CN102631417A - 一种止血中药提取物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种止血中药提取物及其制备方法，具体是一种象蜡树茎皮提取物及其制备方法。本发明提取物是通过将象蜡树茎皮经水或石油醚提取、纯化得到。该提取物克服目前西药毒副作用大和中药复方使用剂量大、纯度不高等缺点，具有止血效果显著的同时、服用量小、纯度高、毒副作用小。是一种理想止血药物，可广泛用于各种内、外出血和手术止血等。

Description

一种止血中药提取物及其制备方法

技术领域

本发明属于中药领域，涉及一种止血中药提取物及其制备方法，具体地说是一种木犀科梣属植物象蜡树茎皮提取物及其制备方法。

背景技术

有资料显示，我国每年临床治疗的出血症病人近1000万人，主要集中在手术科室以及部分内科科室，并多系临床危、急、重症。出血过多时可导致休克，引发生命危险，同时出血还伴随疼痛、炎症等。如果出血不能及时止血，则会在体内淤积，引发其他疾病。因此，止血药物是临床上无可替代的必用产品，具有临床使用顺应性强的特点。随着我国外科手术水平和外科手术治疗覆盖率的提高，以及器官移植术的供不应求，促凝血、止血药物已成为必不可少的药物。

目前，止血药物主要有中药、化学合成药和生物工程药。化学合成药和生物工程药易产生毒副作用，如血栓形成、诱发心脑血管疾病、刺激胃肠道、引起血压急剧升高、过敏反应等。中药都是复方，因此具有服用剂量大、纯度不高、质量不稳定、疗效不佳等缺点。

本发明探索了木犀科梣属的植物象蜡树的提取物，并对其进行止血方面的研究。象蜡树，种拉丁名：Fraxinus platypoda Oliver，为木犀科梣属的植物，别名宽果梣(华北树木志)为中国的特有植物。分布在中国大陆的贵州、陕西、湖北、四川、甘肃、云南等地，生长于海拔1,200米至2,800米的地区，见于山坡和溪谷的杂木林中，目前尚未由人工引种栽培。根据文献查阅，目前没有相关木犀科梣属植物象蜡树提取物及其在止血方面的研究报道和开发利用。

发明内容

基于以上原因，本发明目的是开发一种具有止血作用的象蜡树提取物，该提取物克服目前西药毒副作用大和中药复方的使用剂量大、纯度不高、质量不稳定、疗效不佳等缺点，是一种疗效显著的单味中药提取物作为治疗止血的理想药物。本发明还提供该止血中药提取物的制备方法。

本发明通过以下方案实现：

一种止血中药提取物，指木犀科梣属植物象蜡树茎皮经水或石油醚提取、纯化而得。所述经水提取优选为40-60℃水温浸提取后得到的提取液浓缩成浸膏(相对密度1.10-1.20g/ml)；石油醚提取为石油醚加热回流提取后得到的提取液浓缩成干膏。

所述的纯化指将象蜡树茎皮经水提取后得到的浸膏再经乙醇沉淀、过滤，取滤液浓缩；或经石油醚提取后得到的干膏再经水沉淀、过滤，取滤液浓缩。

上述乙醇沉淀指向浸膏中加入乙醇，使含醇量达到60％-80％，沉淀12-24小时。

上述止血中药提取物的制备方法，该方法是将象蜡树茎皮经水或石油醚提取、纯化。

上述止血中药提取物的制备方法，具体包括以下步骤：

a)提取：取象蜡树茎皮粉碎后经水温浸或石油醚加热回流提取；水温浸所得提取液减压浓缩成浸膏(相对密度1.10-1.20g/ml)，石油醚回流提取得到的提取液减压浓缩成干膏；

b)纯化：水温浸得到的浸膏中加入乙醇沉淀，过滤，取滤液浓缩；石油醚加热回流提取得到的干膏中加水沉淀，过滤，滤液浓缩。

本发明所述的水温浸，指每次加入药材粉末重6-20倍的水，提取1-3次，每次温浸24-48小时，温浸温度为40-60℃。所述的象蜡树茎皮可为市售的干品或在60℃下常规方法干燥，将干燥的茎皮用常规粉碎方法粉碎至过20-80目筛的粉末。

本发明所述的石油醚回流提取，指每次加入药材重6-12倍的石油醚浸泡0.5-3小时，再在50-70℃(优选60℃)下加热回流提取1-3次，每次1-3小时。

上述水提取浸膏中加入乙醇沉淀，指水提取浸膏中加入乙醇使含醇量达到60％-80％，沉淀12-24小时。

上述石油醚提取的干膏中加水沉淀，指石油醚回流提取得到的干膏中加入干膏重2-5倍的水，搅匀，在40-50℃下温热或超声，温热或超声处理1-3次，每次40-50℃下温热10-30分钟或40-50℃下超声5-10分钟。

本发明所述的止血中药提取物可在制备治疗内、外出血或手术止血的药物中应用。

与现有技术比较本发明的有益效果：本发明制备的中药提取物止血效果显著、具有作用快速、服用剂量小、产品纯度高和毒副作用小等特点。本发明原料成本低、来源广泛，制备方法和提取设备简单、成本低廉，提取溶剂没有毒性、容易回收、可重复利用、不污染环境。制备的中药提取物可广泛用于各种内、外出血和手术止血等，具有较高的经济价值和社会效益。同时，依据需求，可以按常规方法把中药提取物加入药剂上接受的辅料和辅助性成分制成各种制剂如片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂、酊剂、浸膏剂、滴丸剂、软膏剂等。

具体实施方式

以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。

实施例1中药提取物对小鼠凝血时间和出血时间的影响

小鼠断尾出血时间(BT)和毛细管凝血时间(CT)实验广泛应用于止血、促凝药物的活性筛选，方法直观、简便、易行。本实验以止血凝血基础理论为指导，主要采用这两种方法来评价中药提取物的止血效果。

1实验材料

1.1实验动物：昆明种小鼠，体重18-20g，南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供。

1.2阳性对照药物：云南白药，云南白药集团股份有限公司，批号20090605。

1.3试验试剂：乙醇，石油醚：国药集团化学试剂有限公司，分析纯。

蒸馏水，生理盐水。

1.4中药提取物1的制备

1.4.1干燥和粉碎：象蜡树茎皮，60℃烘干箱干燥，用中药粉碎机粉碎后过60目筛，得粉末。

1.4.2提取：取2千克粉末，加入药材粉末重10倍量石油醚，浸泡0.5小时，在60℃下回流提取2小时；过滤；滤渣再加粉末重8倍量的石油醚，回流提取1.5小时，过滤；滤渣再加粉末重6倍量的石油醚，回流提取1小时，合并三次滤液。

1.4.3减压浓缩：将石油醚提取液减压浓缩成干膏。

1.4.4得止血中药提取物：用干膏重5倍量的水溶解干膏，50℃下温热10分钟，过滤；滤渣再这样溶解2次，合并三次滤液，减压浓缩成浸膏，冷冻干燥，粉碎为细粉，封口包装。

1.4中药提取物2的制备

1.4.1干燥和粉碎：象蜡树茎皮，60℃烘干箱干燥，用中药粉碎机粉碎后过40目筛，得粉末。

1.4.2提取：取2千克粉末，第一次加入药材粉末重12倍量水，60℃温浸48小时，温浸搅拌，过滤；滤渣再加药材粉末重10倍量的水，温浸36小时，过滤；滤渣再加粉末重6倍量的水，温浸24小时，过滤，合并3次滤液。

1.4.3减压浓缩：将水提取液减压浓缩成相对密度1.10-1.20g/ml的浸膏。

1.4.4得止血中药提取物：浸膏中加入95％的乙醇，使含醇量到80％，静置沉淀12小时，过滤，收集滤液，减压浓缩成浸膏，喷雾干燥，粉碎为细粉，封口包装。

2实验方法

将80只小白鼠随机分为8组，每组10只。用4组做毛细血管凝血实验，分别为中药提取物1组、中药提取物2组、云南白药组(阳性对照组)和生理盐水组(阴性对照组)；另外4组做小白鼠断尾出血时间实验，分别为中药提取物1组、中药提取物2组、云南白药组(阳性对照组)和生理盐水组(阴性对照组)。每天给药2次，生理盐水组给生理盐水，连续给药7天，最后一次给药1h后，采用毛细血管凝血时间和断尾出血时间实验方法进行实验。与生理组比较，按下式计算CT缩短率和BT缩短率。

3数据处理

所有数据用SPPS16.0软件进行单因素方差分析，进行多个样本均数间的两两比较，以均数

表示。

4实验结果

表1中药提取物对小鼠CT(s)和BT(min)的影响(

n＝10)

注：*表示与空白组比较P＜0.01。

统计结果表明，中药提取物1和2组与云南白药组对小鼠血凝时间(CT)与生理盐水组比较，差异极显著(p＜0.01)，说明中药提取物具有促进血液凝固的作用；中药提取物1和2组与云南白药组对小鼠出血时间(BT)与生理盐水组比较，差异极显著(p＜0.01)，说明中药提取物具有缩短小鼠出血时间作用。通过以上实验证实中药提取物具有止血作用。

实施例2中药提取物对家兔肝脏止血实验

1实验材料

11实验动物：健康家兔，雌雄各半，1.8～2.0kg，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供。

1.2阳性对照药物：云南白药，云南白药集团股份有限公司，批号20090605。

1.3试验试剂：同上。

1.4乌拉坦：武昌远城科技发展有限公司，批号080412。

1.5中药提取物3的制备

1.5.1干燥和粉碎：象蜡树茎皮40℃烘干箱干燥，用中药粉碎机粉碎后过80目筛，得粉末。

1.5.2提取：取2千克粉末，加入药材粉末重12倍量石油醚，浸泡3小时，在60℃下回流提取3小时，过滤；滤渣再加粉末重6倍量的石油醚，回流提取1.5小时，合并2次滤液。

1.5.3减压浓缩：减压浓缩成干膏。

1.5.4得止血中药提取物：用干膏重2倍量的水溶解干膏，40℃温热30分钟，过滤；滤渣再这样溶解1次。合并2次滤液，减压浓缩滤液成浸膏，真空干燥，常规超微粉碎法粉碎为微粉，封口包装。

2实验方法

将20只兔子分为中药提取物2组和中药提取物3组、云南白药组和生理盐水组，每组5只。用20％乌拉坦溶液(3ml/kg)麻醉，固定于手术台上，剪去腹部毛，酒精消毒，自腹白线切开皮肤、长约6～8cm，切口上沿不超过胸骨剑突。打开腹腔后轻轻拉出肝脏，周围用纱布固定，然后剪去一块肝组织，一般是肝左叶。创面上小动脉呈泉涌状流出，将药粉立即敷于创面上，用纱布加压1分钟，生理盐水组用纱布加压，加压一分钟后如果不出血则为止血。

3实验结果

将药粉立即敷于创面上，用纱布加压1分钟后除去压力，中药提取物2组、中药提取物3组和云南白药组共15只兔子均加压一分钟后没出血，而生理盐水组出血不止。说明中药提取物具有止血作用。

实施例3中药提取物对狗股动脉止血实验

1实验材料

1.1实验动物：狗，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供。

1.2阳性对照药物：云南白药，云南白药集团股份有限公司，批号20090605。

1.3试验试剂：同上。

1.4乌拉坦：同上。

1.5中药提取物4的制备

1.5.1干燥和粉碎：象蜡树茎皮在50℃烘干箱干燥，用中药粉碎机粉碎后过60目筛，得粉末。

1.5.2提取：取2千克粉末，加入药材粉末重8倍量石油醚，浸泡2小时，在60℃下回流提取3小时，过滤；滤渣再加粉末重6倍量的石油醚，回流提取2小时，过滤。合并2次滤液。

1.5.3减压浓缩：减压浓缩成干膏。

1.5.4得止血中药提取物：用干膏重3倍量水溶解干膏，45℃下频率为40Hz超声5分钟，过滤，滤渣再这样溶解1次。合并2次滤液，减压浓缩成浸膏，冷冻干燥，超微粉碎法粉碎浸膏为微粉，封口包装，每袋2克。

2实验方法

将16只狗分为中药提取物4组和中药提取物2组、云南白药组和生理盐水组，每组4只。用20％乌拉坦溶液(3ml/kg)麻醉，固定于手术台上，剥离股动脉2～3cm，结扎远心端，近心端用止血钳夹住，剪破动脉(约为血管壁的1/3)。然后将药粉敷于创口上，盖上3层纱布，用手压迫，压迫的力量以血液不流出为宜，然后松开止血钳。3分钟后除去压力，如无血液流出，再观察1分钟不出血便认为有止血作用。

3实验结果

加压3分钟后除去压力，中药提取物4组、中药提取物2组和云南白药组没出血，而生理盐水组出血不止。再观察1分钟不出血。说明中药提取物有止血作用。

实施例4中药提取物对鸡消化道出血的影响

鸡球虫是一种鸡感染后引起消化道严重出血的疾病，本实验用中药提取物对其止血效果进行观察。

1实验材料

1.1实验动物：15日龄麻黄小鸡。

1.2阳性对照药物：云南白药，云南白药集团股份有限公司，批号20090605。

1.3试验试剂：同上。

2实验方法

将24只15日龄小鸡分为4组，每组6只，分别为中药提取物1组和中药提取物2组、云南白药组和生理盐水组。每只鸡感染1×10⁵个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊。自实验第二天开始给药，每天给2次，每次给药0.07克/千克中药提取物1、0.07克/千克中药提取物2和0.3克/千克云南白药，生理盐水组给生理盐水，连续给药7天。

3实验结果

第4天开始生理盐水组开始出现血便，第5、6天严重，死亡一只。而中药提取物1组、中药提取物2组和云南白药组没见血便。说明中药提取物对鸡消化道出血有止血作用。实施例5中药提取物的毒理试验

1急性毒性实验

1.1实验材料

1.1.1动物：昆明种小鼠18～22g，雌雄各半。

1.1.2实验试剂：同上。

1.1.3中药提取物5的制备

1.1.3.1干燥和粉碎：象蜡树茎皮，60℃烘干箱干燥，用中药粉碎机粉碎后过60目筛，得粉末。

1.1.3.2提取：取2千克粉末，加入药材粉末重10倍量石油醚，浸泡1小时，在60℃下回流提取2小时，过滤；滤渣再加粉末重8倍量的石油醚，回流提取1小时，过滤；滤渣再加粉末重6倍量的石油醚，回流提取1小时，合并三次滤液。

1.1.3.3减压浓缩：将石油醚提取液减压浓缩成干膏。

1.1.3.4得止血中药提取物：用干膏重4倍量的水溶解干膏，50℃下频率为40Hz超声10分钟，过滤；滤渣再这样溶解2次，合并三次滤液，减压浓缩成浸膏，真空干燥，粉碎为细粉，封口包装。应用时用温水配成所需浓度。

1.2实验方法

中药提取物2和中药提取物5分别用温水配制成4.00g(生药)/ml、2.00g(生药)/ml、1.00g(生药)/ml、0.50g(生药)/ml的浓度，按0.40ml/10g体重给药。给药途径为经口灌胃。

1.3实验结果

连续观察7天小鼠未出现死亡，无法测定LD₅₀。第8天处死全部小鼠后剖检，肉眼可见给药组与对照组的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和胃肠等主要脏器无明显差异。

2最大耐受量实验

2.1实验方法

因为中药提取物经口给药急性毒理实验无法测定LD₅₀。所以采用最大耐受量法测定。生理盐水组给予生理盐水，中药提取物2组和中药提取物5组给4.00g(生药)/ml，按0.40ml/10g的剂量，一天2次给小鼠灌胃，2次间隔6小时，累计给药量达320.00g/kg，三组均按0.40ml/10g体重等体积灌胃。

2.2数据处理

所有数据用SPPS16.0软件进行单因素方差分析，进行多个样本均数间的两两比较，

表示。

2.3实验结果

采用最大耐受量试验法，小鼠第2次经口灌胃给予受试药物后，部分小鼠停止进食，活动减少，但第2天起能恢复正常进食，活动也无异常。在观察期内未出现任何中毒症状，所有小鼠体重有所增长，毛色光亮，皮毛无疏松，口、眼、鼻、耳无异常分泌物，大小便正常。亦无一动物死亡(见表2)，小鼠在1、3、5、7天的体重和生理组相比，差异不显著(p＞0.05)(见表3)。在第7d称重后，全部颈椎脱臼处死，剖检，心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和胃肠等主要脏器未见明显病变。

表2中药提取物的小鼠经口毒性实验结果

表3中药提取物对小鼠体重的影响

2.4实验结论

中药提取物5组和中药提取物2组的小鼠经口急性毒性实验可看到，小鼠在以剂量320.00g(生药)/kg给药后，在观察期内仍未出现任何明显中毒症状和死亡，给药组小鼠体重和生理盐水组小鼠体重相比，差异不显著(p＞0.05)。由以上表试验结果可看出，小鼠经口急性毒性实验LD₅₀＞320.00g(生药)/kg，参照中华人民共和国农业部兽药审评委员会办公室指定的《兽药试验技术规范汇编——新兽药一般毒性试验技术要求》中的规定，可以判定中药提取物属于实际无毒物。

实施例6散剂的制备

1干燥和粉碎：象蜡树茎皮50℃烘干箱干燥，用中药粉碎机粉碎后过20目筛，得粉末。

2提取：第一次加入药材粉末重20倍量水，40℃温浸48小时，温浸过程中搅拌几次，过滤；滤渣再加粉末重15倍量的水，温浸36小时，过滤，合并2次滤液。

3减压浓缩：将水提取液减压浓缩成相对密度1.10-1.20g/ml浸膏。

4得止血中药提取物：浸膏中加入乙醇，使含醇量到60％，静置6小时，过滤，收集滤液，减压浓缩成浸膏，真空干燥，粉碎为微粉。

5得散剂：微粉中加50％过200目生药粉，混匀，在60℃干燥，封口包装。使用方法，外伤出血是散少量药粉，加压片刻。

实施例7胶囊剂的制备

1干燥和粉碎：象蜡树茎皮60℃烘干箱干燥，用中药粉碎机粉碎后过60目筛，得粉末。

2提取：加入药材粉末重12倍量石油醚，浸泡3小时，在60℃下回流提取3小时，过滤，收集滤液。

3减压浓缩：减压浓缩成干膏。

4得止血中药提取物：用干膏重3倍量的水溶解干膏，45℃温热搅拌30分钟，过滤；滤渣再这样溶解2次，合并3次滤液，减压浓缩滤液成浸膏，冷冻干燥，粉碎为细粉。

5得胶囊剂：细粉中加入40％的微晶纤维素，2％滑石粉，混匀，得药粉，将此药粉按每粒装药量0.25克/粒制成胶囊。服用方法，每次2粒，1日3次。

实施例8片剂的制备

1干燥和粉碎：象蜡树茎皮，50℃烘干箱干燥，用中药粉碎机粉碎后过80目筛，得粉末。

2提取：第一次加入药材粉末重12倍量石油醚，浸泡1小时，在60℃下回流提取2小时，过滤；滤渣再加粉末重10倍量的石油醚，回流提取1小时，过滤；滤渣再加粉末重8倍量的石油醚，回流提取1小时，合并三次滤液。

3减压浓缩：将石油醚提取液减压浓缩成干膏。

4得止血中药提取物：用干膏3倍量的水溶解干膏，超声10分钟，过滤；滤渣再这样溶解1次。合并2次滤液，减压浓缩成稠膏。

5得片剂：稠膏中加15％可溶性淀粉糊精，混匀，60℃烘干，粉碎，加重量百分比1％硬酯酸镁混匀，过20目筛，整粒，压片，制成薄衣片，每粒含药量0.25克/片。服用方法，每次2片，一日三次。

Claims (10)

1.一种止血中药提取物，其特征在于该止血中药提取物是通过将象蜡树茎皮经水或石油醚提取、纯化得到。

2.根据权利要求1所述的止血中药提取物，其特征在于所述的经水提取是采用40-60℃水温浸提取后得到的提取液浓缩成浸膏；石油醚提取是采用石油醚加热回流提取后得到的提取液浓缩成干膏。

3.根据权利要求1中所述的止血中药提取物，其特征在于所述的纯化是将象蜡树茎皮经水提取后得到的浸膏再经乙醇沉淀、过滤，滤液浓缩；或经石油醚提取后得到的干膏再经水沉淀、过滤，滤液浓缩。

4.根据权利要求3所述的止血中药提取物，其特征在于所述的乙醇沉淀指向浸膏中加入乙醇，使含醇量达到60％-80％。

5.一种权利要求1所述的止血中药提取物的制备方法，其特征在于该方法将象蜡树茎皮经水或石油醚提取、纯化。

6.根据权利要求5所述的止血中药提取物的制备方法，其特征在于该方法具体包括以下步骤：

a)提取：取象蜡树茎皮粉碎后经水温浸或石油醚加热回流提取；水温浸所得提取液浓缩成浸膏，石油醚回流提取得到的提取液浓缩成干膏；

b)纯化：经水温浸得到的浸膏中加入乙醇沉淀、过滤，取滤液浓缩；石油醚加热回流提取得到的干膏再加水沉淀、过滤，滤液浓缩。

7.根据权利要求6所述止血中药提取物的制备方法，其特征在于所述的象蜡树茎皮粉碎后经水温浸是指加入药材重6-20倍的水，提取1-3次，每次温浸24-48小时，温度为40-60℃；所述的象蜡树茎皮粉碎后经石油醚回流提取是指加入药材重6-12倍的石油醚浸泡0.5-3小时，再加热回流提取1-3次，每次1-3小时。

8.根据权利要求6所述止血中药提取物的制备方法，其特征在于所述的水温浸提取得到的浸膏中加入乙醇沉淀是指向得到的浸膏中加入乙醇使含醇量达到60％-80％，沉淀12-24小时。

9.根据权利要求6所述止血中药提取物的制备方法，其特征在于所述的石油醚回流提取得到的干膏中加水沉淀，指石油醚回流提取得到的干膏中加入干膏重2-5倍的水，搅匀，在40-50℃下温热或超声，温热或超声处理1-3次，每次温热10-30分钟或超声5-10分钟。

10.权利要求1所述的止血中药提取物在制备治疗内、外出血或手术止血的药物中的应用。