CN104173506B - 一种中药提取物的制备方法及其制备的中药提取物和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种中药提取物的制备方法，所述中药提取物的原料药组成为：黄芪30‑60重量份、女贞子9‑15重量份、益母草9‑30重量份、乌梅3‑10重量份、黄连2‑9重量份、肉桂1‑5重量份、密蒙花3‑9重量份；所述制备方法包括：各味药材用药材重量6‑16倍的体积百分浓度为30％‑100％乙醇加热回流提取，回收乙醇，减压浓缩至80℃时测定相对密度为1.20‑1.30的浸膏，得提取浸膏1；药渣用水加热回流提取，水提取液浓缩至80℃时测定相对密度为1.20‑1.30的浸膏，得提取浸膏2；合并提取浸膏1和2，干燥，即得。与现有技术相比，本发明制备方法制备得到的中药提取物活性物质含量和药理作用得到了显著的提升。

Description

一种中药提取物的制备方法及其制备的中药提取物和用途

技术领域

本发明属于中药领域，具体涉及一种用于糖尿病视网膜病变的中药提取物的制备方法及其制备的中药提取物和用途。

背景技术

糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy，简称DR)，是糖尿病严重而常见的眼部并发症之一。随着糖尿病病程的延长，DR的发生率亦随之增高。病程8年以上者中，糖尿病视网膜病变发生率约为50％。该病早期症状不明显，易被忽视，晚期又没有特效的控制方法，疾病缠绵，顽固难治。本病失治，后果严重，是导致成人失明的主要原因，致盲率高达8-12％，对患病人群的生活质量造成了严重不良影响。因此，DR的防治已成为当今医学领域急需解决的重大攻关课题，日益受到国内外医学界和医药工作者的高度重视。但是，目前国内外尚缺乏治疗本病的有效药物。为了满足日益扩大的市场需求，预防和延缓糖尿病患者视网膜病变的疾病进程，提高广大糖尿病患者的生活质量，发挥中医药治疗疑难疾病等优势病种的特长，开展治疗DR的中药新药具有十分重要的社会意义和经济价值。

在申请人早前的一件名为“一种治疗早期糖尿病视网膜病变的中药制剂”专利中(专利号ZL200610087540.3，授权公告日2009年9月16日)，公开了一种治疗早期糖尿病视网膜病变的中药制剂，处方组成为：

黄芪30-60g、女贞子9-15g、益母草9-30g、乌梅3-10g、黄连2-9g、肉桂2-5g、密蒙花3-9g。

该专利文件还公开了上述中药制剂的制备方法，即：(1)取相应配比的各种药组分七剂；(2)用清洁冷水浸泡30分钟；(3)放入煎药机中，加入2500毫升浸泡水，煎煮40分钟，机械挤压出药汁；(4)分装14个密封塑料袋中，每袋175毫升。

上述方法仅是中药煎剂的简单制备方法，并没有考虑如何充分提取出药物中的有效成分，造成有效成分提取不完全，药材资源浪费严重，药效作用不显著。而且水煎剂存在口感差，不方便携带，不宜长期储存的问题。

因此，有必要在充分考虑处方中各味药物的活性成分在种类、结构、理化性质上的差异的基础上，对上述提取工艺进行优化，以期提高药效，为患者提供更好的治疗糖尿病视网膜病变的药物。

发明内容

针对上述问题，本发明的一个目的在于提供一种治疗糖尿病视网膜病变的中药提取物的制备方法。与现有技术的水煎煮法比较，本发明所述制备方法制备得到的中药提取物，活性物质的含量更高、药效更显著。

为了实现上述发明目的，本发明采用了如下的技术方案：

一种中药提取物的制备方法，所述中药提取物的原料药组成为：

黄芪30-60重量份、女贞子9-15重量份、益母草9-30重量份、乌梅3-10重量份、黄连2-9重量份、肉桂1-5重量份、密蒙花3-9重量份；

所述制备方法包括如下步骤：

(1)按照所述重量份准备各原料药；

(2)以上各味药材，加体积百分比浓度为30％-100％的乙醇溶液提取，乙醇提取液回收乙醇，浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏1，药渣备用；

(3)步骤(2)中得到的药渣加水提取，水提取液浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏2；

(4)将提取浸膏1和2合并，得总提取浸膏；

(5)步骤(4)得到的总浸膏干燥，得干浸膏粉，即得。

所述原料药单位处方的组成优选为：

黄芪30g、女贞子15g、益母草15g、乌梅9g、黄连6g、肉桂1g、密蒙花6g。

优选的，所述步骤(2)中，乙醇溶液的体积百分比浓度为30％-80％，更优选为50％。

还优选的，所述步骤(2)中，乙醇溶液的体积为所述药材总重量的6-14倍；更优选的，乙醇溶液的体积为所述药材总重量的10倍。

还优选的，所述步骤(2)中，提取2-3次，每次0.5-2小时；更优选的，提取2次，每次1.5小时。

优选的，所述步骤(3)中，水的重量为药材重量的6-16倍；优选的，水的重量为药材重量的8倍。

还优选的，所述步骤(3)中，水提取1-3次，每次1-3小时；更优选的，水提取2次，每次2小时。

优选的，所述步骤(5)中，干燥方法选自烘干、喷雾干燥或减压干燥；更优选为喷雾干燥。

作为本发明的一个优选实施方式，所述制备方法的具体操作步骤如下：

(1)按照所述重量份准备原料药；

(2)以上各味药材，用药材重量6-16倍的体积百分浓度为30％-100％乙醇加热回流提取2-3次，每次0.5-2小时，滤过，合并各次乙醇提取液，回收乙醇，减压浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏1，药渣备用；

(3)步骤(2)中得到的药渣，用药材重量6-14倍的水加热回流提取2-3次，每次1-3小时，滤过，合并各次滤液，静置，滤过，滤液浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏2；

(4)将提取浸膏1和2合并，得总提取浸膏；

(5)步骤(4)得到的总提取浸膏烘干、减压干燥或喷雾干燥，得干浸膏粉，即得。

作为本发明的一个更优选的实施方式，所述制备方法的具体操作步骤如下：

(1)按照所述重量份准备原料药；

(2)以上各味药材，用药材重量10倍的体积百分浓度为50％乙醇加热回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并两次乙醇提取液，回收乙醇，减压浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏1，药渣备用；

(3)步骤(2)中得到的药渣，用药材重量8倍的水加热回流提取2次，每次2小时，滤过，合并两次滤液，静置，滤过，滤液浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏2；

(4)将提取浸膏1和2合并，得总提取浸膏；

(5)步骤(4)得到的总提取浸膏喷雾干燥，得干浸膏粉，即得。

本发明的另一个目的在于提供一种上述制备方法制备得到的中药提取物。

本发明还有一个目的在于，提供上述中药提取物在制备治疗糖尿病视网膜病变的药物中的应用。

上述应用中，所述中药提取物加入或者不加入所述药学上可以接受的辅料，制备成临床上可以接受的制剂。

本发明所述药学上可以接受的辅料，可以包括但不限于：

稀释剂：例如选自淀粉、糊精、预胶化淀粉、乳糖、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙、氧化镁、碳酸镁、氢氧化铝凝胶、β-环糊精、甘露醇、山梨醇、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羟甲基纤维素钠中的一种或多种。

粘合剂：例如选自蒸馏水、乙醇、淀粉浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、甲基纤维素和乙基纤维素、羟丙甲纤维素中的一种或多种。

润滑剂：例如选自十二烷基硫酸镁、聚乙二醇、微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉中的一种或多种。

矫味剂：例如选自糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、甜菊苷以及香精类中的一种或多种。

本发明的有益技术效果在于：本发明充分考虑处方中各味药物的活性成分，分别采用一定浓度的乙醇和水对有效成分进行提取，脂溶性成分和水溶性成分均得到有效提取；现有技术的水煎剂仅考虑到水溶性成分的提取。因此，本发明有效成分提取更加完全，能够更好地发挥药效，同时可以节约中药资源。

药学研究证明，本发明提取方法与原制剂工艺(水煎煮)比较，其主要药效物质的含量明显提高。药理实验从改善糖尿病大鼠血液流变学、视网膜毛细血管形态学方面证明，本发明所述方法制备得到的中药提取物改善糖尿病大鼠视网膜微血管病变的作用明显强于现有技术中的水煎剂，说明本发明制备的提取物较原制剂(水煎)具有更好的疗效。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1的柱状图显示的是试验例1中，本发明所述制备方法与现有技术在主要药效成分提取率上的比较。

具体实施方式

以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。

实施例1一种中药提取物的制备方法及其制备的中药提取物

原料药处方：

黄芪6kg、女贞子3kg、益母草3kg、乌梅1.8kg、黄连1.2kg、肉桂0.2kg、密蒙花1.2kg

所述制备方法的具体步骤如下：

(1)按照处方准备各味药材。

(2)以上各味药材，用药材重量10倍的体积百分浓度为50％乙醇加热回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并两次乙醇提取液，回收乙醇，减压浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏1，药渣备用；

(3)步骤(2)中药渣用药材重量8倍的水加热回流提取2次，每次2小时，滤过，合并两次滤液，静置，滤过，滤液浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏2；

(4)将提取浸膏1和提取浸膏2合并，得总提取浸膏；

(5)步骤4得到的所述总浸膏，喷雾干燥，所得干浸膏粉4.53kg，即为所述中药提取物。

实施例2一种中药提取物的制备方法及其制备的中药提取物

原料药处方：

黄芪6kg、女贞子3kg、益母草3kg、乌梅1.8kg、黄连1.2kg、肉桂0.2kg、密蒙花1.2kg

所述制备方法的具体步骤如下：

(1)按照处方准备各味药材。

(2)以上各味药材，用药材重量6倍的体积百分浓度为30％乙醇加热回流提取2次，每次0.5小时，滤过，合并两次乙醇提取液，回收乙醇，减压浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏1，药渣备用；

(3)步骤(2)中药渣用药材重量6倍的水加热回流提取1次，提取时间为1小时，滤过，静置，滤过，滤液浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏2；

(4)将提取浸膏1和提取浸膏2合并，得总提取浸膏；

(5)步骤4得到的所述总浸膏，80℃烘干，得干浸膏粉4.45kg，即为所述中药提取物。

实施例3一种中药提取物的制备方法及其制备的中药提取物

原料药处方：

黄芪6kg、女贞子3kg、益母草3kg、乌梅1.8kg、黄连1.2kg、肉桂0.2kg、密蒙花1.2kg

所述制备方法的具体步骤如下：

(1)按照处方准备各味药材。

(2)以上各味药材，用药材重量14倍的体积百分浓度为100％乙醇加热回流提取3次，每次2小时，滤过，合并三次乙醇提取液，回收乙醇，减压浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏1，药渣备用；

(3)步骤(2)中药渣用药材重量16倍的水加热回流提取3次，每次3小时，滤过，合并三次滤液，静置，滤过，滤液浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏2；

(4)将提取浸膏1和提取浸膏2合并，得总提取浸膏；

(5)步骤4得到的所述总浸膏，60℃减压真空干燥，得干浸膏粉4.24kg，即为所述中药提取物。

实施例4一种中药提取物的制备方法及其制备的中药提取物

原料药处方“

黄芪6kg、女贞子3kg、益母草3kg、乌梅1.8kg、黄连1.2kg、肉桂0.2kg、密蒙花1.2kg

所述制备方法的具体步骤为“

(1)按照处方准备各味药材。

(2)以上各味药材，用药材重量8倍的体积百分浓度为80％乙醇加热回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并两次乙醇提取液，回收乙醇，减压浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏1，药渣备用；

(3)步骤(2)中药渣用药材重量12倍的水加热回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并两次滤液，静置，滤过，滤液浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏2；

(4)将提取浸膏1和提取浸膏2合并，得总提取浸膏；

(5)步骤4得到的所述总浸膏，喷雾干燥，得干浸膏粉4.40kg，即为所述中药提取物。

对比例1一种中药组合物的制备方法及其制备的中药煎剂

原料药处方：

黄芪6kg、女贞子3kg、益母草3kg、乌梅1.8kg、黄连1.2kg、肉桂0.2kg、密蒙花1.2kg

所述中药组合物的制备方法，具体步骤为：

(1)按照处方准备各味药材。

(2)取各味药材，用清洁冷水浸泡30分钟，放入煎药机中，加入71.43升浸泡水，煎煮40分钟，机械挤压出药汁，减压浓缩至18.74升，即得所述中药煎剂；然后喷雾干燥，得到干浸膏粉4.14kg。

试验例1本发明所述中药提取物与现有技术的比较

测试样品：

1)本发明实施例1-4制备的中药提取物

2)对比例制备的中药煎剂干浸膏粉

试验方法：

1)黄芪甲苷的含量测定

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(35：65)为流动相；蒸发光散射检测器检测。

对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取测试样品3g，精密称定，精密加甲醇100ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足重量，摇匀，过滤，弃去初滤液，精密吸取续滤液50ml，蒸干，加水25ml使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次25ml，合并正丁醇，用氨试液充分洗涤3次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

药材供试品溶液的制备：按2010年版《中国药典》283页黄芪药材【含量测定】项下“供试品溶液的制备”方法制备。

测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl、30μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。

提取率＝黄芪甲苷总量/投入药材中含黄芪甲苷总量×100％

2)蒙花苷的含量测定

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水-醋酸(45：54.5：0.5)为流动相，检测波长为326nm。

对照品溶液的制备：取蒙花苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取测试样品1g，精密称定，精密加50％乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

药材供试品溶液的制备：按2010年版《中国药典》308页密蒙花药材【含量测定】项下“供试品溶液的制备”方法制备。

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

提取率＝蒙花苷总量/投入药材中含蒙花苷总量×100％

3)小檗碱的含量测定

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾(50：50)(每100ml加入十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0)为流动相，检测波长为345nm

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取测试样品0.3g，精密称定，精密加甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

药材供试品溶液的制备：按2010年版《中国药典》285页黄连药材【含量测定】项下“供试品溶液的制备”方法制备。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

提取率＝提取物中含小檗碱总量/投入药材中含小檗碱总量×100％

4)益母草碱的含量测定

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.4％辛烷磺酸钠的0.1％磷酸溶液(24：76)为流动相，检测波长为277nm。

对照品溶液的制备：取益母草碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.03mg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：取测试样品2g，精密称定，精密加75％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

药材供试品溶液的制备：按2010年版《中国药典》272页益母草药材【含量测定】项下“供试品溶液的制备”方法制备。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

提取率＝益母草碱总量/投入药材中含益母草碱总量×100％

5)桂皮醛的含量测定

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(35：75)为流动相；检测波长为290nm。

对照品溶液的制备：取桂皮醛对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含l0μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取测试样品0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率350W，频率35kHz)10分钟，放置过夜，同法超声处理一次，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

药材供试品溶液的制备：按2010年版《中国药典》127页肉桂药材【含量测定】项下“供试品溶液的制备”方法制备。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

提取率＝桂皮醛总量/投入药材中含桂皮醛总量×100％

试验结果：见表1和图1。

1)表1显示，本发明所述制备方法，不同工艺参数下制备的提取物，检测的各个成分的提取率均高于相同原料药处方的对比例的组合物。

2)实施例1对黄芪甲苷、蒙花苷和小檗碱的提取率明显高于其它实施例。

表1对比例与实施例药效成分对比表

试验结论：

1)本发明所述制备方法能够显著改进现有技术的提取效率，使本发明制备的中药提取物在临床应用时具有更加可靠的药效学物质基础。

2)黄芪甲苷、蒙花苷和小檗碱是治疗糖尿病及糖尿病视网膜病变的有效成分。实施例1所述的制备方法对上述三种成分的提取率明显高于其它各实施例，说明实施例1所述的制备方法是本发明优选的方法。

试验例2本发明所述中药提取物对STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜病变的影响

糖尿病视网膜病变为糖尿病长期发展导致的眼底微血管病变，其主要病理改变是因长期高血糖直接或间接影响其血液流变性，最终造成视网膜血管结构的损伤和功能改变。STZ诱导的糖尿病大鼠模型是目前国际上比较公认的糖尿病模型，经长期造模后逐步形成糖尿病视网膜病变。本试验采用一次腹腔注STZ的方法制备糖尿病大鼠模型，通过药物干预比较本发明所述制备方法与现有技术所制备的提取物对糖尿病大鼠视网膜微血管病变的影响。

1、实验方法

1.1动物分组

取SPF级SD大鼠，适应性饲养1周后，随机分成2组：空白组(15只)，糖尿病组(100只)。所有动物禁食16h后，空白组大鼠腹腔注射(i.p.)55mg/kg的0.01mol/L，pH4.4柠檬酸缓冲液；糖尿病组大鼠腹腔注射1％STZ 55mg/kg(临时溶于0.01mol/L，pH4.4的柠檬酸缓冲液中)。造模1周后尾静脉取血测空腹血糖，以血糖≥16.7mmol/L为模型成功标准。血糖未达标的大鼠再补加STZ 40mg/kg,7天后再次检测其空腹血糖，筛选两次造模成功的大鼠(两次成功率为90％)。将符合糖尿病标准的大鼠按血糖、体重水平再随机分为6组，模型组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、对比例组，每组15只。

该处方人用剂量为：人每天用生药量82g/60kg，即1.4g/kg。根据折算系数表，查出大鼠体重折算系数为6.25，折算大鼠的等效剂量为6.25×1.4g/kg＝8.75g/kg，即8.75g生药量/kg。除模型组外，各组的给药剂量折算成生药都为8.75g生药量/kg。

1.2药物干预

实施例1组(实施例1制备得到的提取物，加去离子水制成0.242g/ml的溶液，给药剂量：10ml/kg)、实施例2组(实施例2制备得到的提取物，加去离子水制成0.237g/ml的溶液，给药剂量：10ml/kg)、实施例3组(实施例3制备得到的提取物，加去离子水制成0.226g/ml的溶液，给药剂量：10ml/kg)、实施例4组(实施例4制备得到的提取物，加去离子水制成0.235g/ml的溶液，给药剂量：10ml/kg)、对比例组(对比例制备得到的药物组合物，加去离子水制成0.221g/ml的溶液，给药剂量：10ml/kg)，模型组和空白对照组给予相应体积的去离子水，灌胃给药，每天给药1次，共给药3个月。给药期间给予充足的饮水、食物，每日更换垫料。

1.3指标检测

1.3.1血液流变学检测

实验结束时，大鼠腹主动脉取血，肝素抗凝，3000r/min，离心15min，留取血浆。用血液粘度仪测定不同切变率下的全血粘度和血浆粘度；用红细胞变形聚集仪测定红细胞聚集指数，实验结果见表2。

1.3.2视网膜毛细血管形态学变化

采用大鼠视网膜铺片法观察其视网膜毛细血管形态学变化。大鼠麻醉后，用生理盐水经心脏灌注冲干净血液，当眼球由红润变为苍白后，摘取带有视神经的眼球，固定于4℃4％PFA48-72h。从4％PFA中取出眼球，流水轻轻冲洗10min,放入盛有PBS的培养皿中；从睫状体后部沿锅齿缘环形剪开巩膜，去除角膜及晶状体，将后眼杯以视乳头为中心桔瓣样切成3块，小心分离出视网膜；PBS(0.01mol/L pH7.4)漂洗l0min，置于0.15mol/L pH7.4甘氨酸缓冲液中浸泡过夜；3％胰蛋白酶(现用现配)37℃空气浴振荡器消化视网膜2-4h，随时观察，待内界膜边缘浮起，与视网膜剩余部分即将分离时，终止消化；转移视网膜到0.1MPBS中，轻轻吸吹除去内界膜，再反复轻吹、吸打，仅剩下一层透明的血管网，漂取并平铺于防脱载坡片上，置室温自然干燥后，存放于4℃切片盒中以备PAS染色，中性树胶封固，备用。

2、实验结果

2.1各处理组对糖尿病大鼠血液流变学的影响：结果见表2。

表2对糖尿病大鼠血液流变学的影响

注：“^**”表示与空白组相比，p<0.01；“^#”表示与模型组相比，p<0.05，“^##”表示与模型组相比，p<0.01；“^▲”表示与对比例组相比，p<0.05，“^▲▲”表示与对比例组相比，p<0.01。

2.1.1与空白组比较，模型组大鼠的红细胞聚集指数、全血粘度(高切、中切、低切)、血浆粘度水平都显著增加(P<0.01)，说明造模成功。

2.1.2与模型组比较，实施例1、2、3、4组和对比例组的红细胞聚集指数、全血粘度(中切、低切)、血浆粘度水平都显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)，其中实施例1、2、4组的各项检测指标的下降更显著，下降程度均大于对比例组。实施例1组与对比例组比较，具有极显著差异(P<0.01)；实施例2、4组与对比例组比较，具有显著差异(P<0.05)。各组作用大小的排序为：实施例1组＞实施例4组＞实施例2组＞实施例3组＞对比例组。

实施例1-4与对比例的原料药处方相同，不同之处在于制备方法，以及由不同制备方法导致的提取物的差异。上述试验结果证明，本发明所述制备方法制备得到的提取物在改善糖尿病大鼠血液流变学方面的作用显著优于现有技术制备的水煎剂。因此，本发明所述制备方法是提高药物疗效的原因所在。正是制备方法的改进，才药效作用得到显著提高。特别的，实施例1制备的提取物的治疗效果明显强于其它各实施例组。因此，实施例1的制备方法是本发明最优选的，其次是实施例4和实施例2的制备方法。

2.2各处理组对大鼠视网膜毛细血管形态学的影响

经视网膜铺片阅片分析，各处理组大鼠视网膜毛细血管形态学观察结果如下：

空白组：大鼠的视网膜毛细血管分布有规则，走向柔和，管径粗细均匀；视网膜动静脉贯穿于其中，动脉染色较深，静脉染色较浅；内皮细胞位于毛细血管的中央，核较大，染色较浅；周细胞位于毛细血管的管腔外侧，核较小，染色较深。

模型组：大鼠视网膜毛细血管排列异常紊乱，走向非常不规则；部分毛细血管管腔粗细不等，或节段膨大或退化，呈囊样扩张，或血管退化，管腔闭锁，形成无细胞毛细血管，出现无灌注区；血管干涸硬化情况明显；视网膜静脉扩张现象明显；同时周细胞数目减少。但未见毛细血管瘤。

与模型组比较，对比例组的大鼠的视网膜毛细血管走向不规则现象明显减少，周细胞数目增多，无细胞毛细血管数目减少。

与模型组比较，实施例3组和对比例组的大鼠的视网膜毛细血管走向不规则现象明显减少，周细胞数目增多，无细胞毛细血管数目减少。实施例1、2、4组大鼠的视网膜毛细血管走向基本正常，周细胞数目增多，无细胞毛细血管数目减少，减少的数量均优于对比例组。

上述结果说明本发明所述制备方法制备得到的中药提取物对糖尿病大鼠视网膜微血管病变有改善作用，且优于现有技术制备的水煎剂。说明制备方法的改进显著提高了复方组合物的药理作用。

总之，试验例1的药学数据证明，本发明所述方法制备的实施例1、2、3、4的中药提取物中药效物质的含量高于现有制备工艺的水煎剂相应成分。从决定药物作用强弱的药效学物质基础的角度看，本发明按照各药材的特点设计并经过优化的提取工艺优于水煎剂的制备工艺。

此外，试验例2的药效实验结果也证明，本发明所述方法制备的实施例1、2、3、4的中药提取物对糖尿病大鼠血液流变学和视网膜毛细血管形态学的改善作用均优于现有技术制备的水煎剂组，说明本发明所述制备方法制备得到的提取物有改善糖尿病大鼠视网膜微血管病变的作用，且优于现有技术制备的水煎剂，本发明的制备工艺显著提高了复方组合物的药理作用。

实施例5一种中药提取物的制备方法及其制备的中药提取物

原料药处方：

黄芪12kg、女贞子1.8kg、益母草1.8kg、乌梅0.6kg、黄连1.8kg、肉桂1kg、密蒙花1.8kg

所述制备方法的具体步骤如下：

(1)按照处方准备各味药材。

(2)以上各味药材，用药材重量10倍的体积百分浓度为70％乙醇加热回流提取3次，每次2小时，滤过，合并三次醇提取液，回收乙醇，减压浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏1，药渣备用；

(3)步骤(2)中药渣用药材重量10倍的水加热回流提取3次，每次3小时，滤过，合并三次滤液，静置，滤过，滤液浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏2；

(4)将提取浸膏1和提取浸膏2合并，得总提取浸膏；

(5)步骤4得到的所述总浸膏，60℃减压真空干燥，得干浸膏粉5.68kg，即为所述中药提取物。

以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明做出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

Claims (6)

1.一种中药提取物的制备方法，所述中药提取物的原料药组成为：

黄芪30-60重量份、女贞子9-15重量份、益母草9-30重量份、乌梅3-10重量份、黄连2-9重量份、肉桂1-5重量份、密蒙花3-9重量份；

其特征在于，所述制备方法的具体操作步骤如下：

(1)按照所述重量份准备原料药；

(2)以上各味药材，用药材重量6-16倍的体积百分浓度为30％-100％乙醇加热回流提取2-3次，每次0.5-2小时，滤过，合并各次乙醇提取液，回收乙醇，减压浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏1，药渣备用；

(3)步骤(2)中得到的药渣，用药材重量6-14倍的水加热回流提取2-3次，每次1-3小时，滤过，合并各次滤液，静置，滤过，滤液浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏2；

(4)将提取浸膏1和2合并，得总提取浸膏；

(5)步骤(4)得到的总提取浸膏烘干、减压干燥或喷雾干燥，得干浸膏粉，即得。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述原料药单位处方的组成优选为：

黄芪30g、女贞子15g、益母草15g、乌梅9g、黄连6g、肉桂1g、密蒙花6g。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法的具体操作步骤如下：

(1)按照所述重量份准备原料药；

(2)以上各味药材，用药材重量10倍的体积百分浓度为50％乙醇加热回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并两次乙醇提取液，回收乙醇，减压浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏1，药渣备用；

(3)步骤(2)中得到的药渣，用药材重量8倍的水加热回流提取2次，每次2小时，滤过，合并两次滤液，静置，滤过，滤液浓缩至80℃时测定相对密度为1.20-1.30的浸膏，得提取浸膏2；

(4)将提取浸膏1和2合并，得总提取浸膏；

(5)步骤(4)得到的总提取浸膏喷雾干燥，得干浸膏粉，即得。

4.权利要求1至3中任一项所述的制备方法制备得到的用于治疗糖尿病视网膜病变的中药提取物。

5.权利要求4所述的中药提取物在制备治疗糖尿病视网膜病变的药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述中药提取物加入或者不加入药学上可以接受的辅料，制备成临床上可以接受的制剂。