CN102608337A - 凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
凝血酶原时间测定试剂盒，它由凝血活酶、缓冲液体系构成，凝血活酶为兔脑组织因子和重组人组织因子。缓冲液体系包括：30-50mMTris-HCl；甘氨酸3～10％；小牛血清白蛋白1～5％；氯化钠0.6～1.3％；氯化钙6.8～8.4mM；NaN30.5％；缓冲液体系的pH值为6.0-8.0。所述凝血活酶还包括兔脑磷脂。它克服了不同仪器的方法差异使各类仪器的敏感度指数不一样的缺点，本发明将高灵敏的人重组凝血活酶与低灵敏度的兔脑粉提取凝血活酶结合起来，通过一定的配比制备出能够满足不同方法学血凝仪的PT试剂，使其ISI值均能接近1.0。本发明还同时公开了凝血酶原时间测定试剂盒的制备方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种临床实验室用体外诊断试剂盒及其制备，它用于人血浆标本凝血酶原时间的测定。更具体地说它是一种采用兔脑组织因子和重组人组织因子联合制备凝血酶原时间测定试剂盒及其其制备方法。
背景技术
医院临床实验室常规凝血实验，即凝血常规四项包括凝血酶原时间测定(PT)、部分活化凝血活酶时间测定(APTT)、凝血酶时间测定(TT)、纤维蛋白原浓度测定(FIB)，主要用于出血性疾病的筛查与诊断、血栓性疾病与血栓前状态检查、各种抗凝治疗监测以及手术前检查。其中，PT为反应机体外源性凝血途径的主要检测指标，常用于：1血液凝固异常可疑包括凝血酶原复合物多个因子(II、VII、X)，因子V，纤维蛋白原及去纤维蛋白原血症的筛选实验；2监测及调整维生素K拮抗剂，香豆素诱导剂的治疗；3监测维生素K缺乏及肝脏疾病；4术前筛选可能的止血异常疾病。目前PT的临床检测多采用Quick法，其原理为在缺乏血小板的血浆内加入组织促凝血酶原激酶(组织因子)和Ca2+后凝血酶原转变为凝血酶，通过产生的凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。PT测定结果报告方式有三种：秒值、根据标准曲线计算的百分活度，国际标准化比率(internationalnormalized ratio INR)。PT测定结果受众多因素的影响，其中凝血酶原试剂为最重要的影响因素。商品化的组织因子在敏感性上与WHO推荐的有所不同，因此生产商需要对每批试剂确定一个敏感因子，此即国际敏感指数ISI(international sensitivity index)，它用来表示试剂中组织凝血活酶相对活性的指数。不同来源的组织凝血活酶对凝血因子的敏感性不同，为了使不同敏感性的组织凝血活酶在PT检测中得到同样的结果，必须要制定一个共同遵循的敏感指标。WHO先后制备或发出了凝血活酶的多种国际参考品(IRP)，用已知ISI值的国际参考试剂与待测组织活酶试剂检测同一标本，对结果进行比较分析，就可得出试剂的ISI数值。目前用于生产和出售的组织凝血活酶试剂必须标有ISI数值[1]。PT测定影响因素很多，其中最关键的是凝血酶原试剂，由于所用凝血酶原试剂的敏感度不同，即使在相同条件下对同一标本测得的结果也不同，而我国医生常用的凝血酶原百分活动度则因为标准血浆不统一而相差更大，甚至达到难以比较的程度。因此WHO于1981年提出PT标准化报告方式为INR，INR＝(PTR)ISI，其中ISI为国际敏感度指数，PTR为PT测定秒值(s)与PT标准对照秒值(s)的比值。经上述公式换算成INR值后，能克服试剂之间敏感度差异的影响，使INR值报告方式具有可比性和可信度[2]。国内多数文献报告人工心脏瓣膜置换术后采用国际正常标准化比值对口服抗凝药物治疗的监测，结果稳定、可靠，具有可比性[3～5]。在口服抗凝药治疗中，华法林类药物是非常有效的抗凝药物，它在不同病人体内的新陈代谢率不同，因而它的剂量必须仔细监测，否则就会因超剂量而造成出血或因为剂量不足导致疾病复发，血栓形成。由此可见在凝血酶原时间的测定中，准确的INR结果对临床抗凝治疗药物的监测非常重要。但是不同ISI值的PT试剂测得的INR结果差异非常显著，而且当标本的INR值越高时，测定结果差异越显著。理论上，ISI值越接近1.0，表明试剂越敏感[1]。根据卫生部临床检验中心凝血试验的室间质控中INR的成绩也可以看出ISI值越接近1.0的PT试剂，测得的结果越准确。所以，在日常工作为了确保口服抗凝药物治疗有效性和安全性，为了检验结果的准确性很多实验室都建议使用接近ISI值1.0的凝血酶原试剂。
目前，医院临床实验室检测PT多用凝血分析仪进行检测。从方法学上讲，凝血分析仪可分为三大类：光学法(代表厂家为Sysmex)、磁珠法(代表厂家为Stago)和光学磁珠法(代表厂家为BrinkElectronik)。有别于传统的手工法，不同仪器的方法差异使各类仪器的敏感度指数不一样，这为PT试剂的最终检测灵敏度引入了新的影响因素。因此，为不同机型调配出ISI值趋近于1.0的试剂将有助于统一不同机型的检测结果，有利于PT检查项目的标准化。
参考文献：[1]丛玉隆，血液学体液学检验与临床释疑[M]，北京：人民军医出版社，2004：173。[2]丁焕民，门小平，蔡淑清，服用抗凝药时INR值的最佳选择[J]，长春中医学院学报，1999，12(15)：40。[3]董力，石应康，邓承祺等，应用国际标准化比值监测心脏机械瓣膜替换术后抗凝治疗[J]，中华胸心血管外科杂志，1999，15(4)；167。[4]魏文宁，王林林，方峻等，机械瓣膜替换术后抗凝中血浆蛋白C含量改变的意义[J]，上海医学检验杂志，2001，16(1)：15。[5]高辉，杨舒，朱雯梅等，人工心脏瓣膜替换术后342例患者应用国际正常标准化比率对口服抗凝药物的监测[J]，上海医学检验杂志，2002，17(3)：159。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有背景技术的不足之处，而提供一种凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法。
本发明的目的是通过如下措施来达到的：凝血酶原时间测定试剂盒，它由凝血活酶、缓冲液体系构成，其特征在于所述的凝血活酶包括兔脑组织因子和重组人组织因子，重组人组织因子在缓冲液体系中的用量为2500-3000U/L，兔脑组织因子在缓冲液体系中的用量为8500-9500U/L。
在上述技术方案中，所述每升缓冲液体系包括：30-50mM的Tris-HCl，占缓冲液体系重量3～10％的甘氨酸，占缓冲液体系重量1～5％的小牛血清白蛋白，占缓冲液体系重量0.6～1.3％的氯化钠，6.8～8.4mM的氯化钙，占缓冲液体系重量0.5％的NaN3，其余为水，缓冲液体系的PH值为6.0-8.0。
在上述技术方案中，所述重组人组织因子在缓冲液体系中的用量为3000U/L，兔脑组织因子在缓冲液体系中的用量为9000U/L。
在上述技术方案中，所述凝血活酶还包括兔脑磷脂0.5-1.5g/L。为了乳化凝血活酶，并提供催化表面。
制备上述凝血酶原时间测定试剂盒的方法，其特征在于它包括如下步骤：首先将重组人组织因子、兔脑组织因子和缓冲液体系采用不同的机型进行调试，调试所用的质控血浆为德灵INR标准血浆，通过此血浆测定出在在各种凝血分析仪上的ISI值即分析灵敏度；其次，将在不同的机型上的ISI值为1的重组人组织因子、兔脑组织因子和缓冲液体系的配比固定并分装，并分别真空冷冻干燥，即配成为不同机型的凝血酶原时间测定试剂盒。
本发明的设计一种PT测定试剂的新的制备技术。在此技术下，可以制备出一系列PT体外诊断试剂盒，各试剂盒可用于不同方法学原理的凝血分析仪，而其ISI值均可趋近于1.0或等于1。本发明将高灵敏的人重组凝血活酶与低灵敏度的兔脑粉提取凝血活酶结合起来，通过一定的配比制备出能够满足不同方法学血凝仪的PT试剂，使其ISI值均能接近1.0。
附图说明
图1为本发明凝血酶原时间测定试剂制备方法的流程图。
具体实施方式
下面结合附图详细说明本发明的实施情况，但它们并不构成对本发明的限定，仅作举例而已。同时通过说明本发明的优点将变得更加清楚和容易理解。
本发明的目的是通过如下措施来达到的：凝血酶原时间测定试剂盒，它由凝血活酶、缓冲液体系构成，所述的凝血活酶包括兔脑组织因子和重组人组织因子，重组人组织因子在缓冲液体系中的用量为2500-3000U/L，兔脑组织因子在缓冲液体系中的用量为8500-9500U/L。所述每升缓冲液体系包括：30-50mM的Tris-HCl，占缓冲液体系重量3～10％的甘氨酸，占缓冲液体系重量1～5％的小牛血清白蛋白，占缓冲液体系重量0.6～1.3％的氯化钠，6.8～8.4mM的氯化钙，占缓冲液体系重量0.5％的NaN3，其余为水，缓冲液体系的PH值为6.0-8.0。
凝血活酶还包括兔脑磷脂0.5-1.5g/L。
制备上述凝血酶原时间测定试剂盒的方法(如图1所示)，它包括如下步骤：首先将重组人组织因子、兔脑组织因子和缓冲液体系采用不同的机型进行调试，调试所用的质控血浆为德灵INR标准血浆，通过此血浆测定出在在各种凝血分析仪上的ISI值即分析灵敏度；其次，将在不同的机型上的ISI值为1的重组人组织因子、兔脑组织因子和缓冲液体系的配比固定并分装，并分别真空冷冻干燥，即配成为不同机型的凝血酶原时间测定试剂盒。
实施例1
凝血酶原时间测定试剂盒，它由凝血活酶、缓冲液体系构成，所述的凝血活酶包括兔脑组织因子和重组人组织因子，重组人组织因子在缓冲液体系中的用量为2500U/L，兔脑组织因子在缓冲液体系中的用量为8500U/L，所述每升缓冲液体系包括：30mM的Tris-HCl，占缓冲液体系重量3％的甘氨酸，占缓冲液体系重量1％的小牛血清白蛋白，占缓冲液体系重量0.6％的氯化钠，6.8mM的氯化钙，占缓冲液体系重量0.5％的NaN3，其余为水，缓冲液体系的PH值为6.0。
制备凝血酶原时间测定试剂盒的方法，它包括如下步骤：首先将重组人组织因子、兔脑组织因子和缓冲液体系采用不同的机型进行调试，调试所用的质控血浆为德灵INR标准血浆，通过此血浆测定出在在各种凝血分析仪上的ISI值即分析灵敏度；其次，将在不同的机型上的ISI值为1的重组人组织因子、兔脑组织因子和缓冲液体系的配比固定并分装，并分别真空冷冻干燥，即配成为不同机型的凝血酶原时间测定试剂盒。
实施例2
凝血酶原时间测定试剂盒，它由凝血活酶、缓冲液体系构成，所述的凝血活酶包括兔脑组织因子和重组人组织因子，重组人组织因子在缓冲液体系中的用量为3000U/L，兔脑组织因子在缓冲液体系中的用量为9500U/L。所述每升缓冲液体系包括：50mM的Tris-HCl，占缓冲液体系重量10％的甘氨酸，占缓冲液体系重量5％的小牛血清白蛋白，占缓冲液体系重量1.0％的氯化钠，8.4mM的氯化钙，占缓冲液体系重量0.5％的NaN3，其余为水，缓冲液体系的PH值为8.0。
制备方法同实施例1。
实施例3
凝血酶原时间测定试剂盒，它由凝血活酶、缓冲液体系构成，所述的凝血活酶包括兔脑组织因子和重组人组织因子，重组人组织因子在缓冲液体系中的用量为2800U/L，兔脑组织因子在缓冲液体系中的用量为9000U/L。所述每升缓冲液体系包括：40mM的Tris-HCl，占缓冲液体系重量7％的甘氨酸，占缓冲液体系重量3％的小牛血清白蛋白，占缓冲液体系重量1.3％的氯化钠，7.6mM的氯化钙，占缓冲液体系重量0.5％的NaN3，兔脑磷脂0.5g/L，其余为水，缓冲液体系的PH值为8.0。
制备方法同实施例1。
实施例4
凝血酶原时间测定试剂盒，它由凝血活酶、缓冲液体系构成，所述的凝血活酶包括兔脑组织因子和重组人组织因子，重组人组织因子在缓冲液体系中的用量为2750U/L，兔脑组织因子在缓冲液体系中的用量为9200U/L。所述每升缓冲液体系包括：43mM的Tris-HCl，占缓冲液体系重量8％的甘氨酸，占缓冲液体系重量4％的小牛血清白蛋白，占缓冲液体系重量1.1％的氯化钠，7.2mM的氯化钙，占缓冲液体系重量0.5％的NaN3，兔脑磷脂1.5g/L，其余为水，缓冲液体系的PH值为8.0。
制备方法同实施例1。
实施例5
凝血酶原时间测定试剂盒，它由凝血活酶、缓冲液体系构成，所述的凝血活酶包括兔脑组织因子和重组人组织因子，重组人组织因子在缓冲液体系中的用量为2700U/L，兔脑组织因子在缓冲液体系中的用量为9300U/L。所述每升缓冲液体系包括：45mM的Tris-HCl，占缓冲液体系重量9％的甘氨酸，占缓冲液体系重量5％的小牛血清白蛋白，占缓冲液体系重量1.2％的氯化钠，7.5mM的氯化钙，占缓冲液体系重量0.5％的NaN3，兔脑磷脂1.0g/L，其余为水，缓冲液体系的PH值为8.0。
制备方法同实施例1。
实验1：试剂的检测灵敏度实验：
以BE compactX为测试机型，将不同配比的重组人组织因子和兔脑粉提取物组织因子制成PT冻干试剂。在测试前，用一定体积的蒸馏水复溶。重组人组织因子与兔脑粉提取物组织因子不同配比的灵敏度见表一。ISI值的校准用德灵公司INR标准血浆。
表一：重组人组织因子与兔脑粉提取物组织因子不同配比的灵敏度(BE CompactX)
从表1可知：当重组人组织因子为3000U/L、兔脑组织因子为9000U/L时，ISI值最接近1。
实验2：本发明试剂在不同厂家机型上的ISI值测定结果对比表
表二：试剂在不同厂家机型上的ISI值测定结果
实验3：本发明试剂与市售试剂在同一机型上的ISI值比较表三：
表三表明本发明试剂的ISI值优于市售试剂，其敏感度比市售试剂高。
实验4：与市售试剂的稳定性的比较(复溶后)
| 时间 | 本发明试剂 | 市售试剂 |
| 1天 | 12.1 | 12.2 |
| 2天 | 12.2 | 12.4 |
| 3天 | 12.3 | 13.6 |
| 4天 | 12.2 | 14.8 |
| 5天 | 12.5 | 18.1 |
| 6天 | 12.8 | 22.3 |
| 7天 | 13.7 | 25.5 |
表四表明本发明试剂的凝血酶原时间值从第5天开始才出现变化，而市售试剂的凝血酶原时间从第3天就开始变化，说明本发明的试剂稳定性较好，有利于医院节省成本，降低患者的医药开支。
实验5：与市售试剂的重复性比较
表五表明，本发明试剂与市售试剂相比变异系数(CV)值较小，重复性较好。
Claims (5)
1.凝血酶原时间测定试剂盒，它由凝血活酶、缓冲液体系构成，其特征在于所述的凝血活酶包括兔脑组织因子和重组人组织因子，重组人组织因子在缓冲液体系中的用量为2500-3000U/L，兔脑组织因子在缓冲液体系中的用量为8500-9500U/L。
2.根据权利要求1所述的凝血酶原时间测定试剂盒，其特征在于所述每升缓冲液体系包括：30-50mM的Tris-HCl，占缓冲液体系重量3～10％的甘氨酸，占缓冲液体系重量1～5％的小牛血清白蛋白，占缓冲液体系重量0.6～1.3％的氯化钠，6.8～8.4mM的氯化钙，占缓冲液体系重量0.5％的NaN3，其余为水，缓冲液体系的PH值为6.0-8.0。
3.根据权利要求1或2所述的凝血酶原时间测定试剂盒，其特征在于所述重组人组织因子在缓冲液体系中的用量为3000U/L，兔脑组织因子在缓冲液体系中的用量为9000U/L。
4.根据权利要求3所述的凝血酶原时间测定试剂盒，其特征在于所述凝血活酶还包括兔脑磷脂0.5-1.5g/L。
5.制备上述任一权利要求所述凝血酶原时间测定试剂盒的方法，其特征在于它包括如下步骤：首先将重组人组织因子、兔脑组织因子和缓冲液体系采用不同的机型进行调试，调试所用的质控血浆为德灵INR标准血浆，通过此血浆测定出在在各种凝血分析仪上的ISI值即分析灵敏度；其次，将在不同的机型上的ISI值为1的重组人组织因子、兔脑组织因子和缓冲液体系的配比固定并分装，并分别真空冷冻干燥，即配成为不同机型的凝血酶原时间测定试剂盒。
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Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103376329A (zh) * | 2012-04-19 | 2013-10-30 | 蓬莱诺康药业有限公司 | 巴曲亭及其有效成份止血作用的表征方法 |
| CN103852362A (zh) * | 2014-03-13 | 2014-06-11 | 皖南医学院 | 兔脑组织因子冻干制剂的制备方法 |
| CN104991079A (zh) * | 2015-07-16 | 2015-10-21 | 青岛古高生物科技有限公司 | 一种凝血试剂用抗氧化剂 |
| CN105277666A (zh) * | 2014-06-27 | 2016-01-27 | 中国人民解放军第三〇二医院 | 一种用于评价三七抗凝活性的生物效价检定方法 |
| CN105368915A (zh) * | 2015-11-12 | 2016-03-02 | 武汉中太生物技术有限公司 | 凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法 |
| CN105368916A (zh) * | 2015-11-12 | 2016-03-02 | 武汉景川诊断技术股份有限公司 | 一种凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法 |
| CN106591267A (zh) * | 2017-01-04 | 2017-04-26 | 三诺生物传感股份有限公司 | 一种凝血活酶及其提取方法以及pt试剂 |
| CN109975560A (zh) * | 2019-04-12 | 2019-07-05 | 深圳优迪生物技术有限公司 | 微流控凝血检测卡及凝血检测仪器 |
| CN111638374A (zh) * | 2020-06-08 | 2020-09-08 | 深圳市国赛生物技术有限公司 | 一种用于测定凝血酶原时间的体外诊断试剂盒 |
| CN112481355A (zh) * | 2020-11-16 | 2021-03-12 | 武汉市长立生物技术有限责任公司 | 液体型凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110412001B (zh) * | 2019-08-01 | 2022-02-11 | 武汉塞力斯生物技术有限公司 | 一种动态监测凝血酶生成能力的试剂盒 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993007492A1 (en) * | 1991-10-04 | 1993-04-15 | Baxter Diagnostics Inc. | Preparation of prothrombin time reagents from recombinant human tissue factor and purified natural and synthetic phospholipids |
| US6183979B1 (en) * | 1999-03-24 | 2001-02-06 | International Technidyne Corporation | Preparation of dried synthetic prothrombin time reagents |
| CN1523358A (zh) * | 2002-11-05 | 2004-08-25 | ����ɨ������˾ | 一种基于组织因子的凝血酶原时间试剂的制备方法 |
| CN1952169A (zh) * | 2005-10-18 | 2007-04-25 | 上海太阳生物技术有限公司 | 临床检验凝血酶原时间(pt)测定体外诊断试剂盒 |
| EP1975622A1 (en) * | 2007-03-28 | 2008-10-01 | Sysmex Corporation | Reagent for measuring clotting time and method for stabilizing tissue factor |
| CN101294163A (zh) * | 2007-04-23 | 2008-10-29 | 上海长岛生物技术有限公司 | 一种基于人重组凝血活酶的液体型pt试剂的制备方法 |
-
2012
- 2012-02-14 CN CN201210032584.1A patent/CN102608337B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993007492A1 (en) * | 1991-10-04 | 1993-04-15 | Baxter Diagnostics Inc. | Preparation of prothrombin time reagents from recombinant human tissue factor and purified natural and synthetic phospholipids |
| US5625036A (en) * | 1991-10-04 | 1997-04-29 | Dade International Inc. | Preparation of prothrombin time reagents from recombinant human tissue factor and purified natural and synthetic phospholipids |
| US6183979B1 (en) * | 1999-03-24 | 2001-02-06 | International Technidyne Corporation | Preparation of dried synthetic prothrombin time reagents |
| CN1523358A (zh) * | 2002-11-05 | 2004-08-25 | ����ɨ������˾ | 一种基于组织因子的凝血酶原时间试剂的制备方法 |
| CN1952169A (zh) * | 2005-10-18 | 2007-04-25 | 上海太阳生物技术有限公司 | 临床检验凝血酶原时间(pt)测定体外诊断试剂盒 |
| EP1975622A1 (en) * | 2007-03-28 | 2008-10-01 | Sysmex Corporation | Reagent for measuring clotting time and method for stabilizing tissue factor |
| CN101294163A (zh) * | 2007-04-23 | 2008-10-29 | 上海长岛生物技术有限公司 | 一种基于人重组凝血活酶的液体型pt试剂的制备方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| ANNIE ROBERT等: "Prothrombin Time in Liver Failure: Time, Ratio, Activity Percentage, or International Normalized Ratio?", 《HEPATOLOGY》 * |
| JUHA HORSTI等: "Poor Agreement among Prothrombin Time International Normalized Ratio Methods: Comparison of Seven Commercial Reagents", 《CLINICAL CHEMISTRY》 * |
| 张存山等: "凝血酶原时间测定方法和正常值", 《人民军医》 * |
| 徐涛: "组织凝血活素的研展和临床应用", 《脏器生化制药》 * |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103376329A (zh) * | 2012-04-19 | 2013-10-30 | 蓬莱诺康药业有限公司 | 巴曲亭及其有效成份止血作用的表征方法 |
| CN103852362A (zh) * | 2014-03-13 | 2014-06-11 | 皖南医学院 | 兔脑组织因子冻干制剂的制备方法 |
| CN103852362B (zh) * | 2014-03-13 | 2016-01-20 | 皖南医学院 | 冻干兔脑组织因子的制备方法 |
| CN105277666A (zh) * | 2014-06-27 | 2016-01-27 | 中国人民解放军第三〇二医院 | 一种用于评价三七抗凝活性的生物效价检定方法 |
| CN104991079A (zh) * | 2015-07-16 | 2015-10-21 | 青岛古高生物科技有限公司 | 一种凝血试剂用抗氧化剂 |
| CN104991079B (zh) * | 2015-07-16 | 2016-04-06 | 青岛古高生物科技有限公司 | 一种凝血试剂用抗氧化剂 |
| CN105368916A (zh) * | 2015-11-12 | 2016-03-02 | 武汉景川诊断技术股份有限公司 | 一种凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法 |
| CN105368915A (zh) * | 2015-11-12 | 2016-03-02 | 武汉中太生物技术有限公司 | 凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法 |
| CN105368915B (zh) * | 2015-11-12 | 2019-03-08 | 武汉中太生物技术有限公司 | 凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法 |
| CN106591267A (zh) * | 2017-01-04 | 2017-04-26 | 三诺生物传感股份有限公司 | 一种凝血活酶及其提取方法以及pt试剂 |
| CN106591267B (zh) * | 2017-01-04 | 2020-02-04 | 三诺生物传感股份有限公司 | 一种凝血活酶及其提取方法以及pt试剂 |
| CN109975560A (zh) * | 2019-04-12 | 2019-07-05 | 深圳优迪生物技术有限公司 | 微流控凝血检测卡及凝血检测仪器 |
| CN111638374A (zh) * | 2020-06-08 | 2020-09-08 | 深圳市国赛生物技术有限公司 | 一种用于测定凝血酶原时间的体外诊断试剂盒 |
| CN112481355A (zh) * | 2020-11-16 | 2021-03-12 | 武汉市长立生物技术有限责任公司 | 液体型凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法 |
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