CN102552534B - 一种从明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制剂的方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制剂的方法，该方法包括下列步骤：a、采用乙醇水溶液提取明日草，浓缩，干燥，得到明日草浸膏粉；b、采用水煎煮豆豉，浓缩，干燥，得到豆豉浸膏粉；c、采用乙醇水溶液提取辣椒，浓缩，干燥，得到辣椒浸膏粉；d、将明日草浸膏粉、豆豉浸膏粉、辣椒浸膏粉，按照50-100∶10-50∶1的重量比混匀，粉碎过筛，加入淀粉、糊精和乙醇，制成软材，制粒即得。本发明还还公开了一种从明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制剂在制备治疗或预防糖尿病药物中的应用。本发明的降糖制剂的有效成分明确、疗效确定、无毒副作用，提取方法易于实施，应用前景广阔。

Description

一种从明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制剂的方法及应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，更具体涉及一种从明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制剂的方法，同时还涉及一种上述方法提取的降糖制剂在制备治疗或预防糖尿病药物中的应用。

背景技术

中华医学会糖尿病学分会组织于2007年6月至2008年5月期间完成的中国成年人糖尿病患病率调查显示：年龄标化的总糖尿病患病率是9.7％；糖尿病前期(空腹血糖受损和糖耐量受损)是15.5％(Prevalence of diabetes among men and women in China.NEng J Med.2010；362(12)：1090-1101.)。世界卫生组织2011年9月发布的糖尿病第312号实况报道指出，糖尿病发展下去，可能损害心脏、血管、眼睛、肾脏和神经。并估计，在2006-2015年期间，仅因糖尿病及其并发症，中国就将损失预计的国民收入5580亿美元。如何尽早治疗糖尿病，减少其并发症的发生是当前医药界最迫切需要解决的难题之一。现有的药物治疗可以抑制血糖升高，但是往往会产生继发性耐药及其他副作用，如使血糖过低，或给肾脏功能造成障碍等，最终不得不选择胰岛素注射治疗，该疗法价格昂贵，且往往会被患者不当使用，反而加快了糖尿病的进程。

糖尿病的发生机制十分复杂，涉及到多个组织和器官，理想的治疗药物应是多靶点的：在消化道抑制α-葡萄糖苷酶，减少单糖的产生；在小肠降低葡萄糖转运蛋白2(Glut2)的表达，抑制糖类的吸收；在肌肉，促进细胞对葡萄糖的摄取，迅速降低血糖；在脂肪，抑制脂肪细胞分化和脂肪酸的合成，减少脂质在细胞内的堆积；在胰岛，提高胰岛素分泌，多靶点同时作用才能有效地预防和治疗糖尿病。针对上述机理，本发明将明日草、豆豉和辣椒科学地组合起来。

明日草(Angelica keiskei)属繖形花科，是一种多年生草本植物，富含查尔酮、黄酮，具有很强的药用保健作用。在日本，明日草被当做防治糖尿病的保健食品广泛使用。动物实验研究表明，明日草能够提高骨骼肌细胞对葡萄糖的摄取能力，从而发挥一定的降糖功效(Antidiabetic activities of chalcones isolated from a Japanese Herb，Angelicakeiskei.J Nutr Sci Vitaminol.2007；53(2)：133-137.Prenylated chalcones 4-hydroxyderricinand xanthoangelol stimulate glucose uptake in skeletal muscle cells by inducing GLUT4translocation.Mol Nutr Food Res.2011；55(3)：467-75.)。

豆豉为豆科植物大豆(Glycine max)种子的发酵加工品。它是一种无副作用，价格便宜，含有多种维生素、酶和氨基酸的传统健康食品。目前日本研制出了豆豉作为降糖的保健食品。研究资料表明豆豉中的大豆肽能使小肠中的α-葡萄糖苷酶活力下降，从而使由淀粉和砂糖消化生成的单糖减少，能减缓小肠对糖份的吸收，所以只能吸收单糖的小肠无法快速吸收糖份了，从而能防止餐后血糖迅速上升。另外豆豉中的异黄酮能加速脂肪细胞的分解，改善脂类代谢，改善糖尿病的症状(Efficacy and safety of Touchi extract，an alpha-glucosidase inhibitor derived from fermented soybeans，in non-insulin-dependentdiabetic mellitus.J Nutr Biochem.2001；12(6)：351-356.)。

辣椒(Chillies)是一种茄科辣椒属植物。辣椒对糖尿病的防治有益。辣椒中含有丰富的辣椒素。研究表明辣椒中的辣椒素可使脂肪细胞中辣椒素受体表达上调，促进[Ca²⁺]i升高，并引起细胞内PPARγ等多种肥胖相关因子的表达改变，从而抑制脂肪细胞分化和脂肪酸的合成，减少脂质在细胞内的堆积(Activation of transient receptor potentialvanilloid type-1 channel prevents adipogenesis and obesity.Circ Res.2007；100(7)：1063-1070.)。试验表明，服用辣椒素的动物比没有服用辣椒素的动物血糖明显降低，同时测得的血胰岛素浓度则明显升高。因此，辣椒中的辣椒素可能提高了胰岛素的分泌量，也有可能是延长了胰岛素的作用时间(Dietary Red Chilli(Capsicumfrutescens L.)is Insulinotropic rather than Hypoglycemic in Type 2 Diabetes Model of Rats.Phytother Res.2008；22(8)：1025-1029.)。

明日草、豆豉和辣椒单用均有一定的降糖保健功能，但效果不强，目前只能开发成保健食品辅助患者提高生活质量，无法开发成药物，目前也没有将明日草、豆豉和辣椒制成复方制剂用于治疗糖尿病的相关报道。

因此，本发明将明日草、豆豉和辣椒组合开发，制成降糖制剂以治疗糖尿病，明日草能抑制小肠Glut2的活性，减少小肠对糖的吸收，明日草还能够提高细胞对血中葡萄糖的摄取，降低胰岛素抵抗程度；豆豉抑制α-葡萄糖苷酶活性，减少小肠对糖的消化；再者，适量的辣椒能阻止脂肪细胞分化和脂肪酸的合成，减少脂质在细胞内的堆积，并具有提高胰岛效能的作用。明日草、豆豉和辣椒结合，优势互补，将发挥多靶点治疗糖尿病的功效，提高血胰岛素水平，降低血糖水平。本发明将满足广大病人的需要，预计会有很好的经济效益和社会效益。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明的第一个目的在于提供了一种从明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制剂的方法，明日草采用乙醇水溶液提取，浓缩，干燥，得到明日草浸膏粉；豆豉采用水煎煮，浓缩，干燥得到豆豉浸膏粉；辣椒采用乙醇水溶液提取，浓缩，干燥，得到辣椒浸膏粉；将上述所得浸膏粉按一定的重量比混匀，然后粉碎，过筛，加入辅料制粒即可。本发明方法提取出了明日草、豆豉和辣椒中的有效成分，且易于实施。

本发明的第二个目的在于提供了一种利用上述方法从明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制剂在制备治疗或预防糖尿病药物中的应用。本发明的降糖制剂对糖尿病具有很好的预防和治疗作用。本申请的发明人多年来一直致力于糖尿病的临床治疗和植物活性成分的研究工作。长期的研究和大量的实验结果证实，与现有的主流疗法相比，从明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制剂对糖尿病的预防和治疗具有效果好、副作用小、价格便宜等优势。本发明中，降糖制剂治疗糖尿病的机制在于：①豆豉抑制α-葡萄糖苷酶活性，减少小肠对糖的消化；②明日草抑制小肠Glut2的活性，减少小肠对糖的吸收；③明日草提高细胞对血中葡萄糖的摄取降低血糖；④辣椒减少脂肪细胞分化和脂肪酸的合成，减少脂质在细胞内的堆积。⑤辣椒还能升高血胰岛素浓度。当然，除了上述五种机制之外，明日草、豆豉、辣椒在机制上还存在着相互重叠、共同促进的作用。

应用从明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制剂防治糖尿病既开发了单用明日草、豆豉或辣椒无法达到的良好降糖效果，形成优势互补，亦能在临床治疗方面给糖尿病患者带来福音。

为了实现上述第一个目的，本发明采用了以下技术措施：

一种从明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制剂的方法，其步骤是：

(1)明日草浸膏的制备

取干燥的整株明日草，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入7-10L/kg倍的70-80v/v％乙醇，70-80℃回流提取2-3次，每次1-2小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到明日草浸膏粉；

(2)豆豉浸膏的制备

取干豆豉，80目粉碎，置入提取罐中，每次加7-15L/kg倍的水，90-100℃煎煮2-3次，每次1-1.5小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到豆豉浸膏粉；

(3)辣椒粉浸膏的制备

取干燥的红辣椒，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入7-15L/kg倍的75-95v/v％乙醇，70-80℃回流提取2-3次，每次1.5-2小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到辣椒浸膏粉；

(4)将步骤(1)得到的明日草浸膏粉、步骤(2)得到的豆豉浸膏粉、步骤(3)得到的辣椒浸膏粉，按照50-100∶10-50∶1的重量比进行混合，然后80目粉碎，得混合浸膏粉；

(5)向步骤(4)得到的混合浸膏粉中加入其重量2倍的淀粉与糊精混合物，混合物中淀粉、糊精重量比为4∶1，再加入95v/v％的乙醇制成软材，制粒即得。

本发明的第二个目的通过以下技术措施得以实现：

一种从明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制剂在制备治疗或预防糖尿病药物中的应用，其基本过程是：将提取得到的明日草、豆豉和辣椒的浸膏粉制成的降糖制剂，临用前加水溶解至所需浓度的溶液，再经口给药，间隔一定时间后重复给药。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：

1、明日草采用乙醇水溶液提取，将提取液浓缩、干燥；豆豉采用水煎煮，将提取液浓缩、干燥；辣椒采用乙醇水溶液提取，将提取液浓缩、干燥；整个制备工艺简单，提取方法易于实施；

2、将明日草、豆豉和辣椒科学地组合在一起，多靶点共同作用，比单用更有效，实验证明具有良好的降糖效果；

3、明日草、豆豉和辣椒单品使用均未发现毒副作用，源自天然，更易为患者接受。

附图说明

图1明日草、豆豉和辣椒降糖制剂降低糖尿病大鼠血糖水平。

n＝4，空白对照组，□；模型对照组，

低剂量治疗组，

中剂量治疗组，

高剂量治疗组，

与空白对照组相比，^*P＜0.05；与模型对照组比，^#P＜0.05。与空白对照组相比，模型对照组血糖水平明显升高(P＜0.05)，说明造模成功。与模型对照组相比，明日草、豆豉和辣椒降糖制剂(中剂量和高剂量组)均有明显的增加降糖作用，使血糖恢复至正常水平。

图2明日草、豆豉和辣椒降糖降糖制剂提高糖尿病大鼠血胰岛素水平。

n＝4，空白对照组，□；模型对照组，

低剂量治疗组，

中剂量治疗组，

高剂量治疗组，

与空白对照组相比，^*P＜0.05；与模型对照组比，^#P＜0.05。与空白对照组相比，模型对照组胰岛素水平明显降低(P＜0.05)，说明造模成功。与模型对照组相比，明日草、豆豉和辣椒降糖制剂组均能在一定程度上提高胰岛素水平，其中低剂量组能显著提高血胰岛素水平(P＜0.05)。

图3明日草、豆豉和辣椒降糖制剂恢复糖尿病大鼠肝糖原水平。

n＝4，空白对照组，□；模型对照组，低剂量治疗组，

中剂量治疗组，高剂量治疗组，

与空白对照组相比，^*P＜0.05；与模型对照组比，^#P＜0.05。与空白对照组相比，模型对照组肝糖原含量水平明显增加(P＜0.05)，说明造模成功。与模型对照组相比，明日草、豆豉和辣椒降糖制剂组均能在一定程度上降低肝糖原含量，其中高剂量组能显著降低肝糖原含量(P＜0.05)，使其基本恢复正常水平。

图4明日草、豆豉和辣椒降糖制剂降低糖尿病大鼠小肠黏膜葡萄糖转运蛋白2表达水平。

A、各组典型的DAB染色图，上方为原图(DAB和苏木精复染)，下方为单独剥离出DAB发色图；B、Nuance多光谱成像系统对DAB发色光密度值分析结果，

n＝4，空白对照组，□；模型对照组，

低剂量治疗组，

中剂量治疗组，

高剂量治疗组，

与模型对照组比，^#P＜0.05。与空白对照组相比，模型对照组小肠黏膜葡萄糖转运蛋白2表达水平增加。与模型对照组相比，明日草、豆豉和辣椒降糖制剂组均能在一定程度上降低小肠黏膜葡萄糖转运蛋白2(Glut2)表达水平，其中，中剂量组能显著降低Glut2表达水平(P＜0.05)，使其基本恢复正常水平。

具体实施方式

下面，申请人将结合具体的实施例对本发明方法及其应用做进一步的详细说明，应理解，以下内容不以任何方式对本发明的保护范围加以限制。

实施例1：

一种从明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制剂的方法，其步骤是：

(1)明日草浸膏的制备

取5kg干燥的整株明日草，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入7L/kg倍(即35L)的70％(v/v)乙醇，70℃回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到明日草浸膏粉1080.7g，测得此浸膏粉中查尔酮含量为0.34％(w/w)，备用。

(2)豆豉浸膏的制备

取1kg干豆豉，80目粉碎，置入提取罐中，每次加10L/kg倍(即10L)的水，90℃煎煮3次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到豆豉浸膏粉253.1g，测得此浸膏粉中总大豆肽的含量21.0％(w/w)，备用。

(3)辣椒粉浸膏的制备

取干燥的红辣椒0.1kg，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入7L/kg倍(即0.7L)的75％(v/v)乙醇，70℃回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到辣椒浸膏粉20.6g，测得其中辣椒素的含量为0.08％(w/w)，备用。

(4)取步骤(1)得到的明日草浸膏粉1kg、步骤(2)得到的豆豉浸膏粉200g、步骤(3)得到的辣椒浸膏粉20g进行混合，重量比为50∶10∶1，80目粉碎，得混合浸膏粉；

(5)向步骤(4)得到的混合浸膏粉中加入其重量2倍的淀粉与糊精混合物(混合物中淀粉、糊精重量比4∶1)，再加入4L 95％(v/v)乙醇，制成软材，制粒即得。

实施例2：

一种从明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制剂的方法，其步骤是：

(1)明日草浸膏的制备

取5kg干燥的整株明日草，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入10L/kg倍(即50L)的75％(v/v)乙醇，75℃回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到明日草浸膏粉970.7g，测得此浸膏粉中查尔酮含量为0.35％(w/w)，备用。

(2)豆豉浸膏的制备

取2.5kg干豆豉，80目粉碎，置入提取罐中，每次加7L/kg倍(即17.5L)水，95℃煎煮2次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到豆豉浸膏粉649.8g，测得此浸膏粉中总大豆肽的含量为20.6％(w/w)，备用。

(3)辣椒粉浸膏的制备

取干燥的红辣椒0.1kg，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入10L/kg倍(即1L)的85％(v/v)乙醇，75℃回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到辣椒浸膏粉21.0g，测得其中辣椒素的含量为0.08％(w/w)，备用。

(4)取步骤(1)得到的明日草浸膏粉500g、步骤(2)得到的豆豉浸膏粉500g、步骤(3)得到的辣椒浸膏粉10g进行混合，重量比为50∶50∶1，80目粉碎，得混合浸膏粉；

(5)向步骤(4)得到的混合浸膏粉中加入其重量2倍的淀粉与糊精混合物(混合物中淀粉、糊精重量比4∶1)，再加入3L 95％(v/v)乙醇，制成软材，制粒即得。

实施例3：

一种从明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制剂的方法，其步骤是：

(1)明日草浸膏的制备

取5kg干燥的整株明日草，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入15L/kg倍(即75L)的80％(v/v)乙醇，80℃回流提取2次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到明日草浸膏粉1046.2g，测得此浸膏粉中查尔酮含量为0.32％(w/w)，备用。

(2)豆豉浸膏的制备

取2kg干豆豉，80目粉碎，置入提取罐中，每次加15L/kg倍(即30L)水，100℃煎煮2次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到豆豉浸膏粉501.3g，测得此浸膏粉中总大豆肽的含量为22.1％(w/w)，备用。

(3)辣椒粉浸膏的制备

取干燥的红辣椒0.1kg，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入15L/kg倍(即1.5L)的95％(v/v)乙醇，80℃回流提取2次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到辣椒浸膏粉23.8g，测得其中辣椒素的含量为0.08％(w/w)，备用。

(4)取步骤(1)得到的明日草浸膏粉500g、步骤(2)得到的豆豉浸膏粉250g、步骤(3)得到的辣椒浸膏粉5g进行混合，重量比为100∶50∶1，80目粉碎，得混合浸膏粉；

(5)向步骤(4)得到的混合浸膏粉中加入其重量2倍的淀粉与糊精混合物(混合物中淀粉、糊精重量比4∶1)，再加入2.3L 95％(v/v)乙醇，制成软材，制粒即得。

实施例4：

一种从明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制剂的方法，其步骤是：

(1)明日草浸膏的制备

取20kg干燥的整株明日草，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入10L/kg倍(即200L)的80％(v/v)乙醇，80℃回流提取2次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到明日草浸膏粉4394.0g，测得此浸膏粉中查尔酮含量为0.32％(w/w)，备用。

(2)豆豉浸膏的制备

取2kg干豆豉，80目粉碎，置入提取罐中，每次加15L/kg倍(即30L)水，100℃煎煮2次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到豆豉浸膏粉510.3g，测得此浸膏粉中总大豆肽的含量为22.1％(w/w)，备用。

(3)辣椒粉浸膏的制备

取干燥的红辣椒0.5kg，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入15L/kg倍(即7.5L)的95％(v/v)乙醇，80℃回流提取2次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到辣椒浸膏粉114.2g，测得其中辣椒素的含量为0.08％(w/w)，备用。

(4)取步骤(1)得到的明日草浸膏粉4394g、步骤(2)得到的豆豉浸膏粉439.4g、步骤(3)得到的辣椒浸膏粉43.94g进行混合，重量比为100∶10∶1，80目粉碎，得混合浸膏粉；

(5)向步骤(4)得到的混合浸膏粉中加入其重量2倍的淀粉与糊精混合物(淀粉、糊精重量比4∶1)，再加入15L 95％(v/v)乙醇，制成软材，制粒即得。

一种上述从明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制剂在制备治疗或预防糖尿病药物中的应用基本过程是：临用前将该降糖制剂加入水中，溶解至所需浓度的溶液，再经口给药，间隔一定时间后重复给药。申请人对该降糖制剂作为制备治疗或预防糖尿病药物中的应用进行了系列实验验证，结论是该制剂能显著降低糖尿病小肠黏膜Glut2表达水平，降低血糖水平，恢复血胰岛素水平，维持正常的肝糖原水平。

实施例5：

从明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制剂降低糖尿病大鼠血糖水平

1.动物

SPF级Goto-Kakizaki雄性大鼠(4～5周龄)，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司(动物许可证编号SCXK(沪)2007-0005)。大鼠自由饮水饮食，明暗周期为12小时。

2.分组给药

空白对照组，喂养普通饲料(玉米73.5％，麦麸20％，鱼粉5％，谷粉1％，食盐0.5％)，灌胃生理盐水10ml/kg体重/天；模型对照组，喂养高脂饲料(普通饲料78.8％，胆固醇1％，牛胆盐0.2％，蛋黄粉10％，猪油10％)，灌胃给予生理盐水10ml/kg体重/天；降糖制剂低、中、高剂量治疗组，喂养高脂饲料(普通饲料78.8％，胆固醇1％，牛胆盐0.2％，蛋黄粉10％，猪油10％)，灌胃分别给予低、中、高剂量降糖制剂(由实施例1制得，临用前加入水溶解至所需浓度(分别是7g/L、35g/L、70g/L)的溶液)。每天灌胃一次，剂量分别为70mg/kg/day、350mg/kg/day、700mg/kg/day，灌胃体积为1ml/100g体重。4个月后进行实验。

3.血糖水平的测定

大鼠尾静脉采血测血糖，使用强生稳豪型血糖仪(ONE TOUCH UltraEasy)及血糖试纸(购自强生上海医疗器械有限公司，血糖仪产品编号：AW06477501B，血糖试纸产品编号：YZB/USA0659-2010)测定。

4.实验结果

血糖水平见图1，与空白对照组相比，模型对照组血糖水平明显升高(P＜0.05)，说明造模成功。与模型对照组相比，中高剂量明日草、豆豉和辣椒降糖制剂治疗组均有明显的降糖作用，使血糖恢复至正常水平。

实施例6：

从明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制剂提高糖尿病大鼠血胰岛素水平

1.动物

SPF级Goto-Kakizaki雄性大鼠(4～5周龄)，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司(动物许可证编号SCXK(沪)2007-0005)。大鼠自由饮水饮食，明暗周期为12小时。

2.分组给药

空白对照组，喂养普通饲料(玉米73.5％，麦麸20％，鱼粉5％，谷粉1％，食盐0.5％)，灌胃生理盐水10ml/kg体重/天；模型对照组，喂养高脂饲料(普通饲料78.8％，胆固醇1％，牛胆盐0.2％，蛋黄粉10％，猪油10％)，灌胃给予生理盐水10ml/kg体重/天；降糖制剂低、中、高剂量治疗组，喂养高脂饲料(普通饲料78.8％，胆固醇1％，牛胆盐0.2％，蛋黄粉10％，猪油10％)，灌胃分别给予低、中、高剂量降糖制剂(由实施例2制得，临用前加入水溶解至所需浓度(分别是7g/L、35g/L、70g/L)的溶液)。每天灌胃一次，灌胃体积为1ml/100g体重，剂量分别为70mg/kg/day、350mg/kg/day、700mg/kg/day。4个月后进行实验。

3.血胰岛素水平的测定

放射免疫法测定血清空腹胰岛素水平，胰岛素放射免疫分析药盒购自北京北方生物技术研究所。

利用均相竞争抑制原理，采用平衡竞争法对血清或血浆进行直接测定。标准品或样品中的胰岛素和标记抗原共同与限量的特异性抗体进行竞争性免疫反应。当样品中胰岛素浓度较高时，与抗体结合的标记抗原就少，反之，亦然。用免疫分离剂分离出抗原-抗体复合物，并测定结合物中的放射性。因标记抗原的结合量与样品中胰岛素呈一定的函数关系。因此，通过数学处理就能计算出样品中的胰岛素浓度。

4.实验结果

胰岛素水平见图2，与空白对照组相比，模型对照组胰岛素水平明显降低(P＜0.05)，说明造模成功。与模型对照组相比，明日草、豆豉和辣椒降糖制剂治疗组均能在一定程度上提高胰岛素水平，其中低剂量组能显著提高血胰岛素水平(P＜0.05)。

实施例7：

从明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制剂恢复糖尿病大鼠肝糖原含量

1.动物

SPF级Goto-Kakizaki雄性大鼠(4～5周龄)，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司(动物许可证编号SCXK(沪)2007-0005)。大鼠自由饮水饮食，明暗周期为12小时。

2.分组给药

空白对照组，喂养普通饲料(玉米73.5％，麦麸20％，鱼粉5％，谷粉1％，食盐0.5％)，灌胃生理盐水10ml/kg体重/天；模型对照组，喂养高脂饲料(普通饲料78.8％，胆固醇1％，牛胆盐0.2％，蛋黄粉10％，猪油10％)，灌胃给予生理盐水10ml/kg体重/天；降糖制剂低、中、高剂量治疗组，喂养高脂饲料(普通饲料78.8％，胆固醇1％，牛胆盐0.2％，蛋黄粉10％，猪油10％)，灌胃分别给予低、中、高剂量降糖制剂(由实施例3制得，临用前加入水溶解至所需浓度(分别是7g/L、35g/L、70g/L)的溶液)。每天灌胃一次，灌胃体积为1ml/100g体重，剂量分别为70mg/kg/day、350mg/kg/day、700mg/kg/day。4个月后进行实验。

3.肝糖原的测定

采用肝糖原测试盒(购自南京建成生物工程研究所)。

测定原理：糖原在浓硫酸的作用下可脱水生成糖醛衍生物，后者再与蒽酮作用形成蓝色化合物，与同法处理的标准葡萄糖溶液比色定量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前先将组织放入浓碱溶液中加热以破坏其他成分而保留糖原。

4.实验结果

肝糖原水平见图3，与空白对照组相比，模型对照组肝糖原含量水平明显增加(P＜0.05)，说明造模成功。与模型对照组相比，明日草、豆豉和辣椒降糖制剂治疗组均能在一定程度上降低肝糖原含量，其中高剂量组能显著降低肝糖原含量(P＜0.05)，使其基本恢复至正常水平。

实施例8：

从明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制剂降低糖尿病大鼠小肠黏膜葡萄糖转运蛋白2表达水平

1.动物

SPF级Goto-Kakizaki雄性大鼠(4～5周龄)，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司(动物许可证编号SCXK(沪)2007-0005)。大鼠自由饮水饮食，明暗周期为12小时。

2.分组给药

空白对照组，喂养普通饲料(玉米73.5％，麦麸20％，鱼粉5％，谷粉1％，食盐0.5％)，灌胃生理盐水10ml/kg体重/天；模型对照组，喂养高脂饲料(普通饲料78.8％，胆固醇1％，牛胆盐0.2％，蛋黄粉10％，猪油10％)，灌胃给予生理盐水10ml/kg体重/天；降糖制剂低、中、高剂量治疗组，喂养高脂饲料(普通饲料78.8％，胆固醇1％，牛胆盐0.2％，蛋黄粉10％，猪油10％)，灌胃给予低、中、高剂量降糖制剂(由实施例4制得，临用前加入水溶解至所需浓度(分别是7g/L、35g/L、70g/L)的溶液)。每天灌胃一次，灌胃体积为1ml/100g体重，剂量分别为70mg/kg/day、350mg/kg/day、700mg/kg/day。4个月后处死动物，取小肠进行实验。

3.小肠黏膜葡萄糖转运蛋白2(Glut2)表达水平测定

取新鲜小肠，4％甲醛固定后，常规技术石蜡包埋，4μm切片，载玻片烤箱中60℃，40min，二甲苯脱蜡，乙醇脱水，0.01M柠檬酸盐缓冲液修复抗原，血清封闭1小时后，Glut2一抗孵育过夜，PBS洗脱3次后，二抗孵育3小时，DAB发色，然后苏木精进行复染，中性树脂封片，加盖玻片，60℃0.5小时烘干。Nuance多光谱成像系统对DAB发色结果进行拍照和定量分析。

4.实验结果

DAB发色照片见图4-A，如图所示，模型对照组DAB染色较空白对照组深，从明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制剂治疗组均能在一定程度上降低大鼠小肠黏膜Glut2表达水平，Nuance多光谱成像系统对DAB发色结果进行的定量分析结果如图4-B所示，与空白对照组相比，模型对照组Glut2表达水平有一定程度的升高。与模型对照组相比，明日草、豆豉和辣椒降糖制剂治疗组均能在一定程度上降低Glut2表达水平，其中，中剂量组能显著降低Glut2表达水平(P＜0.05)，使其基本恢复至正常水平。

Claims (2)

1.一种从明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制剂的方法，其步骤是：

(1)明日草浸膏的制备

取干燥的整株明日草，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入7-10L/kg倍的70-80v/v％乙醇，70-80℃回流提取2-3次，每次1-2小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到明日草浸膏粉；

(2)豆豉浸膏的制备

取干豆豉，80目粉碎，置入提取罐中，每次加7-15L/kg倍的水，90-100℃煎煮2-3次，每次1-1.5小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到豆豉浸膏粉；

(3)辣椒粉浸膏的制备

取干燥的红辣椒，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入7-15L/kg倍的75-95v/v％乙醇，70-80℃回流提取2-3次，每次1.5-2小时，合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得到辣椒浸膏粉；

(4)将步骤(1)得到的明日草浸膏粉、步骤(2)得到的豆豉浸膏粉、步骤(3)得到的辣椒浸膏粉，按照50-100∶10-50∶1的重量比进行混合，然后80目粉碎，得混合浸膏粉；

(5)向步骤(4)得到的混合浸膏粉中加入其重量2倍的淀粉与糊精混合物，混合物中淀粉、糊精重量比为4∶1，再加入95v/v％的乙醇制成软材，制粒即得。

2.根据权利要求1所述的方法提取的降糖制剂在制备治疗或预防糖尿病的药物中的应用。

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