CN102584779B

CN102584779B - 一种联苯环辛烯类木脂素化合物的制备方法

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Publication number: CN102584779B
Application number: CN201110461089.8A
Authority: CN
Inventors: 杨能英; 何风雷; 郭钟慧; 钟连瑜; 王冰; 苏赟
Original assignee: GUANGZHOU CHENLIJI PHARMACEUTICAL FACTORY
Current assignee: GUANGZHOU CHENLIJI PHARMACEUTICAL FACTORY
Priority date: 2011-12-31
Filing date: 2011-12-31
Publication date: 2014-12-10
Anticipated expiration: 2031-12-31
Also published as: CN102584779A

Abstract

本发明公开了一种联苯环辛烯类木脂素化合物的制备方法。该化合物是从黑老虎Kadsura Coccinea中提取分离得到的，包括下述步骤：1)将粉碎的药材黑老虎用有机溶剂或有机溶剂的水溶液进行提取，收集提取液并浓缩，得到浸膏，记为浸膏1；2)向所述浸膏1中加入90℃以上的热水并超声，过滤，收集滤渣；将滤渣用三氯甲烷溶解，过滤，收集三氯甲烷液并浓缩，得到浸膏2；3)将浸膏2用石油醚进行洗涤至石油醚洗涤液接近无色，并挥干浸膏2中的石油醚；4)将步骤3)处理后的浸膏2进行硅胶柱层析，分段收集洗脱液，将洗脱液用薄层色谱法或高效液相色谱法检测，合并含式I所示化合物的洗脱液，挥干溶剂，重结晶得到目标化合物。

Description

一种联苯环辛烯类木脂素化合物的制备方法

技术领域

本发明涉及一种联苯环辛烯类木脂素化合物的制备方法。

背景技术

黑老虎为五味子科南五味子属植物冷饭团Kadsura coccinea(Lem.)A.C.Smith的干燥根，别名过山龙、大钻、臭饭团、钻地风等，主要分布于我国江西、湖南、福建、广西、四川、云南等地。味辛、微苦、性温。具有行气活血，祛风止痛的功效，主要用于治疗风湿痹痛、跌打损伤、痛经、脘腹疼痛等。现代医学研究表明黑老虎具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗肝纤维化等作用。黑老虎的主要生理活性成分为木脂素和三萜酸。其中木脂素结构类型较多，立体化学复杂，而且具有抗肝炎、抗艾滋病毒和抗肿瘤等活性。

Li等报道了化合物南五味子木质素J及其生物活性(Heran Li，Liyan Wang，ZhigangYang，et al.Kadsuralignans H-K from Kadsura coccinea and Their Nitric Oxide ProductionInhibitory Effects.J.Nat.Prod.2007，Vol.70，No.12：1999-2002)。

其结构式如式I所示：

(式I)。

发明内容

本发明的目的是提供式I所示联苯环辛烯类木脂素化合物(即南五味子木质素J)的制备方法。

本发明中式I所示化合物是从中药黑老虎中提取分离得到的，具体方法包括下述步骤：1)将粉碎的黑老虎根木部用有机溶剂或有机溶剂的水溶液进行提取，收集提取液并浓缩得到浸膏，记为浸膏1；

或将粉碎的黑老虎根皮部加水蒸馏，弃去挥发油，水提液过滤，分别收集滤液和滤渣；将所述滤液浓缩得到浸膏；将所述滤渣用有机溶剂或有机溶剂的水溶液进行提取，收集提取液并浓缩得到浸膏；合并所述浸膏得到浸膏1；

或将粉碎的黑老虎根皮部加水蒸馏，弃去挥发油，水提液过滤，分别收集滤液和滤渣；将所述滤液浓缩得到浸膏；将所述滤渣和粉碎的黑老虎根木部混合用有机溶剂或有机溶剂的水溶液进行提取，收集提取液并浓缩得到浸膏；合并所述浸膏得到浸膏1；

2)向所述浸膏1中加入90℃以上的热水并超声分散，过滤，收集滤渣；将滤渣用三氯甲烷溶解，过滤，收集三氯甲烷液并浓缩，得到浸膏2；

3)将浸膏2用石油醚进行洗涤至石油醚洗涤液接近无色，并挥干浸膏2中的石油醚；

4)将步骤3)处理后的浸膏2进行硅胶柱层析，收集含式I所示化合物的洗脱液，挥干溶剂，得到式I所示化合物。

其中，步骤1)中所述有机溶剂为乙醇、丙酮或甲醇，所述有机溶剂的水溶液中有机溶剂的体积含量为50-95％，所述黑老虎根木部与有机溶剂或有机溶剂的水溶液的配比为1g∶(4-20)ml；所述滤渣与有机溶剂或有机溶剂的水溶液的配比为1g∶(4-20)ml；所述滤渣和粉碎的黑老虎根木部的混合物与有机溶剂或有机溶剂的水溶液的配比为1g∶(4-20)ml；所述提取为回流提取，所述回流提取至少进行2次，每次提取的时间为1-5小时。

对粉碎的黑老虎根皮部加水蒸馏时，粉碎的黑老虎皮部与水的配比可为1kg∶(3000～20000ml)。

步骤2)中所述浸膏1与热水的配比为1g∶(1-4)ml。所述滤渣与三氯甲烷的配比为1g∶(1-10)ml。

步骤4)中所述硅胶柱层析的洗脱条件为：以石油醚和乙醚体积比为(2∶1)-(4∶1)的混合溶剂为洗脱剂进行等度洗脱。

步骤4)中进行硅胶柱层析时，分段收集洗脱液，将洗脱液用薄层色谱法或高效液相色谱法检测，合并含式I所示化合物的洗脱液。

其中，所述薄层色谱法检测的条件如下：用收集的洗脱液点样，采用硅胶GF₂₅₄薄层板，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸体积比为15∶5∶1的混合液的上层溶液为展开剂，合并Rf值0.60～0.70的洗脱液。

所述高效液相色谱法检测的色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相为甲醇-水体积比为80∶20的混合溶剂或乙腈-水体积比为70∶30的混合溶剂；检测波长为214nm，合并保留时间t为16～17min的洗脱液。

为了得到纯度较高的式I化合物，所述方法还包括对步骤4)得到的式I所示化合物进行纯化的步骤，具体方法如下：将式I所示化合物进行硅胶柱层析，分段收集洗脱液，将洗脱液用高效液相色谱法检测，合并式I所示化合物的纯度大于90％的洗脱液，挥干溶剂，得到纯化后的式I所示化合物；

在纯化步骤中硅胶柱层析的洗脱条件为：以石油醚和乙醚体积比为(5∶1)-(20∶1)的混合溶剂为洗脱剂进行等度洗脱。

此外，为了进一步提高目的产物的纯度，还可对纯化的产物进行重结晶。所采用的溶剂为乙醚或石油醚和乙醚体积比为(50∶50)-(0∶100)的混合溶剂。

采用本发明方法制备的式I化合物(即南五味子木质素J)的纯度可达98％以上，且提取率可达到50％以上。所得纯品可以作为质量控制的标准品或参照物，控制黑老虎药材或含黑老虎的中成药的质量，很有实用价值。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此。

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

下述实施例中所用的药材黑老虎符合《广东省中药材标准》(第一册)2004版第188页黑老虎项下的有关规定。投料前，通过鉴定，药材实物与名称相符，质量符合标准。药材黑老虎是指黑老虎的干燥根，其包括黑老虎根木部和根皮部。

实施例1、提取分离南五味子木质素J

一、制备方法：

取粉碎的黑老虎根木部(过二号筛)2.0Kg，加体积浓度为95％乙醇12000ml回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏1(1178g)。向所得浸膏1中加2000ml热水(90℃以上)，超声分散10分钟(超声功率300W，频率50kHz)，过滤，得沉淀。用三氯甲烷4000ml将沉淀溶解，超声分散10分钟(超声功率300W，频率50kHz)，粗滤，去掉较大块的滤渣，滤液离心10分钟，去掉溶液上层漂浮物，再过滤，得三氯甲烷液，回收三氯甲烷，得浸膏2(65.8g)。将浸膏2用适量石油醚(沸程60～90℃)反复多次洗涤至石油醚液近无色，挥掉石油醚，加适量三氯甲烷将浸膏2溶解，加入25g硅胶(粒度：200目～300目)拌样，装样品柱，通过制备色谱硅胶柱(内径为3cm，柱高为45cm，硅胶粒度为200目～300目)进行硅胶柱层析，溶剂洗脱条件为：洗脱剂为石油醚(沸程60～90℃)∶乙醚＝2∶1(v/v)，按体积收集洗脱液，每100ml为1个洗脱组份，共收集30个洗脱组份。每个组份通过TLC检测，合并Rf值约0.65的洗脱组份，回收溶剂，得浸膏3，再加适量三氯甲烷将浸膏3(11.2g)溶解，加入20g硅胶拌样，装样品柱，通过制备色谱硅胶柱(内径为3cm，柱高为45cm，硅胶粒度为300目～400目)进行硅胶柱层析，溶剂洗脱条件为：洗脱剂为石油醚(沸程60～90℃)∶乙醚＝7∶1(v/v)，按体积收集洗脱液，每100ml为1个洗脱组份，共收集20个洗脱组份，每个组份通过HPLC检测，合并保留时间t为(16～17min)处峰面积相对较大(纯度大于90％)的洗脱组份，回收溶剂，得浸膏4。用乙醚或石油醚(沸程60～90℃)-乙醚(1∶1，v/v)的混合溶剂对浸膏4反复重结晶，得到纯度在98％以上的式I化合物即南五味子木质素J。结晶余液还可以继续进行硅胶柱层析，洗脱条件同上。按照上述提取分离方法得到南五味子木质素J的纯品约为3.06g，其提取率达到53％。

上述TLC检测方法如下：

直接用收集液点样，点于硅胶GF₂₅₄薄层板上，石油醚(沸程30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1，v/v/v)放置后的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下检视。在Rf值约0.65处可以看到很明显的荧光斑点。将符合上述条件的洗脱组分合并。

上述HPLC检测方法如下：

色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相为甲醇-水(80∶20，v/v)或者乙腈-水(70∶30，v/v)；检测波长为214nm。

供试液制备：分别从每组份中吸取1ml，置蒸发皿中，挥干溶剂，用甲醇2ml溶解，滤过，即得。

测定法：分别精密吸取供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

测定结果判定：供试品色谱中，保留时间t为(16～17min)处有相对应的色谱峰，合并峰面积相对较大(纯度大于90％)的洗脱组份。

二、化合物结构鉴定：

1、紫外光谱(UV)

仪器：Perkin-Elmer Lambda 25紫外光谱仪；

数据：UV(MeOH)λ_max nm(log ε)：214(4.68)，254(sh)，283(3.57)；

2、红外光谱(IR)

仪器：WQF-410 FT-IR

测定方法：KBr压片；

数据：IR(KBr)v_max3523(OH)，1741(C＝O)，1617，1573，1504(Ar.)，1469，1421，1365，1263，1236，1180，1151，1095，1054，1028cm^-1。

3、核磁共振谱(NMR)

仪器：Bruker DRX-400型超导核磁共振仪；

溶剂：氘代三氯甲烷(CDCl₃)；

数据：如表1所示；

无畸变极化转移增强核磁共振碳谱(DEPT)：

表1：南五味子木质素J的¹H NMR(400MHz，CDCl₃)和¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)数据

4、质谱(MS)

仪器：MDS SCIEX API 2000 LC/GC/MS；

测定方法：直接进样；ESI源，正离子模式；

数据：ESIMS m/z(％)：995[2M+Na]⁺，509[M+Na]⁺，469[M-OH]⁺，385[M-C₂H₅(CH₃)CHCO₂]⁺。

5、熔点

仪器：Yanagimoto显微熔点测定仪(Yanagimoto，Kyoto，Japan)

熔点：110-112℃

三、综合结构解析

正离子ESIMS给出了m/z 995[2M+Na]⁺和509[M+Na]⁺准分子离子峰以及m/z469[M-OH]⁺和385[M-C₂H₅(CH₃)CHCO₂]⁺碎片离子峰，显示其分子量为486。核磁共振碳谱(¹³C NMR)显示该化合物含27个碳原子。根据其分子量和所含碳原子数可推定该化合物的分子式为C₂₇H₃₄O₈。该化合物的¹H NMR和¹³C NMR谱(表1)除给出了与日本南五味子素甲(Ookawa N.，Ikeya Y.，Taguchi H.，Yosioka I，1981.The consitituentsof Kadsura japonica Dunal.I.The structures of three new lignans，acetyl-，angeloyl- andcaproyl-binankadsurin A.Chem.Pharm.Bull.，29(1)：123-127.)相似的质子和碳信号外，还存在下列基团信号：一个伯碳甲基[δ_H 0.81(3H，t，J＝7.2Hz)；δ_C 11.4]、一个仲碳甲基[δ_H 0.93(3H，d，J＝7.2Hz)；δ_C 16.7]、一个亚甲基[δ_H 1.58和1.42(各1H，m)；δ_C 26.7]、一个次甲基[δ_H 2.41(1H，m)；δ_C 41.3]、一个酯羰基(δ_C 176.3)。这些信号说明在该化合物分子中存在一个2-甲基丁酰氧基。另外，与日本南五味子素甲的¹H和¹³C NMR谱比较，该化合物的¹H NMR谱中未出现日本南五味子素甲的1-OH质子信号，其¹³CNMR谱中的C-1向高场位移而C-2和C-16向低场位移，提示2-甲基丁酰氧基连在C-1位。基于上述分析，推定该化合物即为南五味子木质素J(Kadsuralignan J)(Heran Li，Liyan Wang，Zhigang Yang，et al.Kadsuralignans H-K from Kadsura coccinea and TheirNitric Oxide Production Inhibitory Effects.J.Nat.Prod.2007，Vol.70，No.12：1999-2002)。该化合物的光谱数据与南五味子木质素J的文献(Li et al.，2007)报道数据完全一致。

实施例2、提取分离南五味子木质素J

取粉碎的黑老虎根皮部(过二号筛)2.0Kg，加水12000ml，蒸馏，得挥发油(弃之)，水提液过滤，滤液蒸干得浸膏a，滤渣加12000ml乙醇回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，回收乙醇后得浸膏b，将浸膏a、b合并得浸膏1，并向其中加2000ml热水(90℃以上)，超声10分钟(超声功率300W，频率50kHz)，过滤，得沉淀。其余同实施例1。

按照上述提取分离方法得到南五味子木质素J的纯品约为1.48g。

化合物结构鉴定结果同实施例1。

实施例3、提取分离南五味子木质素J

取粉碎的黑老虎根木部(过三号筛)2.0Kg，加体积浓度为85％丙酮12000ml回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液，回收溶剂后得浸膏1，其余同实施例1。

按照上述提取分离方法得到(2′S)-南五味子木质素J的纯品约为2.54g。

化合物结构鉴定结果同实施例1。

实施例4、提取分离南五味子木质素J

取粉碎的黑老虎根木部(过二号筛)2.0Kg，加体积浓度为50％乙醇溶液40000ml回流提取2次，每次5小时，过滤，合并滤液，回收溶剂后得浸膏1，向浸膏1中加4000ml热水(90℃以上)，超声10分钟(超声功率300W，频率50kHz)，过滤，得沉淀。其余同实施例1。

按照上述提取分离方法得到南五味子木质素J的纯品约为2.36g。

化合物结构鉴定结果同实施例1。

Claims

1.式Ⅰ所示化合物的制备方法，包括下述步骤：

1)将粉碎的黑老虎根木部用有机溶剂或有机溶剂的水溶液进行提取，收集提取液并浓缩得到浸膏，记为浸膏1；

所述有机溶剂为乙醇或丙酮，所述有机溶剂的水溶液中有机溶剂的体积含量为50～95％；所述黑老虎根木部与有机溶剂或有机溶剂的水溶液的配比为1g:(4-20)ml；所述滤渣与有机溶剂或有机溶剂的水溶液的配比为1g:(4-20)ml；所述滤渣和粉碎的黑老虎根木部的混合物与有机溶剂或有机溶剂的水溶液的配比为1g:(4-20)ml；所述提取为回流提取，所述回流提取至少进行2次，每次提取的时间为1-5小时；所述蒸馏中，粉碎的黑老虎根皮部与水的配比为1kg：(3000～20000ml)；

2)向所述浸膏1中加入90℃以上的热水并超声分散，过滤，收集滤渣；将滤渣用三氯甲烷溶解，过滤，收集三氯甲烷液并浓缩，得到浸膏2；所述浸膏1与热水的配比为1g:(1-4)ml；所述滤渣与三氯甲烷的配比为1g:(1-10)ml；

4)将步骤3)处理后的浸膏2进行硅胶柱层析，收集含式Ⅰ所示化合物的洗脱液，挥干溶剂，得到式Ⅰ所示化合物；所述硅胶柱层析的洗脱条件为：以石油醚和乙醚体积比为2:1的混合溶剂为洗脱剂进行等度洗脱；

所述方法还包括对步骤4)得到的式Ⅰ所示化合物进行纯化的步骤，具体方法如下：将式Ⅰ所示化合物进行硅胶柱层析，分段收集洗脱液，将洗脱液用高效液相色谱法检测，合并式Ⅰ所示化合物的纯度大于90％的洗脱液，挥干溶剂，得到纯化后的式Ⅰ所示化合物；所述硅胶柱层析的洗脱条件为：以石油醚和乙醚体积比为7:1的混合溶剂为洗脱剂进行等度洗脱；

所述方法还包括将所述纯化后的式Ⅰ所示化合物进行重结晶的步骤；所述重结晶使用的溶剂为乙醚或石油醚和乙醚体积比为50：50的混合溶剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤4)中进行硅胶柱层析时，分段收集洗脱液，将洗脱液用薄层色谱法或高效液相色谱法检测，合并含式Ⅰ所示化合物的洗脱液。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述薄层色谱法检测的条件如下：用收集的洗脱液点样，采用硅胶GF₂₅₄薄层板，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸体积比为15：5：1的混合液的上层溶液为展开剂，合并Rf值0.60～0.70的洗脱液。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述高效液相色谱法检测的色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相为甲醇-水体积比为80：20的混合溶剂或乙腈-水体积比为70：30的混合溶剂；检测波长为214nm。