CN102626480A - 一种治疗心脑血管系统疾病的中药及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗心脑血管系统疾病的中药及其制备方法，该中药由含有下述重量份中药原料制成：葛根10-150份、川芎10-200份、穿山龙10-100份、蜂胶10-100份。同时提供了该中药的制备方法。

Description

一种治疗心脑血管系统疾病的中药及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种治疗心脑血管系统疾病的中药及其制备方法。

背景技术

目前，西医对该病的治疗，临床上使用降纤溶栓药、钙离子拮抗剂、抗血小板聚集药和脑保护剂和脑出血微创手术等进行治疗。近年来，随着对发病机理及药物研究的进展，对本病常用药物如罂粟碱、烟酸、前列腺素E、丁格地尔、钙离子拮抗剂如尼莫地平、西比林和脑益嗪等。这些药物其副作用大，且不能从根本上治疗心脑血管疾病，故应尽量少用或不用。中医药治疗本病的古方主要有醒脑再造丸、回天再造丸、舒风再造丸、麝香抗栓丸、大活络丸、小活络丸，还有王清任《医林改错》中有名的补阳还五汤等常用中成药，心脑血管疾病的形成均有一定的治疗作用，但很难达到预期理想的临床疗效。

目前我国临床常用的心血管系统中成药有地奥心血康(以穿龙薯蓣皂苷为主原料)、维奥辛(以穿山龙中薯蓣皂苷为主)和复方丹参滴丸等，均是以心血管系统的冠心病、心绞痛为主治，针对心脑血管同时发挥双重疗效的步长脑心通胶囊是以部分原料药材经水煎醇沉工艺提取制备而成，量化指标少，疗效不够稳定。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术所存在的上述不足，一种治疗心脑血管系统疾病的中药及其制备方法，其技术方案为：

一种治疗心脑血管系统疾病的中药，由含有下述重量份中药原料制成：葛根10-150份、川芎10-200份、穿山龙10-100份、蜂胶10-100份。

进一步，所述中药的剂型为液体制剂、固体、半固体制剂或者气体制剂。

所述液体制剂包括口服液、混悬液、糖浆、注射液、药酒和町剂；所述固体和半固体制剂包括片剂、丸剂、膏剂、丹剂、散剂、颗粒剂、栓剂、粉剂、乳剂、咀嚼剂和胶囊剂，所述气体制剂包括气雾剂和吸入剂。

一种治疗心脑血管系统疾病的中药的制备方法，包括以下步骤：

1)葛根、穿山龙分别采用乙醇回流提取，以8倍量70％乙醇提取3次，每次提取1hr；

2)川芎乙醇渗漉提取，以8倍量90％乙醇后渗滤；

3)合并步骤1)和步骤2)所得的三味药材提取液，上大孔吸附树脂纯化，以90％7醇洗脱，洗脱液浓缩干燥至固体物；

4)蜂胶加水除蜡后，采用6倍量80％乙醇回流提取，于70℃提取2次，每次2hr，提取液浓缩至干燥物；

5)合并步骤3)的固定物和步骤4)的干燥物，粉碎后与基质成型。

步骤3)中所述纯化工艺包括以下步骤：

将葛根、黄姜提取液与川芎提取液合并，以方中君药葛根的有效成分葛根素在AB-8大孔吸附树脂上的饱和吸附量为指标，得到葛根、川芎、黄姜三味药材的纯化工艺为：药液温度为20-30℃，供试药液中葛根素上样浓度为10-12mg/ml，pH值为6.0-7.0，树脂柱径高比为1∶5，树脂∶药材＝1∶1，上样速度为4BV/h，4BV的90％乙醇以4BV/h流速洗脱；以蜂胶总黄酮含量为指标，蜂胶除蜡工艺为8倍量水，煎煮4h，25℃冷凝。

步骤5)中所述成型工艺包括以下步骤：

成型工艺条件为：药物与基质(PEG4000∶PEG6000＝1∶1)以1∶2的比例，80℃熔融混匀，90℃保温在滴距为4cm、滴口径为3/4.5(mm/mm)、滴速为50d·min-1的条件下，滴于0～5℃的二甲基硅油中。

处方由葛根、川芎、穿山龙、蜂胶共四味中药组成。方中葛根味甘辛、性凉，归脾胃经，具解肌退热，生津，透疹的功效。《本草纲目》：“本草十剂云，轻可去实，麻黄、葛根之属。盖麻黄乃太阳经药，兼入肺经，肺主皮毛；葛根乃阳明经药，兼入脾经，脾主肌肉。所以二味药皆轻扬发散，而所入迥然不同也。”临床应用表明，葛根可明显改善高血压患者的头痛、项强、头晕、耳鸣等症状。具扩张冠脉，改善脑循环作用，为君药。川芎味辛，性温，归肝、胆、心包经，具活血行气，祛风止痛的功效，可上行头目，旁开经脉，为血中之气药。《本经》：主中风入脑头痛，寒痹，筋挛缓急，金创，妇人血闭无子。《别录》：除脑中冷动，面上游风去来，目泪出，多涕唾，忽忽如醉，诸寒冷气，心腹坚痛，中恶，卒急肿痛，胁风痛，温中除内寒。药理研究认为川芎抗血栓，扩张冠状动脉和脑血管，改善微循环，抑制血小板凝聚等作用显著，为臣药。穿山龙主含薯蓣皂苷。具抗炎、扩张冠状动脉、抗动脉硬化、调节代谢等作用，为佐药。蜂胶含黄酮和萜烯类化合物，具抗菌消炎、活血化瘀、降压、抗氧化等作用为使药。四药合用，针对心脑血管疾病的病因、病机、症状的不同环节而发挥综合疗效。四药合用同起通络活血，化瘀解毒之功。

本发明的有益效果：

与现有技术相比，本发明的技术方案具有以下优点：本发明在中医药理论指导下，以临床应用为基础，结合现代药理学研究成果，采用了较为先进的提取、纯化工艺，使其治疗疾病的物质基础比较明确，服用剂量小，但药效成分含量较高，属于国家倡导的新药物。药效试验结果表明，本品具有抗炎、活血化瘀，治疗心脑血管疾病的作用；同时，通过急毒、长毒等一系列的非临床安全性评价试验结果表明，其安全性高。另外，本方中所用药材均为常用药物，药源广泛，价廉易得，生产工艺规范，质量标准容易控制，因此开发生产该产品不仅可以解除患者疾病痛苦，而且为地方经济的发展将具有一定的带动作用，具有较好的市场价值。

附图说明

图1为本发明制备方法的流程图；

图2为动态洗脱曲线；

图3为总黄酮标准曲线。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。

葛根、川芎、穿山龙三味药材提取物纯化工艺考察：树脂预处理：将层析柱清洗干净，以防其他物质对树脂的污染，排净柱内水分，于层析柱内加入95％乙醇，将新树脂投入柱中，浸泡24h，用95％乙醇以2BV/h的流速通过树脂层，直至流出液1ml加4ml蒸馏水不呈白色混浊为止，然后用蒸馏水以同样流速洗至无醇味；用2BV5％HCl以6BV/h流速通过树脂层，并浸泡4h，后用蒸馏水以同样流速洗至出水PH中性，用2BV 2％NaOH以6BV/h的流速通过树脂层，并浸泡4h，后用蒸馏水以同样流速洗至出水PH中性。

预试验

(1)AB-8型大孔吸附树脂纯化穿山龙薯蓣皂苷预试验

皂苷类成分可采用大孔树脂进行精制纯化，近年来在这方面有大量文献报道，穿山龙中主要含皂苷类成分，是否也可以用AB-8型大孔树脂吸附法进行纯化，因此，本实验首先对大孔树脂吸附纯化薯蓣皂苷的可行性进行了预试验。

称量穿山龙药材粗粉50克，按照优化的提取工艺条件，8倍量70％乙醇提取3次，每次1小时，提取液减压回收乙醇至无醇味，得到穿山龙水液50ml，加入到20克AB-8大孔吸附树脂柱，摇匀，每隔10min振摇30s，持续2h，静置24小时，使其充分吸附。过滤，用滤纸吸干树脂上的样液。称取2g饱和吸附的大孔吸附树脂，精密称定，置于锥形瓶中，精密分别加入20ml的水、10％、30％、40％、50％、70％、80％、90％乙醇，每10min振摇30s，持续2h，静置24h后，滤过，收集滤液，将滤液蒸干，称重，备用。参照2005版中国药典穿山龙药材鉴定项下内容，以薯蓣皂苷元(中国生物制品检定所，批号：1539-200001)为对照品，进行TLC，方法与结果如下：

①对照品溶液的制备：精密称取薯蓣皂苷元0.0116g置于25ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.464mg/ml的标准品溶液。

②供试品溶液的制备：将水与不同浓度乙醇洗脱液的干燥物进行酸水解。向各干燥物中3mol/l盐酸使其溶解，20ml一次，10ml一次，5ml两次，合并酸液，置于40℃水浴中，水解1h；向各酸水解溶液中加入CHCl₃30ml，回流30min，收集CHCl₃，同法处理两次，残渣用20ml CHCl₃洗涤，合并CHCl₃溶液，回收CHCl₃至干，干燥物加甲醇定容至10ml量瓶，备用。

③TLC条件：薄层层析板：自制硅胶G板；展开剂系统：CHCl₃∶CH₃OH＝10∶0.1；展距：7cm；检识：10％磷钼酸乙醇溶液

④试验结果

在与对照品Rf相同处，10％、30％、40％、50％、70％、80％、90％均出现了蓝色斑点。

从洗脱液来看，70％乙醇洗脱液为深棕色，80％、90％乙醇洗脱液为黄棕色其余洗脱液为黄色或灰黄色，70％、80％、90％乙醇洗脱液蒸干所的浸膏，从表面看颜色淡黄，疏松，比较纯净。

⑤试验结论

AB-8型大孔吸附树脂可以将穿山龙中皂苷类成分吸附，并通过一定浓度的乙醇解吸附，初步认为选用AB-8型大孔吸附树脂精制、纯化薯蓣皂苷是可行的。(2)AB-8型大孔吸附树脂纯化葛根、穿山龙、川芎提取物预实验

葛根、穿山龙、川芎等三味药材提取物的纯化试验研究

供试溶液中含有葛根素、阿魏酸、薯蓣皂苷等有效成分，阿魏酸、薯蓣皂苷的含量相对较低，且测定方法复杂，葛根素含量较高，含量测定方法成熟、简便易行，故选择葛根素的含量作为纯化工艺的考察指标。

(1)样品溶液浓度对吸附的影响：称取已处理好的大孔吸附树脂5份，每份5克，湿法装柱，水冲洗至无醇味，精密移取5份上样液，每份50ml，分别加入0ml、10ml、20ml、30ml、40ml水，混匀后，上柱，以2BV/h的流速过柱，过柱液定容至500ml容量瓶，移取0.1ml，按前述方法测定葛根素量，结果见表1。

表1浓度对吸附的影晌结果

大孔树脂为吸附性和筛选性相结合的材料，浓度是影响吸附纯化效果的重要因素，由表1可以看到，上样液浓度越大，大孔吸附树脂吸附葛根素量越多，供试水液中葛根素上样浓度保持在10-12mg/ml为佳。

(2)温度对吸附的影响：精密移取5份样品溶液，每份20ml，置100ml锥形瓶中，摇匀，将已处理好的AB-8大孔树脂2克投入其中，分别在10℃、20℃、30℃、40℃、50℃状态下使其充分吸附，精密移取上清液1ml，定容至10ml，移取0.1ml，按前述方法测定葛根素量，结果见表2。

表2温度对吸附的影响结果

从结果可以看出，温度对于吸附无明显影响，为了操作方便，节省成本，选择吸附温度为20-30℃。

(3)样品溶液PH值对吸附的影响：精密移取样品溶液20ml，共六份，分别置100锥形瓶中，用5％HCl及5％NaOH分别调至PH值为：5.5，6.0，6.5，7.0，7.5，8.0，精密称取已处理好的AB-8干树脂2克，投入样液中，时时振摇30min，然后静置12h，使其充分吸附，然后过滤、浓缩定容至20ml，精密吸取上清液1ml，定容至10ml，移取0.1ml，按前述方法测定葛根素量，结果见表3。

表3样品溶液PH值对吸附的影响

由结果可知，上样液PH值调至6.0-7.0为佳。

(4)动态洗脱曲线的绘制：称取饱和吸附的AB-8大孔树脂20克，湿法装柱，用水冲洗至无醇味，上样，以6BV90％的乙醇洗脱，每20ml一份，每份流出液水浴蒸干，以甲醇定容至10ml量瓶中，按前述方法测定葛根素量，结果见表4；以洗脱葛根素量对样品编号作图，绘制动态洗脱曲线曲线，见图2。

表4动态洗脱结果

从图2中可以看出，从第6份以后洗脱下来的葛根素量很低，基本洗脱完全，洗脱率达到90％，因此洗脱液以4BV洗脱较为合适。

(5)树脂柱的径高比考察：分别称取20g已处理好的AB-8大孔吸附树脂，分别装在不同的树脂柱中，使树脂柱中树脂的高径分别为1∶1，1∶2，1∶5，1∶8，按上述工艺量取100ml上样液以2BV/h上样，测定吸附的葛根素量，结果见表5。

表5不同径高比的测定结果

从结果可以看出，不同的径高比对葛根素吸附量没有明显影响，径∶高＝1∶5时吸附效果较好，故选择径∶高＝1∶5。

洗脱条件选择：对影响洗脱过程的主要因素乙醇浓度(A)、树脂与药材的比例(B)、上样速度(C)以及洗脱流速(D)采用L₉(3⁴)正交试验，进行考察。

①因素水平表

表6洗脱条件因素水平表

②葛根素含量的测定

分别称取已经处理好的AB-8大孔吸附树脂20g，精密称定，湿法装柱，径∶高＝1∶5，按照正交试验设计进行药液的上样、洗脱，洗脱液体积为4BV。收集洗脱液，精密量取各洗脱液10ml，水浴蒸干，以甲醇定容至5ml量瓶中，按照上述方法测定葛根素含量，以每克树脂上经动态吸附洗脱后葛根素量、浸膏量计，结果见表7。

表7试验结果可以看出，以每克树脂经动态吸附洗脱后葛根素量为评价指标来看，可以认为各因素对葛根素量影响的大小顺序为B＞A＞D＞C，再从各因素水平来看(K值分析)，A、C、D因素均为K₃＞K₂＞K₁，B因素为K₁＞K₂＞K₃，其提取条件以A₃B₁C₃D₃为佳；以浸膏量为评价指标来看，可以认为各因素对总提取物影响的大小顺序为B＞D＞A＞C，再从各因素水平来看(K值分析)，A因素为K₃＞K₁＞K₂，B因素为K₁＞K₂＞K₃，C因素为K₃＞K₂＞K₁，D因素为K₂＞K₃＞K₁，其提取条件以A₃B₁C₃D₂为佳。考虑到大生产实际情况，所以有必要对各因素水平的显著性进行方差分析，结果见表8、9。

表7正交试验结果表

表8方差分析

表9方差分析

从表8方差分析结果表明，因素B对葛根素量影响具有显著性影响，因素A、C、D的影响无显著性意义；从表9方差分析结果表明，因素B对总提取物具有显著性影响，因素A、C、D的影响无显著性意义。结合表7的直观分析，考虑到葛根素洗脱量这个指标较为重要，及中药提取大生产的实际情况和生产效率，确定洗脱最佳条件为A₃B₁C₂D₂，即树脂∶生药材＝1∶1以4BV/h的速度上样，洗脱液为90％的乙醇，洗脱流速为4BV/h。

蜂胶除蜡工艺研究

仪器与试剂

(1)仪器：1100型紫外分光光度计(上海分析仪器厂)

GB204 Mettle Toledo电子天平

(2)试剂：芦丁对照品(中药药品生物鉴定所)，其他试剂均为分析纯。蜂胶(购于陕西省咸阳市自然之子蜂产品公司，经陕西中医学院生药教研室雷国莲教授鉴定为真品)

实验方法与结果

(1)蜂胶除蜡工艺的正交试验设计：以芦丁的含量以及外观性状为指标，考察不同加水量、加热时间、冷凝温度对除蜡工艺的影响。正交试验设计因素水平见表10。

表10因素水平表

(2)总黄酮含量的测定：

①对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重芦丁对照品5.1mg，置于25ml量瓶中，用75％乙醇稀释至刻度，摇匀，得到浓度为20.4μg/ml的溶液，作为对照品溶液。

②供试品溶液的制备

称取9份蜂胶，各10g，置于150ml烧杯中，按正交试验设计加入不同倍数水置电炉上加热时间，不同温度下冷凝，取出上层蜂蜡层于滤纸上，观察并记录各号试验的外观性状，以外观性状为指标(胶层中含蜡珠越少分数越高)进行打分，蜡珠含量最少者为100分，蜡珠含量最多者为20分，10分为一个级别，结果见表38。

用滤纸吸干蜂蜡表面水分，取蜂蜡约0.05g，干燥至恒重，精密称定，加75％乙醇定容置25ml容量瓶中，超声处理20min，静置，吸取上清液0.5ml，置于100ml的量瓶中，加入75％乙醇50ml后，加入5％NaNO₂溶液3.0ml，摇匀，放置6min，加入5％Al(NO₃)₃溶液3ml，摇匀，放置6min，加入4％NaOH溶液4ml，摇匀，静置15min，加水定容至100ml，测定蜂蜡中总黄酮含量，以含量最低的为100分，其他得分＝最低含量/含量×100。

③标准曲线及线性范围

分别精密吸取20.4μg/ml芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml于7个25ml量瓶中，加入75％乙醇5ml后，加入5％NaNO₂溶液0.3ml，摇匀，放置6min，加入5％Al(NO₃)₃溶液0.3ml，摇匀，放置6min，加入4％NaOH溶液0.4ml，摇匀，静置15min，加水定容至刻度，以空白溶液作对照，于751型分光光度计415nm处测定吸收度，结果见表11。

表11标准曲线试验结果

以吸收度A为纵坐标，总黄酮含量C(μg)为横坐标计算回归方程为：A＝0.008839C+0.022893，相关系数r＝0.9986，线性范围20.4μg～122.4μg，标准曲线见图3。

④精密度试验

将芦丁含量为61.2μg的标准溶液，显色后连续测定5次，记录吸收度，结果见表12。

表12精密度试验结果

结果表明，本方法精密度良好。

⑤重复性试验

精密吸取5号提取液5份，以供试品溶液制备方法制备，按样品测定项下操作，平行测定5次，结果见表13。

表13重复性试验结果

结果表明，本方法重复性良好。

⑥回收率试验

精密吸取5号提取液适量，加适量对照品，按供试品溶液制备方法制备，按样品测定项下操作，测定含量，以下式计算回收率，结果见表14。

表14回收率试验结果

结果表明，本方法回收率良好。

⑦稳定性试验

精密吸取5号提取液适量，1份，显色，放置30min后，隔一定时间测定一次，记录吸收度，结果见表15。

表15稳定性试验结果

结果表明，本品在显色后，4小时内稳定性良好。

⑧总黄酮含量的测定及外观性状的评分

将1～9号分离的蜂蜡取出，用吸水纸吸取蜂蜡表面的水分，平摊于滤纸上，进行性状评分；分别称取1～9号蜂蜡0.05g，干燥至恒重，精密称定，按供试溶液的制备方法制备，测定总黄酮含量。结果见表16。

表16正交试验结果表

表17方差分析

结果分析

由直观分析和方差分析可以看出，C因素即冷凝温度对整个试验有显著性影响，A、B因素无显著性影响。由直观分析可以优选出除蜡最佳工艺为：A₂B₃C₂。但由于B因素在整个试验中无显著性影响，因此在生产上为了节约成本，选择加热4小时，即优选的工为A₂B₂C₂。

由表实验结果可以看出，该精制方法可以较好地减少蜂胶出膏率，并且对总黄酮的含量影响较小，因此，该方法可以用来精制蜂胶，且成本较低，为较佳精制蜂胶的方法。

工艺验证

对确定的工艺进行三次验证性实验，结果见表18。

表18验证实验结果

结果稳定，说明该工艺可行。

蜂胶提取工艺研究

蜂胶具有抗菌消炎作用，可降血脂，主要有效成分为黄酮类化合物，又由于蜂胶单独提取，故可选择其总黄酮含量作为蜂胶提取工艺的考察指标。

蜂胶药材的前处理

粉碎度可以影响有效成分的提取，有人研究认为蜂胶提取宜粉碎成粗粉。由于蜂胶36℃时开始变软，有粘性及可塑性，不易粉碎。本研究将其冷冻后，蜂胶变硬变脆而易粉碎。经过研究，将蜂胶置冰箱中冷冻3hr，即可变硬变脆而容易粉碎。故最终确定将蜂胶按照除蜡最佳工艺除杂后，冷冻3hr，粉碎成粗粉，进行提取。

蜂胶提取方法的考察

本发明以其有效成分总黄酮的含量为考察指标，采用平行试验法考察了温浸法、热回流法、超声提取法对蜂胶总黄酮提取率的影响，确定了蜂胶的最佳提取方法。

(1)样品制备

①温浸法：称取蜂胶3份，各4g，分别加70％乙醇80ml，于60℃水浴中温浸24小时，过滤于100ml量瓶中，用70％乙醇洗涤残渣，定容，即得。

②热回流提取法：称取蜂胶3份，各4g，分别加70％乙醇80ml，加热回流1hr，冷却至室温，过滤于100ml量瓶中，用70％乙醇洗涤残渣，定容，即得。

③超声提取法：称取蜂胶3份，各4g，分别加70％乙醇80ml，超声提取1hr(30kHz)，冷却至室温，过滤于100ml量瓶中，用70％乙醇洗涤残渣，定容，即得。

(2)蜂胶样品总黄酮含量测定及结果

精密吸取供试品溶液5ml 3份，分别置于25ml量瓶中，加入75％乙醇5ml后，加入5％NaNO₂溶液0.3ml，摇匀，放置6min，加入5％Al(NO₃)₃溶液0.3ml，摇匀，放置6min，加入4％NaOH溶液0.4ml，摇匀，静置15min，加水定容至刻度，以显色剂溶液为阴性对照，于751型分光光度计415nm处测定吸收度，计算总黄酮的含量，结果见表19。

表19不同提取方法考察结果

从表19结果可以看出，三种方法提取总黄酮含量的次序为：超声提取法＞回流法＞温浸法。温浸法提取耗时太长，生产效率低，且提取量低；超声法虽提取总黄酮量最高，但目前大生产中，超声提取尚不完善且生产设备受到一定限制，而回流法与超声法提取量较为接近，无较大差别，故最终选择用热回流法提取蜂胶。

蜂胶提取温度的考察

蜂胶的有效成分黄酮类化合物，遇热不稳定，因此需考察提取温度对蜂胶总黄酮提取率的影响。本研究以总黄酮的含量为考察指标，采用平行试验法考察提取温度对蜂胶总黄酮提取率的影响。

(1)样品制备

称取蜂胶15份，各4g，分别加95％乙醇80ml，按表18设计的提取温度提取，提取液冷却至室温，过滤于100ml量瓶中，95％乙醇洗涤残渣，定容，即得。

(2)样品测定及结果

结果见表20。

表20温度对蜂胶总黄酮提取的影响

从表20结果可知，提取温度为70℃时，蜂胶总黄酮提取量最高，温度过高或过低，均可以影响总黄酮的提取率，故最终选择蜂胶总黄酮的提取温度为70℃。

蜂胶醇提工艺参数优选

(1)正交试验设计

根据文献资料及大生产的实际情况，对影响醇提的主要因素乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)、提取次数(C)、提取时间(D)采用L9(34)正交试验，进行考察。以蜂胶含有的有效成分总黄酮含量为考察指标，根据现有技术、预试验及大生产的实际情况，确定因素水平，设计方案见表21。

表21蜂胶醇提因素水平表

(2)样品制备

称取除蜡后的蜂胶药材9份，各4g，按L₉(3⁴)正交表所列条件，控制提取温度为70℃，进行实验，收集提取液，浓缩，定容于100ml量瓶中，备用。

(3)样品测定及结果

1～9号正交试验样品测定行，计算总黄酮含量，结果见表22。

表22蜂胶醇提正交试验结果

从表22试验结果可以看出，对总黄酮含量影响最大的为因素A，各因素对总黄酮含量影响的大小顺序为A＞C＞B＞D，再从各因素水平来看(K值分析)，A因素为K₂＞K₁＞K₃，B、D因素为K₃＞K₁＞K₂，C因素为K₂＞K₃＞K₁，从以上直观分析可知，其提取条件应为A₂B₃C₂D₃，考虑到大生产实际情况，所以有必要对各因素水平的显著性进行方差分析，结果见表23。

表23总黄酮含量方差分析

从表23方差分析结果表明，因素A、C对蜂胶总黄酮含量具有显著性影响，因素B、D的影响无显著性意义，结合表44的直观分析，考虑到中药提取大生产的实际情况和生产效率，确定蜂胶醇提取最佳工艺为A₂B₁C₂D₃，即加6倍量80％乙醇于70℃提取2次，每次提取2小时。

(4)工艺验证

对确定的工艺进行三次验证性实验，结果见表24。

表24验证实验结果

结果稳定，说明该工艺可行。

结论：通过平行试验、正交试验和验证实验的结果，确定蜂胶最佳提取工艺为：将蜂胶除蜡后，冷冻3hr后，粉碎成粗粉，加6倍量80％乙醇于70℃提取2次，每次提取2小时。

4.6浓缩工艺研究

由于减压浓缩较常压浓缩温度低，效率高，有效成分不易破坏，且减压浓缩设备为药厂必备设备之一，易于实现，故本研究浓缩工艺采用减压浓缩(-0.08Mpa，60℃)。

4.7干燥工艺研究

由于方中各味药均用醇提，不易干燥，而且干燥时间过长也会使某些成分损失。目前，大多数滴丸都是由中药浸膏加适量的基质来制备的，中药浸膏主要采用了干浸膏和稠浸膏两种形式。为了节省步骤，避免干燥过程的影响，故需考察本滴丸剂是否可用稠膏与基质来制备。本研究根据实验经验确定一定的滴制条件即熔融温度80℃，滴制温度85℃，冷却温度1～5℃，滴距5cm，冷却柱长30cm，考察了不同相对密度稠浸膏、干膏及干浸膏粉与适量基质混合情况及其对成型的影响，结果见表25。

表25中间提取物性状优选结果

由表25结果可知，本滴丸剂提取物以不同相对密度的稠膏制备，成型后硬度小、过软；干浸膏不能成型；而将提取物干燥后，粉碎，过100、150目筛，均能与基质混合均匀，成型效果佳，由于粉碎时间过长可能会破坏有效成分，并且降低生产效率，因此，将干浸膏粉碎过100目筛即可。由以上结果可知，本滴丸制备时必须将提取物干燥，粉碎(过100目筛)后，方可成型。

根据实验室实际情况，将本品提取物置于60℃烘箱干燥。

成型性实验研究

根据实验经验确定一定的滴制条件即熔融温度80℃，滴制温度85℃，冷却温度1～5℃，滴距5c m，冷却柱长30c m，在此条件下进行本滴丸成型工艺的研究。

基质的初步选择

目前制备滴丸常用的基质水溶性的有：聚乙二醇(6000，4000)、硬脂酸钠、甘油、水等。水不溶性的基质有：硬酯酸、单硬脂酸甘油酯、虫蜡、蜂蜡、氢化油以及植物油等。在水溶性基质中，中药滴丸生产中药用聚乙二醇6000、4000时首选基质。药用聚乙二醇4000、6000化学性质稳定，不与主药发生作用，不破坏主药的疗效；药用聚乙二醇4000、6000熔点较低或加一定量热水(60℃～100℃)能溶化成液体，而遇骤冷后又能凝成固体(在室温下仍保持固体状态)，并在加进一定量的药物后仍能保持上述性质；药用聚乙二醇4000、6000对人体无害。

心脑血管疾病具有急性发作的特点，要求制剂应迅速发挥疗效，加之药物含有挥发性成分，故选择熔点低，具有良好分散力和较大内聚力的PEG4000作基质来满足临床治疗和药效成分性质的要求。但初步研究表明，以PEG4000作基质时，滴丸的硬度、流动性均较差。为此，在基质中加入PEG6000来调整滴丸的硬度和流动性。

滴制温度的初步选择

聚乙二醇类受热温度过高会出现色泽加深不易凝固。通过预试验可知，滴制温度在70℃左右时，滴速很慢，成型不好。选择滴制温度在85℃左右，滴速适中，成型良好。

冷却剂的选择

先以药物∶聚乙二醇4000＝1∶2的比例，从二甲基硅油、液体石蜡、花生油、菜籽油中选择合适的冷却剂。以滴丸的下降速度、成型情况为指标，将各指标的考察结果由好至差依次用“+++”、“++”、“+”、“-”表示，结果见表26。

表26冷却剂选择试验结果

由表26可知，以二甲基硅油为冷却剂滴制时下降速度合适，成型好。

药物与基质及基质之间配比的研究

设计药物与基质1∶1.5、1∶2.0、1∶2.2、1∶2.5不同的配比，基质中PEG4000与PEG6000设计不同的比例进行研究，结果见表27。

表27药物与基质及基质之间的配比

将基质在水浴上加热，搅拌，使基质熔融，加入干膏粉，与基质分散均匀，滴入已冷却的冷却剂中，成型后取出，用滤纸吸去粘附的冷却剂，充分干燥即得。以滴丸的圆整度、硬度和成型情况为指标，将各指标的考察结果由好至差依次用“+++”、“++”、“+”、“-”表示，结果见表28。

表28药物与基质及基质之间配比的试验结果

由试验结果可知，基质用量越多，成型越好；PEG6000用量多，滴速慢易拖尾。为尽量减少患者服用量，减少辅料用量，选择药物∶基质＝1∶2，PEG4000∶PEG6000＝5∶5的配比。

熔融温度的考察

按优选的基质与基质配比，将基质置于不同温度水浴上加热，熔融，滴丸。以丸型圆整度、滴出难易程度为指标，将考察结果由好至差依次用“+++”、“++”、“+”、“-”表示，结果见表51。

表29熔融温度试验结果

由试验结果可知，熔融温度在70℃、80℃时，都易滴出，但80℃滴出的丸型圆整度较好。故选择熔融温度为80℃，基质熔融后加入浸膏粉混匀。

滴制温度的考察

按优选的药物与基质配比，将基质置80℃水浴上加热，熔融，加入干膏粉，搅匀，不同温度保温，滴丸。以丸型圆整度、滴出难易程度为指标，将各指标的考察结果由好至差依次用“+++”、“++”、“+”、“-”表示，结果见表30。

表30滴制温度的试验结果

由表30结果可知，滴制时温度控制在90℃为宜。

冷却剂温度的考察

按优选的药物与基质配比，将基质置80℃水浴上加热，熔融，加入干膏粉混匀，90℃保温，滴入不同温度的冷却剂中。冷却剂温度分别为0℃以下，0～5℃，10℃以上。结果0℃以下不圆整；0～5℃圆整，光滑；10℃以上由于不能完全冷却，形状变扁。故选择冷却剂温度为0～5℃。

滴距、滴口内外径大小、滴速等滴制条件的考察

滴距、滴口内外径大小、滴速是影响丸重及丸重差异的主要因素，故需对其进行考察。

(1)正交实验设计

根据预试验情况，对滴距(A)、滴口径(B)、滴速(C)等主要影响滴丸成型因素，采用L₉(3⁴)正交试验进行考察。以成丸的重量变异系数为考察指标，根据预试验及大生产的实际情况，确定因素水平，设计方案见表31。

表31滴制条件因素水平表

(2)方法及结果

按优选的药物与基质配比，将基质置80℃水浴上加热，熔融，加入干膏粉混匀，90℃保温，按滴制条件因素水平表设计方案，滴入0～5℃二甲基硅油中，计算丸重变异系数，结果见表33。

丸重变异系数：照《中国药典》2005年版一部附录IK滴丸剂项下重量差异检查法检查，任取滴丸20丸，分别精密称定每丸重量，计算丸重变异系数(RSD)即得。

表32滴制条件正交试验结果

表33丸重变异系数方差分析

从表32试验结果可以看出，对丸重变异系数影响最大的为因素B，各因素对丸重变异系数影响的大小顺序为B＞A＞C＞D，再从各因素水平来看(K值分析)，A因素为K₁＜K₂＜K₃，B因素为K₂＜K₁＜K₃，C因素为K₃＜K₁＜K₂，从以上直观分析可知，其提取条件应为A₁B₂C₃；各因素水平的显著性方差分析，见表55。

从表33方差分析结果表明，因素A、B对丸重变异系数具有显著性影响，因素C的影响无显著性意义，结合表32的直观分析，其优选工艺为A₁B₂C₃，即最佳滴制条件为滴距4cm，滴口径为3/4.5(mm/mm)，滴速为50d·min^-1。

验证实验

按优选的本发明中药成型工艺条件制备，制备流程图如图1所示，结果本品为棕褐色小丸，大小均匀，外表光滑，色泽一致，硬度适中。重量差异检测：随机取出滴丸20粒，按《中国药典》2005年版一部附录该项下方法进行测定，结果丸重为0.365g，并且符合滴丸重量差异为±7.5％的规定。溶散时限试验：取滴丸6粒，按《中国药典》2005年版该项下方法进行测定，结果不加挡板平均溶散时间为7、7、9min，均符合规定。因此，优选的最佳工艺药物与基质(PEG4000∶PEG6000＝1∶1)以1∶2的比例，基质80℃熔融后加入干膏粉混匀，90℃保温在滴距为4cm、滴口径为3/4.5(mm/mm)、滴速为50d·min^-1的条件下，滴于0～5℃的二甲基硅油中可行。

Claims (6)

1.一种治疗心脑血管系统疾病的中药，其特征在于，由含有下述重量份中药原料制成：葛根10-150份、川芎10-200份、穿山龙10-100份、蜂胶10-100份。

2.根据权利要求1所述的治疗心脑血管系统疾病的中药，其特征在于，所述中药的剂型为液体制剂、固体、半固体制剂或者气体制剂。

3.根据权利要求2所述的治疗心脑血管系统疾病的中药，其特征在于，所述液体制剂包括口服液、混悬液、糖浆、注射液、药酒和町剂；所述固体和半固体制剂包括片剂、丸剂、膏剂、丹剂、散剂、颗粒剂、栓剂、粉剂、乳剂、咀嚼剂和胶囊剂，所述气体制剂包括气雾剂和吸入剂。

4.一种权利要求1所述的治疗心脑血管系统疾病的中药的制备方法，其提取工艺特征在于，包括以下步骤：

1)葛根、穿山龙分别采用乙醇回流提取，以8倍量70％乙醇提取3次，每次提取1hr；

2)川芎乙醇渗漉提取，以8倍量90％乙醇浸泡12h，渗滤速度为2ml/min；

3)合并步骤1)和步骤2)所得的三味药材提取液，上大孔吸附树脂纯化，以90％乙醇洗脱，洗脱液浓缩干燥至固体物；

4)蜂胶加水除蜡后，采用6倍量80％乙醇回流提取，于70℃提取2次，每次2hr，提取液浓缩至干燥物；

5)合并步骤3)的固定物和步骤4)的干燥物，粉碎后与基质成型。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述纯化工艺包括以下步骤：将葛根、黄姜提取液与川芎提取液合并，以方中君药葛根的有效成分葛根素在AB-8大孔吸附树脂上的饱和吸附量为指标，得到葛根、川芎、黄姜三味药材的纯化工艺为：药液温度为20-30℃，供试药液中葛根素上样浓度为10-12mg/ml，pH值为6.0-7.0，树脂柱径高比为1∶5，树脂∶药材＝1∶1，上样速度为4BV/h，4BV的90％乙醇以4BV/h流速洗脱；以蜂胶总黄酮含量为指标，蜂胶除蜡工艺为8倍量水，煎煮4h，25℃冷凝。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤5)中所述成型工艺包括以下步骤：成型工艺条件为：药物与基质(PEG4000∶PEG6000＝1∶1)以1∶2的比例，80℃熔融混匀，90℃保温在滴距为4cm、滴口径为3/4.5(mm/mm)、滴速为50d·min-1的条件下，滴于0～5℃的二甲基硅油中。

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