CN102584990A - 抗新城疫禽流感二联高免卵黄抗体的提取方法 - Google Patents

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Abstract

抗新城疫禽流感二联高免卵黄抗体的提取方法属于兽用生物制品制备技术；将高免鸡蛋进行清理、消毒，晾干备用，从高免鸡蛋中取得卵黄，用磷酸盐缓冲液对卵黄进行稀释，得到卵黄液，在卵黄液中加入硫酸铵，静置，用高速管式离心机离心作业，收集沉淀物，即得产物；本高免卵黄抗体收获量大，纯度高，活性强，注射于动物体内易吸收，防治效果良好，工艺简单可靠，适用于大规模工业化生产。

Description

抗新城疫禽流感二联高免卵黄抗体的提取方法
技术领域
本发明属于兽用生物制品制备技术，主要涉及一种抗新城疫-禽流感二联高免卵黄抗体的提取方法。 
背景技术
目前，卵黄抗体的分离有多种方法：聚乙二醇(PEG)沉淀法、氯仿抽提法、水稀释法、冻融法。获得的WSF需进一步纯化，目的是将大量卵黄抗体从水溶液中分离出来，得到纯精卵黄抗体。20世纪80年代，Polson就用聚乙二醇(PEG)沉淀法提取卵黄抗体，该法抗体回收率高，抗体活性不被破坏，但操作比较繁琐，聚乙二醇残留不易除去。Kim等人于1998年采用超滤法-Amicon cell系统进行提取卵黄抗体，缺点是超滤装置成本较高。21世纪又出现几种提取卵黄抗体的方法，如陈于豹等人于2000年用DEAE-TOY-OPEAL650M阴离子交换色谱法分离纯化卵黄抗体；Boschetti和Verdoliva采用亲和层析法提纯卵黄抗体；2005年Ruan等人采用无机物沉淀法提纯卵黄抗体，最常用的是硫酸铵或是硫酸钠沉淀法；2006年Fu等人采用凝胶层析法提纯卵黄抗体。比较了几种常用的分离方法后，认为最好的分离纯化方法是水稀释法和快速硫酸铵沉淀法。比较而言，用水稀释法去脂不添加化学试剂，不损坏卵黄抗体的活性，安全性好，不影响脂类的进一步利用，是目前去脂研究中的最佳方法，但需要价值高昂的超滤浓缩设备。这些诸多的提取方法存在共同的缺点就是不适于规模化生产。因此，建立一种简便易行、可大量生 产、生产成本低廉、产品纯度和活性高的提取方法对卵黄抗体的广泛应用将具有重要意义。 
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术存在的问题，研究提供一种抗新城疫-禽流感二联高免卵黄抗体的提取方法，达到提取程序简便、快速、适于大规模工业化生产，生产成本低廉，抗体效价损失少、产品质量好的目的。 
本发明目的是通过以下技术方案来实现的： 
抗新城疫-禽流感二联高免卵黄抗体的提取方法采用无机盐-硫酸铵沉淀、管式离心法提取高免卵黄抗体，其提取步骤是：将高免鸡蛋进行清理、消毒，晾干备用；从高免鸡蛋中取得卵黄，用0.15mol/ml、PH7.2的磷酸盐缓冲液按1∶1重量比例对卵黄进行稀释，不断搅拌使其均匀混合，得到卵黄液；在卵黄液中加入重量为卵黄液总重量16-20％的硫酸铵，充分搅拌20-40分钟，使其混合均匀，静置8-14小时后，用高速管式离心机离心作业2-3次，收集沉淀物，即得到抗新城疫-禽流感二联高免卵黄抗体。 
本发明的提取方法提取程序简便、快速、适于大规模工业化生产，且成本低，抗体效价损失少，产品质量好。本发明获得的卵黄抗体为黄色固体，获得量大，效价高，不污染环境，是绿色安全的生物制剂。 
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明。 
实施例1：一种抗新城疫-禽流感二联高免卵黄抗体的提取方法，将高免鸡蛋进行清理、消毒，晾干备用；从高免鸡蛋中取得卵黄，用0.15mol/ml、PH7.2的磷酸盐缓冲液按1∶1重量比例对卵黄 进行稀释，不断搅拌使其均匀混合，得到卵黄液；在卵黄液中加入重量为卵黄液总重量20％的硫酸铵，充分搅拌40分钟，使其混合均匀，静置14小时后，用高速管式离心机离心作业3次，收集沉淀物，即得到抗新城疫-禽流感二联高免卵黄抗体。 
本实施例所提取的卵黄抗体经血凝抑制试验检测，抗体效价910g2，获得量大，一枚蛋可提取出300mg卵黄抗体。 
实施例2：一种抗新城疫-禽流感二联高免卵黄抗体的提取方法，将高免鸡蛋进行清理、消毒，晾干备用；从高免鸡蛋中取得卵黄，用0.15mol/ml、PH7.2的磷酸盐缓冲液按1∶1重量比例对卵黄进行稀释，不断搅拌使其均匀混合，得到卵黄液；在卵黄液中加入重量为卵黄液总重量16％的硫酸铵，充分搅拌20分钟，使其混合均匀，静置10小时后，用高速管式离心机离心作业2次，收集沉淀物，即得到抗新城疫-禽流感二联高免卵黄抗体。 
本实施例所提取的卵黄抗体，经血凝抑制试验检测，抗体效价910g2，获得量偏小，一枚蛋可提取出240mg卵黄抗体。 
防治效果的检测：分别选择健康未免疫的40日龄蛋公鸡80只，随机分为4组，每组20只，进行攻毒防治试验。其中，第1组鸡攻毒前48h每只注射卵黄抗体1ml，第2组攻毒同时注射卵黄抗体1ml，第3组攻毒后48h注射卵黄抗体1ml，第4组鸡未注射卵黄抗体。攻毒株分别为新城疫强毒、禽流感H5。处理后10d统计预防保护率和治愈率。 
结果表明：(1)被新城疫强毒感染的鸡只，处理10d第1组鸡精神状态良好，未出现死亡，预防保护率为100％；第2组鸡死亡1只，预防保护率为95％；第3组鸡死亡3只，治愈率为85％；第4组鸡全部感染发病。(2)被禽流感H5感染后的鸡只，处理后10d第1 组鸡精神状态良好，未出现死亡，预防保护率为100％；第2组鸡死亡1只，预防保护率为95％；第3组鸡死亡4只，治愈率为80％；第4组鸡全部感染发病。可见卵黄抗体见效快，注射后即可产生作用，而且无任何毒副作用，可获得较高的经济效益和社会效益，具有广阔的市场应用前景。 

Claims (1)

1.一种抗新城疫禽流感二联高免卵黄抗体的提取方法，其特征在于将高免鸡蛋进行清理、消毒，晾干备用；从高免鸡蛋中取得卵黄，用0.15mol/ml、PH7.2的磷酸盐缓冲液按1∶1重量比例对卵黄进行稀释，不断搅拌使其均匀混合，得到卵黄液；在卵黄液中加入重量为卵黄液总重量16-20％的硫酸铵，充分搅拌20-40分钟，使其混合均匀，静置8-14小时后，用高速管式离心机离心作业2-3次，收集沉淀物，即得到抗新城疫—禽流感二联高免卵黄抗体。 
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