CN102627702A - 鱿鱼透明质酸的提取方法 - Google Patents
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Abstract
鱿鱼透明质酸的提取方法，涉及一种鱿鱼透明质酸的提取工艺。为了解决鱿鱼透明质酸提取率低，活性不高的问题，本发明按照下述方法提取鱿鱼透明质酸：鱿鱼组织清洗，切块，组织捣碎，经强电场萃取，用超速离心机分离提取液，除去蛋白及脂类物质，再用真空刮板式薄膜浓缩，用真空冻干机进行冻干，即得鱿鱼透明质酸冻干粉末。本发明制备的鱿鱼透明质酸为天然提取物，对人体无副作用，具有改善皮肤营养代谢，使皮肤柔嫩、光滑、去皱、增加弹性、防止衰老等作用，在保湿的同时又是良好的透皮吸收促进剂。与其他营养成分配合使用，可以起到促进营养吸收的更理想效果。可应用于美容化妆品、医药、保健品等领域。
Description
技术领域
本发明涉及一种鱿鱼透明质酸的提取工艺。
背景技术
鱿鱼透明质酸，广泛存在于鱿鱼各个组织中，是一种由β-D-N-乙酰基葡萄糖和β-D-葡萄糖醛酸为结构单元以β-1，4-糖苷键缩合而成的一种酸性黏多糖，属于糖胺聚糖。
透明质酸以其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节，调节血管壁的通透性，调节蛋白质，水电解质扩散及运转，促进创伤愈合等。尤为重要的是，它具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子。透明质酸可以改善皮肤营养代谢，使皮肤柔嫩、光滑、去皱、增加弹性、防止衰老，在保湿的同时又是良好的透皮吸收促进剂。与其他营养成分配合使用，可以起到促进营养吸收的更理想效果。透明质酸保健食品发展迅速，在美容养颜方面的功效越来越受到关注，美容食品将会得到快速发展。人们已经充分认识到透明质酸对机体的重要性，它的应用开发处于蓬勃发展阶段，相信越来越多的产品会涌现，为人类作出贡献。
发明内容
为了解决鱿鱼透明质酸提取率低，活性不高的问题，本发明提供了一种鱿鱼透明质酸的提取方法，采用强电场制备鱿鱼透明质酸，能有效提高鱿鱼透明质酸的提取率和产品活性。
本发明鱿鱼透明质酸的提取方法的步骤如下：
一、鱿鱼透明质酸的提取：将鱿鱼组织清洗、切块、捣碎，以料液比1kg：3~4L的比例分别加入鱿鱼组织和水溶液，用强电场萃取30~40分钟，得到含有鱿鱼透明质酸萃取液，最后用卧螺式离心机以1500~2000r/min的速度进行固液分离，分离出提取液和残渣，将残渣再以料液比为1kg：3~4L的比例加入水溶液，继续进行强电场提取和离心分离，连续提取3次，除去残渣，合并提取液；
二、浓缩：将鱿鱼透明质酸提取液采用真空刮板式薄膜浓缩，浓缩条件为45~50℃，真空度为0.1~0.15mbar，得到鱿鱼透明质酸浓缩液；
三、纯化：将浓缩液分别调pH为3.0、5.0、7.0、9.0、11.0、13.0沉淀蛋白，离心后再次将溶液调至pH为中性，加0.1M NaCl（5.85g/L），以1：1的体积比加入氯仿，除去脂溶相，静置分层后，分离出水相，之后将水相溶液通过流体分配器加入高效色谱层析柱，用氯化钠溶液洗脱，流速为8~15mL/min，得鱿鱼透明质酸洗脱液，再用真空刮板式薄膜浓缩设备浓缩；
四、干燥：用真空冻干机在0.4~0.7mbar、温度-40~-50℃条件下将鱿鱼透明质酸浓缩液真空冻干后粉碎成固体粉末，即得鱿鱼透明质酸冻干粉末。
本发明在鱿鱼透明质酸提取方法中，采用强电场辅助萃取配合卧螺式离心循环萃取的方法，使鱿鱼透明质酸得以充分释放，使透明质酸的提取率可达到85%，比超声波提取法或溶剂回流提取法的提取率分别高了15~20和20~25%。其活性比提取法中超声波提取法或溶剂回流提取法高了25~30%，大大提高了鱿鱼透明质酸的附加经济价值。本发明工艺简单，提取率高，适宜推广和应用。本发明制备的鱿鱼透明质酸活性高，可用于美容化妆品、医药、保健品等领域。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式按照如下步骤提取鱿鱼透明质酸：
一、鱿鱼透明质酸的提取：先进行鱿鱼须、板、眼睛的筛选，购买新鲜的鱿鱼，清洗、切块、捣碎，以料液比1kg：3~4L的比例分别加入鱿鱼组织和水溶液，用强电场萃取30~40分钟，得到含有鱿鱼透明质酸萃取液，最后用卧螺式离心机以1500~2000r/min的速度进行固液分离，分离出提取液和残渣，将残渣再以料液比为1kg：3~4L的比例加入水溶液，继续进行强电场提取和离心分离，连续提取3次，除去残渣，合并提取液；
二、浓缩：将鱿鱼透明质酸提取液采用真空刮板式薄膜浓缩，浓缩条件为45~50℃，真空度为0.1~0.15mbar，得到鱿鱼透明质酸浓缩液；
三、纯化：将浓缩液分别用HCl、NaOH调pH为3.0、5.0、7.0、9.0、11.0、13.0沉淀蛋白，离心后再次将溶液调至pH=7.5，加0.1M NaCl（5.85g/L），以1：1的体积比加入氯仿，除去脂溶相，静置分层后，分离出水相，之后将水相溶液通过流体分配器加入高效色谱层析柱，用氯化钠溶液洗脱，流速为8~15mL/min，得鱿鱼透明质酸洗脱液，再用真空刮板式薄膜浓缩设备浓缩；
四、干燥：用真空冻干机在0.4~0.7mbar、温度-40~-50℃条件下将鱿鱼透明质酸浓缩液真空冻干后粉碎成60目固体粉末，即得鱿鱼透明质酸冻干粉末。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤一中萃取电场强度为每平方厘米60~90千伏，高压电场冲数600~800次，脉冲频率200~300Hz。其他步骤与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一、二不同的是：步骤二中浓缩液中固形物质量百分比为60~70%。其他与具体实施方式一、二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一、二、三不同的是步骤三中高效色谱层析柱纯化，所用固相介质为sephadex树脂，流动相介质为用质量浓度为0.5~1.0的氯化钠洗脱。其他与具体实施方式一、二、三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一、二、三、四不同的是步骤三中真空冻干时间为24~48小时。其他与具体实施方式一、二、三、四相同。
具体实施方式六：本实施方式按照如下步骤提取鱿鱼透明质酸：
一、鱿鱼透明质酸的提取：先进行鱿鱼须、板、眼睛的筛选，购买新鲜的鱿鱼，清洗、切块、捣碎，以料液比1kg：3L的比例分别加入鱿鱼组织和水溶液，用强电场萃取40分钟，萃取电场强度为每平方厘米80千伏，高压电场冲数800次，脉冲频率300Hz，得到含有鱿鱼透明质酸萃取液，最后用卧螺式离心机以2000r/min的速度进行固液分离，分离出提取液和残渣，将残渣再以料液比为1kg：3L的比例加入水溶液，继续进行强电场提取和离心分离。连续提取3次，除去残渣，合并提取液；
二、浓缩：将鱿鱼透明质酸提取液采用真空刮板式薄膜浓缩，浓缩条件为50℃，真空度为0.15mbar，得到鱿鱼透明质酸浓缩液，浓缩液的质量百分比为65%；
三、纯化：将浓缩液分别用HCl、NaOH调pH为3.0、5.0、7.0、9.0、11.0、13.0沉淀蛋白，离心后再次将溶液调至pH=7.5，加0.1M NaCl（5.85g/L），以1：1的体积比加入氯仿，除去脂溶相，静置分层后，分离出水相，之后将水相溶液通过流体分配器加入高效色谱层析柱，所用固相介质为sephadex树脂，用氯化钠溶液洗脱，流速为10mL/min，得鱿鱼透明质酸洗脱液，再用真空刮板式薄膜浓缩设备浓缩；
四、干燥：用真空冻干机在0.6mbar、温度-50℃条件下将鱿鱼透明质酸浓缩液真空冻干，冻干时间为36h，将冻干物粉碎，过60目筛，即得鱿鱼透明质酸冻干粉末。
本具体实施方式中鱿鱼透明质酸的提取率为85%，纯度为80~87%，所得鱿鱼透明质酸活性高，品质好。
Claims (5)
1.鱿鱼透明质酸的提取方法，其特征在于所述提取方法为：
一、鱿鱼透明质酸的提取：将鱿鱼组织清洗、切块、捣碎，以料液比1kg：3~4L的比例分别加入鱿鱼组织和水溶液，用强电场萃取30~40分钟，得到含有鱿鱼透明质酸萃取液，最后用卧螺式离心机以1500~2000r/min的速度进行固液分离，分离出提取液和残渣，将残渣再以料液比为1kg：3~4L的比例加入水溶液，继续进行强电场提取和离心分离，连续提取3次，除去残渣，合并提取液；
二、浓缩：将鱿鱼透明质酸提取液采用真空刮板式薄膜浓缩，浓缩条件为45~50℃，真空度为0.1~0.15mbar，得到鱿鱼透明质酸浓缩液；
三、纯化：将浓缩液分别调pH为3.0、5.0、7.0、9.0、11.0、13.0沉淀蛋白，离心后再次将溶液调至pH为中性，加0.1M NaCl，以1：1的体积比加入氯仿，除去脂溶相，静置分层后，分离出水相，之后将水相溶液通过流体分配器加入高效色谱层析柱，用氯化钠溶液洗脱，流速为8~15mL/min，得鱿鱼透明质酸洗脱液，再用真空刮板式薄膜浓缩设备浓缩；
四、干燥：用真空冻干机在0.4~0.7mbar、温度-40~-50℃条件下将鱿鱼透明质酸浓缩液真空冻干后粉碎成固体粉末，即得鱿鱼透明质酸冻干粉末。
2.根据权利要求1所述的鱿鱼透明质酸的提取方法，其特征在于步骤一中萃取电场强度为每平方厘米60~90千伏，高压电场冲数600~800次，脉冲频率200~300Hz。
3.根据权利要求1所述的鱿鱼透明质酸的提取方法，其特征在于步骤二中浓缩液中固形物质量百分比为60~70%。
4.根据权利要求1所述的鱿鱼透明质酸的提取方法，其特征在于步骤三中高效色谱层析柱纯化，所用固相介质为sephadex树脂，流动相介质为用质量浓度为0.5~1.0的氯化钠洗脱。
5.根据权利要求1所述的鱿鱼透明质酸的提取方法，其特征在于步骤三中真空冻干时间为24~48小时。
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| CN107746438A (zh) * | 2017-11-29 | 2018-03-02 | 桂林华诺威生物科技有限公司 | 从鱿鱼眼中提取透明质酸的工艺 |
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