CN102784238B - 药物组合物在制备预防或治疗新生血管性疾病药物中应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种药物组合物在制备预防或治疗新生血管性疾病的药物中的应用，该药物组合物由黄芪、太子参、女贞子、枸杞子、水蛭、大黄六味中药组成。

Description

药物组合物在制备预防或治疗新生血管性疾病药物中应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种药物组合物在制备预防或治疗新生血管性疾病药物中的用途。

背景技术

血管新生是在原来存在的血管结构上长出新血管的生物学过程，是由于细胞-细胞、细胞-基质及细胞-细胞因子相互作用的结果，目前已发现在创伤、缺血、炎症、组织缺氧、肿瘤生长、糖尿病性视网膜病变、风湿性关节炎、银屑病、动脉粥样硬化、牛皮癣等病理情况下亦可发生新的血管形成。根据相关文献报道，新生血管无论是生理性的还是病理性的，其形成过程大致可分为5个阶段：1、内皮细胞渗透性增加(人们已经认识到组织缺血、低氧常伴随微血管的高通透性和毛细血管密度的增加)；2、血管基底膜和细胞外基质(xtracellularmatrixc，ECM)崩解；3、内皮细胞出芽；4、内皮细胞增殖；5、基底膜再生，募集外膜细胞，形成成熟血管[钟一声、朱益华，新生血管性眼病，第3章，第32-42页]。任何病理改变在本质上均是体内动态平衡的失调，新生血管的形成亦然，血管刺激因子增强和(或)抑制因子减少使两者平衡失调即会导致新生血管生成，而血管内皮生长因子(vascularendothelia l growth factor，VEGF)是体内促进新生血管形成的主要因子之一。

由于病理性新生血管的生成不仅能为病理细胞的生长提供能量来源，也能为其转移提供通道，因此许多疾病如肿瘤、新生血管性眼病(包括角膜新生血管、虹膜新生血管、脉络膜新生血管及视网膜新生血管等)的发生和发展都同新生血管相关。目前通过某种外源干预或药物等手段抑制血管新生而开展的治疗已经成为肿瘤、新生血管性眼病等疾病的治疗新策略。人们已成功开发，并且正在研究多种抑制血管新生的药物，其中最主要的是抑制血管内皮生长因子VEGF药物，例如贝伐单抗(Bevacizumab)，其通过抑制血管内皮生长因子VEGF来抑制血管生成，从而阻断肿瘤细胞的生长，目前已被批准用于治疗直肠癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、肾癌，相关临床结果显示其在治疗新生血管性眼病，如角膜新生血管、脉络膜新生血管(如年龄相关性黄斑变性)、糖尿病视网膜病变、新生血管性青光眼、其他新生血管性眼病(术后新生血管形成、人工晶状体眼黄斑囊样水肿)等方面也有明显的效果[赵燕等，贝伐单抗应用在眼部新生血管性疾病中的研究进展，临床合理用药，2010年5月，第3卷，第10期]；还有VEGF Trap-Eye，其在治疗年龄相关性黄斑变性(age-related maculardegenerati-on，AMD)的临床研究中已显示出满足主要的疗效指标的临床实验结果[国外药讯，2010年第12期，第12页]；国内成都康弘生物科技有限公司研发的抑制新生血管药物(CN1706867A)，在治疗老年性黄斑变性(AMD)的临床研究中已显示出确切的疗效。

从目前已有的抑制新生血管药物可以看出抑制新生血管对于抑制肿瘤的生长具有非常显著的作用，其在直肠癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、肾癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、前列腺癌、视网膜相关肿瘤等方面都有着实际的应用价值。而抑制新生血管药物同样在新生血管性眼病中也有着非常重要的作用。眼部新生血管可发生于角膜、虹膜、脉络膜及视网膜等多种眼组织中，是重要的致盲因素，根据其新生血管发生部位的不同主要分为角膜新生血管、虹膜新生血管、脉络膜新生血管、视网膜新生血管，这类疾病的共同特点是新生血管生成，使该类疾病的治疗变得非常棘手，严重影响了患者的生存质量，给患者家庭及社会带来沉重的负担。虹膜新生血管在其后期可发展成为严重的新生血管性青光眼(neovascular glaucoma，NVG)，这种青光眼很难控制，最终会导致患者眼部失明，甚至因眼部剧痛而摘除眼球。脉络膜新生血管又称视网膜下新生血管，是来自脉络膜毛细血管的增殖血管，常见的同脉络膜新生血管相关眼病有年龄相关性黄斑变性(AMD)、病理性高度近视、老年性玻璃膜疣等。视网膜新生血管相关眼病包括糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜静脉周围炎等，其中糖尿病性视网膜病变是糖尿病的严重并发症之一，据统计可占糖尿病患者的50％左右。

目前的研究认为，视网膜新生血管相关眼病是由于各种原因导致机体内新生血管生成的刺激因子，特别是血管内皮生长因子VEGF与抑制因子之间失去平衡而造成的。缺氧诱导的视网膜新生血管形成(OIR)的动物模型是国际同行公认的成熟的新生血管性视网膜疾病的动物模型，并且已经被证实缺氧增加了VEGFmRNA的表达，大量的眼细胞如视网膜血管内皮细胞、周细胞和Muller细胞分泌VEGF明显增高，破坏血-视网膜屏障导致视网膜血管通透性增高，渗出增加以及视网膜水肿，当VEGF在玻璃体及视网膜含量明显增加时，则刺激视网膜内皮细胞增殖，诱导视网膜新生血管形成[徐凡等，血管内皮生长因子与糖尿病视网膜病变的相关性研究，实用糖尿病杂志，第7卷，第1期]。

虽然目前人们已经越来越重视通过抑制血管新生的策略来治疗多种疾病，抑制血管新生的药物也有了很大的发展，其显著的疗效也给患者带来的更大的信心，但已开发出的药物数量仍然较少。由于目前已开发出的抑制血管新生的药物多数为生物药，其制备成本相对较高，往往会给患者以及社会带来较大的经济负担，继续开发新的抑制血管新生的药物对于患者和社会来讲都具有非常显著的意义。因此，如何利用祖国医学药材种类选择众多的优势，进一步开发有效抑制新生血管的中药对于患者有着非常重要的意义。国内医学工作者们在传统中医抑制新生血管生成方面也有着积极的研究，例如有研究显示雷公藤红素就具有显著的抗血管形成作用，在抗癌药物开发中非常具有潜力；姜黄素可以通过抑制内皮细胞增殖与内皮细胞迁移从而抑制新生血管生成；CN 101045057A公开了川芎嗪在制备治疗新生血管性视网膜疾病的药物中的应用；CN102058845A公开了一种由黄芪、当归、茯苓、浙贝母等中药组成的药物组合物，用于治疗黄斑变性。CN1347714A公开了一种治疗糖尿病肾病的药物组合物，由黄芪、女贞子、水蛭、大黄、太子参、枸杞子组成，但目前该药物组合物在制备抑制新生血管药物中的应用尚未见报道。

发明内容

本发明目的之一提供一种药物组合物的新用途，具体而言是提供一种药物组合物在制备预防或治疗新生血管性疾病药物中的用途。

所述新生血管性疾病包括肿瘤、眼部新生血管性疾病；其中肿瘤包括直肠癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、肾癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、前列腺癌、视网膜相关肿瘤，其中视网膜相关肿瘤包括视网膜母细胞瘤、多发性视网膜血管瘤；眼部新生血管性疾病包括角膜新生血管相关疾病、虹膜新生血管相关疾病、脉络膜新生血管相关疾病、视网膜新生血管相关疾病。其中所述虹膜新生血管相关疾病包括新生血管性青光眼；脉络膜新生血管相关疾病包括年龄相关性黄斑变性、病理性高度近视、老年性玻璃膜疣；视网膜新生血管相关疾病包括糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜静脉周围炎。

本发明另一方面提供所述药物组合物在制备治疗糖尿病性白内障药物中的应用。

所述药物组合物由黄芪、太子参、女贞子、枸杞子、水蛭、大黄六味中药组成，其组成配比优选为黄芪20-65％、太子参5-30％、女贞子5-20％、枸杞子10-30％、水蛭10-15％、大黄5-30％；更优选为黄芪36.14％、太子参12.05％、女贞子18.07％、枸杞子14.46％、水蛭12.05％、大黄7.23％。

上述药物组合物可以加入药学上可接受的载体或赋形剂制备成制剂；优选为汤剂、散剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液、颗粒剂、注射剂、栓剂。

新生血管增生过度在眼部疾病中是一大类致盲性眼病的根本原因，其中视网膜新生血管性疾病占据较大比例。本发明选取新生血管性疾病中的新生血管眼部疾病发病比例较高的视网膜新生血管性疾病为研究对象，选取国内外公认的缺氧诱导幼鼠视网膜新生血管(oxygen-induced retinopathy，OIR)模型模拟视网膜新生血管疾病过程，以血管新生面积及视网膜病理改变为评价指标，研究了本发明的药物组合物对抑制新生血管的作用。

研究结果显示本发明的药物组合物能显著改善幼鼠视网膜血管新生面积，病理切片显示与模型组比较本发明药物组合物组后极部视网膜无灌注区明显减少，血管清晰，血管迂曲、扩张、变形程度明显减轻，新生血管明显减少。同时本发明药物组合物能明显降低突破内界膜的血管内皮细胞核数，其对视网膜新生血管具有显著的抑制作用。由此可见本发明药物组合物能够显著抑制新生血管的生成，其在以药物手段抑制血管新生而开展肿瘤、新生血管性眼病的治疗中具有显著的应用价值。

此外，我们还进一步考察本发明药物组合物对眼部新生血管性疾病具体病种(糖尿病视网膜病变)的疗效。我们选取最具代表性的链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病视网膜病变动物模型，从预防及治疗两种模式分别通过血液流变学检测，视网膜周细胞改变，视网膜中央动脉血流动力学检测及视网膜病理改变四项指标系统考察了该药物组合物对糖尿病视网膜病变的预防及治疗作用。

预防组和治疗组两种模型研究结果表明，本发明药物组合物能显著降低血液粘度和血沉下降速度，具有活血化瘀的作用，能够非常显著地改善微循环障碍；同时本发明药物组合物能够显著提高视网膜中央动脉(CRA)的血流速度，显著改善糖尿病大鼠视网膜中央动脉血流灌注和供血不足，明显抑制视网膜血管新生；再者，本发明药物组合物能极显著减少周细胞的丢失和抑制内皮细胞的增生，对视网膜血管有良好保护作用；此外，本发明药物组合物还能够明显减弱大鼠晶状体纤维变性程度，显著改善大鼠糖尿病性白内障症状。上述研究结果表明本发明药物组合物不仅对早期糖尿病性视网膜病变有显著的预防作用，还能够显著治疗早期糖尿病性视网膜病变，能够延缓因高血糖引起的视网膜病变的发生和发展。

另一方面，本发明还提供了上述药物组合物的制备方法，具体步骤如下：

1)黄芪除去杂质，大小分开，洗净，润透，切成2-4mm厚片，60-80℃烘干备用；

2)太子参除去杂质，抢水洗净，切成2-4mm厚片，60-80℃烘干备用；

3)女贞子除去杂质及梗叶，洗净，60-80℃干燥，用时捣碎；

4)枸杞子除去杂质，拣去果梗，整洁后备用；

5)水蛭，洗净，切段，60-70℃烘干备用；

6)大黄，除去杂质，洗净，润透，切直片，厚度为2-4mm，60-80℃烘干，筛去碎屑备用；

将上述方法炮制后的大黄粉碎，过100目筛，取细粉进行辐射灭菌，2KGY/小时，辐照时间3小时后备用；取经上述方法炮制过的女贞子加6倍量得75％乙醇，回流提取2-4次，每次1小时，将醇提回收乙醇；女贞子的药渣与经上述方法炮制过的黄芪、太子参、枸杞子、水蛭加水6倍量的水，煎煮2-4次，每次2小时，滤过，合并水提液，去弃药渣，煎出液与女贞子回收乙醇后的浓缩液合并，在-0.015-0.030MPa下，减压浓缩，温度为80℃，浓缩至浸膏相对密度为1.05-1.15时，在70℃下喷雾干燥为干膏粉，再与前述备用的大黄混匀即得。

附图说明

图1实施例一正常组眼部病理切片(HE×20)

图2实施例一模型组眼部病理切片A(HE×20)

图3实施例一模型组眼部病理切片B(HE×20)

图4实施例一模型组眼部病理切片C(HE×20)

图5实施例一模型组眼部病理切片D(HE×20)

图6实施例一给予本发明药物组合物后眼部病理切片E(HE×20)

图7实施例一给予本发明药物组合物后眼部病理切片F(HE×20)

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面给出本发明药物组合物的药效学试验研究结果，说明其在制药领域的新用途。

实施例一、药物组合物对缺氧诱导幼鼠视网膜新生血管的抑制作用

1、试验方法

取50只C₅₇BL/6J幼鼠，2d龄时每2窝合笼饲养，共4笼幼鼠，7d龄时每笼1只母鼠和幼鼠进入氧箱，共进入4个氧箱(每1个氧箱均由2只母鼠轮流喂养小鼠)，另一只母鼠放在正常室内空气中饲养，每天各氧箱每笼2只母鼠互换。饲养期间氧气的流量控制为0.50～0.75L/min，容器内氧气浓度为(75±2)％，每天打开氧箱更换垫料、加食、换水、替换母鼠。用测氧仪间断监测容器内的氧浓度，每天4～6次，室温控制在(23±2)℃，在此高氧环境中饲养5d，5d后(即12d龄)将幼鼠放回正常空气环境中，以诱导小鼠视网膜新生血管产生。

从进入正常氧浓度空气后将模型组幼鼠随机分为5组，每组10只，模型组(等体积生理盐水)、阳性组(0.5g多贝斯/kg体重)、本发明药物组合物(按实施例五制备)低剂量组(0.5g药粉/kg体重)、本发明药物组合物(按实施例五制备)中剂量组(1.0g药粉/kg体重)、本发明药物组合物(按实施例五制备)高剂量组(2.0g药粉/kg体重)，另取同批次正常幼鼠10只置正常空气环境中为正常组。于给药结束后(即17d龄)，腹腔内注射40mg/kg戊巴比妥钠麻醉，打开小鼠胸腔，于左心室灌注生理盐水和4％多聚甲醛各1ml，然后立即摘取眼球，左右眼球分别置于4％的多聚甲醛中固定，4℃保存。将左眼进行视网膜铺片作ADP酶血管染色，测定视网膜新生血管的面积(以积分光密度值(IOD)表示)，右眼球、脱水、包埋、连续切片并以HE染色，在显微镜下计数病变小鼠突破内界膜的血管内皮细胞核数目，以此来评价本发明药物组合物对视网膜新生血管的影响。

2、实验仪器

PL203电子天平：梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；VIP5J-F2全封闭组织脱水机：日本樱花检验仪器株式会社；TEC5EMJ-2组织包埋机：日本樱花检验仪器株式会社；IVS-410推拉式切片机：日本樱花检验仪器株式会社；DRS-2000J-D2自动染色装置：日本樱花检验仪器株式会社；Glas-J2自动封片机：日本樱花检验仪器株式会社；日本Olympus BH-2普通光学显微镜：日本Olympus公司；OLYMPUS DP71病理显微摄影：日本Olympus公司。

3、实验结果

(1)本发明药物组合物对视网膜新生血管的抑制作用

表1本发明药物组合物对缺氧诱导幼鼠视网膜新生血管增生面积的影响(

n＝10)

注：模型组与正常组比较^ΔΔΔp＜0.001给药组与模型组比较*p＜0.05 **p＜0.01

从表1结果可以看出，模型组视网膜新生血管增生面积(以IOD值表示)较正常组明显升高，提示模型组已出现严重的视网膜新生血管病变，而本发明药物组合物组新生血管面积显著低于模型组，且与多贝斯组相当，上述数据显示本发明药物组合物组能够明显减少因缺氧诱导的乳鼠视网膜血管新生面积，因此本发明药物组合物对视网膜新生血管生长具明显的治疗作用。

病理切片结果显示正常组视网膜血管以视盘为中心呈放射状排列直至周边，末梢分支变细与侧支分出的毛细血管相互吻合，形成密集的毛细血管网，走形自然，分布均匀，呈两层分布，无血管闭塞(如附图1所示)。而模型组视网膜神经纤维层有许多小圆形细胞增生和新生血管，有些新生血管突入到视网膜表面(如附图2所示)；同时视网膜表面分布大量新生血管(小箭头)，并长入到玻璃体和晶状体囊膜表面(长箭头)(如附图3所示)；此外，模型组动物视网膜神经纤维层内大量细胞增生和新生血管形成(如附图4所示)；并伴有视网膜表面小片状出血(箭头)(如附图5所示)。给药组后极部视网膜结构清楚，视网膜表面光滑(如附图6所示)，同时视网膜表面细小的新生血管(细箭头)及小灶状细胞增生明显减少(如附图7所示)。以上病理切片结果可以看出本发明药物组合物对视网膜新生血管有明显抑制作用。

(2)对病变小鼠突破内界膜的血管内皮细胞核个数的影响

表2本发明药物组合物对缺氧诱导幼鼠突破内界膜的血管内皮细胞核数的影响(

n＝10)

注：模型组与正常组比较ΔΔΔp＜0.001给药组与模型组比较*p＜0.05 **p＜0.01

从表2结果可以看出，与正常组比较，模型组突破内界膜的内皮细胞核数量明显升高，本发明药物组合物各剂量组能够明显减少突破内界膜的内皮细胞核数量，表明本发明药物组合物具有能够明显抑制视网膜新生血管生长的作用。

综合表1、表2及病理切片结果可以看出：本发明药物组合物可显著改善因缺氧诱导幼鼠血管新生面积及突破内界膜的血管内皮细胞核，显著抑制视网膜新生血管生长的作用。

实施例二、药物组合物对STZ诱导糖尿病视网膜病变的预防作用

1、试验方法

取正常雄性SD大鼠300只，观察室饲养3天，造模前禁食24h并称重，以50mg/kg剂量经腹腔一次性注射链脲佐菌素(Streptozotocin，0.1mmol/L，pH 4.4的枸橼酸钠缓冲液配成1％STZ)。注射1周后断尾取血，测量空腹血糖，凡空腹血糖≥15.8mmol/L者纳入为糖尿病大鼠模型，将糖尿病大鼠饲养4周后，挑选血糖值稳定的模型大鼠80只(血糖值≥15.8mmol/L)和正常组大鼠10只。

模型动物按血糖水平，随机分为6组，分别为模型组(等体积生理盐水)、阳性组(0.5g多贝斯/kg体重)、本发明药物组合物A组(按实施例八制备)(0.5g药粉/kg体重)、本发明药物组合物B组(按实施例五制备)(0.5g药粉/kg体重)、本发明药物组合物C组(按实施例七制备)(0.5g药粉/kg体重)、本发明药物组合物D组(按实施例六制备)(0.5g药粉/kg体重)，每组16只，各组每天灌胃给药1次，连续给药21周，在试验期间观察动物一般状况，每周称量一次体重和每2周测量一次血糖，于试验结束时对大鼠右眼进行彩色多普勒检查，测定每只大鼠右眼视网膜中央动脉(CRA)的血流动力学，包括收缩期峰值血流速度(Max)、舒张末期流速(Min)、平均血流速度(TAMx)；然后将动物禁食16h，戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉取血，部分做血粘度、血沉测定；摘取右眼球固定在4％多聚甲醛溶液中，进行视网膜血管消化铺片，显微镜下计数视网膜血管内周细胞(P)数和内皮细胞(E)数，并计算二者比值。

2、实验仪器

Sequoia512型彩色多普勒超声仪：德国西门子生产；LG-R-80C血液粘度仪：北京中勤世帝科学仪器有限公司；ADVIA2120血液分析仪：德国西门子生产；LXJ-IIB型低速大容量多管离心机：上海安亭科学仪器有限公司；SUNRISE酶标仪：奥地利日升公司；罗氏卓越型血糖仪及试纸条：德国Roche Diagnostics Gmbh生产，试纸条批号：321030；PL203电子天平：梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；LEICADM LB2普通光学显微镜：德国Leica公司；解剖显微镜：德国Leica公司。

3、试验结果

表3中药复合物对STZ诱导糖尿病性视网膜病变大鼠血液流变学的影响

(预防组)

注：模型组与正常组比较ΔΔΔp＜0.001，给药组与模型组比较^*p＜0.05 ^**p＜0.01 ^***p＜0.001

表3结果表明：模型组大鼠全血粘度和血浆粘度显著升高，血沉增快，与正常组比较，有极显著性差异。与模型组比较，本发明药物组合物能显著降低各切速下的大鼠全血粘度以及血浆粘度，血沉下降减慢，本发明药物组合物降低大鼠血液粘度的水平和血沉下降速度的水平不低于阳性药多贝斯。结果表明，本发明药物组合物具有非常显著的活血化瘀作用，能够非常显著预防糖尿病大鼠血液粘度的升高，改善微循环障碍。

表4本发明药物组合物对STZ诱导糖尿病性视网膜病变大鼠CRA血流动力学的影响

(预防组)

注：模型组与正常组比较^ΔΔΔp＜0.001，给药组与模型组比较^**p＜0.01 ^***p＜0.001

表4结果表明：模型组大鼠CRA血流流速明显降低，Max、Min、TAMx均非常显著低于同期正常组，提示视网膜血流灌注和供血严重不足，与模型组比较，本发明药物组合物大鼠CRA血流流速明显增加，具有非常显著性意义。结果表明，本发明药物组合物能够显著改善糖尿病大鼠视网膜中央动脉血流灌注和供血不足，对早期糖尿病性视网膜病变有显著的预防作用。

表5本发明药物组合物对STZ诱导糖尿病性视网膜病变大鼠内皮细胞、周细胞及其比值的影响(预防组)

注：模型组与正常组比较ΔΔΔp＜0.001给药组与模型组比较***p＜0.001

表5结果显示：与正常组比较，模型组内皮细胞增生明显，周细胞数目明显减少，E/P比值非常显著增大。与模型组比较，各给药组周细胞数非常显著地增多，内皮细胞明显减少，E/P比值明显改善。表明给予本发明药物组合物能够非常显著地减少周细胞的丢失和抑制内皮细胞的增生，对视网膜血管有良好的保护作用，预防了因高血糖引起的视网膜病变的发生和发展。

综合表3-表5结果可以看出，本发明药物组合物对糖尿病大鼠视网膜中央动脉血流灌注和供血不足均有明显改善作用；并且能显著抑制糖尿病大鼠血液粘度的升高，改善微循环障碍；明显减少周细胞的丢失和抑制内皮细胞的增生，对视网膜血管有良好的保护作用，且四个组合物中以组合物B的效果更为显著，说明各药物组合物尤其是组合物B可明显预防因高血糖引起的视网膜病变的发生和发展。

实施例三、中药复合物对STZ诱导糖尿病视网膜病变的治疗作用

1、试验方法

取正常雄性SD大鼠300只，观察室饲养3天，造模前禁食24h并称重，以50mg/kg剂量经腹腔一次性注射链脲佐菌素(Streptozotocin，0.1mmol/L，pH 4.4的枸橼酸钠缓冲液配成1％STZ)。注射1周后断尾取血，测量空腹血糖，凡空腹血糖≥15.8mmol/L者纳入为糖尿病大鼠模型，继续基础饲料喂养3个月，测定大鼠视网膜血流动力学参数，若出现血流动力学参数的异常则可据《中药新药治疗糖尿病视网膜病变的临床研究指导原则》确定为模型动物进入糖网病的亚临床期。

挑选糖网病大鼠70只，行彩色多普勒超声检查，以血流动力学指标随机分为6组：模型组(等体积生理盐水)、阳性组(0.5g多贝斯/kg体重)、本发明药物组合物A组(按实施例八制备)(0.5g药粉/kg体重)、本发明药物组合物B组(按实施例五制备)(0.5g药粉/kg体重)、本发明药物组合物C组(按实施例七制备)(0.5g药粉/kg体重)、本发明药物组合物D组(按实施例六制备)(0.5g药粉/kg体重)，每组14只，另取同批正常大鼠10只为正常组(等体积生理盐水)。各组每天灌胃给药1次，连续给药12周。在试验期间观察动物一般状况，每周称量一次体重和每4周测量一次血糖，于试验结束时对大鼠右眼进行彩色多普勒检查，测定每只大鼠右眼视网膜中央动脉(CRA)的血流动力学，然后将动物禁食16h，戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉取血，部分做血粘度、血沉；摘取右眼球固定在4％多聚甲醛溶液中，进行视网膜消化铺片，显微镜下计数视网膜血管内周细胞(P)数和内皮细胞(E)数，并计算二者比值。

2、实验仪器

罗氏卓越型血糖仪及试纸条：德国Roche Diagnostics Gmbh生产，试纸条批号：321030；Sequoia512型彩色多普勒超声仪：德国西门子生产；LG-R-80C血液粘度仪：北京中勤世帝科学仪器有限公司；ADVIA2120血液分析仪：德国西门子生产；LXJ-IIB型低速大容量多管离心机：上海安亭科学仪器有限公司；SUNRISE酶标仪：奥地利日升公司；PL203电子天平：梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司。LEICADM LB2普通光学显微镜：德国Leica公司；解剖显微镜：德国Leica公司；Olympus BH-2普通光学显微镜：日本Olympus公司。

3、实验结果

表6本发明药物组合物对STZ诱导糖尿病性视网膜病变大鼠血液流变学的影响(治疗组)

注：模型组与正常组比较ΔΔΔp＜0.001，给药组与模型组比较^***p＜0.001

表6结果表明：模型组大鼠全血粘度和血浆粘度显著升高，血沉增快，与正常组比较，有非常显著性差异。与模型组比较，本发明药物组合物能显著降低各切速下的大鼠全血粘度以及血浆粘度，血沉下降减慢，本发明药物组合物降低大鼠血液粘度的水平和血沉下降速度的水平与阳性药多贝斯相当。可以看出本发明药物组合物具有非常显著的活血化瘀作用，能极显著抑制糖尿病大鼠血液粘度的升高，改善微循环障碍。

表7本发明药物组合物对STZ诱导糖尿病性视网膜病变大鼠CRA血流动力学的影响

(治疗组)

注：模型组与正常组比较^ΔΔΔp＜0.001，给药组与模型组比较^*p＜0.05 ^***p＜0.001

表7结果表明：模型组大鼠CRA血流流速明显降低，Max、Min、TAMx均非常显著低于同期正常组，反映视网膜血流灌注和供血严重不足，与模型组比较，本发明药物组合物大鼠CRA血流流速明显增加，均有非常显著性意义。可以看出本发明药物组合物能够显著改善糖尿病大鼠视网膜中央动脉血流灌注和供血不足，对早期糖尿病性视网膜病变有显著的治疗作用。

表8本发明药物组合物对STZ诱导糖尿病性视网膜病变大鼠内皮细胞、周细胞及其比值的影响

(治疗组)

注：模型组与正常组比较ΔΔΔp＜0.001给药组与模型组比较***p＜0.001

表8结果显示：与正常组比较，模型组大鼠视网膜毛细血管内皮细胞增生明显，周细胞数目明显减少，E/P比值非常显著增大。给予本发明药物组合物的组均能够非常显著地减少周细胞丢失和抑制内皮细胞的增生，显著改善E/P比值。由此可以看出本发明药物组合物对视网膜血管有良好的保护作用，能够延缓因高血糖引起的视网膜病变的发生和发展。

综合表6-表8结果显示：本发明药物组合物对糖尿病大鼠视网膜中央动脉血流灌注和供血不足均有明显改善作用；并且能显著抑制糖尿病大鼠血液粘度的升高，改善微循环障碍，明显减少周细胞的丢失和抑制内皮细胞的增生，对视网膜血管有良好的保护作用，且四个组合物中以组合物B的效果更为显著，说明各药物组合物尤其是组合物B可明显治疗因高血糖引起的视网膜病变的发生和发展。

实施例二采用STZ诱导为糖尿病大鼠后，在其视网膜尚未发生病变前给予以本发明药物组合物以预防其糖尿病视网膜病变的发生；实施例三采用STZ诱导为糖尿病大鼠后再继续基础饲料喂养3个月，待其视网膜发生病变后才以本发明药物组合物以治疗糖尿病视网膜病变。上述两种模式的实验结果均显示本发明药物组合物具有良好的干预作用，其对糖尿病视网膜病变的预防和治疗均有显著改善作用。

实施例四、本发明药物组合物对大鼠糖尿病性白内障程度的改善作用

1、试验方法

预防性实验中取注射STZ 72小时后血糖升至16.7mmol/L的糖尿病大鼠模型84只，以空腹血糖随机分为6组：模型对照组(等体积生理盐水)、阳性对照组(0.5g多贝斯/kg体重)、本发明药物组合物A组(按实施例八制备)(0.5g药粉/kg体重)、本发明药物组合物B组(按实施例五制备)(0.5g药粉/kg体重)、本发明药物组合物C组(按实施例七制备)(0.5g药粉/kg体重)、本发明药物组合物D组(按实施例六制备)(0.5g药粉/kg体重)，每组14只，另取同批正常大鼠10只为正常对照组(等体积生理盐水)。各组连续给药24周，正常对照组和模型对照组给予等体积的生理盐水。末次给药后，对大鼠眼睛进行白内障程度的评分，即晶状体纤维变性的程度。根据在眼球水平切面上，变性组织占据晶状体的面积计算：晶状体纤维变性≤1/4者，用(+)表示，记为1分；晶状体纤维变性≤2/4者，用(++)表示，记为2分；晶状体纤维变性＞2/4者，用(+++)表示，记为3分。统计组间差异。

治疗性实验中取亚临床期糖网病模型大鼠84只，以血流动力学指标随机分为6组：模型对照组(等体积生理盐水)、阳性对照组(0.5g多贝斯/kg体重)、本发明药物组合物A组(按实施例八制备)(0.5g药粉/kg体重)、本发明药物组合物B组(按实施例五制备)(0.5g药粉/kg体重)、本发明药物组合物C组(按实施例七制备)(0.5g药粉/kg体重)、本发明药物组合物D组(按实施例六制备)(0.5g药粉/kg体重)，每组14只，另取同批正常大鼠10只为正常对照组(等体积生理盐水)。各组连续给药12周，正常对照组和模型对照组给予等体积的生理盐水。末次给药后，对大鼠眼睛进行白内障程度的评分，即晶状体纤维变性的程度。根据在眼球水平切面上，变性组织占据晶状体的面积计算：晶状体纤维变性≤1/4者，用(+)表示，记为1分；晶状体纤维变性≤2/4者，用(++)表示，记为2分；晶状体纤维变性＞2/4者，用(+++)表示，记为3分。统计组间差异。

2、实验仪器

Sequoia512型彩色多普勒超声仪：德国西门子生产；罗氏卓越型血糖仪及试纸条：德国Roche Diagnostics Gmbh生产，试纸条批号：321030；PL203电子天平：梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司。

3、实验结果

表9本发明药物组合物对糖尿病大鼠白内障的改善评分

注：正常给药组与模型对照组比较^*p＜0.05 ^**p＜0.01 ^***p＜0.001

表9结果表明：模型组大鼠晶状体纤维变性程度明显增强，反映白内障症状严重，与模型组比较，本发明药物组合物中大鼠晶状体纤维变性程度明显减弱，均有显著性意义。结果表明，本发明药物组合物能够显著改善大鼠糖尿病性白内障症状，对糖尿病性视网膜病变有显著的预防与治疗作用。

实施例五

黄芪540g、太子参180g、女贞子270g、

枸杞子216g、水蛭180g、大黄108g

上述药物首先进行中药材的炮制：

1)黄芪除去杂质，大小分开，洗净，润透，切成2-4mm厚片，60-80℃烘干备用；

2)太子参除去杂质，抢水洗净，切成2-4mm厚片，60-80℃烘干备用；

3)女贞子除去杂质及梗叶，洗净，60-80℃干燥，用时捣碎；

4)枸杞子除去杂质，拣去果梗，整洁后备用；

5)水蛭，洗净，切段，60-70℃烘干备用；

6)大黄，除去杂质，洗净，润透，切直片，厚度为2-4mm，60-80℃烘干，筛去碎屑备用；

将上述方法炮制后的大黄粉碎，过100目筛，取细粉进行辐射灭菌，2KGY/小时，辐照时间3小时后备用；取经上述方法炮制过的女贞子加6倍量得75％乙醇，回流提取2-4次，每次1小时，将醇提回收乙醇；女贞子的药渣与经上述方法炮制过的黄芪、太子参、枸杞子、水蛭加水6倍量的水，煎煮2-4次，每次2小时，滤过，合并水提液，去弃药渣，煎出液与女贞子回收乙醇后的浓缩液合并，在-0.015-0.030MPa下，减压浓缩，温度为80℃，浓缩至浸膏相对密度为1.05-1.15时，在70℃下喷雾干燥为干膏粉，再与前述备用的大黄混匀得药物组合物。

实施例六

取如下重量百分含量的原料药：

黄芪23％、太子参30％、女贞子10％、

枸杞子12％、水蛭11％、大黄14％

其炮制和制备方法基本与实施例五相同。

实施例七

取如下重量百分含量的原料药：

黄芪20％、太子参5％、女贞子20％、

枸杞子10％、水蛭15％、大黄30％

其炮制和制备方法基本与实施例五相同。

实施例八

取如下重量百分含量的原料药：

黄芪65％、太子参5％、女贞子5％、

枸杞子10％、水蛭10％、大黄5％

其炮制和制备方法基本与实施例五相同。

实施例九：胶囊的制备

取实施例五制得药物组合物，制成颗粒，干燥，加预胶化淀粉、滑石粉适量，混均，装入胶囊，制成1000粒。

实施例十：散剂的制备

取实施例六制得药物组合物，过100目筛，袋装封口，2g/袋，为散剂成品。

实施例十一：丸剂的制备

取实施例七制得药物组合物，在60℃下干燥1小时，粉碎，过60目筛，用纯水泛丸，水丸每20粒重1g，包衣，打光，60℃干燥，为丸剂成品。

实施例十二：片剂的制备

取实施例八制得药物组合物，加辅料淀粉10％，混匀，制成颗粒，在60℃下干燥1小时，压片，片重：0.5g/片，包薄膜衣，为片剂成品。

Claims (7)

1.一种药物组合物在制备预防或治疗眼部新生血管性疾病的药物中的应用，所述药物组合物组成重量配比为：黄芪20-65％、太子参5-30％、女贞子5-20％、枸杞子10-30％、水蛭10-15％、大黄5-30％。

2.根据权利要求1所述的应用，其中所述药物组合物组成重量配比为黄芪36.14％、太子参12.05％、女贞子18.07％、枸杞子14.46％、水蛭12.05％、大黄7.23％。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述眼部新生血管性疾病为角膜新生血管相关疾病、虹膜新生血管相关疾病、脉络膜新生血管相关疾病、视网膜新生血管相关疾病。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述视网膜新生血管相关疾病为糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜静脉周围炎。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述虹膜新生血管相关疾病为新生血管性青光眼。

6.根据权利要求3所述应用，其特征在于所述脉络膜新生血管相关疾病为年龄相关性黄斑变性、病理性高度近视、老年性玻璃膜疣。

7.权利要求1-2任一项所述的药物组合物在制备治疗糖尿病性白内障药物中的应用。

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