CN102603783B

CN102603783B - 一种靶向抗恶性肿瘤的药物及其制备方法

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Publication number: CN102603783B
Application number: CN201210072152.3A
Authority: CN
Inventors: 张俏男
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2012-03-16
Filing date: 2012-03-16
Publication date: 2014-09-03
Anticipated expiration: 2032-03-16
Also published as: CN102603783A

Abstract

本发明涉及靶向抗恶性肿瘤的药物及其制备方法，可有效解决对恶性肿瘤治疗用药的问题，其解决技术方案是，氢氧化钾中加入乙醇，溶解，加入对-硼酰基-1-硝基-2-氨基-苯，加热，滴加次氯酸钠溶液，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤，真空干燥，用乙醇重结晶，得[¹⁰B]-5-硼¹⁰二羟基-苯并呋咱-1-氧化物；在[¹⁰B]-5-硼¹⁰二羟基-苯并呋咱-1-氧化物中加乙醇和水，乳化，加入氰氨基钠，升温反应后，冷却至固体析出，抽滤，滤液中加入冰醋酸，析出金红色产物，过滤，滤饼用乙醇重结晶，干燥，得[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧化合物，本发明制备方法简单，具有靶向作用，能够与肿瘤细胞特异性结合，并释放活性成分，有效用于治疗恶性肿瘤，疗效好，毒副作用小，安全可靠。

Description

一种靶向抗恶性肿瘤的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药领域，特别是一种靶向抗恶性肿瘤的药物及其制备方法。

背景技术

恶性肿瘤是一种治疗难度大，致死率高的疾病，全球每年因恶性肿瘤死亡的人数超过了1000万，这种疾病正在成为新世纪人类的第一杀手。传统的恶性肿瘤治疗方法主要是手术、放疗和化疗，但这些治疗方法不仅给病人带来了极大的痛苦，而且术后容易复发和转移。目前针对恶性肿瘤的药物毒副作用大，治疗效果差，造成患者免疫功能低下，至今尚未研究出对恶性肿瘤有显著疗效的药物，因此，对治疗靶向抗恶性肿瘤的药物的创新势在必行。

近几年，具有高效、低毒、副作用小等特点的抗体靶向药物的出现，为抗恶性肿瘤药物的研发开辟了一条新道路。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明的目的就是提供一种靶向抗恶性肿瘤的药物及其制备方法，可有效解决对恶性肿瘤治疗用药的问题。

本发明的技术方案是，包括一种制备靶向抗恶性肿瘤药物的化合物，该化合物为[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧化合物(简写为¹⁰BABD)，分子式为：

C₇H₈N₄O₄ ¹⁰B，其结构式为其制备方法，包括以下步骤：(1)合成[¹⁰B]-5-硼¹⁰二羟基-苯并呋咱-1-氧化物；(2)合成[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧化合物。

一种靶向抗恶性肿瘤的复合物，该复合物为[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧·[聚一氟化二碳](简写为¹⁰BABD·(¹²C₂F)_n)，分子式为C₇H₇N₄O₄ ¹⁰B·(¹²C₂F)_n，其制备方法，包括以下步骤：将所述的一氟化二碳(¹²C₂F)_n和[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧化合物¹⁰BABD粉碎后，充分混合均匀经辐照后，制备成¹⁰BABD·(¹²C₂F)n复合物，然后分装保存。

本发明具有靶向作用，能够与肿瘤细胞特异性结合，并释放活性成分，经试验证明本发明所述药物有效用于治疗恶性肿瘤，疗效好，毒副作用小，安全可靠，且制备方法简单，易于实现。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明具体实施方式作详细说明。

本发明一种制备靶向抗恶性肿瘤药物的化合物，名称为[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧化合物(简写为¹⁰BABD)，分子式为：C₇H₇N₄O₄ ¹⁰B，其结构式为

其合成路线为：

具体的制备方法包括以下步骤：

(1)[¹⁰B]-5-硼¹⁰二羟基-苯并呋咱-1-氧化物的合成：在反应器中加入氢氧化钾22g和体积浓度95％的乙醇250ml，搅拌溶解，再加入对-硼二羟基-1-硝基-2-氨基-苯41g，搅拌加热溶解，10℃以下缓慢滴加0℃的体积浓度为12％的次氯酸钠溶液359ml，滴加完毕继续搅拌30min，抽滤得滤饼，滤饼用蒸馏水洗涤，每次用220ml蒸馏水，洗涤2次，抽干，真空干燥后，用体积浓度75％的乙醇55ml重结晶，得到35.5g橙黄色针状结晶，即是[¹⁰B]-5-硼¹⁰二羟基-苯并呋咱-1-氧化物，收率为89.5％，mp:72-73℃。

(2)[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧化合物的合成：在反应器中加入[¹⁰B]-5-硼¹⁰二羟基-苯并呋咱-1-氧化物27.2g、乙醇120ml和水40ml，搅拌乳化后，缓慢加入重量浓度为65％的氰氨基钠53g，加完后，待反应物反应升温至38-42℃，再加热至61℃，在该温度下搅拌反应1.5h后，冷却至5℃以下，固体析出完全，抽滤，滤液中加入冰醋酸25ml，析出金红色产物，过滤得滤饼，滤饼用乙醇重结晶，抽干，真空干燥，得到橙黄色片状结晶即为[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧化合物(简写为¹⁰BABD)29.9g，收率为84.1％，纯度为99.3％。

一种靶向抗恶性肿瘤的复合物，其特征在于，该复合物为[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧·[聚一氟化二碳](简写为¹⁰BABD·(¹²C₂F)_n)，分子式为C₇H₈N₄O₄ ¹⁰B(¹²C₂F)_n。

其具体的制备方法包括以下步骤：(1)将聚一氟化二碳(简称为(¹²C₂F)_n)15g，先用玛瑙球球磨机磨成粒度为5-100μm的细小颗粒，再转入分子气流粉碎机内粉碎成100-400nm的微粒，作为药物分子的慢化剂和保护剂；(2)取[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧化合物(即¹⁰BABD)29.9g用上述(1)的方法粉碎成粒度为100-400nm的微粒；(3)取上述纳米级(¹²C₂F)_n10g、纳米级¹⁰BABD28g，在混合机中充分混合均匀后，转入石英罐中，送微型中子源反应堆，从实验孔道引出堆外的单能热中子束辐照装置(NR)中进行辐照19h后取出，即制备成：[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧·[聚一氟化二碳]复合物，然后吸附在吐温-80表面制成稳定的水性分散体，立即分装于5ml无色透明中性药用含铍(Be)玻璃管型瓶中，1g/支装，压盖(内盖用丁基胶塞，外盖用金属铍)密封，保存于锆合金不锈钢制成的容器内，供动物肿瘤模型试验用。

本发明在使用时，以每支加2-4ml0.9％生理盐水，稀释成混悬液，即可服用。

本发明所述药物经多次实验，具有很好的治疗效果，相关的动物实验资料如下：

一、¹⁰BABD·(¹²C₂F)_n对抗血管生成试验

鸡胚尿囊膜法

在鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成早期，机体免疫系统尚未完全建立，因此对各种异物几乎不发生排斥反应，便于将含药物的载体置于其表面，观察本品对血管生成的影响。

操作步骤如下：

1、将新鲜受精的白皮来航鸡种蛋，气室端朝上，置于37℃，60％湿度的恒温室中孵育，每日早晚各转动一次，并用检卵灯观察鸡胚发育情况。

2、孵育七天后，在检卵灯下寻找发育良好的鸡胚20只，每组10只，分为两组，以甲醛稀释液(1:4000)清洗种蛋外壳，空气晾干，75％乙醇消毒鸡蛋外壳，之后垂直静置数分钟。

3、小心将鸡胚气室端去壳，剥去外层卵壳膜，不要破坏内层卵壳膜。

4、在鸡胚内层卵壳膜内的中心的血管处放置药用级甲基纤维素盘，加入¹⁰BABD·(¹²C₂F)n，用1g×1支以0.9％的生理盐水4ml稀释后的混悬液，每只鸡胚0.2ml，空白对照组加入同体积的生理盐水0.2ml作为对照。

5、灭菌的透明胶带封闭窗口，在7-8％的CO₂细胞培养箱(模拟缺乏氧环境下癌细胞的增殖条件)中37℃继续孵育72h后观察结果为：给药组鸡胚绒毛囊膜上血管网中，在加入载体和受试药物¹⁰BABD·(¹²C₂F)n的部位出现直径≥5mm的无血管空斑，判定为阳性，有强拮抗血管生成活性作用。而空白对照组在加入载体和0.2ml的0.9％生理盐水的部位血管生长良好，未出现无血管空斑，判定为阴性。

二、化学物质诱发性动物肿瘤模型试验

¹⁰BABD·(¹²C₂F)n对抗α-苯并芘诱发的动物肺腺癌模型试验

人及动物肺部是α-苯并芘诱发的靶器官，小鼠肺部及肝微粒体中芳烃羟化酶(AHH)对芳烃有代谢作用，肺中此酶的活性是肝中的10倍，肺中AHH活性高，是肺组织对α-苯并芘敏感的原因。本模型采用A/J小鼠，A/J小鼠属于对苯并芘诱发肺腺癌的敏感株，用此模型检测本发明抗肺癌疗效，周期短，操作简单。

操作步骤如下：1、取A/J小鼠，体重16-18g，每组20只，雌雄各半，分两组，即治疗组和空白对照组；2、一次量腹腔注射α-苯并芘100mg/kg(溶解在玉米油或者麻油中)；3、α-苯并芘处理后第二天，治疗组取¹⁰BABD·(¹²C₂F)n4g×4支，以每支4ml0.9％的生理盐水稀释成混悬液，分别腹腔注射，按照1g小鼠体重注射10mg药品，间隔1日后再重复一次，共注射两次，空白对照组腹腔注射同体积的0.9％生理盐水，共注射两次；4、经α-苯并芘和¹⁰BABD·(¹²C₂F)n处理6个月后，以颈椎脱臼法处死动物，取出肺用Bouin液(饱和三硝基苯酚75ml、40％甲醛25ml、冰醋酸5ml)固定，24-48h后观察结果：(1)空白对照组肺组织呈黄色，生瘤病灶呈白色表面隆起，肉眼可见数目繁多，直径≥2mm的瘤结节，作病理检查时，在显微镜下可见到腺癌由新生的立方和柱状细胞构成，倾向于形成纤维基质支持的腺结构，核可变大或者不规则，含有明显的核仁，胞质中可见粘蛋白。瘤结节多发生在肺外周，呈弥漫型，侵犯肺叶的大部分波及两侧肺，表现为周围型肺实质肿块，确定肿瘤性质为肺腺癌；(2)经¹⁰BABD·(¹²C₂F)n处理后的治疗组肺组织呈黄色，肉眼和显微镜下观察不到白色表面隆起的生瘤病灶

三、自发性动物肿瘤模型试验

自发性动物肿瘤模型(即实验动物未经任何有意识的人工处置，在自然条件下所发生的动物肿瘤模型)。

1、乳腺癌模型试验

乳腺肿瘤因生长在体表，较易早期发现，因而能够准确的观察它的大小与生长率，便于进行试验。

操作步骤如下：(1)高癌系瑞士种小鼠，出生5-9个月，其左右两侧及乳头部位均可发生肿瘤，每只小鼠中常见一个肿瘤，选择肿瘤生长数目和大小相近(一般选择其肿瘤小者直径2-3mm，大者直径5-6mm)的动物，配对分组，将每只小鼠的乳腺肿瘤全部切除，经组织学检查确诊，然后取1mm直径大小的肿瘤组织，埋于小鼠的一个切除部位的皮下，缝合各伤口。术后，分笼饲养，分为两组，每组20只，雌雄各半。次日，取¹⁰BABD·(¹²C₂F)_n4_g×4支，以每只4ml0.9％生理盐水稀释成混悬液后，按照1g小鼠体重注射10mg药品，分别腹腔注射，间隔1日再重复一次，对照组给以同样体积的0.9％的生理盐水作空白对照试验。(2)取18-26g的C₃H/Re小鼠作受鼠，瘤源取自雄性C₃H/Re小鼠的自发性乳腺癌。在无菌操作下将癌组织剪成约1mm直径的小块，接种于受体腋皮下，待移植的肿瘤长至4-6mm直径，分为两组，每组20只，雌雄各半，采用上述(1)的给药方法进行给药。

疗效观察：乳腺癌动物模型给药开始后，每天观察给药组和对照组肿瘤生长情况(观察新肿瘤和局部复发肿瘤)，记录发生时间和位置，每周用长尺测量皮下肿瘤两次，测定肿块的长和宽，治疗组30日后计算出的结果为：负瘤重相当率＝T/C％＝5.89％；空白对照组负瘤重相当率＝T/C％＝63.9％，且在40-80日内自然死亡率高达95％，而治疗组观察自然生存时间180天死亡率仅3％。

2、AKR白血病模型实验

实验用6-12个月的雌或雄AKR小鼠60只，此时鼠的脾和淋巴结肿大，血象异常。经血液检测确诊为白血病者挑取40只，次日，配对分为两组(即治疗组和空白对照组)每组20只。取¹⁰BABD·(¹²C₂F)_n3g×3支，用0.9％生理盐水每只4ml稀释成混悬液，按照1g小鼠体重注射100mg药品，分别腹腔注射给治疗组小鼠，以同样体积的0.9％的生理盐水分别腹腔注射给空白对照组小鼠，间隔2日后再重复给药一次，至第七天在存活的动物中脾和淋巴结不肿大者为缓解；至第十五天观察：治疗组20只小鼠中有16只白细胞总数降至正常范围内，有4只低于正常值以下，末梢血象中不成熟细胞数均显著减少，血红蛋白水平正常，肿大的淋巴结和脾明显缩小，而空白对照组的小鼠脾和淋巴结及血象均异常。持续观察至动物全部自然死亡，结果为治疗组动物的平均生存期比空白对照组动物的平均生存期延长85天。

四、癌侵袭的动物模型试验

癌侵袭大鼠walker256模型

walker256癌移植于大鼠肌肉后可侵袭邻近骨骼的骨膜、骨质甚至骨髓，导致癌的骨侵袭和骨转移。癌组织可释放一些促进破骨细胞活性的细胞因子，致使骨质吸收和破坏，同样伴发高血钙症，所以用该模型的主要目的是检验¹⁰BABD·(¹²C₂F)_n对walker256癌造成的骨侵袭和骨质溶解的影响。

操作步骤如下：(1)抽取生长旺盛的荷walker256癌大鼠的腹水，计数癌细胞，以磷酸盐缓冲液稀释成含有10⁷/ml个活癌细胞；(2)每组20只100-120g重的wistar大鼠，共两组。每只大鼠右后肢胫骨旁肌肉接种10⁶/0.1ml癌细胞。取¹⁰BABD·(¹²C₂F)_n4g×4支，以每支4ml0.9％生理盐水稀释成混悬液，给治疗组大鼠分别尾静脉注射，按照1g大鼠体重注射120mg药品，空白对照组大鼠分别尾静脉注射同样体积的0.9％的生理盐水作空白对照试验；(3)即刻拍摄大鼠骨骼X-射线片，以左侧胫骨为对照，观察右侧胫骨的骨质溶解等现象，并称大鼠的体重、瘤重，剥离胫骨外肌肉等软组织，称左右胫骨重量；(4)荷瘤侧胫骨以10％甲醛固定、脱钙、切片、HE染色。光镜下观察和评定本发明药物对walker256癌瘤大鼠的骨侵袭和骨质溶解的程度。

结果计算：X-射线片统计对照组walker256荷瘤侧胫骨的骨溶解动物数及骨膜反应的动物出现率分别为90％及55％，病理观察肿瘤侵袭骨皮质及骨髓的动物出现率分别为80％及50％；对皮质骨吸收的动物出现率为90％。100-120gwistar大鼠荷瘤侧胫骨重量528±11.2mg。治疗组walker256荷瘤侧胫骨的骨溶解动物数及骨膜反应的动物出现率分别为6％和3％。病理观察肿瘤侵袭骨皮质及骨髓的动物出现率分别为5％和1％。对皮质骨吸收的动物出现率为2％。100-120gwistar大鼠荷瘤侧胫骨重量512±3.3mg。通过该模型实验说明¹⁰BABD·(¹²C₂F)_n有对抗癌侵袭及抑制骨质溶解的强药理作用。本品治疗癌骨侵袭的同时也缓解骨痛，其机制与以下因素有关：(1)肿瘤组织受药物中¹⁰B核反应释放出的⁴He、β-ray照射后，病灶缩小，减轻了骨膜张力和压力，也减轻了对周围神经的机械性压迫；(2)病灶缩小后，受肿瘤侵蚀的骨骼重新钙化；(3)电离辐射作用影响神经末梢去极化过程，干扰疼痛信号传导，电离辐射作用抑制了缓激肽、前列腺素等疼痛介质的分泌。

由上述试验可证明，由本发明所述的化合物制备的复合物可有效用于防治恶性肿瘤，有实际的临床意义，是治疗恶性肿瘤药物上的创新，社会与经济意义巨大。

Claims

1.一种制备靶向抗恶性肿瘤药物的化合物，其特征在于，该化合物为[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧化合物，分子式为：C₇H₇N₄O₄ ¹⁰B，其结构式为：

2.权利要求1所述的靶向抗恶性肿瘤药物的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)[¹⁰B]5-硼¹⁰二羟基-苯并呋咱-1-氧化物的合成：在反应器中加入氢氧化钾22g和体积浓度95％的乙醇250ml，搅拌溶解，再加入对-硼二羟基-1-硝基-2-氨基-苯41g，搅拌加热溶解，10℃以下缓慢滴加0℃的体积浓度为12％的次氯酸钠溶液359ml，滴加完毕继续搅拌30min，抽滤得滤饼，滤饼用蒸馏水洗涤，抽干，真空干燥后，用体积浓度75％的乙醇55ml重结晶，得到橙黄色针状结晶的5-硼¹⁰二羟基-苯并呋咱-1-氧化物；

(2)[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧化合物的合成：在反应器中加入[¹⁰B]-5-硼¹⁰二羟基-苯并呋咱-1-氧化物27.2g、乙醇120ml和水40ml，搅拌乳化后，缓慢加入重量浓度为65％的氰氨基钠53g，加完后，待反应物反应升温至38-42℃，再加热至61℃，在该温度下搅拌反应1.5h后，冷却至5℃以下，待固体析出完全，抽滤，滤液中加入冰醋酸25ml，析出金红色产物，过滤得滤饼，滤饼用乙醇重结晶，抽干，真空干燥，得到橙黄色片状结晶的[¹⁰B]6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧化合物。

3.一种靶向抗恶性肿瘤的复合物，其特征在于，该复合物为[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧·[聚一氟化二碳]，分子式为C₇H₇N₄O₄ ¹⁰B·(¹²C₂F)_n。

4.权利要求3所述靶向抗恶性肿瘤的复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将聚一氟化二碳，磨成粒度为5-100μm的颗粒，再粉碎成100-400nm的微粒；

(2)将[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧化合物粉碎成粒度为100-400nm的微粒；

(3)取所述的聚一氟化二碳微粒10g和[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧化合物微粒28g，充分混合均匀后，转入石英罐中，送微型中子源反应堆，从实验孔道引出堆外的单能热中子束辐照装置中进行辐照19h后取出，即制备成[¹⁰B]-6-硼¹⁰二羟基-3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氧·[聚一氟化二碳]复合物，然后吸附在吐温-80表面制成稳定的水性分散体，立即分装于5ml无色透明中性药用含铍玻璃管型瓶中，1g/支装，压盖密封，保存于鋯合金不锈钢制成的容器内。