，红花80～100g，桃仁100～120g，牛膝80～100g，生地黄80～100g，川芎40～60g，赤芍40～60g，陈皮60～80g，柴胡40～60g，甘草25～50g。 

优选的，所述的降低肺动脉压力的药物组合物，还包括枳壳40～60g，桔梗40～60g。 

优选的，所述的降低肺动脉压力的药物组合物，黄芪100g，潞党参120g白 术60g，当归90g，红花90g，桃仁120g，牛膝80g，生地黄90g，川芎50g，赤芍60g，陈皮70g，柴胡50g，枳壳60g，桔梗50g，甘草30g。 

实现本发明目的之二的一种降低肺动脉压力的药物组合物的制备方法，包括如下步骤： 

(1)将上述药物组合物的各个成分与水混合，煎沸，离心后取上清液； 

(2)将上清液浓缩，离心，干燥制成药粉； 

(3)将药粉与乳糖混合制成颗粒。 

所述步骤(1)中使用的水为重蒸水，使用量为药物组合物重量的十倍。 

所述步骤(1)中离心处理的转速为4000rpm，时间为15min。 

所述步骤(2)中浓缩温度为60～70℃，真空度为-0.08MPa。 

所述步骤(2)中离心处理采用管式离心机离心。 

所述步骤(2)中干燥过程采用高效喷雾干燥机喷雾干燥，药液流速为300ml/min，离心转速为30000rpm，进风温度为200℃，出风温度为80℃。 

所述步骤(3)中制成颗粒的过程是通过干法压力机压粉制得，主压力为4MPa，侧压力为2MPa，过30目筛，压三遍。 

本发明的一种降低肺动脉压力的药物组合物的有益效果如下： 

本发明的一种降低肺动脉压力的药物组合物，其成分中黄芪补肺益气为君，当归活血补血，党参补脾益气，白术有助党参益气之功，桃仁、红花入血分，助当归活血行气，柴胡、枳壳、陈皮行气降逆、川芎行气活血为佐，牛膝、地黄、赤芍等药反佐以防过于甘温，桔梗载药入肺，甘草调和诸药；具有补肺益气、活血逐瘀的效果。 

具体实施方式

本发明的一种降低肺动脉压力的药物组合物的实施例如下： 

实施例1 

本本实施例的降低肺动脉压力的药物组合物，包括黄芪80g，潞党参130g，白术50g，当归80g，红花80g，桃仁100g，牛膝90g，生地黄80g，川芎40g，赤芍40g，陈皮60g，柴胡40g，甘草25g，枳壳40g，桔梗40g。 

实施例2 

本本实施例的降低肺动脉压力的药物组合物，包括黄芪120g，潞党参150g， 白术80g，当归100g，红花100g，桃仁110g，牛膝100g，生地黄100g，川芎60g，赤芍50g，陈皮80g，柴胡60g，甘草50g，枳壳50g，桔梗60g。 

实施例3 

本实施例的降低肺动脉压力的药物组合物，包括黄芪100g，潞党参120g白术60g，当归90g，红花90g，桃仁120g，牛膝80g，生地黄90g，川芎50g，赤芍60g，陈皮70g，柴胡50g，枳壳60g，桔梗50g，甘草30g。 

本发明的一种降低肺动脉压力的药物组合物的制备方法，包括如下步骤： 

(1)将上述药物组合物的各个成分与该药物组合物重量十倍的重蒸水混合，煎沸20min，合并两次滤液，在转速为4000rpm条件下进行离心，时间为15min，然后取上清液； 

(2)将上清液浓缩，浓缩温度为60～70℃，真空度为-0.08MPa，然后采用管式离心机离心，采用高效喷雾干燥机喷雾干燥，药液流速为300ml/min，离心转速为30000rpm，进风温度为200℃，出风温度为80℃，制成药粉； 

(3)将药粉与乳糖混合通过干法压力机压粉制得颗粒，主压力为4MPa，侧压力为2MPa，过30目筛，压三遍。 

本发明的降低肺动脉压力的药物组合物效果实验的实验数据如下： 

实验一 

本实验拟通过观察肺心病家兔皮毛、体重和呼吸变化的情况，观察本发明的降低肺动脉压力的药物组合物对肺心病家兔一般状况的影响。 

1材料与方法 

1.1实验动物 

日本大耳白家兔(壹级，SCXK京(2005)-0003)32只，雌雄各半，月龄5-6月，体重2.1±0.2Kg，饲养于室温12℃-16℃，湿度20％-45％的通风环境内，自由饮水。 

1.2药品与仪器 

本实施例1的降低肺动脉药力的药物组合物，1g相当于2.5g生药 

卡托普利片：常州制药厂有限公司，国药准字(H32023731)，批号08052911 

一次性使用静脉输液针：天津哈娜好医材有限公司，规格H-201 0.45×20，批号080228A 

玻璃针管、手术剪、生理盐水、消毒棉球等。 

1.3方法 

1.3.1分组 

将家兔随机分为正常组、模型组、降低肺动脉压力的药物组、卡托普利组，每组8只。 

1.3.2复制模型 

家兔适应性饲养3天后，参考浙江医科大学俞秋棠家兔肺心病模型建立方法^[63]，模型组、降低肺动脉压力的药物组、卡托普利组复制肺心病模型，正常组仅予常规饲养，不作处理。具体步骤如下： 

备皮：选择家兔耳缘静脉中较粗者，尽可能紧贴皮肤地剪去耳背的毛发。 

消毒：用75％医用酒精擦拭局部静脉血管消毒，使之充盈扩张。 

注射：用玻璃针管抽取0.7％FeCl₃溶液，连接静脉输液针，排空气体后注射于耳缘静脉，注射后用0.9％生理盐水0.5ml冲管，棉球按压止血。开始注射时，以0.6ml/次剂量，注射7次，之后逐渐增加至0.8ml/次，隔日注射1次，连续21次，共42天，总剂量约15ml/只。 

1.3.3给药方法 

复制模型完成后，按照如下方案给药： 

降低肺动脉压力的药物组：以0.7g/kg·d剂量，给予实施例1的降低肺动脉压力的药物组合物，2次/日，共20天；相当于人用剂量的3倍； 

卡托普利组：以5mg/kg·d剂量，给予卡托普利水溶液，2次/日，共20天； 

模型组、正常组给予正常饮食。 

1.4观察指标 

①一般情况：记录各组家兔活动状态、皮毛光泽度； 

②体重变化：分别于造模前(0d)、造模后/给药前(42d)、给药后(62d)测定各组家兔体重； 

③呼吸频率：用直接观察膈肌法，测定家兔每分钟呼吸次数，分别于造模前、造模后/给药前、给药治疗后进行观察。 

1.5统计学处理 

用SPSS 11.0统计学软件进行分析，其中计量资料采用方差分析和T检验。各组数据均值以 表示。 

2结果 

2.1家兔一般情况 

造模过程中，模型组家兔活动能力下降，多数家兔出现呼吸频率加快，有的家兔在耳静脉注射FeCl₃溶液后出现一过性的端坐呼吸、喘促、喷嚏，饮食及活动情况下降。42d时，模型组、卡托普利组、降低肺动脉压力的药物组家兔皮毛均稀松、变暗，不及正常组光泽。62d时，降低肺动脉压力的药物组家兔饮食及活动情况略有改善。 

2.2家兔体重变化 

于0d、42d、62d时，分别测定各组家兔体重，结果如下： 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物组合物对肺心病家兔体重的影响 

如下表： 

注：与模型组相比，*P＜0.05。 

0d，各组家兔体重无明显差异；42d时，各组家兔体重仍无统计学差异。62d时，模型组家兔体重与正常组相比，明显减轻(P＜0.05)。 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔体重增长的影响 

如下表： 

注：与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。 

从家兔体重增长情况来看，模型组、卡托普利组、降低肺动脉压力的药物 组家兔的体重在造模后均有增加，增加程度组间比较无差异。给药期间，家兔体重上升幅度出现差异，模型组家兔体重增长明显落后于正常组(P＜0.01)，卡托普利组的体重增长幅度稍高于模型组(P＜0.05)，降低肺动脉压力的药物组的体重增长幅度与模型组相比，有显著性差异(P＜0.01)。 

2.3家兔呼吸频率变化 

于0d、42d、62d时，分别测定各组家兔呼吸频率，结果如下： 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔呼吸频率的影响 

如下表： 

注：与模型组相比，**P＜0.01。 

观察家兔的呼吸情况，0d时各组家兔呼吸频率无差异。0d-42d间，模型组、卡托普利组、降低肺动脉压力的药物组均出现呼吸频率明显地加快，甚至个别家兔出现一过性的喘促，而正常组未见明显变化，模型组与正常组比较有显著性差异(P＜0.01)。 

62d，模型组脱离FeCl₃刺激，呼吸频率下降，但与正常组仍有显著差异(P＜0.01)；卡托普利组与模型组相比未见明显差异；降低肺动脉压力的药物组呼吸频率下降较为明显，与模型组相比有显著性差异(P＜0.01)。 

3 结论 

乏力气短、呼吸困难是肺心病患者的典型症状，是“气虚”的典型表现。复制家兔肺心病模型过程中，出现了活动下降、呼吸频率增加、甚至喘促的症状，是肺气不足，呼吸机能减退，气体交换出入不足的典型表现；同时，由于中医认为“肺主皮毛”，肺气虚损则不能布精微物质于皮毛，导致皮毛不荣，家兔的皮毛逐渐失去光泽，也是肺气虚的表现之一。故肺心病家兔呼吸、体重及皮毛均出现明显异常。 

由于家兔处于生长期，故造模过程中体重增长与同期的正常组相比，暂未见差异。造模后，由于肺心病家兔气虚血瘀的病理状态已经存在，体质下降，故模型组家兔体重增长明显落后于正常组；卡托普利组由于得到了一定的治疗，体质有所改善，体重增长稍高于模型组；降低肺动脉压力的药物组由于针对家兔肺心病模型气虚血瘀的病理状态进行治疗，体质改善较为明显，体重接近于正常组，可见补气、活血可以改善肺心病家兔的体质。 

呼吸频率的变化是家兔肺心病模型早期即可出现的改变。在复制模型的过程中观察到，部分家兔对FeCl₃刺激非常敏感，每次注射后立刻出现喷嚏连连、端坐喘促的情况，一段时间后可自行缓解，这些家兔在模型复制成功后，呼吸频率明显增加，说明静脉注射FeCl₃可立即造成血管的痉挛。脱离FeCl₃刺激后，各组家兔的呼吸频率均有所降低，但模型组与正常组仍差异明显(P＜0.01)，说明FeCl₃已经对肺组织造成了明显的损伤，严重影响到了呼吸功能，在一段时间内无法自行恢复；卡托普利组与模型组的呼吸频率无差异，推测卡托普利对于肺心病的治疗作用在呼吸频率方面改善不明显；降低肺动脉压力的药物组在改善肺心病家兔喘促方面发挥了较好的治疗作用，呼吸频率与模型组相比差异明显(P＜0.01)，由此推测，降低肺动脉压力的药物对于FeCl₃造成的肺组织损伤具有保护和修复作用，另一方面，具有“益气”功效的中药在本方中发挥了补肺气的作用，对于改善肺心病患者喘促、气短的症状具有较好的疗效。 

本实验选用卡托普利作为阳性对照药物。作为一种ACEI类药物，主要作用于肾素-血管紧张素-醛固酮系统，能抑制ACE活性，阻止AngII的形成，从而降低AngII水平，舒张小动脉，并能抑制醛固酮分泌，减少水钠潴留。文献报道^[39]，卡托普利能有效降低MCT诱发的肺心病大鼠肺动脉压和血浆ET-1水平，减轻肺渗出，改善微循环，减低右心室的后负荷，部分逆转右心室肥厚，改善右心功能，对肺心病具有治疗的作用。此外，卡托普利还可保护血管内膜及内皮细胞免受损害，减少炎性细胞的粘附和聚集^[64]。 

实验过程中，正常组有1只家兔在5d时因腹泻而死亡，考虑系饲养不当导致。 

实验二本发明的降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔右心系统影响的观察 

肺心病早期改变是肺循环阻力增加，导致PAH。随着肺部病变的不断发展使右心室肥厚及扩张，最终发生右心衰竭。如彩色多普勒检查显示右心扩大、右室壁肥厚、右室流出道及肺动脉扩张，结合频谱多普勒观察三尖瓣和肺动脉瓣返流，支持PAH的诊断，结合临床病史和表现，慢性肺心病的诊断可成立^[65]。因此，为了观察家兔肺心病模型肺动脉压力的改变，并观察降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔右心系统改变情况的影响，本次实验在无创的前提下，对家兔的右心系统进行超声心动探查。 

1 材料与方法 

实验动物与模型复制、给药方法：同实验一，不同的是使用实施例2的降低肺动脉压力的药物组合物。 

1.1仪器 

美国Sequoia 512彩色电脑声像仪，TV3C探头，探头频率3.5-7.0MHz。 

1.2方法 

麻醉：速眠新注射液与盐酸氯胺酮注射液1∶1混合，按0.3ml/Kg剂量，肌肉注射。 

探查：麻醉后家兔均取背位，剪除胸骨左缘4-6肋间内侧至腋前的被毛，充分涂抹耦合剂，于相应位置探查，分别测定肺动脉内径、右室流出道、右室前壁厚、右室内径、肺动脉流速、三尖瓣流速。一共测定3次，分别于第0d、42d、62d进行。 

1.3观察指标 

肺动脉内径、右室流出道、右室前壁厚、右室内径、肺动脉流速(及是否有返流)、三尖瓣流速(及是否有返流)。 

1.4统计学处理 

用SPSS 11.0统计学软件进行分析，其中计量资料采用方差分析和T检验，并进行配对资料比较。各组数据均值以 表示。 

2 结果 

2.1肺动脉内径变化的观察 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔肺动脉内径的影响 

如下表： 

注：与模型组相比，*P＜0.05。 

42d，模型组与正常组相比，肺动脉内径显著增宽(P＜0.05)； 

62d，各组肺动脉内径比较无差异； 

模型组、卡托普利组、降低肺动脉压力的药物组共9只家兔在0d与42d配对比较，肺动脉内径增宽(P＜0.01)；正常组前后比较无差异； 

各组家兔自身42d与62d分别进行配对比较，均无差异。 

2.2右室流出道宽度变化的观察 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔右室流出道宽度的影响 

如下表： 

注：与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。 

42d，模型组与正常组比较无差异； 

62d，模型组与正常组相比，右室流出道显著增宽(P＜0.01)，模型组与降低肺动脉压力的药物组相比，右室流出道亦增宽(P＜0.05)； 

模型组、卡托普利组、降低肺动脉压力的药物组共9只家兔在0d与42d配对比较，右室流出道显著增宽(P＜0.01)；正常组前后比较无差异； 各组家兔自身42d与62d分别进行配对比较，均无明显差异。 

2.3右室前壁厚度变化的观察 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔右室前壁厚度的影响 

如下表： 

42d，模型组与正常组比较无差异； 

62d，各组间比较无差异； 

模型组、卡托普利组、降低肺动脉压力的药物组共9只家兔在0d与42d配对比较，右室前壁明显增厚(P＜0.01)；正常组前后比较无差异； 

各组家兔自身42d与62d分别进行配对比较，均无明显差异。 

2.4右室内径变化的观察 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔右室内径的影响 

如下表： 

注：与模型组相比，*P＜0.05。 

42d，模型组与正常组比较无差异； 

62d，模型组与正常组相比，右室内径显著增宽(P＜0.05)； 

模型组、卡托普利组、降低肺动脉压力的药物组9只家兔在0d与42d配对比较，右室内径显著增宽(P＜0.01)；正常组前后比较无差异； 

降低肺动脉压力的药物组自身42d与62d配对比较，内径变窄(P＜0.05)，其余家兔自身给药前后比较无差异。 

2.5肺动脉流速变化的观察 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔肺动脉流速的影响 

如下表： 

模型组和降低肺动脉压力的药物组在42d时，各有1只家兔出现肺动脉少量返流，降低肺动脉压力的药物组家兔在62d时再行检查，未见返流，模型组家兔未予处理，62d时检查中仍有少量返流。 

该检测指标统计学未见差异。 

2.6三尖瓣流速变化的观察 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔三尖瓣流速的影响 如下表： 

注：与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。 

42d，模型组与正常组相比，三尖瓣流速明显加快(P＜0.05)； 

62d，模型组与正常组的差异更为显著(P＜0.01)，降低肺动脉压力的药物组在62d时显示出与模型组的差异(P＜0.05)； 

各组家兔均未见三尖瓣返流；各组家兔自身0d与42d、42d与62d分别配对比较，均无差异。 

3 结论 

由于呼吸和循环系统都具有很大的代偿能力，慢性肺心病的病理改变具有一个很长的过程。文献报道^[66]肺动脉内径从正常发展到肺心病的演变过程中，呈逐渐增大的趋势，肺动脉扩张程度从某种程度上可以反映肺动脉内压力和右心室受累程度。肺心病的血流动力学研究指出，进程缓慢而持续的PAH，可使肺动脉的主干及各主要分支扩张，肺动脉扩张是其阻力增加的早期改变。 

肺动脉内径、右室流出道、右室前壁厚度、右室内径这4个指标，在复制模型后与复制模型前相比，自身配对比较有显著性差异，而同期的正常组未见明显差异，说明造模剂FeCl₃对心脏的影响，更容易体现在右心系统结构的改变方面；对于血流速度的影响，虽有少量的肺动脉返流，但可能本实验的模型复制时间还不足以使其能够明显地体现出来。因此，我们可以通过超声心动的改变认为，家兔造模后存在一定程度的PAH。 

药物的疗效，在上述指标中未能完全体现出来，考虑一方面，可能由于本实验的给药时间尚不足以使已经造成的右心系统结构的改变在短时间内出现明显的逆转；另一方面，肺心病患者在出现右室壁肥厚后可能本身难以逆转。 

给药结束后，仅降低肺动脉压力的药物组在右室流出道、三尖瓣流速这2项指标上体现出与模型组的差异，在右室内径这1项指标上给药前后自身比较有差异，推测降低肺动脉压力的药物在降低肺动脉压力方面可能具有一定的疗效；降低肺动脉压力的药物组在对于肺动脉返流的治疗上，显示出了一定的疗效，但仍需更大样本的支持。卡托普利组与模型组相比，未见明显差异，考虑卡托普利为一血管紧张素转换酶抑制剂，通过抑制血管紧张素转换酶的活性，使血管紧张素II的水平降低，从而抑制血管收缩，降低外周血管阻力，减少静脉回心血量，减低右室后负荷，这一起效过程需要长期服用才能有显著疗效。 

实验三降低肺动脉压力的药物影响肺心病家兔肺血管病理损伤的研究 

肺心病是由于肺血管阻力增大而产生持续性PAH，右心室负荷加大，使得右心室肥厚、扩大，最终形成的。因此，肺心病的病理改变主要集中于肺血管管腔、管壁的病理改变。文献报道^[10]病理切片可光镜下见小动脉血管壁明显增厚，血管腔狭窄、闭塞，伴小血管炎伴肺炎、右心室增厚、右心心肌细胞肥大等病理改变。 

实验二中，已经在超声心动的探查下，发现心脏结构和动脉流速发生了改变，认为肺动脉压力的增高已经产生。由于PAH的产生是由于肺小动脉血管阻力的增大，因此需要进一步证实肺小动脉是否存在狭窄、管壁是否肥厚，另一方面，希望能够通过形态学方法，研究用降低肺动脉压力的药物给药治疗后，家兔肺血管损伤产生了怎样的变化，并探讨其机制。 

1 材料与方法 

实验动物与模型复制、给药方法：同实验一，不同的是降低肺动脉压力的药物组使用的是实施例3的降低肺动脉压力的药物。 

1.1仪器 

KPJ-1型烤片机：中国天津航空机电公司 

BMJ-1型生物组织包埋机：中国天津航空机电公司 

ZPJ-1型展片机：中国天津航空机电公司 

AS325R型旋转石蜡切片机：英国SHANDON 

照相及显微测量软件：Leica DM IRB Version 2.51；Leica Qwin 

1.2方法 

62d时，用空气栓塞法处死各组家兔，取肺组织用10％中性福尔马林固定，酒精逐级脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，常规HE染色，光镜下观察各组织的病理改变，具体流程如下： 

①取10％中性福尔马林固定72h以上的肺组织用自来水冲洗； 

②酒精逐级脱水：80％酒精2d，95％酒精1d，100％酒精3h； 

③透明：二甲苯内浸泡1h； 

④石蜡包埋：65℃石蜡溶液中浸泡2h，石蜡包埋； 

⑤切片：在石蜡切片机上将组织切成5μm厚的切片，并于65℃烤片机上烤4h； 

⑥脱蜡：将切片于二甲苯中浸泡4-5h脱蜡，然后浸泡100％、95％、80％、70％酒精内各2min，自来水充分漂洗； 

⑦染色：苏木素染色6min，流水冲洗2次；盐酸酒精分化10s，流水冲洗3次；1％氨水反蓝1min，流水冲洗3次；伊红染色0.5min，流水冲洗1次； 

⑧脱水：70％、80％、95％、100％酒精逐级脱水各2min； 

⑨透明：二甲苯内浸泡20min； 

⑩中性树胶封片，光学显微镜观察组织病理变化。 

1.3观察指标 

对HE染色的病理切片的肺小动脉管壁厚度进行测量，在每张病理切片上随机选择动脉横切面直径在50μm-150μm的血管，400倍镜下观察5个视野。用Leica Qwin软件，鼠标分别描记并测量管腔面积与管总面积、中膜面积、中膜厚度与血管直径，数出中膜核数，计算如下，并进行统计学分析。 

管腔面积比(％LA)＝LA/VA，公式中LA(lumen area)为管腔面积，VA(vascular area)为血管总面积。 

中膜核密度(ND)＝MA/NN，公式中MA(medial area)为中膜面积，NN(number of nuclear)为中膜核数。 

中膜厚度比(％WT)＝WT/ED，公式中WT(wall thickness)为中膜厚度，ED(external diameter)为血管直径。 

1.4统计学处理 

用SPSS 11.0统计学软件进行分析，其中计量资料采用方差分析和T检验。各组数据均值以 表示。 

2 结果 

2.1镜下观察 

模型组、卡托普利组、降低肺动脉压力的药物组的家兔小动脉血管壁均有增厚，血管腔狭窄、闭塞，伴小血管炎伴肺炎；正常组管壁增厚不明显。 

2.2管腔面积比(％LA) 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔肺小动脉管腔面积比(％LA)的影响 

如下表： 

注：与模型组相比，**P＜0.01。 

模型组管腔面积比明显小于正常组(P＜0.01)；给药治疗的两组，降低肺动脉压力的药物组和卡托普利组分别与模型组比较，均有显著性差异(P＜0.01)。 

2.3中膜核密度(ND) 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔肺小动脉中膜核密度(ND)的影响 

如下表： 

注：与模型组相比，**P＜0.01。 

模型组与正常组无显著差异(P＞0.05)，但降低肺动脉压力的药物组却与模型组有显著差异(P＜0.01)，中膜核密度显著增大。 

2.4中膜厚度比(％WT) 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔肺小动脉中膜厚度比(％WT)的影响 

如下表： 

注：与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。 

模型组中膜厚度比(％WT)明显大于正常组(P＜0.01)；给药治疗的两组中，卡托普利组与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)，降低肺动脉压力的药物组的中膜厚度比值明显较模型组小，差异更为明显(P＜0.01)。 

3 结论 

本实验用静脉注射FeCl₃的方法复制家兔肺心病模型，其病理改变主要发生于肺小动脉，体现在肺小动脉血管管壁的增厚。前文已经讨论过，FeCl₃可能的作用机制有：使血管反复痉挛导致肌层肥厚；氧化作用损伤血管内皮使内膜增生、血管腔狭窄；促进毛细血管内血栓形成、血液凝固性升高、气体交换障碍等。这与PAH主要产生于肺小动脉阻力增大的原理相一致，也符合近年来肺心病发病研究的热点观点之一——血管内皮细胞的损伤和脱落导致了血管张力的变化^[44]。 

从管腔面积比(％LA)来看，模型组相对于正常组的动脉血管呈明显缩窄的改变；经卡托普利治疗的卡托普利组血管缩窄减轻，经降低肺动脉压力的药物治疗的降低肺动脉压力的药物组的血管缩窄不明显，与模型组相比均有显著性差异(P＜0.01)。因此认为，降低肺动脉压力的药物可以改善肺小动脉缩窄。 

肺小动脉中膜核密度，模型组与正常组未见明显差异，但降低肺动脉压力的药物组却与模型组有显著差异(P＜0.01)。考虑此差异的产生并非由于FeCl₃复制肺心病模型过程中导致血管受损而发生增生的改变，而是具有益气功效的中药可能产生了促进细胞增殖的影响。 

肺小动脉中膜厚度比(％WT)，模型组与正常组相比，其厚度明显增加，说明模型组即使在脱离FeCl₃的刺激后，其损伤也可以长期存在，血管壁的增厚无法自行恢复；卡托普利组与模型组相比，中膜的增厚程度略为减轻；降低肺动脉压力的药物组与模型组相比，其中膜厚度比值明显较模型组小，推测降低肺动脉压力的药物可以改善肺小动脉中膜的增厚。 

通过病理切片的实验研究证明，降低肺动脉压力的药物治疗家兔肺心病模型，通过减轻血管缩窄、抑制中膜增厚，能够抗FeCl₃造成的血管损伤，具有一定疗效。 

实验四降低肺动脉压力的药物影响肺心病家兔相关血管细胞因子的研究 

血管内皮细胞的损伤可导致其分泌的血管活性物质的紊乱，导致血管张力的改变，如内皮细胞衍生舒张因子(EDRF/NO)、前列环素(PGI₂)、内皮素(ET)、血管紧张素II(AngII)、肿瘤坏死因子(TNF)等。其中，AngII主要产生于肺血管内皮，组织局部的AngII参与血管张力调节，AngII的水平与肺血管阻力呈正相关；ET-1是缩血管作用最强的血管活性物质^[52]；TNF可通过多种途径而致血管内皮细胞损伤，既可反映炎症的进展，又可表明血管内皮细胞的损伤。PGI₂主要由血管内皮细胞和平滑肌细胞产生，具有舒张血管和抑制血小板聚集的作用，6-酮-前列腺素F_1a(6-Keto-PGF_1a)是其主要的水解产物；已被公认为是EDRF本质的NO，可通过一系列途径导致平滑肌舒张。这些血管收缩/舒张因子可反映血管张力的改变。 

通过实验三，我们已经可以看到，降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔肺血管具有减轻血管缩窄、抑制中膜增厚的作用，有助于修复FeCl₃造成的血管损伤。现在，我们需要进一步探讨的是，这种对肺小动脉血管的保护作用究竟是如何起效的，降低肺动脉压力的药物是如何影响相关细胞因子的分泌，从而达到降低血管张力，降低肺循环阻力的作用。为此，我们测定家兔血中相关细胞因子的浓度变化，推测药物作用的机理。 

1 材料与方法 

实验动物与模型复制、给药方法：同实验一。 

1.1观察指标与实验方法(血液样本均送北京北方生物技术研究所测定) 

1.1.1血管收缩因子： 

AngII：放射免疫法； 

ET-1：放射免疫法； 

TNF-α：放射免疫法； 

1.1.2血管舒张因子： 

NO：硝酸还原酶法； 

6-Keto-PGF_1a(间接反映血清PGI₂水平)：放射免疫法。 

1.2统计学处理： 

用SPSS 11.0统计学软件进行分析，其中计量资料采用方差分析和T检验。 各组数据均值以 

表示。 

2 结果 

2.1血管收缩因子 

2.1.1AngII 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔血浆AngII含量的影响 

如下表： 

注：与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。 

42d，模型组血中AngII含量与正常组相比，显著上升(P＜0.01)；62d，卡托普利组、降低肺动脉压力的药物组AngII含量均下降，并与模型组有显著性差异(P＜0.05)，模型组未予治疗，发现AngII含量不降反升，与正常组相比具有显著性差异(P＜0.01)。 

2.1.2ET-1 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔血浆ET-1含量的影响 

如下表： 

注：与模型组相比，*P＜0.05。 

42d，模型组血中ET-1含量与正常组相比，明显升高(P＜0.01)；62d，卡托普利组、降低肺动脉压力的药物组血中ET-1含量均下降，并与模型组有显 著性差异(P＜0.05)，模型组未予治疗，后检查发现ET-1含量不降反升，与正常组相比具有显著性差异(P＜0.05)。 

2.1.3TNF-α 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔血浆TNF-α含量的影响 

如下表： 

注：与模型组相比，*P＜0.05。 

42d，模型组血中TNF-α含量与正常组相比，显著升高(P＜0.05)；62d，卡托普利组、降低肺动脉压力的药物组与模型组相比，均无差异，模型组未予治疗，TNF-α含量略有上升，与正常组相比仍有显著差异(P＜0.05)。 

2.2血管舒张因子 

2.2.16-Keto-PGF_1a

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔血浆6-Keto-PGF_1a含量的影响 如下表： 

注：与模型组相比，**P＜0.01。 

治疗前，正常组血中6-Keto-PGF₁a含量明显高于模型组(P＜0.01)；治疗后，卡托普利组、降低肺动脉压力的药物组与模型组相比无显著性差异。 

2.2.2NO 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔血清NO含量的影响 

如下表： 

注：与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。 

42d，正常组血中NO含量明显高于模型组(P＜0.01)；62d，降低肺动脉压力的药物组NO含量上升，并与模型组比较有差异(P＜0.05)，卡托普利组与模型组相比无差异。 

3 结论 

由实验结果可以看出，反映血管收缩/舒张情况的各项指标，在治疗前，正常组与模型组均有显著性差异，提示本实验模型的复制方法可以使家兔血管张力发生改变。 

模型组家兔未予任何治疗，反映血管收缩的指标AngII、ET-1、TNF-α均未下降，并反而有所上升，提示即使脱离FeCl₃的刺激，血管仍可在较长的一段时间内保持收缩状态，并且，确实存在着血管内皮损伤与TNF-α相互影响，形成恶性循环的情况^[48]；反映血管舒张的指标6-Keto-PGF_1a和NO则略有上升，考虑可能为机体在血管长时间保持收缩状态下，自身产生的适应性变化。 

在血管收缩的相关细胞因子方面，卡托普利组和降低肺动脉压力的药物组的治疗作用，在AngII、ET-1这两项指标上表现得比较明显，62d时，两组与模型组对比，均有差异(P＜0.05)。该两项指标可直接反映血管收缩情况，说明卡托普利与降低肺动脉压力的药物可以明显扩张肺心病家兔的肺动脉血管，作用效果相似。在TNF-α这项指标上，虽未见到卡托普利组和降低肺动脉压力的药物组与模型组的差异，但从柱状图上可见其含量均有下降，与模型组的上升趋势形成区别，这是否也可以理解为一种疗效的体现，并且，降低肺动脉压力的药物组的TNF-α均值下降更多，这需要以后的进一步实验研究来探讨。 

在血管舒张的相关细胞因子方面，62d时，降低肺动脉压力的药物组的NO值显著高于模型组(P＜0.05)，卡托普利组与模型组相比无差异，说明降低肺动脉压力的药物可使血中NO含量升高，达到舒张肺动脉血管的目的。作为PGI₂代谢产物的6-Keto-PGF_1a，62d时，卡托普利组和降低肺动脉压力的药物组分别与模型组比较，均未见明显差异，考虑机体自身产生的适应性变化与药物疗效叠加，尚未见明显的疗效体现。 

由此可以认为，降低肺动脉压力的药物保护血管内皮、修复血管损伤，从而治疗肺心病的作用，是通过降低血中AngII、ET-1含量，升高NO含量，从而抑制血管收缩，促进血管舒张，降低血管阻力来体现的。 

实验五降低肺动脉压力的药物影响肺心病家兔肺组织细胞增殖的研究 

通过以上实验，我们已经考察了降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔的治疗作用，认为降低肺动脉压力的药物具有一定的疗效。通过病理切片观察肺心病家兔的血管损伤情况，也可以初步得出结论，降低肺动脉压力的药物对于肺动脉血管内皮的损伤具有一定的保护和治疗作用。然而这种保护和治疗作用的机理究竟如何体现，在细胞学上是否可以找到证据，仍然需要进一步的实验研究来探讨和证明。 

因此，观察肺组织细胞的增殖情况，是否可以从细胞学角度反映降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔的治疗作用，是本实验探讨的内容。 

1 材料与方法 

实验动物与模型复制、给药方法：同实验一。 

1.1仪器与试剂 

TDL80-2B型离心机：上海安亭科学仪器厂 

PBS：百事创新(北京)科技有限公司 

每1000mL蒸馏水中加NaCl 8.5g，Na₂HPO₄·12H₂O 3.5g，NaH₂PO₄·2H₂O0.25g，配成0.01mol/L PBS溶液 

II型胶原酶：Sigma C6885，100mg/支 

500mL蒸馏水中加100mg胶原酶，配成200mg/L胶原酶溶液 

RNase A：Sigma R4875，50mg/支 

50mL蒸馏水中加50mg RNase A，配成1mg/mL RNase A溶液 

0.1mg/mL碘化丙啶染液(PI，含1％Triton)：北京大学医学部流式细胞检测中心提供 

1.2方法 

流式细胞术(Flow Cytometry，FCM) 

①标本预处理： 

从处死后的家兔新鲜肺组织取材2g，用PBS溶液漂洗干净，浸泡在含PBS溶液的平皿中；用眼科剪尽可能地将组织剪碎；弃去上清液，组织块转入小烧杯中，加入25ml胶原酶溶液，37℃，30min，搅拌；取出组织，在不锈钢网上轻轻研磨，使组织和细胞分离；滤液用400目筛网过滤2次，制成单细胞悬液。 

②固定： 

制备的单细胞悬液用体积分数为70％的乙醇固定，4℃保存过夜。 

③染色： 

用PBS溶液漂洗并低速离心2次，洗去固定液，加200ulRNase A 37℃水浴30min；加入50ul PI染色液混匀，室温染色5min。 

1.2检测仪器与软件 

仪器：BD FACSCalibur；软件：ModFit LT 

1.3观察指标： 

细胞增殖周期：分为G0、G1、S、G2、M期。S期是DNA合成期，在S期内，DNA进行复制，使细胞的DNA含量由2倍体(2C)变为4倍体(4C)。G1和G2期为DNA合成前、后间期，此期无DNA的合成，但RNA和蛋白质进行合成。M期为有丝分裂期，在此期一个细胞分裂为2个细胞。细胞内的染色体分裂成2组。在M期分裂成两个子细胞之前，G2和M期细胞的DNA含量均为恒定的4C。M期以后部分细胞进入G1期，继续进行增殖，部分细胞进入G0期，即静止期，不再继续增殖。利用DNA的荧光染料，如PI，与细胞内的DNA结合，可反映细胞内DNA含量。具有2C DNA含量细胞为G0/G1期细胞，4C DNA含量细胞为G2/M期细胞，DNA含量介于两者之间的细胞为S期细胞。 

由于细胞周期中的S期为典型的增殖期，因此，观察比较S期占所有细胞分化周期的比例，可以反映细胞增殖的情况。 

1.4统计学处理 

用SPSS 11.0统计学软件进行分析，其中计量资料采用方差分析和T检验。各组数据均值以 

表示。 

2 结果 

卡托普利、降低肺动脉压力的药物对肺心病家兔流式细胞S％值的影响 

如下表： 

注：与模型组相比，*P＜0.05。 

模型组S％值与正常组相比明显降低(P＜0.05)；降低肺动脉压力的药物组与模型组相比，S％值显著增高(P＜0.05)；卡托普利组与模型组相比无差异。 

3 结论 

由检测结果可以看出，模型组的增殖期细胞比例最低，因此推测，静脉注射FeCl₃造成血管损伤的可能的作用机制为：在损伤肺血管内皮细胞的同时，抑制肺组织细胞的增殖，抑制血管的修复和新生血管的形成。由表5-1及柱状图可以看出，经过治疗，肺组织细胞可部分恢复增殖，发挥修复损伤的功能，其中卡托普利组与模型组相比未见差异，而降低肺动脉压力的药物组S％值与模型组相比，统计学显示其显著性增高，说明降低肺动脉压力的药物助损伤修复的作用更佳。 

气虚血瘀是贯穿肺心病发病过程的基本病机。细胞增殖指细胞通过分裂增生子代细胞的现象。可以猜想，“气虚”引申到细胞学上的表现，可以理解为细胞分裂能力的下降，细胞增殖率减低，细胞自我修复功能的减弱；“血瘀”从微观来看，可以理解为血管内皮细胞的修复受到环境的阻碍，内皮的完整性遭到破坏后得不到及时的修复，导致血管内皮细胞的内分泌功能紊乱，机体凝血-纤溶系统异常和血小板功能紊乱，从而使血液处于高凝状态，即“血瘀阻络”。因此，“气虚”是肺心病的发病基础，细胞受损后不能正常完成其应有的气体交 换、血液运送功能，导致心肺功能的降低；而损伤的细胞增殖降低、得不到及时的修复，细胞因子分泌异常，病理状态长期存在，进一步导致了肺心病患者心肺功能进入恶性循环。 

卡托普利具有扩张血管的作用，其机理尚未完全阐明，可能与抑制血管紧张素I转化为血管紧张素II、抑制ET-1的分泌及增加NO的合成等有关^[39]，因此，猜想卡托普利是否可以通过调节血管内皮细胞分泌的细胞因子的浓度，间接达到阻止血管内皮细胞进一步被破坏的目的。在本实验结果中，卡托普利对照组的S％值与模型组相比，未见明显差异，由此推测，卡托普利虽被认为有扩张血管的功能，但在抗血管损伤、促进血管损伤的修复方面，疗效欠佳。 

降低肺动脉压力的药物组在本实验中体现了其良好的治疗作用，与模型组相比，S％值显著增高(P＜0.05)。因此推测，一方面，“益气”可以使细胞增殖恢复正常，保证受损细胞能够自我修复，另一方面，“活血”可以扭转肺小动脉血管中血液的高凝状态，改变细胞因子的分泌异常，使得血液能够正常运行。两方面结合，同时致力于消除肺心病患者长期存在的病理状态，体现出良好的疗效，从而达到治疗的目的。 

实验五益肺活血颗粒对血小板衍生生长因子诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及转化生长因子活性的影响 

肺动脉平滑肌细胞的异常增殖和肺血管的重构是肺动脉高压形成过程中的重要病理改变，这也是目前多种药物治疗肺动脉高压效果不佳的主要原因。血小板衍生生长因子可通过激活胞外调节激酶等多种信号通路来促进血管平滑肌细胞的增殖和表型的转换，转化生长因子是调控细胞增殖和转化的重要因子，可通过抑制一氧化氮(NO)信号通路调节酶的表达来促进血管平滑肌细胞的增殖，并诱导成纤维细胞转化为成肌纤维细胞，两者相互协同并与肺动脉高压的形成和肺血管重塑联系紧密。本实验着重于观察本发明的降低肺动脉压力的药物组合物对PDGF-BB诱导大鼠PASMCs增殖的影响以及对TGF-β活性的调节作用，从分子水平探讨其作用机制。 

1 材料与方法 

1.1动物成年SD大鼠，雌雄各半，体重150～250g。 

1.2药物：本实施例3的降低肺动脉压力的药物组合物。 

1.3试剂及仪器DMEM/F12培养基(美国M & C公司)，抗β-actin单克隆抗体(武汉博士德公司)，TGF-β一抗(美国Santa cruz公司)，RNA酶、碘化丙啶(华美生物工程公司)，PDGF-BB(美国Peprotech公司)，链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)试剂盒、DAB试剂盒(天津灏洋生物公司)，MTT试剂盒(北京凯欣杰生物科技有限公司)。缺氧CO2培养箱(美国Thermo公司)、流式细胞仪(美国Beckman Coulter公司)、ELX-800酶标仪(美国Bio-Tek公司)。 

1.4方法 

1.4.1大鼠PASMCs原代培养和鉴定选用成年SD大鼠15只，2％戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔麻醉后，无菌条件下取出心肺，轻柔分离肺动脉，在外科手术显微镜下仔细剥除肺动脉内、外膜，用眼科剪将肺动脉中膜剪成1mm×1mm的组织块，接种于25mL培养瓶中于37℃5％CO2培养箱中孵育，3～5天换1次培养液(含15％胎牛血清的DMEM/F12)。14d后细胞爬出，呈典型峰、谷状分布，抗β-actin单克隆抗体免疫组化染色鉴定为PASMCs，纯度在98％以上。胰酶消化传代培养，采用生长良好的3～5代细胞进行实验。 

1.4.2分组实验分为5组：对照组，PDGF-BB组，降低肺动脉压力的药物高、中、低剂量组(PDGF-BB+降低肺动脉压力的药物，终浓度为7.5、1.5、0.3mg/mL)。 

1.4.3PASMCs的增值测定采用MTT法。将生长良好的3～5代PASMCs以每孔8×103/10μL接种于96孔培养板，24h后换不含胎牛血清的DMEM/F12同步化培养24h，培养条件同上，益肺活血颗粒组按不同浓度加入生药5μL/孔，设置对照组，按实验分组培养48h。每孔加入MTT 10μL，继续孵育4h后直接加入甲瓒溶解液100μL/孔，置于CO2培养箱再孵育4h，用酶标仪于570nm处测定OD值。每组8个复孔，重复实验4次。 

1.4.4细胞周期测定采用流式细胞仪测定法。 

将细胞以每孔8×104/100μL接种于6孔培养板，待细胞生长基本融合后换无血清DMEM/F12同步化培养24h，按实验分组要求培养，降低肺动脉压力的药物各剂量组按不同的配制浓度加入生药30μL/孔，48h后PBS洗细胞2次，胰蛋白酶消化，收集细胞离心去上清后加入70％的冰乙醇，置于4℃冰箱固定24h。PBS洗3遍，加入25μg/mL RNA酶500μL、50μg/mL碘 化丙啶溶液500μL，37℃水浴反应30min，以300目滤网过滤细胞，流式细胞仪测定细胞周期构成比和增殖指数(PI)，PI＝(S+G2/M)/(G0/G1+S+G2/M)×100％。 

1.4.5TGF-β蛋白含量测定采用SP法。将细胞悬液置于带有小盖玻片的6孔板中制作细胞爬片，按实验分组处理24h后，PBS冲洗3遍，加4％多聚甲醛固定10min，PBS再冲洗3遍，依照SP试剂盒步骤进行。每组随机选6张爬片进行统计分析，每张爬片用HMIAS-2000高清晰度彩色病理图文分析系统分析。 

1.5统计学方法数据处理采用SPSS 13.0软件，结果以x±s表示。采用单因素方差分析。 

2 结果 

2.1不同剂量降低肺动脉压力的药物对PDGF-BB诱导大鼠PASMCs增殖的影响(表1)与对照组比较，PDGF-BB组OD值增高明显(P＜0.01)，而与PDGF-BB组比较， 

不同剂量降低肺动脉压力的药物对大鼠PASMCs增殖的影响(x±s)如下表： 

注：与PDGF-BB组比较，*P＜0.01 

降低肺动脉压力的药物高、中、低剂量组OD值均有降低，并且有剂量量依赖性，但降低肺动脉压力的药物低剂量组对PDGF-BB刺激PASMCs增殖的抑制作用不明显(P＞0.05)。 

2.2不同剂量降低肺动脉压力的药物对大鼠PASMCs细胞周期的影响PDGF-BB组G0/G1期比例显著降低，S+G2/M期比例显著升高，PI显著升 高，与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.01)；不同剂量降低肺动脉压力的药物组G0/G1期比例显著升高，S+G2/M期比例显著降低，PI显著降低，且具有剂量依赖性，与PDGF-BB组比较，差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。YFHXG低剂量组由于浓度过低，对细胞周期无明显影响(P＞0.05)。 

不同剂量降低肺动脉压力的药物对大鼠PASMCs细胞周期的影响(％，x±s)如下表： 

注：与PDGF-BB组比较，*P＜0.05，**P＜0.01 

2.3不同剂量降低肺动脉压力的药物对大鼠PASMCs细胞内TGF-β蛋白表达的影响，PDGF-BB组细胞内TGF-β蛋白表达与对照组比较，明显升高(P＜0.05);不同剂量降低肺动脉压力的药物组细胞内TGF-β蛋白显著降低，且具有剂量依赖性，各组与PDGF-BB组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。降低肺动脉压力的药物低剂量组对细胞内TGF-β蛋白的表达无明显影响(P＞0.05)。 

3 结论 

肺血管收缩和重构是肺动脉高压形成的重要病理过程，在细胞水平上主要表现为PASMCs的异常增殖及功能异常和无肌层泡内动脉肌化，继而导致肺血管的重构。PDGF-BB可通过诱导cAMP反应元素结合蛋白的核排出和蛋白酶的降解等多种途径来促进PASMCs的增殖。TGF-β主要表达于内皮细胞、血 管平滑肌细胞、白细胞及上皮细胞，可调节这些细胞的迁移和增殖并刺激其转化。而最新研究发现：在继发性肺动脉高压(PAH)患者肺血管中的PASMCs对TGF-β的刺激表现出错误的效应，PASMCs开始增生、肥大并出现肺血管重构，同时对多种细胞因子的促凋亡反应丧失，其具体机制目前并不清楚，可能与TGF-β及其受体基因的变异和匹配失衡、血流动力学的改变等多种因素密切联系。而在低氧性PAH发生过程中，低氧可刺激肺动脉平滑肌细胞释放TGF-β，进而通过上调Nox4和氧自由基(reactive oxygen species，ROS)表达来促进PASMCs增殖。另外，TGF-β可促进血小板释放PDGF，通过PDGF促进PASMCs的增殖，两者起协调促进作用；TGF-β还促进细胞外基质合成，一方面上调基质成分基因的转录、翻译，另一方面通过减少基质降解蛋白酶的合成和分泌，增加降解酶阻制剂的合成和分泌，抑制基质的降解，在肺血管重构过程中起着重要的作用。 

本发明的降低肺动脉压力的药物组合物是在补中益气汤与血府逐瘀汤基础之上辨证加减而制成，方中黄芪、潞党参、白术补益肺气，当归、桃仁、红花、牛膝、川芎、赤芍等药活血化瘀，陈皮、柴胡、桔梗、枳壳、甘草行气降逆。而且前期动物研究也发现该药具有保护血管内皮细胞、抑制中膜增厚、减轻血管缩窄、降低肺动脉高压的功能。 

本研究通过分离培养大鼠PASMCs，并同时给予PDGF-BB和不同剂量降低肺动脉压力的药物进行干预，观察发现PDGF-BB可直接刺激PASMCs的增殖，而相比单纯PDGF-BB组，培养3天后显微镜下可直接观察到不同剂量降低肺动脉压力的药物组的PASMCs生长抑制明显，数目减少。 

MTT法显示，PDGF-BB组48h细胞增殖明显，不同剂量降低肺动脉压力的药物组的抑制作用也明显增强。细胞周期测定显示，PDGF-BB组G0/G1期比例显著降低，S+G2/M期比例显著升高，说明PDGF-BB能够直接促进细胞的有丝分裂和增殖效应，而不同剂量降低肺动脉压力的药物组与PDGF-BB组比较，G0/G1期比例显著升高，S+G2/M期比例显著降低，PI显著降低，说明降低肺动脉压力的药物能使细胞周期中静止和分裂前期的细胞显著增多，从而抑制PASMCs的增殖，且具有剂量依赖性。SP法显示：PDGF-BB可提高PASMCs内TGF-β的表达，但降低肺动脉压力的药物可以降低TGF-β的活性及表达。 

Claims (10)

1.一种降低肺动脉压力的药物组合物，包括黄芪80～120g，潞党参120～150g，白术50～80g，当归80～100g，红花80～100g，桃仁100～120g，牛膝80～100g，生地黄80～100g，川芎40～60g，赤芍40～60g，陈皮60～80g，柴胡40～60g，甘草25～50g。

2.根据权利要求1所述的降低肺动脉压力的药物组合物，其特征在于：还包括枳壳40～60g，桔梗40～60g。

3.根据权利要求2所述的降低肺动脉压力的药物组合物，其特征在于：包括黄芪100g，潞党参120g白术60g，当归90g，红花90g，桃仁120g，牛膝80g，生地黄90g，川芎50g，赤芍60g，陈皮70g，柴胡50g，枳壳60g，桔梗50g，甘草30g。

4.一种权利要求1～3任一所述的降低肺动脉压力的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)将上述药物组合物的各个成分与水混合，煎沸，离心后取上清液；

(2)将上清液浓缩，离心，干燥制成药粉；

(3)将药粉与乳糖混合制成颗粒。

5.根据权利要求4所述的降低肺动脉压力的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中使用的水为重蒸水，使用量为药物组合物重量的十倍。

6.根据权利要求4所述的降低肺动脉压力的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中离心处理的转速为4000rpm，时间为15min。

7.根据权利要求4所述的降低肺动脉压力的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中浓缩温度为60～70℃，真空度为-0.08MPa。

8.根据权利要求4所述的降低肺动脉压力的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中离心处理采用管式离心机离心。

9.根据权利要求4所述的降低肺动脉压力的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中干燥过程采用高效喷雾干燥机喷雾干燥，药液流速为300ml/min，离心转速为30000rpm，进风温度为200℃，出风温度为80℃。

10.根据权利要求4所述的降低肺动脉压力的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中制成颗粒的过程是通过干法压力机压粉制得，主压力为4MPa，侧压力为2MPa，过30目筛，压三遍。