CN102321242A - 聚乙二醇-聚乳酸-聚-l-赖氨酸共聚物、制备方法及作为基因或药物载体的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了聚乙二醇-聚乳酸-聚-L-赖氨酸阳离子聚合物、制备方法及作为基因或药物载体在医药中的应用。通过控制载体粒径大小使其有被动靶向功能。通过用靶向性基团修饰多聚物，使其有主动靶向功能。此载体还有运送活性物质、肿瘤治疗与诊断、超声显影、逆转或降低耐药等功能。能应用于制备抗肿瘤药物靶向制剂；制备逆转或降低肿瘤耐药制剂；制备肿瘤诊断显影试剂；制备脱氧核糖核酸质粒的转染试剂；制备肿瘤治疗用的基因治疗药物制剂；制备用于反义核酸、小干扰核糖核酸(siRNA)转染试剂；制备反义核酸、siRNA、microRNA(微小RNA)治疗用的药物制剂。
Description
技术领域
本发明属于肿瘤靶向递送与缓释给药系统纳米药物制剂技术领域。具体是聚乙二醇-聚乳酸-聚-L-赖氨酸(PEG-PLA-PLL)阳离子聚合物、制备方法及作为基因或药物载体在医药中的应用。
发明背景
临床上应用化疗药物治疗恶性肿瘤在许多情况下获得了一定的成功，但是，同时也存在着一些严重的问题。一个主要的问题是化疗药物普遍缺乏选择性，导致严重的剂量依赖性毒副作用的产生，极大地限制了化疗药物的临床治疗效果。另一个问题是肿瘤细胞抗药性的快速出现。因此，对于能特异性靶向肿瘤细胞并造成正常细胞最小损伤的治疗方法的开发，具有非常重要的意义和广阔的应用前景。
近几十年来，靶向递送载体由于其独特的优势，能有效的提高治疗效果，而备受国内外关注。尤其以可生物降解的聚合物为载体的递送系统得到的迅速的发展，靶向递送载体可以有效的降低药物的毒副作用，延迟药物在体内的代谢，改善治疗效果。许多像聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸等生物降解材料已经广泛的被用做药物、基因和成像试剂的递送载体，取得了一定的效果。
段友容等人发明了“聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚赖氨酸(简称mPEG-PLGA-PLL)纳米递送系统、制备方法及其应用”(CN 200910247576.7)。该专利公开了mPEG-PLGA-PLL阳离子聚合物纳米粒递送系统的制备和其应用，聚合物制备的载体纳米粒可用于负载有机药物、水溶性药物、水不溶性抗癌药物或用于诊断用的显影剂等。
多数纳米载体在体内未到达靶目标前即被巨噬细胞识别吞噬，而达不到治疗效果；由此国内外许多学者，将聚乙二醇单甲醚(mPEG)附着在载体的表面，mPEG的长链能使纳米载体有效的逃避网状内皮系统的吞噬，从而达到长循环的目的，并且取得了较好的治疗效果。可降解聚合物聚乳酸(PLA)，在体内可以缓慢降解，可以 使药物随材料的降解被缓慢释放出来，从而达到较长时间的治疗效果。阳离子多聚物聚左旋赖氨酸PLL，生物相容性好，降解产物为人体所必需的氨基酸。多聚左旋赖氨酸复合物仍带正电荷，其结构灵活、稳定、易调整其分子量，可以通过引入侧链和特异靶向性基团来修饰多聚物骨架，进而调整和改善载体的性能，达到缓释药物的目的。将PLA和PLL结合可以发挥两者的优点。因此以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚-L-赖氨酸(mPEG-PLA-PLL)阳离子聚合物为骨架的纳米给药系统是一种非常优异的缓释药物载体。
给药系统的靶向能力是将活性物质准确递送至靶点的关键，以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚-L-赖氨酸(mPEG-PLA-PLL)阳离子聚合物为骨架的纳米给药系统可以很好的解决这个问题。研制的纳米载体系统直径可保持在1nm-10000nm。因为正常组织周围的血管没有缝隙，而肿瘤组织周围的血管有100nm左右的缝隙，所以纳米粒子就会从这些缝隙中渗透出来，并利用增强的渗透保留效应聚集于肿瘤部位，然后攻击癌细胞，但不会损害正常细胞，从而达到被动靶向的效果。将纳米粒采用靶向基团修饰后，靶向基团可以与靶点特异性结合，具有受体介导的靶向给药系统形成的主动靶向效应，使抗肿瘤药物比较准确送到肿瘤细胞中，实现恶性肿瘤的靶向治疗。采用本发明所设计的以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚-L-赖氨酸(mPEG-PLA-PLL)阳离子聚合物为骨架的纳米给药系统，可以同时连接靶向基团和包裹两种以上的活性物质从而达到靶向递送、多重治疗方式结合的目的。
发明内容
本发明的目的是提供一种聚乙二醇-聚乳酸-聚-L-赖氨酸(PEG-PLA-PLL)阳离子聚合物，是以聚乙二醇-聚乳酸-聚-L-赖氨酸(PEG-PLA-PLL)阳离子聚合物为骨架的纳米给药载体系统。PEG有长循环功效，聚乳酸PLA可生物降解有缓控释功效，聚左旋赖氨酸PLL带正电荷可以介导与负电荷的基因结合。通过控制载体粒径大小可使载体具有被动靶向的功能。通过引入侧链和特异靶向性基团来修饰多聚物骨架，进而调整和改善载体的性能，可使载体具有主动靶向的功能。这种载体材料还具有运送活性物质、肿瘤治疗与诊断、超声显影、逆转或降低耐药等功能。
本发明的目的还提供一种上述聚乙二醇-聚乳酸-聚-L-赖氨酸(PEG-PLA-PLL)阳离子聚合物的制备方法。
本发明的另外一个目的是提供上述聚乙二醇-聚乳酸-聚-L-赖氨酸 (PEG-PLA-PLL)阳离子聚合物的应用。
本发明所要解决的技术问题在于合成合适的载体，使不同的靶向基团能有效地嫁接在载体上，并且包载活性物质，从而有效的将活性物质靶向递送到靶点。
本发明所述的阳离子聚合物mPEG-PLA-PLL为一系列不同分子量、不同单体比例的材料，其mPEG-PLA-PLL聚合物分子量为1.2×103-10.0×108道尔顿，优选的分子量范围为2.0×103-8.0×108；所述的聚乙二醇，聚乳酸和聚-L-赖氨酸的摩尔比为0.1-50∶0.1-100∶1-100，优化的比例为5-20∶10-45∶15-65。
本发明所述的聚乙二醇和聚乳酸的摩尔比为1-50∶1-100，优化的比例为5-25∶15-60；所述的聚乙二醇-聚乳酸和聚-L-赖氨酸的摩尔比为1-50∶1-100，优化的比例为5-25∶60-15。
本发明所述的聚合物材料mPEG-PLA-PLL的合成方法是采用开环聚合法。合成所用的催化剂包括辛酸亚锡、乳酸锌、氯化亚锡或对甲苯磺酸等。
本发明所述的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚-L-赖氨酸(mPEG-PLA-PLL)的合成方法具有如下5个步骤。
(1)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸的制备：
在真空的玻璃管中、100～250℃和催化剂存在下，聚乙二醇单甲醚和丙交酯反应2～100小时，聚乙二醇单甲醚占原料总量质量百分比为1％～50％，所述的聚乙二醇单甲醚分子量为100～20000，催化剂占原料总质量的百分比为0.0001～1％催化剂，所述的催化剂是辛酸亚锡、乳酸锌、氯化亚锡或对甲苯磺酸。
(2)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-[(N-叔丁氧羰基)-L-苯丙氨酸]的制备：
在有机溶剂中、氮气保护和室温下，步骤(1)的产物、叔丁氧基羰基-L-苯丙氨酸、N，N-二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶反应0.5～5天；所述的步骤(1)的产物、N-叔丁氧羰基-L-苯丙氨酸、N，N-二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1∶0.01～30∶0.01～30∶0.01～30。
(3)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-L-苯丙氨酸的制备
在有机溶剂中、氮气保护和-20℃～40℃温度下，步骤(2)的产物和三氟乙酸反应0.1～24小时，所述的步骤(2)的产物和三氟乙酸的摩尔比为1∶0.01～30。
(4)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-[(N-苄氧羧基)-聚-L-赖氨酸]的制备
有机溶剂中、氮气保护和室温下，步骤(4)的产物和氨基酸环内酸酐反应1～6天，所述的骤(4)的产物和氨基酸环内酸酐的摩尔比为1∶0.01～100。
(5)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚(L-赖氨酸)的制备
步骤(4)的产物和定量33％的氢溴酸-冰乙酸溶液在0℃反应0.1-24h；所述的步骤(4)的产物、33％的氢溴酸-冰乙酸溶液的摩尔比为1∶0.01～100。
本发明所述的聚合物mPEG-PLA-PLL是一种优良的基因或药物载体，可以用于制备抗肿瘤药物制剂。利用这种材料包裹基因或药物，在机械搅拌、超声、高压乳匀机作用下制备缓释纳米粒，粒径在1nm-10μm以下可控(优选为10nm-1000nm)，表面光滑，均匀度好，颗粒规则无粘连，再分散性好，载药量和包封率高，可用于制备静脉或肌肉注射或口服给药的缓释纳米粒。制备的纳米粒可以分散在固体、半固体或溶液中。优选的是制成注射给药的药物制剂形式，尤其是供静脉注射用。
本发明所述的与可以与聚合物mPEG-PLA-PLL连接的靶向基团，包括肿瘤血管生成抑制肽；抗肿瘤血管生成的因子如成纤维生长因子(FGFs)、血管内皮生长因子(VEGF)；以及多肽、叶酸、抗体、转铁蛋白、糖、聚山梨酯等活性基团，甘草酸、甘草次酸、胆酸、低密度脂蛋白(LDL)、激素、核酸等所有具有可用于修饰的适宜官能团的靶向基团及其衍生物。所用的RGD肽是含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的任何直链或环状多肽片段，包括含RGD序列的三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽和十肽，或含RGD类似物(RGDm)的直链或环状多肽片段；所用的抗体包括表皮生长因子受体(EGFR)、人表皮生长因子(hrEGF)等多种抗体；糖类包括半乳糖、壳聚糖、甘露聚糖、胶淀粉、支链淀粉和葡萄聚糖等；靶向基团的接枝率为0.0001％-50％。
本发明所述的包载的活性物质包括药物、基因、诊断用显影剂、微泡内容性气体、探针。药物包括任何适合制成纳米粒给药系统的抗肿瘤药物，可为有机药物、水溶性药物或水不溶性药物抗癌药，如抗叶酸类(如甲氨蝶呤)、抗嘌呤类(如巯嘌呤)、抗嘧啶类(如氟尿嘧啶、替加氟)、核苷酸还原酶抑制药(如羟基脲)、脱氧核糖核苷酸多聚酶抑制药(如环胞苷)、直接影响和破坏DNA结构及其功能的药物(如氮芥、环磷酰胺、氮甲、顺铂、丝裂霉素、喜树碱)、抑制蛋白质合成的药(如阿霉素、L-门冬酰胺酶、柔红霉素、光辉霉素)、影响微管蛋白质组装和纺锤丝形成的药物(长春新碱、依托泊苷)和用于核磁成像、超声或CT等成像仪器所用的显影剂活性药物或诊断试剂，诊断试剂分为用于超声、核磁共振、CT和PET的诊断试剂。基因包括siRNA、microRNA、自杀基因、抑癌基因、反义核酸等用于治疗的基因；微泡内容性气体包括空气、氟碳气体、六氟化硫等用于超声微泡显影剂。
本发明所述的聚合物载体包载微泡内容性气体后可用于超声显影，实体肿瘤定位并且通过超声空化效应辅助肿瘤治疗。
本发明所述的以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚-L-赖氨酸(mPEG-PLA-PLL)聚合物为骨架的纳米给药系统，可以同时连接至少一种或一种以上的不同靶向基团修饰或/和载至少一种或一种以上的不同的活性物质从而达到靶向递送、药物和基因的共治疗、多重治疗方式结合的目的。
本发明所述的PEG-PLA-PLL聚合物为骨架的载基因或药物微纳米粒系统，可以通过以下制备方法制备：
采用复乳法制备，取4mg材料mPEG-PLA-PLL溶于200μL二氯甲烷或乙酸乙酯或二氯甲烷和丙酮的混合溶剂中，加入0.2mg药物溶液，超声乳化，再加入2.2mL浓度为1％的普朗尼克F68水分散介质中，再次超声乳化。然后室温下搅拌0.5-5h除去有机相，即得纳米粒溶液。
采用薄膜乳化法制备，取4mg材料mPEG-PLA-PLL和0.2mg药物溶于400μL三氯甲烷或丙酮溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL的水溶液，室温下搅拌0.5-6h，即得纳米粒溶液。
采用透析法制备，取4mg材料mPEG-PLA-PLL溶于200μL二甲亚砜溶剂中，加入0.4mg药物，将搅拌均匀的溶液在搅拌的条件下滴入2mL水中，之后将溶液装入透析袋(截留分子量为7000)中透析3-72小时，除去有机溶剂，即得纳米粒溶液。
采用乳化蒸发法制备，取4mg材料mPEG-PLA-PLL和0.2mg药物溶于400μL三氯甲烷或丙酮和二氯甲烷的混合溶剂中，加入2.2mL浓度为2％的含聚乙烯醇(PVA)的水分散介质中，超声或高压乳匀乳化，乳液在室温下搅拌2-4h，挥尽有机溶剂，即得纳米粒溶液。
采用界面沉淀法制备，取4mg材料mPEG-PLA-PLL和0.2mg药物溶于400μL丙酮溶剂中，在不断的搅拌条件下，将上述溶液注入2.2mL的浓度为2％的PVA水分散介质中，加压挥发去除丙酮，即得纳米粒溶液。
采用自组装法制备，取4mg材料mPEG-PLA-PLL溶于200μL水或乙醇溶液中，加入0.4mg药物，将搅拌均匀的溶液在搅拌的条件下滴入2mL水中，之后将溶液装入透析袋(截留分子量为7000)中透析3-72小时，除去有机溶剂；即得纳米粒溶液。
同时还可将包载不同药物的纳米递送载体制备成不同类型的胶囊剂、片制剂、丸剂、散剂、颗粒剂、滴丸剂和膜剂等。
本发明所述的PEG-PLA-PLL纳米给药系统的制备方法，其特征在于所用的材料是PEG-PLA-PLL，其摩尔浓度为0.001-10000M。
本发明所述的PEG-PLA-PLL纳米给药系统的制备方法，其特征在于所包裹的药物是基因或抗肿瘤化疗药物，其摩尔浓度为0.001-10000μM。
本发明所述的PEG-PLA-PLL纳米给药系统的制备方法，其特征在于所用的超声强度，其范围为10-1000W。
本发明所述的PEG-PLA-PLL纳米给药系统的制备方法，其特征在于所用的透析袋截留分子量，其范围为100-10000。
本发明所述的PEG-PLA-PLL纳米给药系统的制备方法，其特征在于所述的水分散介质为右旋糖苷40，右旋糖苷70、普朗尼克F68或聚乙烯醇PVA等各种适合于制备纳米粒的表面活性剂，分散介质浓度为0.01-20％(w/v)。
本发明所述的PEG-PLA-PLL纳米给药系统的制备方法，其特征在于所述的有机溶剂包括乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙醇、二甲亚砜和二甲基甲酰胺等各种适合于制备纳米粒的有机溶剂。
本发明所述的PEG-PLA-PLL纳米递送系统的制备方法，其特征在于可以制备成冻干剂保存和应用，冻干支架剂包括海藻糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、右旋糖苷、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇等，支架剂含量为0.01-20％(w/v)。
本发明制备方法简便，适于大规模生产，特别适应于制备具有长循环、可生物降解、缓控释、被动靶向、主动靶向、运送活性物质和抗肿瘤的药物。采用本发明的方法获得的抗肿瘤的药物适合于静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射、口服或经皮给药等方式。
附图说明
图1mPEG-PLA-PLL材料的凝胶渗透色谱(GPC)测试图
图2粒径分布图
siRNA-mPEG-PLA-PLL纳米粒(A)、microRNA-mPEG-PLA-PLL纳米粒(B)、DNA-mPEG-PLA-PLL-La纳米粒(C)、siRNA+DHAQ-mPEG-PLA-PLL-Fa(D)、ADM-mPEG-PLA-PLL-Glu(E)、DHAQ-mPEG-PLA-PLL纳米粒(F)、Paclitaxel-mPEG-PLA-PLL-EGFRab纳米粒(G)、Cisplatin mPEG-PLA-PLL-hrEGF纳米粒(H)、Bufalin-mPEG-PLA-PLL-cRGD(I)、5Fu-mPEG-PLA-PLL-cRGD纳米粒 (J)、Cy5-siRNA-mPEG-PLA-PLL-Trf纳米粒(K)粒径分布图和图A-K的柱状图(L)。
图3对不同肿瘤细胞的基因干扰图
siRNA-mPEG-PLA-PLL纳米粒(A)对U937白血病细胞、ADM+siRNA-mPEG-PLA-PLL-La纳米粒(B)对7721肝癌细胞、siRNA-mPEG-PLA-PLL-EGFRab纳米粒(C)对MCF-7乳腺癌细胞和microRNA-mPEG-PLA-PLL-PSAab纳米粒(D)对PC-3前列腺癌细胞的基因干扰图。
图4对荷A549肺癌裸鼠的靶向测试分析实验
注射Cy5-microRNA-mPEG-PLA-PLL-cRGD纳米粒(A)、Cy5-microRNA-mPEG-PLA-PLL-EGFRab纳米粒(B)和Cy5-microRNA-mPEG-PLA-PLL-Fa纳米粒(C)24h时对荷A549肺癌裸鼠的靶向测试分析图片。
图5Cy5-siRNA+DHAQ-mPEG-PLA-PLL在荷SW620肠癌裸鼠体内靶向测试分析实验。
图6Cy5-siRNA-mPEG-PLA-PLL-La在荷PLC肝癌裸鼠体内靶向测试分析实验。
图7Cy5-DNA-mPEG-PLA-PLL/Cap在荷MDA-MB-231乳腺癌裸鼠体内靶向测试分析实验。
图8siRNA-mPEG-PLA-PLL-Fa纳米粒(A)对荷A549肺癌裸鼠、DHAQ+siRNA-mPEG-PLA-PLL-EGFRab纳米粒(B)对荷MDA-MB-231乳腺癌裸鼠、microRNA-mPEG-PLA-PLL-RGD纳米粒(C)对荷U937白血病裸鼠、5Fu-mPEG-PLA-PLL-Trf纳米粒(D)对荷PLC肝癌裸鼠、ADM-mPEG-PLA-PLL-La纳米粒(E)对荷HepG2肝癌裸鼠、siRNA-mPEG-PLA-PLL-cRGD纳米粒(F)对荷PC-3前列腺癌裸鼠和siRNA-mPEG-PLA-PLL-La纳米粒(G)对荷HepG2肝癌裸鼠的肿瘤生长曲线图。
符号说明
图1中CPC代表凝胶渗透色谱，Mv代表粘均分子量，Mz代表Z均分子量，Mn代表数均分子量，Mw代表重均分子量；
图2中Diam代表粒径，NPs代表纳米粒(nanoparticles)，DHAQ代表药物米托蒽醌，ADM(Doxorubicin)代表阿霉素，Paclitaxel代表紫杉醇，Cisplatin代表顺铂，5Fu代表5-氟尿嘧啶，Rb代表罗丹明B，Fa代表叶酸，Glu代表半乳糖， EGFRab代表表皮生长因子受体抗体，La代表乳糖酸，Glu代表半乳糖，cRGD(RGD)代表精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽。
图3中PSAab代表前列腺特异性抗原抗体
图4中a.u.代表任意单位(Arbitrary Unit)，Cy5-siRNA代表荧光染料Cy5标记的siRNA，24h代表24小时。
图7中Cy5-DNA代表荧光染料Cy5标记的DNA，CaP代表磷酸钙。
具体实施方式
本发明描述了用于药物/基因递送载体以及制备方法和应用。本发明并不限于本文所公开的具体的构型、方法步骤和物质，因为这样的构型、方法和物质可以多少发生变化。本文所使用的术语仅仅是用于描述具体实施方案的目的并且并不打算进行限制，因为本发明的范围将仅仅受到所附权利要求及其等同内容的限制。
说明书和所附权利要求书，除非上下文另外清楚地加以描述，单数形式的“一种”和“所述”均包括复数的相应内容。
下面以实施例对本发明加以进一步的说明，但是不限制本发明的内容。实施例1、聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚-L-赖氨酸(mPEG-PLA-PLL)的合成
(1)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸的制备：抽真空加热干燥耐热玻璃管，先加入17.28g丙交酯，随后加入占原料总量质量百分比为10％、分子量为2K的mPEG，再加入乳酸锌催化剂，通氮气，加热溶解抽真空，冷却固化抽真空2小时后封管，150℃反应40小时。
抽真空加热干燥耐热玻璃管，先加入30.24g丙交酯，随后加入占原料总量质量百分比为20％、分子量为5K的mPEG，再加入乳酸锌催化剂，通氮气，加热溶解抽真空，冷却固化抽真空2小时后封管，120℃反应5天。
(2)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-叔丁氧羰基-L-苯丙氨酸的制备：
取6g mPEG-PLA溶于干燥有机溶剂，搅拌加入1.06g叔丁氧羰基-L-苯丙氨酸、0.83g 1，3-二环己基碳二亚胺，0.08g 4-二甲氨基吡啶，氮气保护，室温搅拌2天，过滤，饱和碳酸氢钠溶液和水各洗涤3次，收集有机相，无水硫酸镁干燥，浓缩，加冰乙醚沉淀出产物，过滤，真空干燥。
(3)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-叔丁氧氨基-L-苯丙氨酸的制备：
取2.6g上述(2)产物溶于干燥有机溶剂中，氮气保护，0℃搅拌滴加5.2ml干燥的三氟乙酸，滴加30分钟，继续反应2小时，旋蒸去除溶剂与未反应三氟乙酸， 残渣溶于有机溶剂，饱和碳酸氢钠溶液和水各洗涤3次，收集有机相，无水硫酸镁干燥，浓缩，冰乙醚沉淀，过滤，真空干燥。
(4)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-带保护基的聚-L-赖氨酸的制备：
取2g上述(3)产物溶于干燥有机溶剂中，加入1.6g氨基酸环内酸酐(NCA)，氮气保护，室温反应3天，浓缩，冰乙醚沉淀，过滤，真空干燥。
(5)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚-L-赖氨酸(mPEG-PLA-PLL)的制备：
取1g上述(4)的产物溶于3ml三氟乙酸中，加入5ml体积分数为33％的氢溴酸(HBr)醋酸溶液，0℃反应1小时，冰乙醚沉淀，过滤，真空干燥。(凝胶渗透色谱(GPC)测试见图1)
(6)含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(cRGD)环肽的接枝：
取400mg mPEG-PLA-PLL溶于二甲亚砜中，随后加入46mg cRGD和27mg N，N″-羰基二咪唑(CDI)，氮气保护下室温搅拌反应4小时。反应结束后将溶液置于透析袋中透析24小时得mPEG-PLA-PLL-cRGD，随后冻干保存。
(7)叶酸(Fa)的接枝：
取28mg Fa溶于二甲亚砜中，加入0.1g共聚物mPEG-PLA-PLL，再加入30mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，氮气保护下搅拌反应4小时。去离子水透析，冻干得到mPEG-PLA-PLL-Fa，密封、备用。
(8)表皮生长因子受体抗体(EGFRab)的接枝：
将5mgEGFRab溶于二甲基甲酰胺中，加入20mg CDI搅拌，然后加入0.1g共聚物mPEG-PLA-PLL，氮气保护下搅拌反应4小时，之后透析，然后冻干得到mPEG-PLA-PLL-EGFRab，密封、备用。
(9)前列腺特异性抗原抗体(PSAab)：
将5mgPSAab溶于二甲亚砜中，加入20mg EDC和20mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)搅拌，然后加入0.5g共聚物mPEG-PLA-PLL，氮气保护下搅拌反应24小时，之后透析，然后冻干得到mPEG-PLA-PLL-PSAab，密封、备用。
(10)人表皮生长因子(hrEGF)：
将3mg hrEGF溶于二甲基甲酰胺中，加入20mg EDC和20mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)搅拌，然后加入0.5g共聚物mPEG-PLA-PLL，氮气保护下搅拌反应24小时，之后透析，然后冻干得到mPEG-PLA-PLL-hrEGF，密封、备用。
(11)铁蛋白(Trf)的接枝：
将2mgTrf溶于二甲亚砜或二甲基甲酰胺中，加入10mg EDC和10mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)搅拌，然后加入共聚物0.1g mPEG-PLA-PLL，氮气保护下搅拌反应4小时，之后透析，然后冻干得到mPEG-PLA-PLL-Trf，密封、备用。
(12)半乳糖(Glu)的接枝：
将4mg Glu溶于二氯甲烷和甲醇的混合液中，加入18mg CDI搅拌，然后加入共聚物0.3g mPEG-PLA-PLL，氮气保护下搅拌反应24小时，冰乙醚沉淀，然后冻干沉淀物得到mPEG-PLA-PLL-Glu，密封、备用。
(13)乳糖酸(La)的接枝：
将4mg La溶于二氯甲烷和丙酮中，加入18mg EDC和10mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)或CDI搅拌，然后加入共聚物0.3g mPEG-PLA-PLL，氮气保护下搅拌反应24小时，之后透析，然后冻干得到mPEG-PLA-PLL-La，密封、备用。或将4mg La溶于二甲亚砜中，加入20mg N，N″-羰基二咪唑(CDI)，搅拌，然后加入共聚物0.3gmPEG-PLA-PLL，氮气保护下搅拌反应24小时，之后透析，然后冻干得到mPEG-PLA-PLL-La，密封、备用。
实施例2、包载siRNA的mPEG-PLA-PLL纳米粒的制备
采用复乳法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL溶于200μL或1000μL二氯甲烷或乙酸乙酯或二氯甲烷和丙酮的混合溶剂中，加入0.2nmoL或4nmoL siRNA溶液，超声乳化(300W或500W，10s×4)，再加入2.2mL或6mL浓度为0.5％或2％的普朗尼克F68水分散介质中，再次超声乳化(300W或500W，10s×4)。然后室温下搅拌0.5-5h除去有机相，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
采用薄膜乳化法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL和0.2nmoL或4nmoLsiRNA溶于400μL或2000μL丙酮或乙醇溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL或12mL的水溶液，室温下搅拌0.5-6h，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液(图2-A)。
采用透析法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL溶于200μL二甲亚砜或二甲基甲酰胺溶剂中，加入0.4nmoL或者6nmoL siRNA，将搅拌均匀的溶液在搅拌的条件下滴入2mL或10mL水中，之后将溶液装入透析袋(截留分子量为7000)中透析3-72小时，除去有机溶剂，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
采用乳化蒸发法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL和0.2nmoL或4nmoL siRNA溶于400μL或2000μL三氯甲烷或丙酮和二氯甲烷的混合溶剂中，加入2.2mL或44mL浓度为0.5％或2％的含聚乙烯醇(PVA)的水分散介质中，超声或 高压乳匀乳化，乳液在室温下搅拌2或4h，挥尽有机溶剂，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
采用界面沉淀法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL和0.2nmoL或4nmoL siRNA溶于400μL或2000μL丙酮溶剂中，在不断的搅拌条件下，将上述溶液注入2.2mL或44mL的浓度为0.5％或2％的PVA水分散介质中，加压挥发去除丙酮，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液液。
采用自组装法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL溶于200μL或1000μL水或乙醇溶液中，加入0.4nmoL或8nmoL siRNA，将搅拌均匀的溶液在搅拌的条件下滴入2mL或者10mL水中，之后将溶液装入透析袋(截留分子量为3000或7000)中透析3或72小时，除去有机溶剂；即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
同时还可将包载siRNA的纳米递送载体制备成不同类型的胶囊剂、片制剂、丸剂、散剂、颗粒剂、滴丸剂和膜剂等。
实施例3、包载microRNA的mPEG-PLA-PLL纳米粒的制备
采用复乳法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL溶于200μL或1000μL二氯甲烷或乙酸乙酯或二氯甲烷和丙酮的混合溶剂中，加入0.2nmoL或4nmoL siRNA溶液，超声乳化(300W或500W，10s×4)，再加入2.2mL或6mL浓度为0.5％或2％的普朗尼克F68水分散介质中，再次超声乳化(300W或500W，10s×4)。然后室温下搅拌0.5-5h除去有机相，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
采用薄膜乳化法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL和0.2nmoL或4nmoL siRNA溶于400μL或2000μL丙酮或乙酸乙酯溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL或12mL的水溶液，室温下搅拌0.5-6h，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
采用透析法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL溶于200μL二甲亚砜溶剂中，加入0.4nmoL或者6nmoL siRNA，将搅拌均匀的溶液在搅拌的条件下滴入2mL或10mL水中，之后将溶液装入透析袋(截留分子量为7000)中透析3-72小时，除去有机溶剂，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液(图2-B)。
采用乳化蒸发法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL和0.2nmoL或4nmoL siRNA溶于400μL或2000μL三氯甲烷或丙酮和二氯甲烷的混合溶剂中，加入2.2mL或44mL浓度为0.5％或2％的含聚乙烯醇(PVA)的水分散介质中，超声或高压乳匀乳化，乳液在室温下搅拌2或4h，挥尽有机溶剂，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。
采用界面沉淀法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL和0.2nmoL或4nmoL siRNA溶于400μL或2000μL丙酮溶剂中，在不断的搅拌条件下，将上述溶液注入2.2mL或44mL的浓度为0.5％或2％的PVA水分散介质中，加压挥发去除丙酮，即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液液。
采用自组装法制备，取4mg或20mg材料mPEG-PLA-PLL溶于200μL或1000μL水或乙醇溶液中，加入0.4nmoL或8nmoL siRNA，将搅拌均匀的溶液在搅拌的条件下滴入2mL或者10mL水中，之后将溶液装入透析袋(截留分子量为3000或7000)中透析3或72小时，除去有机溶剂；即得粒径为1-10000nm的纳米粒溶液。实施例4、包载DNA的mPEG-PLA-PLL-La纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-La溶于400μL二氯甲烷或乙酸乙酯中，加入4.4mL 1wt％的F68水溶液中超声。然后室温下搅拌3小时除去有机相，得mPEG-PLA-PLL纳米粒溶液。将适量的mPEG-PLA-PLL-La纳米粒溶液在充分搅拌下逐滴加入等体积的质粒DNA溶液中，低温孵育30min，即得到载DNA基因的纳米粒(DNA-mPEG-PLA-PLL-La)。
复乳-液中干燥法亦称溶剂挥发法，即将基因溶解于水作为内水相，8mgmPEG-PLA-PLL-La溶解于400μL三氯甲烷作为油相，两者超声后，形成油包水(W/O)的初乳，然后倒入4mL浓度为2wt％聚乙烯醇水溶液，再次乳化成水包油包水的复乳(W/O/W)，搅拌蒸去有机溶剂固化微球，离心洗涤，真空干燥后以60Co辐照灭菌(图2-C)。
实施例5、包载siRNA和DHAQ的mPEG-PLA-PLL-Fa纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-Fa溶于400μL二氯甲烷或三氯甲烷溶剂中，加入40μL浓度为10mg/mL的盐酸米托蒽醌(DHAQ)的水溶液，超声乳化后，再加入4.4mL 1wt％的F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3小时，除去有机相，即得纳米粒混悬液。将适量的mPEG-PLA-PLL纳米粒溶液在充分搅拌下逐滴加入等体积的siRNA溶液中，低温孵育30分钟，即得到载基因和药物的纳米粒(siRNA+DHAQ-mPEG-PLA-PLL-Fa)(图2-D)。
实施例6、包载阿霉素(ADM)的mPEG-PLA-PLL-Glu纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-Glu溶于400μL二氯甲烷或乙酸乙酯中，加入40μL浓度为10mg/mL的阿霉素(ADM)水溶液，超声乳化后，再加入4.4mL1wt％的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得ADM- mPEG-PLA-PLL-Glu纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用薄膜乳化法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-Glu和0.4mg阿霉素(ADM)溶于400μL丙酮溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL水溶液，室温下搅拌3h，即得ADM-mPEG-PLA-PLL-Glu纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用透析法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-Glu溶于3mL二甲亚砜或二甲基甲酰胺溶剂中，加入0.4mg阿霉素(ADM)溶液，搅拌均匀；随后将有机溶液在搅拌的条件下滴入水中，之后将溶液装入透析袋中透析48小时，除去有机溶剂；即得ADM-mPEG-PLA-PLL-Glu纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用界面沉淀法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-Glu和0.4mg阿霉素(ADM)溶于400μL丙酮溶剂中，在一定搅拌速度下，将上述溶液注入4mL浓度为2wt％聚乙烯醇(PVA)溶液，加压挥发去除丙酮，即得ADM-mPEG-PLA-PLL-Glu纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm(图2-E)。
实施例7、包载盐酸米托蒽醌(DHAQ)药物的mPEG-PLA-PLL纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL溶于400μL二氯甲烷或三氯甲烷或乙酸乙酯溶剂中，加入40μL浓度为10mg/mL的盐酸米托蒽醌(DHAQ)水溶液，超声乳化后，再加入4.4mL 1wt％的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用薄膜乳化法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL和0.4mg盐酸米托蒽醌(DHAQ)溶于400μL丙酮溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL水溶液，室温下搅拌3h，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用透析法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL溶于3mL二甲亚砜溶剂中，加入0.4mg盐酸米托蒽醌(DHAQ)，搅拌均匀；随后将有机溶液在搅拌的条件下滴入水中，之后将溶液装入透析袋中透析48小时，除去有机溶剂；即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm之间。
采用界面沉淀法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL和0.4mg盐酸米托蒽醌(DHAQ)溶于400μL丙酮或乙醇溶剂中，在一定搅拌速度下，将上述溶液注入4mL浓度为2wt％聚乙烯醇(PVA)溶液，加压挥发去除丙酮，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm(图2-F)。
实施例8、包载紫杉醇(Paclitaxel)的mPEG-PLA-PLL-EGFRab纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-EGFRab溶于400μL三氯甲烷，加 入0.4mg的紫杉醇(Paclitaxel)，超声乳化后，再加入4.4mL 2wt％的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm(图2-G)。
采用薄膜乳化法制备：取15mg mPEG-PLA-PLL-EGFRab和0.4mg紫杉醇(Paclitaxel)溶于400μL丙酮溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL水溶液，室温下搅拌5h，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用透析法制备：取6mg mPEG-PLA-PLL-EGFRab溶于3mL二甲亚砜溶剂或二甲基甲酰胺溶剂中，加入40μL浓度为20mg/mL的紫杉醇(Paclitaxel)二甲亚砜溶液中，搅拌均匀；随后将有机溶液在搅拌的条件下滴入水中，之后将溶液装入透析袋中透析48小时，除去有机溶剂；即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
实施例9、包载顺铂(Cisplatin)的mPEG-PLA-PLL-hrEGF纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取10mg mPEG-PLA-PLL溶于400μL三氯甲烷，加入0.6mg的顺铂(Cisplatin)溶液，超声乳化后，再加入4.4mL 2wt％的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得纳米粒混悬液。随后加EDC和NHS加入纳米粒溶液中，再加入1.2mg/ml的hrEGF水溶液，氮气保护下磁力搅拌4h，随后超滤离心得到Cisplatin-mPEG-PLA-PLL-hrEGF纳米粒。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm(图2-H)。
采用薄膜乳化法制备：取14mg mPEG-PLA-PLL-hrEGF和0.4mg顺铂(Cisplatin)溶于400μL丙酮溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL水溶液，室温下搅拌5h，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
采用透析法制备：取4mg mPEG-PLA-PLL-hrEGF溶于3mL二甲亚砜溶剂或二甲基甲酰胺溶剂中，加入40μL浓度为20mg/mL的顺铂(Cisplatin)二甲亚砜溶液中，搅拌均匀；随后将有机溶液在搅拌的条件下滴入水中，之后将溶液装入透析袋中透析48小时，除去有机溶剂；即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm。
实施例10、包载蟾蜍灵(Bufalin)的mPEG-PLA-PLL-cRGD纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-cRGD溶于400μL三氯甲烷，加入40μL浓度为20mg/mL的蟾蜍灵(Bufalin)溶液，超声乳化后，再加入4.4mL 2wt％的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm(图2-I)。
实施例11、包载5-氟尿嘧啶(5Fu)的mPEG-PLA-PLL-cRGD纳米粒的制备
采用乳化蒸发法制备：取8mg mPEG-PLA-PLL-cRGD溶于400μL乙酸乙酯溶剂中，加入40μL浓度为20mg/mL的5-氟尿嘧啶(5Fu)溶液，超声乳化后，再加入4.4mL 2wt％的泊洛沙姆F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得纳米粒混悬液。上述制得的纳米粒粒径控制在1-10000nm(图2-J)。
实施例12、包载微泡内容性气体的mPEG-PLA-PLL纳米粒的制备
采用双乳化法，将12mg mPEG-PLA-PLL溶于1mL三氯甲烷溶剂中，充分搅拌至其完全溶解(作连续相)，然后在其中加入200μL双蒸水(为分散相)，超声后，成乳白色乳化液(W/O微球)，将乳化液(分散相)倒入4mL 2wt％PVA溶液中(连续相)，均质机均质(W/O/W微球)。然后加入4mL异丙醇溶液中，高温下搅拌，使微球表面固化、二氯甲烷尽量自然挥发，再经多次双蒸水与正己烷洗涤、离心(去除二氯甲烷)，收集微球，待其室温干燥后加入适量双蒸水混匀，置-45℃真空冷冻干燥机中真空冷冻干燥48小时，然后停止抽气，将全氟丙烷气体缓慢充入冷冻干燥室内至大气压，关闭冷冻干燥机气阀并保持8h即得mPEG-PLA-PLL微泡超声造影剂。
实施例13、转铁蛋白(Trf)修饰mPEG-PLA-PLL包载Cy5标记的siRNA(Cy5-siRNA)的纳米粒的制备
取8mg mPEG-PLA-PLL-Trf溶于400μL三氯甲烷中，加入40μL浓度为10mg/mL的Cy5-siRNA水溶液，超声乳化后，再加入4.4mL 1wt％的F68水溶液中，再次超声。然后室温下搅拌3h除去有机相，即得Cy5-siRNA-mPEG-PLA-PLL-Trf纳米粒混悬液(图2-K)。
实施例14、载基因的纳米粒对不同细胞干扰效果实验
图3(A)可知，与siRNA相比，siRNA-mPEG-PLA-PLL纳米粒能显著的降低U937白血病细胞基因的表达，具有较好的干扰效果。这也证实该载体能够有效的荷载siRNA，并能被细胞有效地吞噬，进而来干扰U937白血病细胞基因的表达。
图3(B)可知，与siRNA相比，ADM+siRNA-mPEG-PLA-PLL-La纳米粒能有效地抑制7721肝癌细胞的基因表达，表明该载体能同时荷载基因和药物，从而有效的干扰基因表达。
图3(C)可知，与siRNA相比，siRNA-mPEG-PLA-PLL-EGFRab纳米粒能显著地抑制MCF-7乳腺癌细胞的基因表达，表明接有靶向基团的siRNA-mPEG-PLA-PLL-EGFRab纳米粒对MCF-7乳腺癌细胞具有较好的干扰效果。
图3(D)可知，与siRNA相比，microRNA-mPEG-PLA-PLL-PSAab纳米粒能有效地干扰PC-3前列腺癌细胞的基因表达，表明该载体能够有效的荷载microRNA，并将其递送到细胞内，从而有效的干扰PC-3前列腺癌细胞基因的表达。
实施例15、mPEG-PLA-PLL载Cy5标记的microRNA(Cy5-microRNA)纳米粒的靶向测试分析实验
分别用Cy5-microRNA-mPEG-PLA-PLL-cRGD纳米粒(A)、Cy5-microRNA-mPEG-PLA-PLL-EGFRab纳米粒(B)和Cy5-microRNA-mPEG-PLGA-PLL-Fa纳米粒(C)24h时用小动物活体荧光仪对荷A549肺癌裸鼠进行纳米粒的肿瘤靶向测试分析。结果表明，纳米粒在24h能有效地靶向集中于肿瘤部位(图4)。
实施例16、mPEG-PLA-PLL载cy5-siRNA+DHAQ纳米粒在荷瘤动物体内的靶向测试分析实验
分别静脉注射载有Cy5-siRNA+DHAQ的mPEG-PLA-PLL(Cy5-siRNA+DHAQ-mPEG-PLA-PLL)纳米粒，每只荷SW620肠癌裸鼠给予0.1nmol，在24和48h时用小动物活体荧光仪测试分析纳米粒在体内的靶向分布情况。
结果表明Cy5-siRNA+DHAQ-mPEG-PLA-PLL纳米粒能较好的靶向于鼠的肝部，具有较好的肝靶向效果(图5)。
实施例17、mPEG-PLA-PLL-Fa载cy5-siRNA纳米粒在荷瘤动物体内的靶向测试分析实验
分别静脉注射载有Cy5-siRNA的mPEG-PLA-PLL-Fa(Cy5-siRNA-mPEG-PLA-PLL-Fa)纳米粒，每只荷PLC肝癌裸鼠给予0.1nmol，48h时用小动物活体荧光仪测试分析纳米粒在体内的靶向情况。
结果表明载有Cy5-siRNA-mPEG-PLA-PLL-Fa纳米粒在48h能较好的靶向于鼠肾脏，有效地靶向于肾脏(图6)。
实施例18、复合磷酸钙(Cap)的mPEG-PLA-PLL载Cy5-DNA纳米粒(Cy5-DNA-mPEG-PLA-PLL/Cap)在荷瘤动物体内的靶向测试分析实验
分别静脉注射载有Cy5-DNA-mPEG-PLA-PLL/Cap纳米粒，每只荷MDA-MB-231乳腺癌裸鼠给予0.1nmol，24，48和72h时用小动物活体荧光仪测试分析纳米粒在体内组织的靶向分布情况。
结果表明载有Cy5-DNA-mPEG-PLA-PLL/Cap纳米粒在裸鼠体内主要分布在动物的肾脏，而且随着时间的延长，纳米粒仍能够有效地靶向于鼠的肾部(图7)。
实施列19、载基因或药物纳米粒对不同荷瘤裸鼠的治疗实验
从图8(A)可以看出，随着治疗时间延长，与Saline或siRNA相比，siRNA-mPEG-PLA-PLL纳米粒或siRNA-mPEG-PLA-PLL-Fa纳米粒都能有效地降低荷A549肺癌裸鼠的肿瘤体积，且siRNA-mPEG-PLA-PLL-Fa纳米粒的抑制肿瘤生长效果更明显，这表明该载体能很好荷载siRNA，在动物体内治疗能有效地控制肿瘤生长。
从图8(B)可以看出，DHAQ+siRNA-mPEG-PLA-PLL-EGFRab纳米粒能够有效地降低荷MDA-MB-231乳腺癌裸鼠的肿瘤生长速度，表明该载体能够有效的荷载药物和基因达到理想的治疗效果。
从图8(C)可以看出，随着治疗时间的延长，与Saline或microRNA相比，microRNA-mPEG-PLA-PLL-RGD纳米粒或microRNA-mPEG-PLA-PLL-RGD纳米粒能有效地控制荷U937白血病裸鼠的肿瘤生长，且嫁接靶向基团的microRNA-mPEG-PLA-PLL-RGD纳米粒的抑瘤效果更显著，这证实该载体可以有效的将microRNA递送到肿瘤组织，从而有效地抑制肿瘤的生长。
从图8(D)可以看出，随着治疗时间的延长，与Saline或5Fu相比，5Fu-mPEG-PLA-PLL或5Fu-mPEG-PLA-PLL-Trf纳米粒都能有效地抑制荷PLC肝癌裸鼠的肿瘤生长，同样，5Fu-mPEG-PLA-PLL-Trf纳米粒的抑瘤效果更明显，表明该载体也可以有效地将药物递送到肿瘤部位，从而起到有效的治疗。
从图8(E)可以看出，随着治疗时间的延长，与Saline或ADM相比，ADM-mPEG-PLA-PLL或ADM-mPEG-PLA-PLL-La纳米粒都能有效地抑制荷HepG2肝癌裸鼠的肿瘤生长。ADM-mPEG-PLA-PLL-La纳米粒能更有效的抑制肿瘤的生长，表明该载体也可以有效地将药物递送到肿瘤部位，从而抑制肿瘤的生长。
从图8(F)可以看出，随着治疗时间的延长，与Saline或siRNA相比，siRNA-mPEG-PLA-PLL或siRNA-mPEG-PLA-PLL-cRGD纳米粒都能有效地抑制荷PC-3前列腺癌裸鼠的肿瘤生长。siRNA-mPEG-PLA-PLL-cRGD纳米粒能够提高siRNA的治疗效果，有效地制前列腺肿瘤的生长。
从图8(G)可以看出，随着治疗时间的延长，与Saline或siRNA相比，siRNA-mPEG-PLA-PLL或siRNA-mPEG-PLA-PLL-La纳米粒都能有效地增强siRNA对荷HepG2肝癌裸鼠肿瘤生长的抑制效果。且siRNA-mPEG-PLA-PLL-La纳米粒能更有效的抑制肝癌肿瘤的生长。
Claims (10)
1.一种聚乙二醇-聚乳酸-聚-L-赖氨酸阳离子聚合物，其特征在于所述的聚乙二醇-聚乳酸-聚-L-赖氨酸阳离子聚合物的分子量为1.2×103-10.0×108道尔顿；所述的聚乙二醇、聚乳酸和聚-L-赖氨酸摩尔比为0.1-50∶0.1-100∶1-100。
2.如权利要求1或2所述的聚乙二醇-聚乳酸-聚-L-赖氨酸阳离子聚合物，其特征在于所述的聚乙二醇和聚乳酸摩尔比为1-50∶1-100；所述的聚乙二醇-聚乳酸和聚-L-赖氨酸摩尔比为1-50∶1-100。
3.如权利要求1所述的聚乙二醇-聚乳酸-聚-L-赖氨酸阳离子聚合物，其特征在于所述的聚乙二醇为一端羟基甲基化的聚乙二醇mPEG，其分子量为0.1K-20K道尔顿；所述的聚乳酸的分子量为1K-100K道尔顿；所述的聚-L-赖氨酸分子量为0.5K-100K道尔顿。
4.一种如权利要求1或3所述的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚-L-赖氨酸阳离子聚合物的合成方法，其特征在于通过如下步骤获得：
(1)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸的制备
在抽真封管中、100～250℃和催化剂存在下，聚乙二醇单甲醚和丙交酯反应2～100小时；所述的聚乙二醇单甲醚和丙交酯的摩尔比为1～99∶99～1，聚乙二醇单甲醚占原料总量质量百分比为1％～50％，所述的聚乙二醇单甲醚分子量为100～20000道尔顿，催化剂占原料总质量的百分比为0.0001～1％催化剂，所述的催化剂是辛酸亚锡、乳酸锌、氯化亚锡或对甲苯磺酸；
(2)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-[(N-叔丁氧羰基)-L-苯丙氨酸]的制备
在有机溶剂中和室温条件下，步骤(1)的产物、叔丁氧基羰基-L-苯丙氨酸、N，N-二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶反应0.5～5天；所述的步骤(1)的产物、N-叔丁氧羰基-L-苯丙氨酸、N，N-二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1∶0.01～30∶0.01～30∶0.01～30；
(3)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-L-苯丙氨酸的制备
在有机溶剂中和-20℃～40℃温度下，步骤(2)的产物和三氟乙酸反应0.1～24小时，所述的步骤(2)的产物和三氟乙酸的摩尔比为1∶0.01～30；
(4)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-[(N-苄氧羧基)-聚-L-赖氨酸]的制备
有机溶剂中和室温和氮气保护条件下，步骤(4)的产物和氨基酸环内酸酐反应1～6天，所述的骤(4)的产物和氨基酸环内酸酐的摩尔比为1∶0.01～100；
(5)聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚(L-赖氨酸)的制备
步骤(4)的产物和定量33％的氢溴酸-冰乙酸溶液在氮气保护下，0℃反应0.1-24小时；所述的步骤(4)的产物、33％的氢溴酸-冰乙酸溶液的摩尔比为1∶0.01～100。
5.一种如权利要求1所述的以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚-L-赖氨酸阳离子聚合物的应用，其特征在于在制备基因或药物载体在医药中的应用。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述的基因载体是可以被组织、细胞膜受体识别的靶向基团、肿瘤血管生成抑制肽、成纤维生长因子或血管内皮生长因子的抗肿瘤血管生成的因子、以及叶酸、抗体、转铁蛋白、糖、聚山梨酯、多肽、甘草酸、甘草次酸、胆酸、低密度脂蛋白、激素或核酸修饰的基因载体。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述的载体是载至少一种或一种以上的不同的活性物质来制备微纳米粒给药系统。
8.如权利6要求所述的应用，其特征在于可通过乳化蒸发法、界面沉淀法、透析法、薄膜乳化法、冷冻干燥法、超声分散法或逆向蒸发法等方法来制备聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚-L-赖氨酸为载体的微纳米粒给药系统；所制备的微纳米粒给药系统的粒径为5nm-10000nm。
9.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述的活性物质是基因、药物、诊断用显影剂、诊断试剂或微泡内容气体。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征是所述的基因是DNA质粒的转染试剂、肿瘤治疗用的基因治疗药物制剂、用于反义核酸和siRNA转染试剂、制备反义核酸、siRNA或microRNA治疗用的药物制剂；所述的药物是能够注射、口服或粘膜给药的抗肿瘤化疗药物、抗肿瘤药物靶向制剂、逆转或降低肿瘤耐药制剂或肿瘤诊断显影的试剂。所述的微泡内容气体是空气、氟碳气体或六氟化硫。
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