CN102600474A - 聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚-l-赖氨酸嵌段聚合物在递送药物或基因中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于肿瘤靶向递送与缓释给药系统纳米药物制剂技术领域，具体涉及聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚-L-赖氨酸嵌段聚合物作为递送药物或基因载体在医药中的应用。该聚合物可以包载活性物质用于制备肿瘤靶向的抗肿瘤药物，所述的聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚-L-赖氨酸的粒径为5-10000nm，所述的聚乙二醇，聚乳酸羟基乙酸和聚-L-赖氨酸的摩尔比为0.1-50∶0.1-100∶1-100；所述的活性物质为基因或药物；所述的基因为miRNA、siRNA、dsRNA或shRNA；所述的药物为盐酸表阿霉素、氟尿嘧啶、顺铂、盐酸米托蒽醌、甲氨蝶呤、长春新碱、紫杉醇、喜树碱或环磷酰胺。
Description
技术领域
本发明属于肿瘤靶向递送与缓释给药系统纳米药物制剂技术领域。具体是聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚-L-赖氨酸(PEG-PLGA-PLL)嵌段聚合物作为基因或药物载体在医药中的应用。
发明背景
临床上应用化疗药物治疗恶性肿瘤在许多情况下获得了一定的成功，但是，同时也存在着一些严重的问题。一个主要的问题是化疗药物普遍缺乏选择性，导致严重的剂量依赖性毒副作用的产生，极大地限制了化疗药物的临床治疗效果。另一个问题是肿瘤细胞抗药性的快速出现。因此，对于能特异性靶向肿瘤细胞并造成正常细胞最小损伤的治疗方法的开发，具有非常重要的意义和广阔的应用前景。
近几十年来，靶向递送载体由于其独特的优势，能有效的提高治疗效果，而备受国内外关注。尤其以可生物降解的嵌段聚合物为载体的递送系统得到的迅速的发展，靶向递送载体可以有效的降低药物的毒副作用，延迟药物在体内的代谢，改善治疗效果。许多像聚乳酸羟基乙酸、聚乳酸羟基乙酸-羟基乙酸等生物降解材料已经广泛的被用做药物、基因和成像试剂的递送载体，取得了一定的效果。
段友容等人发明了“聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸酸-聚赖氨酸(简称mPEG-PLGA-PLL)纳米递送系统、制备方法及其应用”(CN 200910247576.7)。所述的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-聚赖氨酸嵌段聚合物的分子量为1.0×103-9.0×106，聚乙二醇单甲醚/乳酸的摩尔比为1-50∶50-100，乳酸/羟基乙酸的摩尔比为1-100∶1-100，羟基乙酸/赖氨酸的摩尔比为50-100∶1-50；所述的纳米粒粒径在10-1000nm；所述的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸被精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸修饰并包载米托蒽醌；所述的靶向基团是精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸。
多数纳米载体在体内未到达靶目标前即被巨噬细胞识别吞噬，而达不到治疗效果；由此国内外许多学者，将聚乙二醇单甲醚(mPEG)附着在载体的表面，mPEG的长链能使纳米载体有效的逃避网状内皮系统的吞噬，从而达到长循环的目的，并且取得 了较好的治疗效果。可降解聚合物聚乳酸羟基乙酸(PLGA)，在体内可以缓慢降解，可以使药物随材料的降解被缓慢释放出来，从而达到较长时间的治疗效果。阳离子多聚物聚左旋赖氨酸PLL，生物相容性好，降解产物为人体所必需的氨基酸。多聚左旋赖氨酸复合物仍带正电荷，其结构灵活、稳定、易调整其分子量，可以通过引入侧链和特异靶向性基团来修饰多聚物骨架，进而调整和改善载体的性能，达到缓释药物的目的。将PLGA和PLL结合可以发挥两者的优点。因此以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-聚-L-赖氨酸(mPEG-PLGA-PLL)嵌段聚合物为骨架的纳米给药系统是一种非常优异的缓释药物载体。
给药系统的靶向能力是将活性物质准确递送至靶点的关键，以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-聚-L-赖氨酸(mPEG-PLGA-PLL)嵌段聚合物为骨架的纳米给药系统可以很好的解决这个问题。研制的纳米载体系统直径可保持在5nm-10000nm。因为正常组织周围的血管没有缝隙，而肿瘤组织周围的血管有100nm左右的缝隙，所以纳米粒子就会从这些缝隙中渗透出来，并利用增强的渗透保留效应聚集于肿瘤部位，然后攻击癌细胞，但不会损害正常细胞，从而达到被动靶向的效果。将纳米粒采用靶向基团修饰后，靶向基团可以与靶点特异性结合，具有受体介导的靶向给药系统形成的主动靶向效应，使抗肿瘤药物比较准确送到肿瘤细胞中，实现恶性肿瘤的靶向治疗。采用本发明所设计的以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-聚-L-赖氨酸(mPEG-PLGA-PLL)嵌段聚合物为骨架的纳米给药系统，可以同时连接靶向基团和包裹两种以上的活性物质从而达到靶向递送、多重治疗方式结合的目的。
发明内容
本发明的目的是提供一种聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚-L-赖氨酸(PEG-PLGA-PLL)嵌段聚合物的应用。
本发明所要解决的技术问题在于合成合适的载体，使不同的靶向基团能有效地嫁接在载体上，并且包载活性物质，从而有效的将活性物质靶向递送到靶点。
本发明所述的嵌段聚合物mPEG-PLGA-PLL为一系列不同分子量、不同单体比例的材料，其mPEG-PLGA-PLL聚合物分子量为1.0×103-9.0×106，聚乙二醇单甲醚/乳酸的摩尔比为1-50∶50-100，乳酸/羟基乙酸的摩尔比为1-100∶1-100，羟基乙酸/赖氨酸的摩尔比为50-100∶1-50；所述的纳米粒粒径在10-1000nm。
本发明所述的聚乙二醇和聚乳酸羟基乙酸的摩尔比为1-50∶1-100，优化的比例 为5-25∶15-60；所述的聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸和聚-L-赖氨酸的摩尔比为1-50∶1-100，优化的比例为5-25∶60-15。
本发明所述的嵌段聚合物材料mPEG-PLGA-PLL的合成方法是采用开环聚合法。合成所用的催化剂包括辛酸亚锡、乳酸锌、氯化亚锡或对甲苯磺酸等。
本发明所述的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-聚-L-赖氨酸(mPEG-PLGA-PLL)的合成方法如下(反应式1)：
(1)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸(mPEG-PLGA)的制备
抽真空加热干燥耐热玻璃管，加入一定摩尔质量比的丙交酯/乙交酯原料(比例为8∶2、7∶3、6∶4、5∶5)，加入占原料总量质量百分比为1％～20％、分子量范围为350～5000的PEG，再加入催化剂，通氮气，加热溶解抽真空，冷却固化抽真空2小时后封管，120-150℃反应8-50h。
(2)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-叔丁氧羰基(mPEG-PLGA-Boc(Z))的制备
一定量mPEG-PLGA溶于干燥有机溶剂，搅拌加入BOC-L-苯丙氨酸(1～15eqv.)、N，N-二环己基碳二亚胺(1～15eqv.)，0～40℃缓慢滴加4-二甲氨基吡啶，氮气保护，室温搅拌1～3天，过滤，碱洗水洗(或透析)，浓缩，加冰甲醇或冰乙醚沉淀出产物，过滤，真空干燥。
(3)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-氨基(PEG-PLGA-NH2)的制备
取mPEG-PLGA-Boc(Z)溶于干燥有机溶剂中，氮气保护，0℃搅拌滴加干燥的三氟乙酸，滴加10～60分钟，继续反应1～3小时，旋蒸去除溶剂与未反应三氟乙酸，残渣溶于有机溶剂，冰甲醇或冰乙醚沉淀，过滤，真空干燥。
(4)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-带保护基的聚赖氨酸(mPEG-PLGA-PZLL)的制备
取PEG-PLGA-NH2溶于干燥有机溶剂中，加入N-羧酸酐(NCA)(1～60eqv.)，氮气保护，室温反应1～5天，浓缩，冰甲醇或冰乙醚沉淀，过滤，真空干燥。
(5)mPEG-PLGA-PLL的制备
取mPEG-PLGA-PZLL溶于定量三氟乙酸中，加入少量体积分数为33％的氢溴酸(HBr)醋酸(Acetic)溶液，0℃反应0.5-8h，冰甲醇或冰乙醚沉淀，过滤，真空干燥。
反应式1.mPEG-PLGA-PLL的合成路线
反应式中r.t.表示室温，2d表示2天，3h表示3小时，BOC-terminated mPEG-PLGA表示聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-叔丁氧羰基，Amino-terminated mPEG-PLGA表示聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-氨基，mPEG-PLGA-b-poly(Nε-(Z)-L-lysine)表示聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-带保护基的聚赖氨酸。
本发明所述的嵌段聚合物mPEG-PLGA-PLL是一种优良的基因或药物载体包载活性物质用于制备肿瘤靶向的抗肿瘤药物，，所述的活性物质为基因或药物；所述 的基因为miRNA(microRNA，微RNA)siRNA(small interfering RNA，小干扰RNA)，dsRNA(double-stranded RNA，双链RNA)或shRNA(short hairpin RNA，短发卡RNA)；所述的药物为盐酸表阿霉素、氟尿嘧啶、顺铂、盐酸米托蒽醌、甲氨蝶呤、长春新碱、紫杉醇、喜树碱或环磷酰胺。
本发明中所述的用于制备肿瘤靶向的抗肿瘤药物中，所述的抗肿瘤药物为治疗白血病、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌或肾癌的药物。换言之是一种治疗白血病、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌或肾癌的药物。
可以用于制备抗肿瘤药物。利用这种嵌段聚合物材料包裹基因或药物，在机械搅拌、超声、高压乳匀机作用下制备缓释纳米粒，粒径在1nm-10000nm以下可控(优选为10nm-1000nm)，表面光滑，均匀度好，颗粒规则无粘连，再分散性好，载药量和包封率高，可用于制备静脉或肌肉注射或口服给药的缓释纳米粒。制备的纳米粒可以分散在固体、半固体或溶液中。优选的是制成注射给药的药物制剂形式，尤其是供静脉注射用。
本发明所述的PEG-PLGA-PLL嵌段聚合物为骨架的载基因或药物微纳米粒系统，可以通过以下制备方法制备：
(1)溶剂扩散法：取8mg嵌段聚合物材料和10nmoL基因或1mg药物溶于500μL乙醇溶剂中，将上述溶液搅拌着滴入5mL的浓度为1％的F68水分散介质中，加压挥发去除丙酮，即得纳米粒溶液。
(2)乳化-溶剂蒸发法：取10mg嵌段聚合物材料和10nmoL基因或3mg药物溶于600μL甲醇和三氯甲烷混合溶剂中，加入4mL浓度为1％的含F68的水分散介质中，超声乳化，乳液在室温下搅拌4h。挥尽有机溶剂，即得纳米粒溶液。
(3)薄膜水化法：取8mg嵌段聚合物材料和10nmoL基因或3mg药物溶于600μL二氯甲烷溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入6mL的水溶液进行水化，室温下搅拌0.5-6h，即得纳米粒溶液。
(4)透析法：取8mg嵌段聚合物材料和10nmoL基因或1mg药物溶于300μL水，二甲基甲酰胺(DMF)或二甲亚砜(DMSO)溶液中，将搅拌均匀的溶液在搅拌的条件下滴入5mL水中，之后将溶液装入透析袋(截留分子量为3000-10000)中透析3-72小时，透析除去有机溶剂，即得纳米粒溶液。
(5)乙醇注入法：取6mg嵌段聚合物材料和10nmoL基因或1mg药物溶于乙醇 中，在搅拌条件下，用针管注入水中，搅拌2h，随后旋转蒸发除去乙醇，即得纳米粒溶液。
(6)采用界面沉淀法制备：取8mg嵌段聚合物材料和10nmoL基因或0.4mg药物溶于丙酮溶剂中，在一定搅拌速度下，将上述溶液注入聚乙烯醇(PVA)溶液，加压挥发去除丙酮，即得纳米粒混溶液。
同时还可将包载不同药物的纳米递送载体制备成不同类型的胶囊剂、片制剂、丸剂、散剂、颗粒剂、滴丸剂和膜剂等。
本发明所述的PEG-PLGA-PLL纳米给药系统的制备方法，其特征在于所用的材料是PEG-PLGA-PLL，其摩尔浓度为0.001-10000M。
本发明所述的PEG-PLGA-PLL纳米给药系统的制备方法，其特征在于所包裹的药物是基因或抗肿瘤化疗药物，其摩尔浓度为0.001-10000μM。
本发明所述的PEG-PLGA-PLL纳米给药系统的制备方法，其特征在于所用的超声强度，其范围为10-1000W。
本发明所述的PEG-PLGA-PLL纳米给药系统的制备方法，其特征在于所用的透析袋截留分子量，其范围为100-10000。
本发明所述的PEG-PLGA-PLL纳米给药系统的制备方法，其特征在于所述的水分散介质为右旋糖苷40，右旋糖苷70、普朗尼克F68或聚乙烯醇PVA等各种适合于制备纳米粒的表面活性剂，分散介质浓度为0.01-20％(w/v)。
本发明所述的PEG-PLGA-PLL纳米给药系统的制备方法，其特征在于所述的有机溶剂包括乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙醇、二甲亚砜和二甲基甲酰胺等各种适合于制备纳米粒的有机溶剂。
本发明所述的PEG-PLGA-PLL嵌段聚合物纳米给药载体系统，其特征是在药物载体方面的应用包括对药物的递送、长循环、可生物降解、缓控释、被动靶向、主动靶向、运送活性物质、肿瘤治疗与诊断、超声显影、逆转肿瘤细胞的耐药特性及对疾病的诊断和治疗。所述的给药系统在制备治疗相应疾病药品中的给药途径包括：注射、口服和粘膜给药。
本发明所述的PEG-PLGA-PLL纳米递送系统的制备方法，其特征在于可以制备成冻干剂保存和应用，冻干支架剂包括海藻糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、右旋糖苷、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇等，支架剂含量为0.01-20％(w/v)。
本发明制备方法简便，适于大规模生产，特别适应于制备肿瘤靶向的抗肿瘤药纳 米粒给药系统。
本发明所述的mPEG-PLGA-PLL嵌段聚合物为骨架的纳米给药系统，所制备的载药纳米粒对肿瘤耐药具有逆转或者降低耐药的功能。
附图说明
图1粒径分布图
ADM-mPEG-PLGA-PLL纳米粒(A)，5Fu-mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒(B)，CDDP-mPEG-PLGA-hrEGF纳米粒(C)，DHAQ-mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒(D)，EGFR-siRNA/mPEG-PLGA-PLL纳米粒(E)，VEGF-siRNA/mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒(F)，BCSG1-siRNA/mPEG-PLGA-PLL-La纳米粒(G)，hTERT-miRNA/mPEG-PLGA-PLL纳米粒(H)，HIF-1α-miRNA/mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒(I)
图2载药物纳米粒的毒性实验
ADM-mPEG-PLGA-PLL-Glu纳米粒对Huh-7肝癌细胞的毒性图(A)，5Fu-mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒对SGC-7901胃癌细胞的毒性图(B)，CDDP-mPEG-PLGA-PLL-hrEGF纳米粒对SKOV3卵巢癌细胞的毒性图(C)，DHAQ-mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒对MDA-MB-231乳腺癌细胞的毒性图(D)，EGFR-siRNA/mPEG-PLGA-PLL纳米粒对MDA-MB-231乳腺癌细胞的干扰图，a代表空白组，b代表EGFR-siRNA/LipofectamineTM2000，c代表EGFR-siRNA/mPEG-PLGA-PLL纳米粒(E)，VEGF-siRNA/mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒对SMMC-7721肝癌细胞的干扰图，a代表空白组，b代表VEGF-siRNA/LipofectamineTM2000，c代表VEGF-siRNA/mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒(F)，BCSG1-siRNA/mPEG-PLGA-PLL-La纳米粒对MCF-7乳腺癌细胞的干扰图，a代表空白组，b代表BCSG1-siRNA/LipofectamineTM2000，c代表BCSG1-siRNA/mPEG-PLGA-PLL-La纳米粒(G)，hTERT-miRNA/mPEG-PLGA-PLL纳米粒对PLC肝癌细胞的干扰图，a代表空白组，b代表hTERT-siRNA/LipofectamineTM2000，c代表hTERT-siRNA/mPEG-PLGA-PLL纳米粒(H)，HIF-1α-miRNA/mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒对SW-620结肠癌细胞的干扰图，a代表空白组，b代表HIF-1α-miRNA/LipofectamineTM2000，c代表HIF-1α-miRNA/mPEG-PLGA-PLL纳米粒(I)。
图3载药物或基因纳米粒对荷瘤裸鼠治疗实验
ADM-mPEG-PLGA-PLL-Glu纳米粒(A)对荷Huh-7肝癌裸鼠、5Fu-mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒(B)对荷SGC-7901胃癌细胞裸鼠、CDDP-mPEG-PLGA-hrEGF纳米粒(C)对荷SKOV3卵巢癌裸鼠、DHAQ-mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒(D)对荷MDA-MB-231乳腺癌裸鼠、EGFR-siRNA/mPEG-PLGA-PLL纳米粒(E)对荷MDA-MB-231乳腺癌裸鼠、VEGF-siRNA/mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒(F)对荷SMMC-7721肝癌裸鼠、BCSG1-siRNA/mPEG-PLGA-PLL-La纳米粒(G)对荷MCF-7乳腺癌裸鼠、hTERT-miRNA/mPEG-PLGA-PLL纳米粒(H)对荷PLC肝癌裸鼠、HIF-1α-miRNA/mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒(I)对荷SW-620结肠癌裸鼠的肿瘤生长曲线图。
符号说明
图1中ADM代表盐酸表阿霉素，5Fu代表氟尿嘧啶，CDDP代表顺铂，DHAQ代表盐酸米托蒽醌，EGFR-siRNA代表表皮生长因子受体小干扰RNA，VEGF-siRNA代表血管内皮生长因子小干扰RNA，BCSG1-siRNA代表乳腺癌特异基因1小干扰RNA，hTERT-miRNA代表人端粒酶逆转录酶微小RNA，HIF-1α-miRNA代表人缺氧诱导因子-α微小RNA，Diam代表粒径。
图2中，The viability of the cells代表细胞的活性，Concentration代表浓度。LipofectamineTM2000代表脂质体
图3中Saline代表生理盐水，The tumor volumes代表肿瘤体积，Time代表时间，days代表天数。
具体实施方式
本发明描述了用于药物/基因递送载体以及制备方法和应用。本发明并不限于本文所公开的具体的构型、方法步骤和物质，因为这样的构型、方法和物质可以多少发生变化。本文所使用的术语仅仅是用于描述具体实施方案的目的并且并不打算进行限制，因为本发明的范围将仅仅受到所附权利要求及其等同内容的限制。
说明书和所附权利要求书，除非上下文另外清楚地加以描述，单数形式的“一种”和“所述”均包括复数的相应内容。
下面以实施例对本发明加以进一步的说明，但是不限制本发明的内容。
实施例1、聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-聚-L-赖氨酸(mPEG-PLGA-PLL)的合成
(1)叔丁基羧基保护氨基的氨基醇的制备：3-氨基-1-丙醇溶于水，加入碳酸氢钠搅拌。将溶液冷却至5℃，然后缓慢加入冷的溶于对二恶烷的二碳酸二叔丁酯(Boc-酸酐)溶液。混合溶液在0℃搅拌反应1小时后室温过夜反应。反应液中加入蒸馏水，乙酸乙酯萃取水相2次。有机相用饱和碳酸氢钠水洗2次。合并水相酸化调节pH值到1再用乙酸乙酯萃取3次。合并所有有机相，干燥，浓缩，提纯。
(2)催化剂的制备：二乙基锌与3-氨基(N-Boc)-1-丙醇在甲苯溶液中室温反应8小时。过硅胶柱提纯，真空干燥。
(3)聚乳酸羟基乙酸-叔丁氧羰基(PLGA-Boc(Z))的制备：抽真空加热干燥耐热玻璃管，加入17.28g丙交酯与3.48g乙交酯原料(摩尔比为8∶2)，加入催化剂，通氮气，加热溶解抽真空，冷却固化抽真空2小时后封管，150℃反应40h。
(4)聚乳酸羟基乙酸-氨基(PLGA-NH2)的制备：取2.6g PLGA-Boc(Z)溶于干燥有机溶剂中，氮气保护，0℃搅拌滴加5.2ml干燥的三氟乙酸，滴加30分钟，继续反应2小时，旋蒸去除溶剂与未反应三氟乙酸，残渣溶于有机溶剂，饱和NaHCO3溶液和水各洗涤3次，收集有机相，无水硫酸镁干燥，浓缩，冰乙醚沉淀，过滤，真空干燥。
(5)聚乳酸羟基乙酸-[(N-苄氧羧基)-聚-L-赖氨酸](PLGA-PZLL)的制备：取2g PLGA-NH2溶于干燥有机溶剂中，加入1.6g氨基酸环内酸酐(NCA)，氮气保护，室温反应3天，浓缩，冰乙醚沉淀，过滤，真空干燥。
(6)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-[(N-苄氧羧基)-聚-L-赖氨酸](mPEG-PLGA-PZLL)的制备：1g羧基化的聚乙二醇单甲醚、1.8g PLGA-PZLL溶于干燥有机溶剂中，搅拌加入0.83g 1，3-二环己基碳二亚胺，0.08g 4-二甲氨基吡啶，氮气保护，室温搅拌2天，过滤，饱和NaHCO3溶液和水各洗涤3次，收集有机相，无水硫酸镁干燥，浓缩，加冰乙醚沉淀出产物，过滤，真空干燥。
(7)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸羟基乙酸-聚(L-赖氨酸)(mPEG-PLGA-PLL)的制备：取1g mPEG-PLGA-PZLL溶于3ml三氟乙酸中，加入5ml体积分数为33％的氢溴酸(HBr)醋酸溶液，0℃反应1h，冰乙醚沉淀，过滤，真空干燥。
实施例3接枝靶向基团
(1)含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽(cRGD)的接枝：
取400mg mPEG-PLGA-PLL溶于二甲亚砜中，随后加入46mg cRGD和27mg N，N″-羰基二咪唑(CDI)，氮气保护下室温搅拌反应4小时。反应结束后将溶液置于透析袋中透析24小时得mPEG-PLGA-PLL-cRGD，随后冻干保存。
(2)叶酸(Fa)的接枝：
取28mg Fa溶于二甲亚砜中，加入0.1g共聚物mPEG-PLGA-PLL，再加入30mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，氮气保护下搅拌反应4小时。去离子水透析，冻干得到mPEG-PLGA-PLL-Fa，密封、备用。
(3)表皮生长因子受体抗体(EGFRab)的接枝：
将5mgEGFRab溶于二甲基甲酰胺中，加入20mg CDI搅拌，然后加入0.1g共聚物mPEG-PLGA-PLL，氮气保护下搅拌反应4小时，之后透析，然后冻干得到mPEG-PLGA-PLL-EGFRab，密封、备用。
(4)前列腺特异性抗原抗体(PSAab)：
将5mgPSAab溶于二甲亚砜中，加入20mg EDC和20mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)搅拌，然后加入0.5g共聚物mPEG-PLGA-PLL，氮气保护下搅拌反应24小时，之后透析，然后冻干得到mPEG-PLGA-PLL-PSAab，密封、备用。
(5)人表皮生长因子(hrEGF)：
将3mg hrEGF溶于二甲基甲酰胺中，加入20mg EDC和20mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)搅拌，然后加入0.5g共聚物mPEG-PLGA-PLL，氮气保护下搅拌反应24小时，之后透析，然后冻干得到mPEG-PLGA-PLL-hrEGF，密封、备用。
(6)铁蛋白(Trf)的接枝：
将2mgTrf溶于二甲亚砜或二甲基甲酰胺中，加入10mg EDC和10mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)搅拌，然后加入共聚物0.1g mPEG-PLGA-PLL，氮气保护下搅拌反应4小时，之后透析，然后冻干得到mPEG-PLGA-PLL-Trf，密封、备用。
(7)半乳糖(Glu)的接枝：
将4mg Glu溶于二氯甲烷和甲醇的混合液中，加入18mg CDI搅拌，然后加入共聚物0.3g mPEG-PLGA-PLL，氮气保护下搅拌反应24小时，冰乙醚沉淀，然后冻干沉淀物得到mPEG-PLGA-PLL-Glu，密封、备用。
(8)乳糖酸(La)的接枝：
将4mg La溶于二氯甲烷和丙酮中，加入18mg EDC和10mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)或CDI搅拌，然后加入共聚物0.3g mPEG-PLGA-PLL，氮气保护下搅拌反应24小时，之后透析，然后冻干得到mPEG-PLGA-PLL-La，密封、备用。或将4mg La溶于二甲亚砜中，加入20mg N，N″-羰基二咪唑(CDI)，搅拌，然后加入共聚物0.3g mPEG-PLGA-PLL，氮气保护下搅拌反应24小时，之后透析，然后冻干得到 mPEG-PLGA-PLL-La，密封、备用。
实施例2、包载阿霉素(ADM)的mPEG-PLGA-PLL-Glu纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-Glu溶于400μL二氯甲烷或乙酸乙酯中，加入40μL浓度为10mg/mL的ADM水溶液，超声乳化后，再加入4.4mL 1wt％的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得ADM-mPEG-PLA-PLL-Glu纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用薄膜乳化法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-Glu和0.4mg ADM溶于400μL丙酮溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL水溶液，室温下搅拌3h，即得ADM-mPEG-PLA-PLL-Glu纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用透析法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-Glu溶于3mL二甲亚砜或二甲基甲酰胺溶剂中，加入0.4mg ADM溶液，搅拌均匀；随后将有机溶液在搅拌的条件下滴入水中，之后将溶液装入透析袋中透析48h，除去有机溶剂；即得ADM-mPEG-PLA-PLL-Glu纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用界面沉淀法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-Glu和0.4mg ADM溶于400μL丙酮溶剂中，在一定搅拌速度下，将上述溶液注入4mL浓度为2wt％聚乙烯醇(PVA)溶液，加压挥发去除丙酮，即得ADM-mPEG-PLA-PLL-Glu纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm(图1-A)。
实施例3、包载5-氟尿嘧啶(5Fu)的mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-cRGD溶于400μL乙酸乙酯溶剂中，加入40μL浓度为20mg/mL的5-氟尿嘧啶(5Fu)溶液，超声乳化后，再加入4.4mL 2wt％的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm(图1-B)。
实施例4、包载顺铂(CDDP)的mPEG-PLGA-PLL-hrEGF纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取10mg mPEG-PLA-PLL溶于400μL三氯甲烷，加入0.6mg的CDDP溶液，超声乳化后，再加入4.4mL 2wt％的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得纳米粒混悬液。随后加EDC和NHS加入纳米粒溶液中，再加入1.2mg/ml的hrEGF水溶液，氮气保护下磁力搅拌4h，随后超滤离心得到CDDP-mPEG-PLA-PLL-hrEGF纳米粒。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm (图1-C)。
采用薄膜乳化法制备：取14mg mPEG-PLA-PLL-hrEGF和0.4mg CDDP溶于400μL丙酮溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL水溶液，室温下搅拌5h，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用透析法制备：取4mg mPEG-PLA-PLL-hrEGF溶于3mL二甲亚砜溶剂或二甲基甲酰胺溶剂中，加入40μL浓度为20mg/mL的CDDP二甲亚砜溶液中，搅拌均匀；随后将有机溶液在搅拌的条件下滴入水中，之后将溶液装入透析袋中透析48h，除去有机溶剂；即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
实施例5、包载盐酸米托蒽醌(DHAQ)药物的mPEG-PLA-PLL-cRGD纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-cRGD溶于400μL二氯甲烷或三氯甲烷或乙酸乙酯溶剂中，加入40μL浓度为10mg/mL的DHAQ水溶液，超声乳化后，再加入4.4mL 1wt％的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用薄膜乳化法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-cRGD和0.4mg DHAQ溶于400μL丙酮溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL水溶液，室温下搅拌3h，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用透析法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-cRGD溶于3mL二甲亚砜溶剂中，加入0.4mg DHAQ，搅拌均匀；随后将有机溶液在搅拌的条件下滴入水中，之后将溶液装入透析袋中透析48h，除去有机溶剂；即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm之间。
采用界面沉淀法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-cRGD和0.4mg DHAQ溶于400μL丙酮或乙醇溶剂中，在一定搅拌速度下，将上述溶液注入4mL浓度为2wt％聚乙烯醇(PVA)溶液，加压挥发去除丙酮，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm(图1-D)。
实施例6、包载长春新碱药物的mPEG-PLA-PLL-Fa纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取10mg mPEG-PLA-PLL-Fa溶于500μL二氯甲烷中，加入40μL浓度为10mg/mL的甲氨蝶呤水溶液，超声乳化后，再加入4.4mL 1wt％的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用薄膜乳化法制备：取10mg mPEG-PLA-PLL-Fa和0.4mg长春新碱溶于500μL丙酮溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入5mL水溶液，室温下搅拌3h，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用透析法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-Fa溶于3mL二甲亚砜溶剂中，加入1mg长春新碱，搅拌均匀；随后将有机溶液在搅拌的条件下滴入水中，之后将溶液装入透析袋中透析48h，除去有机溶剂；即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm之间。
采用界面沉淀法制备：取10mg mPEG-PLA-PLL-Fa和0.5mg长春新碱溶于400μL丙酮或乙醇溶剂中，在一定搅拌速度下，将上述溶液注入5mL浓度为2wt％聚乙烯醇(PVA)溶液，加压挥发去除丙酮，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
实施例7、包载甲氨蝶呤药物的mPEG-PLA-PLL-PSAab纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-PSAab溶于400μL三氯甲烷溶剂中，加入40μL浓度为10mg/mL的甲氨蝶呤的0.1mol/L NaOH溶液，超声乳化后，再加入4.4mL 1wt％的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用薄膜乳化法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-PSAab和0.4mg甲氨蝶呤溶于400μL丙酮溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL水溶液，室温下搅拌3h，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用透析法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-PSAab溶于3mL二甲亚砜溶剂中，加入0.4mg甲氨蝶呤，搅拌均匀；随后将有机溶液在搅拌的条件下滴入水中，之后将溶液装入透析袋中透析48h，除去有机溶剂；即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm之间。
采用界面沉淀法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-PSAab和0.4mg甲氨蝶呤溶于400μL丙酮或乙醇溶剂中，在一定搅拌速度下，将上述溶液注入4mL浓度为2wt％聚乙烯醇(PVA)溶液，加压挥发去除丙酮，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
实施例8、包载环磷酰胺药物的mPEG-PLA-PLL-Trf纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取10mg mPEG-PLA-PLL-Trf溶于500μL二氯甲烷或三氯甲烷或乙酸乙酯溶剂中，加入30μL浓度为10mg/mL的环磷酰胺水溶液，超声乳化后， 再加入4.4mL 1wt％的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用薄膜乳化法制备：取10mg mPEG-PLA-PLL-Trf和0.3mg环磷酰胺溶于500μL丙酮溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入5mL水溶液，室温下搅拌3h，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用透析法制备：取10mg mPEG-PLA-PLL-Trf溶于3mL二甲亚砜溶剂中，加入0.4mg环磷酰胺，搅拌均匀；随后将有机溶液在搅拌的条件下滴入水中，之后将溶液装入透析袋中透析48h，除去有机溶剂；即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm之间。
采用界面沉淀法制备：取10mg mPEG-PLA-PLL-Trf和0.3mg环磷酰胺溶于500μL丙酮或乙醇溶剂中，在一定搅拌速度下，将上述溶液注入5mL浓度为2wt％聚乙烯醇(PVA)溶液，加压挥发去除丙酮，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
实施例9、包载紫杉醇药物的mPEG-PLA-PLL-La纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-La溶于400μL二氯甲烷或三氯甲烷或乙酸乙酯溶剂中，加入40μL浓度为10mg/mL的DHAQ水溶液，超声乳化后，再加入4.4mL 1wt％的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用薄膜乳化法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-La和0.4mg DHAQ溶于400μL丙酮溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL水溶液，室温下搅拌3h，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用透析法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-La溶于3mL二甲亚砜溶剂中，加入0.4mg DHAQ，搅拌均匀；随后将有机溶液在搅拌的条件下滴入水中，之后将溶液装入透析袋中透析48h，除去有机溶剂；即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm之间。
采用界面沉淀法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-La和0.4mg DHAQ溶于400μL丙酮或乙醇溶剂中，在一定搅拌速度下，将上述溶液注入4mL浓度为2wt％聚乙烯醇(PVA)溶液，加压挥发去除丙酮，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
实施例10、包载EGFR-siRNA的mPEG-PLGA-PLL纳米粒的制备
采用复乳法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL溶于200μL或1000μL二氯甲烷或乙酸乙酯或二氯甲烷和丙酮的混合溶剂中，加入0.2nmoL或4nmoL EGFR-siRNA溶液，超声乳化(300W或500W，10s×4)，再加入2.2mL或6mL浓度为0.5％或2％的普朗尼克F68水分散介质中，再次超声乳化(300W或500W，10s×4)。然后室温下搅拌0.5-5h除去有机相，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
采用薄膜乳化法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL和0.2nmoL或4nmoL EGFR-siRNA溶于400μL或2000μL丙酮或乙醇溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL或12mL的水溶液，室温下搅拌0.5-6h，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液(图1-E)。
采用透析法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL溶于200μL二甲亚砜或二甲基甲酰胺溶剂中，加入0.4nmoL或者6nmoL EGFR-siRNA，将搅拌均匀的溶液在搅拌的条件下滴入2mL或10mL水中，之后将溶液装入透析袋(截留分子量为7000)中透析3-72小时，除去有机溶剂，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
实施例11、包载VEGF-siRNA的mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL-cRGD和0.2nmoL或4nmoL VEGF-siRNA溶于400μL或2000μL三氯甲烷或丙酮和二氯甲烷的混合溶剂中，加入2.2mL或44mL浓度为0.5％或2％的含聚乙烯醇(PVA)的水分散介质中，超声或高压乳匀乳化，乳液在室温下搅拌2或4h，挥尽有机溶剂，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液(图1-F)。
采用界面沉淀法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL-cRGD和0.2nmoL或4nmoL VEGFR-siRNA溶于400μL或2000μL丙酮溶剂中，在不断的搅拌条件下，将上述溶液注入2.2mL或44mL的浓度为0.5％或2％的PVA水分散介质中，加压挥发去除丙酮，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液液。
采用自组装法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL-cRGD溶于200μL或1000μL水或乙醇溶液中，加入0.4nmoL或8nmoL VEGF-siRNA，将搅拌均匀的溶液在搅拌的条件下滴入2mL或者10mL水中，之后将溶液装入透析袋(截留分子量为3000或7000)中透析3或72小时，除去有机溶剂；即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液
实施例12、包载BCSG1-siRNA的mPEG-PLGA-PLL-La纳米粒的制备
采用复乳法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL-La溶于200μL或1000μL二氯甲烷或乙酸乙酯或二氯甲烷和丙酮的混合溶剂中，加入0.2nmoL或4nmoL BCSG1-siRNA溶液，超声乳化(300W或500W，10s×4)，再加入2.2mL或6mL浓度为0.5％或2％的普朗尼克F68水分散介质中，再次超声乳化(300W或500W，10s×4)。然后室温下搅拌0.5-5h除去有机相，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
采用薄膜乳化法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL-La和0.2nmoL或4nmoL BCSG1-siRNA溶于400μL或2000μL丙酮或乙酸乙酯溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL或12mL的水溶液，室温下搅拌0.5-6h，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
采用透析法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL-La溶于200μL二甲亚砜溶剂中，加入0.4nmoL或者6nmoL BCSG1-siRNA，将搅拌均匀的溶液在搅拌的条件下滴入2mL或10mL水中，之后将溶液装入透析袋(截留分子量为7000)中透析3-72小时，除去有机溶剂，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液(图1-G)。
实施例13、包载hTERT-miRNA的mPEG-PLGA-PLL纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL和0.2nmoL或4hTERT-miRNA溶于400μL或2000μL三氯甲烷或丙酮和二氯甲烷的混合溶剂中，加入2.2mL或44mL浓度为0.5％或2％的含聚乙烯醇(PVA)的水分散介质中，超声或高压乳匀乳化，乳液在室温下搅拌2或4h，挥尽有机溶剂，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
采用界面沉淀法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL和0.2nmoL或4nmoL hTERT-miRNA溶于400μL或2000μL丙酮溶剂中，在不断的搅拌条件下，将上述溶液注入2.2mL或44mL的浓度为0.5％或2％的PVA水分散介质中，加压挥发去除丙酮，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液液。
采用自组装法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL溶于200μL或1000μL水或乙醇溶液中，加入0.4nmoL或8nmoL hTERT-miRNA，将搅拌均匀的溶液在搅拌的条件下滴入2mL或者10mL水中，之后将溶液装入透析袋(截留分子量为3000或7000)中透析3或72小时，除去有机溶剂；即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。(图1-H)
实施例14、包载HIF-1α-miRNA的mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒的制备
采用薄膜乳化法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL-cRGD和0.2nmoL或4nmoL HIF-1α-miRNA溶于400μL或2000μL丙酮或乙酸乙酯溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL或12mL的水溶液，室温下搅拌0.5-6h，即得粒径为1-10000nm的纳米粒 溶液。
采用透析法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL-cRGD溶于200μL二甲亚砜溶剂中，加入0.4nmoL或者6nmoL HIF-1α-miRNA，将搅拌均匀的溶液在搅拌的条件下滴入2mL或10mL水中，之后将溶液装入透析袋(截留分子量为7000)中透析3-72小时，除去有机溶剂，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
采用乳化蒸发法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL-cRGD和0.2nmoL或4nmoL HIF-1α-miRNA溶于400μL或2000μL三氯甲烷或丙酮和二氯甲烷的混合溶剂中，加入2.2mL或44mL浓度为0.5％或2％的含聚乙烯醇(PVA)的水分散介质中，超声或高压乳匀乳化，乳液在室温下搅拌2或4h，挥尽有机溶剂，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
采用界面沉淀法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL-cRGD和0.2nmoL或4nmoL HIF-1α-miRNA溶于400μL或2000μL丙酮溶剂中，在不断的搅拌条件下，将上述溶液注入2.2mL或44mL的浓度为0.5％或2％的PVA水分散介质中，加压挥发去除丙酮，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液液。
采用自组装法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL-cRGD溶于200μL或1000μL水或乙醇溶液中，加入0.4nmoL或8nmoL HIF-1α-miRNA，将搅拌均匀的溶液在搅拌的条件下滴入2mL或者10mL水中，之后将溶液装入透析袋(截留分子量为3000或7000)中透析3或72小时，除去有机溶剂；即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
实施例15、包载药物或基因纳米对不同细胞的毒性或干扰实验
图2-A可知，与游离AMD相比，ADM-mPEG-PLGA-PLL-Glu纳米粒能显著增加对Huh-7肝癌细胞的细胞毒性，表明该纳米粒能提高ADM药物对Huh-7肝癌细胞的治疗效果。
图2-B可知，与游离5Fu相比，5Fu-mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒能有效地提高对SGC-7901胃癌细胞的细胞毒性，表明该纳米粒能有效地提高5Fu药物对SGC-7901胃癌细胞的疗效。
图2-C可知，与游离CDDP相比，CDDP-mPEG-PLGA-hrEGF纳米粒能有效提高药物对SKOV3卵巢癌细胞的毒性，表明该纳米粒能够有效地递送药物到SKOV3卵巢癌细胞内，提高对细胞的疗效。
图2-D可知，与游离DHAQ相比，DHAQ-mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒能有 效地提高药物对MDA-MB-231乳腺癌细胞的毒性，表明该纳米粒能有效地提高药物对细胞的疗效。
图2-E可知，与EGFR-siRNA/LipofectamineTM2000相比，EGFR-siRNA/mPEG-PLGA-PLL纳米粒能有效地干扰MDA-MB-231乳腺癌细胞基因的表达，表明该纳米粒能有效地提高EGFR-siRNA对MDA-MB-231乳腺癌细胞相关基因的表达。
图2-F可知，与VEGF-siRNA/LipofectamineTM2000相比，VEGF-siRNA/mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒能进一步提高对SMMC-7721肝癌细胞的干扰，表明该纳米粒能有效的将VEGF-siRNA递送到细胞浆中，提高对基因的干扰效果。
图2-G可知，与BCSG1-siRNA/LipofectamineTM2000相比，BCSG1-siRNA/mPEG-PLGA-PLL-La纳米粒能有效地干扰MCF-7乳腺癌细胞基因的表达，表明该纳米粒可以有效的将BCSG1-siRNA递送到细胞浆中，提高干扰效果。
图2-H可知，与hTERT-miRNA/LipofectamineTM2000相比，hTERT-miRNA/mPEG-PLGA-PLL纳米粒能有效地干扰PLC肝癌细胞基因的表达，表明该纳米粒可以有效地提高hTERT-miRNA对PLC肝癌细胞基因的干扰效果。
图2-I可知，与HIF-1α-miRNA/LipofectamineTM2000相比，HIF-1α-miRNA/mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒能有效地提高HIF-1α-miRNA对SW620结肠癌细胞干扰的表达，表明该纳米粒可以有效地提高对PLC肝癌细胞基因的干扰效果。
实施例16、载药物或基因纳米粒对荷不同肿瘤裸鼠的治疗效果
图3-A可知，随着治疗时间的延长，与Saline和AMD相比，ADM-mPEG-PLGA-PLL-Glu纳米粒能有效地抑制荷Huh-7肝癌裸鼠肿瘤的生长，表明ADM-mPEG-PLGA-PLL-Glu纳米粒在体内能有效地提高药物对肿瘤的疗效。
图3-B可知，与Saline和5Fu相比，5Fu-mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒能随着治疗时间的延长更有效地提高对荷SGC-7901胃癌裸鼠的治疗效果，其肿瘤的生长速度明显低于注射Saline或ADM的荷瘤裸鼠，表明该纳米粒能有效地提高5Fu药物对荷SGC-7901胃癌裸鼠的治疗效果。
图3-C可知，随着治疗时间的延长，与Saline和CDDP相比，CDDP-mPEG-PLGA-PLL-hrEGF纳米粒能明显抑制荷SKOV3卵巢癌裸鼠的肿瘤生长，表明CDDP-mPEG-PLGA-PLL-hrEGF纳米粒对其具有较好的治疗效果。
图3-D可知，随着治疗时间的延长，与Saline和DHAQ相比，DHAQ-mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒能明显抑制荷MDA-MB-231乳腺癌裸鼠的肿瘤生长，表明DHAQ-mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒对其具有较好的治疗效果。
图3-E可知，随着治疗时间的延长，与Saline相比，EGFR-siRNA/LipofectamineTM2000或EGFR-siRNA/mPEG-PLGA-PLL NPs能够降低荷MDA-MB-231乳腺癌裸鼠肿瘤的生长，且EGFR-siRNA/mPEG-PLGA-PLL NPs抑制肿瘤生长效果更明显，这表明该载体能很好荷载EGFR-siRNA并能有效地控制荷瘤裸鼠的肿瘤生长。
图3-F可知，随着治疗时间的延长，与Saline相比，VEGF-siRNA/Lipofectamine TM2000或VEGF-siRNA/mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒能有效地抑制荷SMMC-7721肝癌裸鼠的肿瘤生长，且VEGF-siRNA/mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒抑制肿瘤生长的效果更明显，表明该纳米粒能高效率的递送VEGF-siRNA到肿瘤部位，进而有效地抑制肿瘤的生长。
图3-G可知，随着治疗时间的延长，与Saline相比，BCSG1-siRNA/Lipofectamine TM2000或BCSG1-siRNA/mPEG-PLGA-PLL-La纳米粒能有效地抑制荷MCF-7乳腺癌裸鼠肿瘤的生长，且BCSG1-siRNA/mPEG-PLGA-PLL-La纳米粒抑制肿瘤生长的效果更显著，表明该纳米粒能有效地递送BCSG1-siRNA到肿瘤部位，从而抑制肿瘤的生长。
图3-H可知，与Saline相比，hTERT-miRNA/LipofectamineTM2000或hTERT-miRNA/mPEG-PLGA-PLL纳米粒能有效地抑制荷PLC肝癌裸鼠的肿瘤生长，且hTERT-miRNA/mPEG-PLGA-PLL纳米粒抑制肿瘤生长的效果更明显，表明该纳米粒能特异性地递送hTERT-miRNA到肿瘤部位，从而有效地抑制肿瘤的生长。
图3-I可知，与Saline相比，HIF-1α-miRNA/LipofectamineTM2000或HIF-1α-miRNA/mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒能有效地抑制荷SW620结肠癌裸鼠肿瘤的生长，且HIF-1α-miRNA/mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒抑制肿瘤生长的效果更明显，表明该纳米粒能特异性地递送HIF-1α-miRNA到肿瘤部位，从而有效地抑制肿瘤的生长。
Claims (4)
1.一种聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚-L-赖氨酸嵌段聚合物为载体包载活性物质用于制备肿瘤靶向的抗肿瘤药物的应用，其特征是所述的聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚-L-赖氨酸的粒径为5-10000nm，所述的聚乙二醇，聚乳酸羟基乙酸和聚-L-赖氨酸的摩尔比为0.1-50∶0.1-100∶1-100；所述的活性物质为基因或药物；所述的基因为miRNA、siRNA、dsRNA或shRNA；所述的药物为盐酸表阿霉素、氟尿嘧啶、顺铂、盐酸米托蒽醌、甲氨蝶呤、长春新碱、紫杉醇、喜树碱或环磷酰胺。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的抗肿瘤药物为治疗白血病、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌或肾癌的药物。
3.如权利要求1所述的应用，其特征是所述的聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚-L-赖氨酸嵌段聚合物为载体包载活性物质用于制备肿瘤靶向的抗肿瘤药物的方法如下：
(1)溶剂扩散法：取适量嵌段聚合物材料和基因或药物溶于少量乙醇溶剂中，将上述溶液搅拌着滴入适量浓度为1％的F68水分散介质中，加压挥发去除丙酮，即得纳米粒溶液；
(2)乳化-溶剂蒸发法：取适量嵌段聚合物材料和基因或药物溶于少量甲醇和三氯甲烷混合溶剂中，加入适量浓度为1％的含F68的水分散介质中，超声乳化，乳液在室温下搅拌挥尽有机溶剂，即得纳米粒溶液；
(3)薄膜水化法：取适量嵌段聚合物材料和基因或药物溶于少量二氯甲烷溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入适量水溶液进行水化，室温下搅拌0.5-6h，即得纳米粒溶液；
(4)透析法：取适量嵌段聚合物材料和基因或药物溶于少量水、二甲基甲酰胺或二甲亚砜溶液中，将搅拌均匀的溶液在搅拌的条件下滴入适量水中，之后将溶液装入截留分子量为3000-10000的透析袋中透析3-72小时，透析除去有机溶剂，即得纳米粒溶液；
(5)乙醇注入法：取适量嵌段聚合物材料和基因或药物溶于乙醇中，在搅拌条件下，用针管注入水中，搅拌2h，随后旋转蒸发除去乙醇，即得纳米粒溶液；所述的聚合物材料同权利要求1所述的聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚-L-赖氨酸阳离子聚合物；所述的基因和药物如权利要求1所述。
4.所述的聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚-L-赖氨酸嵌段聚合物也可化学键合肿瘤靶向基团，使其具有对于肿瘤的主动靶向性。所述靶向基团为精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽(cRGD)、叶酸(Fa)、表皮生长因子受体抗体(EGFRab)、前列腺特异性抗原抗体(PSAab)、人表皮生长因子(hrEGF)、铁蛋白(Trf)、半乳糖(Glu)、乳糖酸(La)。
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