CN102552154A - 蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的白蛋白纳米粒制剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的制备方法及分别制备该复合物和白蛋白的油水两相，制成白蛋白纳米粒制剂，本发明的制备方法制得的制剂具有辅料用量少、载药量高、稳定性好、制备工艺简单，适合工业化大生产，本发明制备的制剂具有肿瘤靶向性，具有较好的临床应用价值。

Description

蒽 环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的白蛋白纳米粒制剂

技术领域

本发明涉及一种可以广泛应用于工业生产的高稳定性的蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的白蛋白纳米粒制剂及其制备方法，涉及医药技术领域。

背景技术

蒽环类抗肿瘤抗生素是有效的广谱的重要抗肿瘤药物，临床上广泛用于治疗各种癌症，如乳腺癌、肝癌、肺癌、白血病、淋巴瘤及多种其他实体瘤。蒽环类抗肿瘤抗生素对机体可产生广泛的生物化学效应，具有强烈的细胞毒性作用，其作用机制主要是药物分子直接嵌入DNA碱基对之间，干扰转录过程，阻止mRNA的形成，起到抗肿瘤作用。由于它们的醌-氢醌官能团，蒽环类抗生素还被认为与导致DNA损伤的自由基的生成有关。这类药物主要包括：阿霉素(Doxorubicin, ADM )、柔红霉素(Daunorubicin, DNR )、表阿霉素(Epirubicin, EPI)、吡喃阿霉素(Pirarubicin, THP-ADM)、阿克拉霉素(Aclacinomycin, ACM)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、伊达比星(Idarubician)等。

但是，蒽环类抗生素能特异性地结合心磷脂，研究发现其是在心脏的线粒体和恶性细胞的膜上以高浓度存在于磷脂，由此导致蒽环类抗肿瘤抗生素的心脏毒副作用。另外，像其他细胞毒抗肿瘤药物一样，蒽环类抗生素缺乏对肿瘤组织的选择性，存在着严重的剂量依赖性急性毒性，临床上表现为：恶心、呕吐、脱发、骨髓抑制。蒽环类抗生素的毒副作用严重地限制了其长期重复用于临床上肿瘤的治疗。

为减轻蒽环类抗肿瘤抗生素的毒副作用，药学工作者进行了不懈的努力，包括调整给药方案，研制类似物及剂型改进等。若能改变蒽环类抗肿瘤抗生素的组织分布和提高其对肿瘤组织的选择性可显著降低毒性。现已有美国NeXstar 制药公司研发的柔红霉素脂质体DaunoXome®于1996 年得到FDA 的批准在美国上市。由美国Sequus 公司开发的阿霉素脂质体“Doxil”®(多喜)也已上市，主要用于治疗复发性卵巢癌和人体免疫缺乏病毒(HIV)引起的难以医治的卡巴氏肉瘤。

专利文献CN 200510037263.0公开了一种吡柔比星脂质体，蒽环类抗肿瘤抗生素的脂质体制剂可减少药物在心脏的蓄积，增加药物在肿瘤组织的分布，从而减轻剂量依赖的急性毒性；专利文献CN101361747A还公开了一种用白蛋白稳定的阿霉素纳米颗粒的冷冻干燥粉末制剂以及该制剂在治疗对阿霉素敏感的治疗恶性肿瘤方面的应用，该文献将其制成了脂质体。

但是，蒽环类抗肿瘤抗生素脂质体也存在着诸多缺点：目前市场上使用的蒽环类抗肿瘤抗生素多为盐形式，具有亲水性。药物包封在脂质体中容易泄漏，制剂稳定性较差；脂质体的制备过程复杂，工业生产成本相对偏高。

目前还有一些专利申请披露了将蒽环类抗肿瘤抗生素做成脂质纳米粒，如专利文献CN200710044137.7公开了一种吡柔比星或盐酸吡柔比星脂质纳米粒及其制备方法，虽然脂质纳米粒载体系统具有改善吸收、调节释药速度及一定的靶向性等特点，特别是对传递水难溶性药物。目前市场上使用的蒽环类抗肿瘤抗生素多为盐形式，具有亲水性，所以药物制成脂质纳米粒包封率较差。

随着新的药物传递系统的不断发展，通过一些特殊的传递方法与策略，可以部分解决药物存在的一些问题，诸如溶解性差、稳定性不好、毒性和不良反应大等。载体输送系统亚微粒(如微乳、微球、脂质体)的研究已成为药物新剂型研究中非常活跃的领域。脂质体、微乳、亚微乳、聚合物纳米粒等一系列药物载体被发展起来，并在选择性吸收和靶向给药等方面取得了显著的成就。近年来药物传递系统的研究取得了很大的进展，但以安全有效的方式传递药物仍然是药剂学领域亟待解决的问题。

白蛋白纳米粒是以白蛋白为载体，包封或吸附药物，经过固化分离而形成的实心球体。早在20世纪70年代已有制备白蛋白纳米粒的相关报道，最初仅将其作为诊断剂，经过近40年的发展，白蛋白纳米粒已成为一种相对成熟的药物传递系统。白蛋白材料具有安全无毒、无免疫原性、可生物降解、生物相容性好等特点，不过，白蛋白纳米粒作为药物载体，同样需要药物具有较好的脂溶性。

制备白蛋白纳米粒的方法有乳化固化法、去溶剂化法、聚合物分散法、快速膨胀超临界溶液法、机械研磨法、PH凝聚法。这些传统方法涉及到化学交联或热变性，化学交联为非特异性，存在于蛋白质结构内的任何亲核基团都有反应活性；热变性法会不可逆转地改变蛋白质结构，所得蛋白纳米粒的生物降解性差，毒性大，残留的甲醛、戊二醛等醛类物质，会造成大分子物质失活。CN1736489A、CN1616089A、CN1772290A均披露了白蛋白纳米粒的制备方法、其中制备纳米过程中需要加入脱水剂和交联剂，使白蛋白变性固化，使得白蛋白是以变性的方式包裹在药理活性物质的表面，这种白蛋白纳米粒进入体循环后主要被肝、肾、骨髓等处网状内皮系统的巨噬细胞吞噬，主要具有器官靶向。变性固化后的白蛋白纳米粒失去了生物学特征，不具有肿瘤的趋向性。

2004年，美国生物科学有限公司公开了一种基于二硫键形成的白蛋白纳米粒制备技术，该技术是以药物纳米粒为核心，白蛋白以二硫键部分交联包裹在纳米粒表面，一方面保留了白蛋白的全部生物学特征，另一方面避免了使用交联剂造成的醛类物质残留引起毒副作用等问题。美国生物科学有限公司公开的专利(ZL97199720.9)将紫杉醇类药物制成了适合临床需要的、稳定的白蛋白纳米粒制剂，但是我们的实验表明如果不对蒽环类抗肿瘤抗生素活性成分进行亲脂化处理，且不加除白蛋白外其它表面活性剂的情况下，并不能制备出适合临床需要的、具有较高包封率、粒径均匀、稳定的蒽环类抗肿瘤抗生素的白蛋白纳米粒制剂。

综上所述，可以看出目前还没有稳定性好，适于工业化大生产，制备方法简单，而且生产成本低的蒽环类抗肿瘤抗生素的新制剂。开发此类蒽环类抗肿瘤抗生素的新制剂将为肿瘤的临床治疗提供一个很好的选择，将会产生良好的社会和经济效益。

发明内容

本发明的目的是提供一种克服上述缺点的稳定性好，载药量包封率高、制备方法简单、疗效好、副作用少的蒽环类抗肿瘤抗生素复合物的白蛋白纳米粒制剂，供临床上使用。

本发明提供的蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物白蛋白纳米粒制剂，旨在提高蒽环类抗肿瘤抗生素的载药量和包封率，降低毒性，适宜于工业化生产，方便临床使用，增加疗效。

本发明的显著特点是联合使用白蛋白和其它表面活性剂作为蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的载体成分，提高载药量和包封率，减少给药剂量，可以改变药物体内分布，具体靶向性，提高疗效，降低毒副作用等；此外，采用生物相容性好、安全无毒、无免疫原性、可生物降解的白蛋白作为载体，可避免用助溶剂增溶难溶药物所带来的毒性和副作用等问题。

本发明通过制备蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物，增加药物的脂溶性，采用适当的有机溶剂将其溶解作为油相，白蛋白溶于水作为水相，两相混合高压均质制成白蛋白纳米粒，旋蒸除去有机溶剂后，经过冷冻干燥，将其配制成药学上可以接受的注射给药纳米粒混悬制剂。

本发明人研究发现将蒽环类抗肿瘤抗生素与油酸制备成油酸复合物，蒽环类抗肿瘤抗生素的氨基部分和油酸的羧基部分以离子对形成复合物，增强其疏水性，使其能更好地溶解在类脂成分中，能显著提高载药量。而且更为重要地，油酸、白蛋白和表面活性剂，这三成分一起能够相互作用，更利于白蛋白纳米粒的稳定，这是现有技术中预料不到的结果。

本发明提供的白蛋白纳米粒粒径在约10-500nm，优选在100-300nm，更优选为150nm左右。

本发明提供了一种蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的白蛋白纳米粒制剂，其包含蒽环类抗肿瘤抗生素、油酸、表面活性剂及白蛋白，也可以加上冻干保护剂和其他药学上可接受辅料，冷冻干燥制成粉末。

本发明的目的之一是提供了一种蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的白蛋白纳米粒制剂，包含蒽环类抗肿瘤抗生素与油酸形成的复合物、表面活性剂及白蛋白，其中蒽环类抗肿瘤抗生素、油酸、表面活性剂及白蛋白的重量份为蒽环类抗肿瘤抗生素1份、油酸1~10份，表面活性剂1~10份、白蛋白1~1000份；优选地，蒽环类抗肿瘤抗生素1份、油酸2~5份、表面活性剂3~6份、白蛋白6~100份。

本发明所述的蒽环类抗肿瘤抗生素包括阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、吡柔比星或阿克拉霉素中的一种或多种混合物。

本发明所述的油酸作为蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的成分。油酸(oleic acid)学名为顺-9-十八烯酸，是一种不饱和脂肪酸。

本发明所述的白蛋白优选人血清白蛋白，其加入的浓度范围约为0.1-25%(w/v)，优选范围0.5-5%(w/v)，更优选1%(w/v)的人血清白蛋白水溶液。在水相中加入白蛋白的作用是起稳定剂的作用，以便其与油酸、表面活性剂的共同作用从而形成稳定的纳米颗粒。

本发明所述的蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的白蛋白纳米粒制剂制备过程中加入的适量表面活性剂，选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、十二烷基硫酸钠、Solutol HS 15、月桂酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、鲸蜡醇硫酸钠、硬脂醇硫酸钠、脂肪酸磺酸化物、烷基芳基磺酸化物、司盘、吐温、卖泽、苄泽、泊洛沙姆、壬基酚、辛基酚、辛基甲酚、平平加O和类似化合物的一种或其混合物；优选蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、泊洛沙姆；更进一步优选蛋黄卵磷脂E80。

本发明的目的之一是提供了一种包含蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的白蛋白纳米粒的制剂，包含蒽环类抗肿瘤抗生素与油酸形成的复合物、表面活性剂、白蛋白、冻干保护剂和其他药学上可接受辅料，基于重量份计为蒽环类抗肿瘤抗生素1份、油酸1～10份、表面活性剂1～10份、白蛋白1～1000份、冻干保护剂10～1000份，其他药学上可接受辅料适量。进一步优选地，蒽环类抗肿瘤抗生素1份、油酸2~5份、表面活性剂3~6份、白蛋白6~100份，冻干保护剂20～300份，其他药学上可接受辅料适量。

本发明所述的蒽环类抗肿瘤抗生素油酸白蛋白纳米粒制剂包括冷冻干燥时保护白蛋白纳米粒结构、形态的冻干保护剂，包括：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、甘露糖、海藻糖、甘氨酸、右旋糖酐中的一种或它们的混合物。优选的冻干保护剂为蔗糖。干燥后的粉末在接触水性介质时自动分散形成白蛋白纳米粒的混悬液。

本发明所述的其他辅料可为等渗调节剂、抗氧化剂、防腐剂、pH调节剂等药剂学制备白蛋白纳米粒的常规赋形剂。

本发明所述的蒽环类抗肿瘤抗生素的白蛋白纳米粒制剂通过注射给药，口服给药、体内局部给药、黏膜吸收给药等方式给药。

本发明的目的之一是提供了一种蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的白蛋白纳米粒的制剂，所述制剂选自注射制剂、口服制剂、缓释制剂、控释制剂、粘膜吸收制剂等。

本发明的目的之一是提供了一种蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的白蛋白纳米粒的制剂在制备减少蒽环类抗肿瘤抗生素副作用的药物中的应用，所述副作用包括蒽环类抗生素缺乏对肿瘤组织的选择性，存在着严重的剂量依赖性急性毒性，临床上表现为：恶心、呕吐、脱发、骨髓抑制。

本发明的目的之一是提供了一种蒽环类抗肿瘤抗生素的油酸复合物白蛋白纳米粒制剂的制备方法，其特征包括下述步骤：

(1)取蒽环类抗肿瘤抗生素的药学上可接受的盐，先用碱性物质中和对应酸之后，再与油酸溶于脂溶性溶剂中，在温度约30℃～约50℃下，优选约45℃的条件下搅拌反应1～2小时，形成蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物；或者直接取蒽环类抗肿瘤抗生素与油酸溶于脂溶性溶剂中，在温度约30℃～约50℃下，优选约45℃的条件下搅拌反应1～2小时，形成蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物；

(2)减压浓缩除去脂溶性溶剂；

(3)用适当的水不溶性有机溶剂溶解上述的药理活性物质；

(4)取适量的白蛋白，优选人血清白蛋白，溶解于适量的水中；

(5)根据表面活性剂的溶解特性，在上述的水相或油相中加入适当的表面活性剂；

(6)油相与水相混合，搅拌或超声形成混悬液；

(7)将步骤(6)中所述的混悬液用制备成纳米乳剂；

(8)减压蒸发除去有机溶剂，即得蒽环类抗肿瘤抗生素的油酸复合物的白蛋白纳米粒混悬溶液。

其中，步骤（1）中的碱性物质主要是用于中和蒽环类抗肿瘤抗生素的药学上可接受盐中的酸根，获得药物分子形式游离碱。所述碱性物质选自氢氧化钠水、碳酸钠水、碳酸氢钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾、三乙胺、氨水，或是两种或多种碱性物质的混合物；步骤（1）所述碱性物质优选碳酸氢钠，其加入量是本领域的常规选择。

作为具体的实施方案之一，步骤(7)中所述的将步骤(6)中所述的混悬液可用高压乳匀机、高剪切混合器、超声处理器、高剪切搅拌器或类似设备制备成纳米乳剂。

本发明所述的药理活性物质即蒽环类抗肿瘤抗生素和油酸形成的复合物优选溶解在一种合适的有机溶剂内，所述溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、四氢呋喃、二氧六环、乙腈、丙酮、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、甲基吡咯烷酮或类似溶剂，以及2种或2种以上这些溶剂的混合物；所述溶剂也可选自大豆油、椰子油、橄榄油、红花油、棉籽油、芝麻油、橙油、苎烯油、C1-C20醇、C2-C20酯、C3-C20酮、聚乙二醇、脂肪烃、芳香烃、卤代烃及其混合物。

其中，步骤(1)所述的脂溶性溶剂指丙酮、乙醇、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯等，优选丙酮。温度范围为20~70℃，优选50℃。

其中，步骤(3)所述的水不溶性有机溶剂指乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、乙醚、正己烷、正庚烷等，优选二氯甲烷。

其中，步骤(5)所述的表面活性剂优选蛋黄卵磷脂E80。

作为具体的实施方案之一，步骤(8)所得蒽环类抗肿瘤抗生素的油酸复合物的白蛋白纳米粒混悬溶液，还可以加入冷冻干燥赋形剂和其他辅料，经过本领域的常规方式冻干成为粉末。

其次，本发明所述的蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物白蛋白纳米粒是在高压和高剪切力条件下经均化作用形成的。这种均化作用通常在高压乳匀机内进行，典型的操作压力在3,000至30,000Psi的范围内，本发明优选的压力在5,000至15,000Psi的范围内更好。可接受的均化方法包括可赋予高剪切和空化作用，如高压乳匀机、高剪切混合器、超声处理器、高剪切搅拌器和类似设备。

最后，溶剂于减压下蒸发，生成由蛋白质包衣的药理活性物质纳米颗粒和蛋白质组成的胶体系统。蒸发方法包括使用旋转蒸发器、降膜蒸发器、喷雾干燥器、冷冻干燥器和类似设备。本发明优选旋转蒸发器。

本发明的优点

由于白蛋白材料具有安全无毒、无免疫原性、可生物降解、生物相容性好等特点，使其在药物输送方面具有以下优点：

(1)可缓释药物，从而延长药物作用时间；

(2)可达到靶向输送的目的；

(3)可在保证药物作用的前提下，减少给药剂量，从而减轻或避免毒副反应；

(4)对亲脂性药物有很好的载药能力；

(5)可提高药物的稳定性，有利于储存。此外，粒子平均粒径在150nm左右的微粒体分散系统可实现药物传递的靶向性，控制药物体内释放，提高患者适应性。

下面再以实施例对本发明加以进一步的说明，同时也结合实施例中附图加以说明，但绝不是对本发明的范围限制。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案。

图1为吡柔比星油酸复合物白蛋白纳米粒的粒径分布图

具体实施方案

实施例 1

取人血清白蛋白50mg，加入9ml注射用水溶解得人血清白蛋白溶液。

取吡柔比星5mg，加入油酸5μl溶于约43℃的丙酮6ml中搅拌1～2小时，得橙黄色澄清溶液。旋蒸除去丙酮即得吡柔比星油酸复合物，加入蛋黄卵磷脂E80 20mg，用二氯甲烷1ml将其溶解，并与上述人血清白蛋白溶液混合，探头超声10次制成混悬液，然后将混悬液在高压乳匀器内乳匀15次，将其旋蒸以除去有机溶剂，加入冻干保护剂蔗糖配制成含10%的蔗糖的吡柔比星油酸复合物白蛋白纳米粒水溶液，在无菌条件下冷冻干燥，即可。

得到的冻干粉末用注射用水重制形成的胶体溶液，平均粒径为170nm，多分散系数（PDI）为0.155。吡柔比星油酸复合物白蛋白纳米粒的粒径分布图见附图1所示。

实施例 2

取人血清白蛋白200mg，加入9ml注射用水溶解得人血清白蛋白溶液，并在溶液中加入卖泽52 10mg。

取吡柔比星5mg，加入油酸5μl溶于约42℃的丙酮6ml中搅拌1～2小时，得橙黄色澄清溶液。旋蒸除去丙酮即得吡柔比星油酸复合物，用二氯甲烷1ml将其溶解，并与上述人血清白蛋白溶液混合，探头超声10次制成混悬液，然后将混悬液在高压乳匀器内乳匀15次，将其旋蒸以除去溶剂，加入冻干保护剂蔗糖配制成含10%的蔗糖的吡柔比星油酸复合物白蛋白纳米粒水溶液，在无菌条件下冷冻干燥，即可。

得到的冻干粉末用注射用水重制形成的胶体溶液，平均粒径为206nm，PDI为0.195。

实施例 3

取人血清白蛋白500mg，加入9ml注射用水溶解得人血清白蛋白溶液。

取盐酸吡柔比星5mg，溶解于1ml水中，加入50mg/ml的NaHCO₃溶液20ul，漩涡一分钟，加入油酸10ul，漩涡至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。加入注射用大豆磷脂 30mg，用二氯甲烷1ml将其溶解，并与上述人血清白蛋白溶液混合，探头超声10次制成混悬液，然后将混悬液在高压乳匀器内乳匀15次，将其旋蒸以除去溶剂，加入冻干保护剂葡萄糖配制成含10%葡萄糖的吡柔比星油酸复合物白蛋白纳米粒水溶液，在无菌条件下冷冻干燥，即可。

得到的冻干粉末用注射用水重制形成的胶体溶液，平均粒径为188nm，PDI为0.145.

实施例 4

取人血清白蛋白50mg，加入9ml注射用水溶解得人血清白蛋白溶液，在溶液中加入十二烷基硫酸钠40mg。

取盐酸阿霉素5mg，溶解于1ml水中，加入50mg/ml的NaHCO3溶液20ul，漩涡一分钟，加入油酸10ul，漩涡至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。用二氯甲烷1ml将其溶解，并与上述人血清白蛋白溶液混合，探头超声10次制成混悬液，然后将混悬液在高压乳匀器内乳匀15次，将其旋蒸以除去溶剂，加入冻干保护剂麦芽糖配制成含10%麦芽糖的吡柔比星油酸复合物白蛋白纳米粒水溶液，冷冻干燥，即可。

得到的冻干粉末用注射用水重制形成的胶体溶液，平均粒径为182nm，PDI为0.134.

实施例 5

取人血清白蛋白100mg，加入9ml注射用水溶解得人血清白蛋白溶液，并在溶液中加入F68 10mg溶解。

取阿克拉霉素5mg，加入油酸5μl溶于约45℃的丙酮6ml中搅拌1～2小时，得橙黄色澄清溶液。旋蒸除去丙酮即得吡柔比星油酸复合物，用二氯甲烷1ml将其溶解，并与上述人血清白蛋白溶液混合，探头超声10次制成混悬液，然后将混悬液在高压乳匀器内乳匀15次，将其旋蒸以除去溶剂，加入冻干保护剂配制成含5%葡萄糖和5%甘露糖的吡柔比星油酸复合物白蛋白纳米粒水溶液，在无菌条件下冷冻干燥，即可。

得到的冻干粉末用注射用水重制形成的胶体溶液，平均粒径为224nm，PDI为0.198.

实施例 6

取人血清白蛋白80mg，加入9ml注射用水溶解得人血清白蛋白溶液。

取盐酸柔红霉素5mg，溶解于1ml水中，加入50mg/ml的NaHCO3溶液20ul，漩涡一分钟，加入油酸10ul，漩涡至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。加入注射用大豆磷脂 30mg，用二氯甲烷1ml将其溶解，并与上述人血清白蛋白溶液混合，探头超声10次制成混悬液，然后将混悬液在高压乳匀器内乳匀15次，将其旋蒸以除去溶剂，加入冻干保护剂配制成含10%的蔗糖的吡柔比星油酸复合物白蛋白纳米粒水溶液，在无菌条件下冷冻并冻干48小时。

得到的冻干粉末用注射用水重制形成的溶液，平均粒径为179nm，PDI为0.175.

实施例 7

取人血清白蛋白30mg，加入9ml注射用水溶解得人血清白蛋白溶液，再将50mg Solutol HS 15加入溶解。

取伊达比星10mg，溶解于2ml水中，加入50mg/ml的碳酸氢钠溶液40ul，漩涡二分钟，加入油酸20ul并超声至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。加入注射用大豆磷脂 20mg，用二氯甲烷1ml将其溶解，并与上述人血清白蛋白溶液混合，探头超声10次制成混悬液，然后将混悬液在高压乳匀器内乳匀15次，将其旋蒸以除去溶剂，加入冻干保护剂配制成含10%的蔗糖的吡柔比星油酸复合物白蛋白纳米粒水溶液，在无菌条件下冷冻干燥，即可。

得到的冻干粉末用注射用水重制形成的胶体溶液，平均粒径为170nm，PDI为0.166。

实施例 8

取人血清白蛋白300mg，加入9ml注射用水溶解得人血清白蛋白溶液，在溶液中加入吐温80 20mg。

取伊达比星10mg，溶解于2ml水中，加入50mg/ml的碳酸氢钠溶液40ul，漩涡二分钟，加入油酸10ul并超声至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。加入注射用大豆磷脂 20mg，用二氯甲烷1ml将其溶解，并与上述人血清白蛋白溶液混合，探头超声10次制成混悬液，然后将混悬液在高压乳匀器内乳匀15次，将其旋蒸以除去溶剂，加入冻干保护剂配制成含10%的蔗糖的吡柔比星油酸复合物白蛋白纳米粒水溶液，在无菌条件下冷冻干燥，即可。

得到的冻干粉末用注射用水重制形成的胶体溶液，平均粒径为184nm，PDI为0.196。

实施例 9

取人血清白蛋白800mg，加入9ml注射用水溶解得人血清白蛋白溶液。

取伊达比星5mg，溶解于2ml水中，加入50mg/ml的碳酸氢钠溶液40ul，漩涡二分钟，加入油酸20ul并超声至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。加入注射用二硬脂酰磷脂酰甘油20mg，用二氯甲烷1ml将其溶解，并与上述人血清白蛋白溶液混合，探头超声10次制成混悬液，然后将混悬液在高压乳匀器内乳匀15次，将其旋蒸以除去溶剂，加入冻干保护剂配制成含10%的蔗糖的吡柔比星油酸复合物白蛋白纳米粒水溶液，在无菌条件下冷冻并冻干48小时。

得到的冻干粉末用注射用水重制形成的溶液，平均粒径为198nm，PDI为0.176。

实施例 10

取人血清白蛋白3g，加入9ml注射用水溶解得人血清白蛋白溶液。

取盐酸吡柔比星5mg，溶解于2ml水中，加入50mg/ml的碳酸氢钠溶液40ul，漩涡二分钟，加入油酸10ul并超声至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀，用二氯甲烷1ml将其溶解，并与上述人血清白蛋白溶液混合，探头超声10次制成混悬液，然后将混悬液在高压乳匀器内乳匀15次，将其旋蒸以除去溶剂，加入冻干保护剂配制成含10%的蔗糖的吡柔比星油酸复合物白蛋白纳米粒水溶液，在无菌条件下冷冻并冻干48小时。

得到的冻干粉末用注射用水重制形成的溶液，平均粒径为150nm，PDI为0.169。

实施例 11 不同处方的制剂工艺的可行性对比。

实施例1是加入了油酸、白蛋白、表面活性剂；对比例1是考察不加油酸的影响；对比例2是考察不加表面活性剂的影响。

成分	实施例1	对比例1	对比例2
				吡柔比星	5mg	5mg	5mg
油酸	5μl	/	5μl
				人血清白蛋白	50mg	50mg	50mg
蛋黄卵磷脂E80	20mg	20mg	/
				包封率	>85%	<50%	<50%
粒径	170nm	1075nm	2643nm
				PDI	0.155	0.315	0.406

从上表可看出，实施例1有较好的包封率、粒径和PDI；对比例1有较小的包封率、较大的粒径和PDI；对比例2有较小的包封率、较大的粒径和PDI，且观察到肉眼可见的大颗粒。可见油酸、表面活性剂、白蛋白三者的组合才能得到粒径较小、分布均匀、包封率高的纳米粒。

Claims (10)

1.一种蒽环类抗肿瘤抗生素的油酸复合物白蛋白纳米粒制剂，其特征在于包含油酸与蒽环类抗肿瘤抗生素形成的复合物、人血清白蛋白、表面活性剂，其中，基于重量份计，蒽环类抗肿瘤抗生素1份、油酸1~10份，表面活性剂1~10份、白蛋白1~1000份。

2.根据权利要求1所述的蒽环类抗肿瘤抗生素的油酸复合物白蛋白纳米粒制剂，其特征在于所述表面活性剂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱 、磷脂酰乙醇胺、十二烷基硫酸钠、月桂酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、鲸蜡醇硫酸钠、硬脂醇硫酸钠、脂肪酸磺酸化物、烷基芳基磺酸化物、司盘、吐温、卖泽、苄泽、泊洛沙姆、壬基酚、辛基酚、辛基甲酚、平平加O和类似化合物的一种或其混合物。

3.根据权利要求1所述的蒽环类抗肿瘤抗生素的油酸复合物白蛋白纳米粒制剂，其特征在于所述白蛋白选自人血清白蛋白。

4.根据权利要求1所述的蒽环类抗肿瘤抗生素的油酸复合物白蛋白纳米粒制剂，其特征在于所述白蛋白纳米粒粒径分布范围在40 ～1000 nm，平均粒径为50 ～250 nm。

5.一种包含蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的白蛋白纳米粒的制剂，其特征在于包含，基于重量份计，蒽环类抗肿瘤抗生素1份、油酸2~5份、表面活性剂3~6份、白蛋白6~100份，冻干保护剂20～300份，其他药学上可接受辅料适量。

6.权利要求5所述的制剂，其特征在于选自注射制剂、口服制剂、缓释制剂、控释制剂、粘膜吸收制剂。

7.一种制备权利要求1-4所述的蒽环类抗肿瘤抗生素的油酸复合物白蛋白纳米粒制剂的方法，其特征包括下述步骤：

(1)取蒽环类抗肿瘤抗生素的药学上可接受的盐，先用碱性物质中和对应酸之后，再与油酸溶于脂溶性溶剂中，在温度约30℃～约50℃下搅拌反应1～2小时，形成蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物；或者直接取蒽环类抗肿瘤抗生素与油酸溶于脂溶性溶剂中，在温度约30℃～约50℃下搅拌反应1～2小时，形成蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物；

(2)减压浓缩除去脂溶性溶剂；

(3)用适当的水不溶性有机溶剂溶解上述的药理活性物质；

(4)取适量的白蛋白，优选人血清白蛋白，溶解于适量的水中；

(5)根据表面活性剂的溶解特性，在上述的水相或油相中加入适当的表面活性剂；

(6)油相与水相混合，搅拌或超声形成混悬液；

(7)将步骤(6)中所述的混悬液用制备成纳米乳剂；

(8)减压蒸发除去有机溶剂，即得。

8.一种制备权利要求5-6所述的蒽环类抗肿瘤抗生素的油酸复合物白蛋白纳米粒的制剂方法，其特征在于将权利要求7所得的产品，加入冷冻干燥赋形剂，冻干成为粉末；或进一步加入其他赋形剂制成药学上可接受的制剂。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于药学上可接受的制剂选自注射制剂、口服制剂、缓释制剂、控释制剂、粘膜吸收制剂。

10.一种蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的白蛋白纳米粒的制剂在制备减少蒽环类抗肿瘤抗生素副作用的药物中的应用，其中，所述副作用包括蒽环类抗生素缺乏对肿瘤组织的选择性，存在着严重的剂量依赖性急性毒性，临床上表现为：恶心、呕吐、脱发、骨髓抑制。

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