CN101810570B

CN101810570B - 蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物脂质纳米粒制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN101810570B
Application number: CN2010101503461A
Authority: CN
Inventors: 张凌; 龚照墉; 刘振谧
Original assignee: Chengdu Shichuang Biopharmaceutical Technology Co Ltd
Current assignee: Sichuan Baili Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2010-04-16
Filing date: 2010-04-16
Publication date: 2012-06-20
Anticipated expiration: 2030-04-16
Also published as: CN101810570A

Abstract

本发明提供了一种蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物的脂质纳米粒制剂及其制备方法，该脂质纳米粒制剂包含蒽环类抗肿瘤抗生素与脂肪酸形成的复合物，以及脂质纳米粒载体成分的磷脂和类脂，其重量比为1∶1～10∶1～10∶1～1000。

Description

蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物脂质纳米粒制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，确切地说是提供一种可以广泛应用于工业生产的蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物脂质纳米粒制剂及其制备方法。

背景技术

蒽环类抗肿瘤抗生素是一类临床常用的广谱抗肿瘤药物，对机体可产生广泛的生物化学效应，具有强烈的细胞毒性作用，其作用机制主要是药物分子嵌入DNA，抑制核酸的合成。蒽环类抗肿瘤抗生素被广泛用于治疗各种癌症，如白血病、淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、肝癌及多种其他实体瘤。这类抗肿瘤药物主要包括：阿霉素(Doxorubicin，ADM)、柔红霉素(Daunorubicin，DNR)、表阿霉素(Epirubicin，EPI)、吡喃阿霉素(Pirarubicin，THP-ADM)、阿克拉霉素(Aclacinomycin，ACM)等。然而，像其他细胞毒抗肿瘤药物一样，蒽环类抗肿瘤抗生素缺乏对肿瘤组织的选择性，静脉注射后，毒副作用大。除了造成骨髓抑制，胃肠道毒性及脱发外，还可引起严重的心脏毒性，一般表现为各种心率失常，累积量大时可发生不可逆的心肌损伤乃至充血性心力衰竭。这些毒副作用使蒽环类抗肿瘤抗生素的临床应用受到了很大限制。

为减轻蒽环类抗肿瘤抗生素的毒副作用，药学工作者进行了不懈的努力，包括调整给药方案，研制类似物及剂型改进等，其中最为成功的是脂质体制剂的研制成功。

蒽环类抗肿瘤抗生素的脂质体制剂可减少药物在心脏的蓄积，增加药物在肿瘤组织的分布，从而减轻剂量依赖的急性毒性，并获准用于治疗临床上的各种类型的癌症，且取得了较好的治疗效果。已上市的蒽环类抗肿瘤抗生素脂质体产品有阿霉素脂质体、柔红霉素脂质体。

美国NeXstar制药公司研发的柔红霉素脂质体Dauno 于1996年得到FDA的批准在美国上市。最早上市的阿霉素脂质体是美国Sequus公司开发的

(多喜)”，主要用于治疗复发性卵巢癌和人体免疫缺乏病(HIV)引起的难以医治的卡巴氏肉瘤。除多喜外，阿尔扎/先灵葆雅公司开发的PEG修饰的阿霉素脂质体

(楷莱)于2003年被批准上市。此外，Elan公司也已经上市了阿霉素柠檬酸盐脂质体注射液

主要用于治疗乳腺癌。

虽然脂质体作为抗肿瘤药物的传递系统的优势是明显的，已经有一些成功的商品化制剂。但是，脂质体制剂本身的一些缺点限制了其发展。

一、脂质体的稳定性不够好，储存和使用条件较为苛刻。如阿尔扎/先灵葆雅公司开发的阿霉素长循环脂质体

必须在2-8℃条件下保存，使用时除5％葡萄糖注射液外的其他稀释剂或任何抑菌剂都可能使本品产生沉淀。

二、脂质体的制备过程复杂，工业生产成本相对偏高，致使其价格也十分昂贵，例如：的价格高达1200美元/支，很多患者无法承担如此昂贵的医药费用，这极大地限制了脂质体制剂的临床使用。

因此，近年来，制备方法简单、稳定性好的脂质纳米粒(Lipid nanoparticles，LN)越来越受到药物制剂研究者的重视。脂质纳米粒系指以天然或合成类脂如三酰甘油等为载体材料，将药物包裹或内嵌于类脂核中，制成粒径约为50～1000nm的胶粒给药系统。LN的最大特点一是采用生理相容性好、毒性低的类脂材料为载体，降低了其对人体的毒副作用；二是可采用已有成熟工艺的高压均质法进行工业化生产。同时，类脂基质又使它具有聚合物纳米粒的优点，如可以控制药物的释放、避免药物的降解，稳定性好以及良好的靶向性等。此外，LN的水分散系统可以进行高压蒸汽灭菌，具有长期的物理化学稳定性，也可通过冻干或喷雾干燥法制成固体粉末，然后加工成片剂、胶囊剂、丸剂等剂型，以改善患者的顺应性。但脂质纳米粒主要适合于载亲脂性药物，亦可先将亲水性药物通过酯化等方法制成脂溶性较强的前体药物后，再制备LN。以脂质纳米粒作为药物载体，需要药物有较好的脂溶性，这样药物才能被包裹在纳米粒中同时具有较高的载药量和包封率。

由于蒽环类抗肿瘤抗生素的脂溶性通常较小，难以溶解在类脂材料中，限制了该类药物脂质纳米粒的研究开发。该类药物脂质纳米粒的文献报道较少，且其载药量不高。如专利CN101129335报道的阿霉素纳米脂质载体，其载药量为1-5％，包封率为67.1％。

一般而言，要将药物包裹在脂质纳米粒中，就需要提高药物的脂溶性，目前可以采用的提高药物脂溶性方法有：

一、通过酯化等化学合成的方法将药物制成脂溶性较强的前体药物。这种方法的缺陷是有可能影响药物的药理活性且制备方法复杂。

二、带电荷的药物可以通过与带相反电荷的亲脂性离子形成离子对的方法增强药物的脂溶性，此种方法需要使用的反离子生理相容性好，可以用于人体。而目前使用的反离子大多都是离子型表面活性剂，毒性较大。

三、某些药物如黄酮类药物可以与磷脂形成磷脂复合物提高其脂溶性。这种方法的缺陷在于只有少数的具有特定结构的药物才能形成磷脂复合物而且有些磷脂复合物的稳定性差。

到目前为止，已有文献报道通过形成离子对的方法增加蒽环类抗肿瘤抗生素的脂溶性，并将其包裹在脂质纳米粒中。MARIA ROSA GASCO等人报道了使用六癸基磷酸盐与阿霉素形成疏水离子对的方式可以将阿霉素包裹在固体脂质纳米粒中(Pharmacological Research，Vol.42，No.4，2000)。但是，文献报道的方法中使用的反离子为六癸基磷酸盐，这是一种在皮革工业中使用的化工原料，毒性大，不能用于人体。

综上所述，可以看出目前还没有稳定性好，适于工业大生产，制备方法简单，而且生产成本低的的蒽环类抗肿瘤抗生素的新制剂。开发这类新制剂将为肿瘤的临床治疗提供一个很好的选择，产生良好的社会和经济效益。

发明内容

本发明的目的是提供一种克服上述缺点的制备方法简单、疗效好、副作用少的蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物的脂质纳米粒制剂。

本发明的另一目的是提供蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物。

本发明所说的蒽环类抗肿瘤抗生素如未特别说明，通常是指其盐酸盐。

本发明通过制备蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物，显著增加药物的脂溶性，然后再采用类脂为骨架材料溶解或分散蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物，制备成脂质纳米粒，经过或不经过冷冻干燥，将其配制成药学上可以接受的注射、口服或外用的纳米粒混悬制剂。

本发明先将蒽环类抗肿瘤抗生素与脂肪酸制备成复合物。蒽环类抗肿瘤抗生素的胺基与脂肪酸的羧基发生了较强的相互作用，形成了离子对的结构。虽然，现有技术报道通过形成离子对的方法增加蒽环类抗肿瘤抗生素的脂溶性，但是没有报导采用脂肪酸与蒽环类抗肿瘤抗生素形成离子对的技术方案，更为重要的是采用脂肪酸而形成具有离子对结构的蒽环类抗肿瘤抗生素复合物，不仅使复合物与原药相比大大提高了脂溶性，能更好地溶解在类脂成分中，显著提高药物包封率和载药量，而且只需较少量的磷脂和类脂材料，即可制备成脂质纳米粒制剂。

进一步的优点，复合物的水溶性与原药相比大大降低，从而显著提高了蒽环类抗肿瘤抗生素脂质纳米粒制剂的包封率和载药量。

本发明的目的是提供了一种蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物脂质纳米粒制剂，其包含作为药用活性成分的蒽环类抗肿瘤抗生素、用于制备蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物的脂肪酸、作为脂质纳米粒载体成分的磷脂和类脂。其中所述蒽环类抗肿瘤抗生素与脂肪酸、磷脂、类脂的重量比为1∶1～10∶1～10∶1～1000，优选为1∶2～4∶2～4∶1～20。

本发明所述的与脂肪酸形成蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物的蒽环类抗肿瘤抗生素包括阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、吡喃阿霉素、阿克拉霉素，其中优选阿霉素。

本发明用于制备蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物的脂肪酸是选自油酸、亚油酸、亚麻酸、硬脂酸、软脂酸中的一种或多种混合物。

进一步优选以油酸作为蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物的成分。油酸(oleicacid)学名为顺-9-十八烯酸，是一种不饱和脂肪酸。油酸与其他脂肪酸一起，以甘油酯的形式存在于一切动植物油脂中。

本发明所述作为蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物脂质纳米粒组成成分的磷脂及其衍生物是平均分子量为700～800的磷脂，包括：大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、氢化磷脂及聚乙二醇(PEG)化磷脂的一种或其混合物。本发明优选的磷脂为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂的一种或其两种的混合物。

本发明所述的蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物脂质纳米粒含有的类脂是指生理相容好、可生物降解的天然或合成类脂，可以是甘油三酯、甘油酯以及脂肪酸，形态上可以是固体，也可以是液体。固体类脂包括高熔点的三硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、棕榈酸十六酯、山嵛酸甘油酯、硬脂酸等；液体类脂包括大豆油、红花油、芝麻油、棉子油、鱼油、玉米油、中链脂肪酸脂等，本发明所述的类脂可以是上述各种具体类脂的一种或多种的混合物，优选是两种的混合物。

进一步地，制剂还可包含冻干保护剂和其他药学上可接受的赋形剂，经过冷冻干燥后成粉末。经干燥后的粉末在接触水性介质时自动分散形成脂质纳米粒的混悬液。

本发明所述的蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物脂质纳米粒制剂可以包括，也可以不包括冷冻干燥时保护脂质纳米粒结构、形态的冻干保护剂，选自：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、甘露糖、海藻糖、甘氨酸、右旋糖酐中的一种或它们的混合物。优选的冻干保护剂选自葡萄糖、蔗糖以及海藻糖。

本发明所述的蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物脂质纳米粒制剂可包括含PEG长链的表面活性剂，例如：Ploxmer188、吐温80、聚氧乙烯蓖麻油、SolutolHS 15、Myrj52、Myrj59等。这些含PEG长链的表面活性剂包裹在脂质纳米粒表面，使其隐型化，延长脂质纳米粒在血液中的循环时间。

按照本发明，蒽环类抗肿瘤抗生素、脂肪酸、磷脂、类脂的重量比为1∶1～10∶1～10∶1～1000，更优选1∶2～4∶2～4∶1～20。

本发明所述的其他药学上可接受的赋形剂包括等渗调节剂、抗氧化剂、防腐剂、pH调节剂等，本领域技术人员可根据需要添加。

其中，脂质纳米粒的粒径分布范围在40～800nm，平均粒径为50～300nm。

本发明所述的脂质纳米粒制剂可以用于注射给药，也可以通过口服、外用等其它形式给药。

本发明以脂质纳米粒作为蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物的载体。脂质纳米粒是近年来发展较快的一种新型给药载体。本发明提供脂质纳米粒的粒径在200nm左右，具有以下优点：(1)适用于口服、静脉注射、局部等多种给药形式；(2)生理接受性好；(3)对亲脂、亲水性药物有很好的载药能力，不仅提高药物的生物利用度，防止敏感药物的水解，而且具有缓控释和靶向作用；(4)其水分散体系比较稳定，可进行热压灭菌或γ辐射灭菌，制成粉末(冷冻干燥或喷雾干燥)可长期保存；(5)脂质纳米粒适宜工业化生产。此外，粒子平均粒径在50～300nm左右的微粒体分散系统，可实现药物传递的靶向性，控制药物体内释放，提高患者适应性。

文献(阿霉素隐型脂质体用于肿瘤小剂量化疗的研究，吉林大学研究生论文，2009.4)报道在阿霉素隐型脂质体的磷脂双分子层中镶嵌油酸，然后通过调节pH，让油酸带电，油酸的电荷产生排斥力，使脂质体粒度下降，同时油酸的负电荷还能吸引带有正电荷的阿霉素在脂质体表面，提高药物的包封率。虽然该文献中使用的材料阿霉素、磷脂、油酸和本发明相同，但材料用量、制备方法和本发明不同。最主要的是它制备的是脂质体，内部为水相，而我们制备出的是内部为类脂的实心脂质纳米粒，结构上完全不同。

文献(一种纳米结构脂质载体给药系统的用途，CN101129335A)报道的纳米结构脂质载体中也使用了油酸，但该专利中油酸的用途是作为液态脂质加入固态脂质当中，破坏固态脂质规则的晶体结构，增加不规则晶型结构的比例，使包封药物的空间容量增大。而本发明中油酸的用途是和阿霉素形成离子对复合物，使阿霉素的脂溶性显著增大，提高在类脂材料中的溶解性，从而提高包封率、载药量。

本发明的另一个目的是提供一种蒽环类抗肿瘤抗生素的脂肪酸复合物脂质纳米粒制剂的制备方法，其特征包括下述步骤：

(1)取蒽环类抗肿瘤抗生素溶解于适量水中，加入碱性溶液，混合均匀；

(2)加入脂肪酸，超声或搅拌至水层无色；

(3)离心，取沉淀，得蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物；

(4)将蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物、磷脂、类脂用有机溶剂溶解，混匀；

(5)减压浓缩除去有机溶剂；

(6)加含等渗调节剂的注射用水，剧烈搅拌或超声，形成脂质的混悬液；

(7)将(6)所得混悬液经过高压乳匀，形成脂质纳米粒制剂。

其中，步骤(1)中的碱性溶液主要是用于中和蒽环类抗肿瘤抗生素中的酸根，获得药物分子形式游离碱。所述碱性容液选自氢氧化钠水溶液、碳酸钠水溶液、碳酸氢钠水溶液、氢氧化钾水溶液、碳酸钾水溶液、碳酸氢钾水溶液、三乙胺水溶液、氨水溶液，或是两种或多种碱性溶液的混合液；步骤(1)所述碱性溶液优选碳酸氢钠水溶液，其加入量是本领域的常规选择。

其中，步骤(4)所述有机溶剂是指丙酮、乙酸乙酯、乙醇、氯仿、甲醇，二氯甲烷，优选乙醇。

优选地，本发明的蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物脂质纳米粒制剂的制备方法，包括下述顺序的步骤：

(1)取蒽环类抗肿瘤抗生素溶解于适量水中，加入碱性溶液，搅拌混匀；

(2)加入油酸，超声或搅拌至水层无色；

(3)离心，取沉淀，得蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物；

(4)将蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物、磷脂、类脂用有机溶剂溶解，混匀；

(5)减压浓缩除去有机溶剂；

(7)将(6)所得混悬液经过高压乳匀，形成脂质纳米粒制剂。

其中，步骤(7)所得脂质纳米粒混悬液，还可以加入冻干保护剂和其他赋形剂，冻干成为粉末。

冻干粉末封装得成品。临床使用时，干燥后的粉末在接触水性介质时自动分散形成脂质纳米粒的混悬液。

本发明提供的蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物脂质纳米粒，旨在提高蒽环类抗肿瘤抗生素的脂溶性，降低毒性，适宜于工业化生产，方便临床使用，增加疗效。其显著特点是利用了脂肪酸作为蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物和脂质纳米粒的载体成分，提高载药量，减少给药剂量，可以改变药物的体内分布，具有靶向性，提高疗效，降低毒副作用等。

附图说明

附图1.阿霉素油酸复合物脂质纳米粒粒径分布图

附图2.阿霉素油酸复合物和阿霉素与油酸混合物的DSC扫描图

具体实施方式

下面再以实施例对本发明加以进一步的说明，同时也结合实施例中附图加以说明，但绝不是对本发明的范围限制。

实施例1

取盐酸阿霉素10mg，溶解于2ml水中，加入50mg/ml的NaHCO₃溶液40μl，漩涡一分钟，加入油酸20μl，漩涡至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。称取蛋黄卵磷脂(平均分子量800)60mg，维生素E5mg，大豆油60μl与复合物共同溶解于乙酸乙酯中，超声使溶解完全，减压蒸干有机溶剂，加入5％葡萄糖溶液10ml，搅拌，高压乳匀7次，即得阿霉素油酸复合物脂质纳米粒。粒径为190nm，PDI为0.125，见附图1。

实施例2

取盐酸柔红霉素10mg，溶解于2ml水中，加入10mg/ml的NaOH溶液20μl，漩涡一分钟，加入油酸50μl并超声至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。称取大豆卵磷脂(平均分子量750)60mg，维生素E5mg，中链脂肪酸酯40μl与复合物共同溶解于乙醇，超声使溶解完全，减压蒸干有机溶剂，加入生理盐水10ml，搅拌，高压乳匀7次，即得阿霉素油酸复合物脂质纳米粒。粒径为175nm，PDI为0.210。

实施例3

取盐酸表阿霉素10mg，溶解于5ml水中，加入20mg/ml的Na₂CO₃溶液30μl，超声二分钟，加入油酸70μl并超声至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。称取大豆卵磷脂(平均分子量750)60mg，单硬脂酸甘油酯40mg与复合物共同溶解于二氯甲烷中，超声使溶解完全，减压蒸干有机溶剂，加入5％葡萄糖溶液10ml，搅拌，高压乳匀7次，即得表阿霉素油酸复合物脂质纳米粒。粒径为267nm，PDI为0.257。

实施例4

取盐酸吡喃阿霉素10mg，溶解于3ml水中，加入20mg/ml的三乙胺溶液40μl，漩涡二分钟，加入油酸60μl并搅拌至水层无色，9000r/mm离心3min，取复合物沉淀。称取大豆卵磷脂(平均分子量750)60mg，三月桂酸甘油酯200mg与复合物共同溶解于乙酸乙酯中，超声使溶解完全，减压蒸干有机溶剂，加入5％葡萄糖溶液10ml，搅拌，高压乳匀7次，即得吡喃阿霉素油酸复合物脂质纳米粒。粒径为187nm，PDI为0.213。加入8％的海藻糖，冻干后复溶，粒径为204nm，PDI为0.252。

实施例5

取盐酸阿霉素10mg，溶解于2ml水中，加入50mg/ml的碳酸氢钠溶液40μl，漩涡二分钟，加入油酸30μl并超声至水层无色，8000r/min离心5min，取复合物沉淀。称取蛋黄卵磷脂(平均分子量750)50mg，三硬脂酸甘油酯40mg和三辛酸甘油酯60mg，与复合物共同溶解于二氯甲烷中，超声使溶解完全，减压蒸干有机溶剂，加入注射用水10ml，搅拌，高压乳匀6次，即得阿霉素油酸复合物脂质纳米粒。粒径为208nm，PDI为0.212。加入10％的葡萄糖，冻干后复溶，粒径为233nm，PDI为0.247。

实施例6

取盐酸阿克拉霉素10mg，溶解于2ml水中，加入50mg/ml的碳酸氢钠溶液40μl，漩涡二分钟，加入油酸40μl并超声至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。称取蛋黄卵磷脂(平均分子量750)60mg，麻油0.8ml，与复合物共同溶解于二氯甲烷中，超声使溶解完全，减压蒸干有机溶剂，加入5％葡萄糖溶液8ml，搅拌，高压乳匀9次，即得阿克拉霉素油酸复合物脂质纳米粒。粒径为177，PDI为0.158。

实施例7

取盐酸阿霉素10mg，溶解于2ml水中，加入50mg/ml的NaHCO₃溶液40μl，漩涡一分钟，加入油酸20μl，漩涡至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。称取蛋黄卵磷脂(平均分子量800)50mg，PEG化磷脂(PEG-HSPE)5mg和维生素E5mg，大豆油60μl与复合物共同溶解于乙酸乙酯中，超声使溶解完全，减压蒸干有机溶剂，加入5％葡萄糖溶液10ml，搅拌，高压乳匀7次，即得阿霉素油酸复合物长循环脂质纳米粒。

实施例8

取盐酸阿霉素10mg，溶解于2ml水中，加入50mg/ml的NaHCO₃溶液40μl，漩涡一分钟；另取硬脂酸20mg，加少量丙酮溶解，加入前述水溶液中，漩涡至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。称取大豆卵磷脂50mg，大豆油60μl与复合物共同溶解于乙酸乙酯中，超声使溶解完全，减压蒸干有机溶剂，加入生理盐水10ml，搅拌使分散，高压乳匀5次，即得阿霉素硬脂酸复合物脂质纳米粒。

实施例9

取盐酸表阿霉素10mg，溶解于5ml水中，加入50mg/ml的NaHCO₃溶液40μl，漩涡一分钟；另取软脂酸40mg，加少量乙醇溶解，加入前述水溶液中，漩涡至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。称取大豆卵磷脂50mg，大豆油60μl与复合物共同溶解于乙酸乙酯中，超声使溶解完全，减压蒸干有机溶剂，加入5％葡萄糖溶液10ml，搅拌使分散，高压乳匀6次，即得表阿霉素软脂酸复合物脂质纳米粒。

实施例10

取盐酸阿克拉霉素10mg，溶解于2ml水中，加入50mg/ml的碳酸氢钠溶液40μl，漩涡二分钟，加入亚油酸40μl并超声至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。称取氢化卵磷脂60mg，三硬脂酸甘油酯和玉米油各50mg，与复合物共同溶解于丙酮中，超声使溶解完全，减压蒸干有机溶剂，加入5％葡萄糖溶液8ml，搅拌，高压乳匀6次，即得阿克拉霉素亚油酸复合物脂质纳米粒。

实施例11

实施例12

取盐酸阿霉素10mg，溶解于2ml水中，加入50mg/ml的碳酸氢钠溶液40μl，漩涡二分钟，加入油酸100μl并超声至水层无色，5000r/min离心5min，取复合物沉淀。称取大豆卵磷脂30mg，大豆油1000μl，与复合物共同溶解于丙酮中，超声使溶解完全，减压蒸干有机溶剂，加入生理盐水10ml，搅拌，高压乳匀6次，即得阿霉素油酸复合物脂质纳米粒。

实施例13

取盐酸表阿霉素10mg，溶解于2ml水中，加入50mg/ml的碳酸氢钠溶液40μl，漩涡二分钟，加入油酸30μl并超声至水层无色，6000r/min离心5min，取复合物沉淀。称取蛋黄卵磷脂和Solutol HS 15各30mg，大豆油1000μl，与复合物共同溶解于丙酮中，超声使溶解完全，减压蒸干有机溶剂，加入生理盐水10ml，搅拌，高压乳匀6次，即得阿霉素油酸复合物脂质纳米粒。

实施例14

取盐酸阿霉素10mg，溶解于5ml水中，加入50mg/ml的NaHCO₃溶液40μl，漩涡振荡三分钟，加入油酸20μl并超声至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。称取大豆卵磷脂(平均分子量750)30mg，中链油20mg与复合物共同溶解于乙醇中，超声使溶解完全，减压蒸干有机溶剂，加入5％葡萄糖溶液10ml，搅拌，高压乳匀7次，即得表阿霉素油酸复合物脂质纳米粒。粒径为197nm，PDI为0.243，载药量为13.1％，包封率为85.8％。

实施例15

取盐酸表阿霉素10mg，溶解于5ml水中，加入50mg/ml的NaHCO₃溶液40μl，超声二分钟，加入亚麻酸20μl并超声至水层无色，7000r/min离心5min，取复合物沉淀。称取大豆卵磷脂(平均分子量750)30mg，大豆油30mg与复合物共同溶解于乙醇中，超声使溶解完全，减压蒸干有机溶剂，加入5％葡萄糖溶液10ml，搅拌，高压乳匀7次，即得表阿霉素油酸复合物脂质纳米粒。粒径为237nm，PDI为0.217，载药量为11.3％，包封率为82.4％。

实施例16

阿霉素油酸复合物的DSC鉴定：以Al₂O₃为参比物，升温速度：10℃/min，扫描范围50～300℃，N₂流速为0.2ml/min，分别称取盐酸阿霉素，油酸，实施例1的复合物及物理混合物2～20mg进行差热分析，其中复合物及物理混合物的比较见附图2。从DSC图谱可看出，复合物与混合物有明显的不同：复合物在99.3℃有一强的吸热凹处，而混合物在99.3℃处没有吸热峰也没有放热峰，这说明复合物中阿霉素与油酸分子之间存在一定的作用力，这样当外界温度升高时才会吸取能量来破坏这种作用力。

实施列17

本发明中不同形式的阿霉素的脂水分配系数的测定方法，采用1％盐酸乙醇溶液稀释后，用荧光分光光度法测定阿霉素的含量。

方法：分别取适量的阿霉素(盐酸盐)、阿霉素(游离型)和阿霉素-油酸复合物溶解于适量水饱和的正辛醇中，加等体积的正辛醇饱和的水，恒温振荡24小时，10000rpm离心20min，分取适量水和正辛醇层，加1％盐酸乙醇溶液稀释后，用荧光光度计(激发波长：498nm，发射波长582nm)测定药物含量。按下式计算脂水分配系数。

脂水分配系数＝阿霉素在正辛醇中的浓度/阿霉素在水中的浓度

表1不同形式的阿霉素的脂水分配系数

药物	脂水分配系数(P)	lgP
			阿霉素(盐酸盐)	0.0163	-1.79
阿霉素(游离型)	0.0477	-1.32
			阿霉素-油酸复合物	64	1.81

实施例18

本发明中采用高效液相色谱法按照文献报道的色谱条件[药物分析杂志，1993，13(6)：403-404；军事医学科学院院刊，2008，32(2)：165-167；药学学报，2002，37(4)：299-303；实用医院临床杂志，2005，2(4)：17-18]分别测定阿霉素、表阿霉素、柔红霉素、阿克拉霉素的含量。

包封率和载药量测定方法：取制备的蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物脂质纳米粒适量，加入MgCl₂溶液(20mg/ml)适量调节zeta电位至15mV以下，45000rpm离心30min，取纳米粒沉淀，加甲醇溶解定容后，测定药物含量；另取制备的蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物脂质纳米粒适量，加甲醇溶解定容后，测定药物总含量，然后按照下式计算包封率和载药量，结果见表2。

包封率＝纳米粒中药物量/药物总量

载药量＝纳米粒中药物量/(纳米粒中药物量+纳米粒中加入的所有其它辅料的重量)

表2多种蒽环类抗肿瘤抗生素油酸复合物脂质纳米粒的最大载药量和包封率

药物	最大载药量	包封率
			阿霉素	18.5％	86.3％
表阿霉素	20.3％	82.7％
			柔红霉素	14.7％	83.4％
阿克拉霉素	12.9％	81.5％

本发明所制备出的蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物在脂质纳米粒中的最大载药量都能大于10％，包封率大于80％，显著优于现有的同类研究。

Claims

1.一种蒽环类抗肿瘤抗生素的脂肪酸复合物的脂质纳米粒制剂，其特征在于包含蒽环类抗肿瘤抗生素与脂肪酸形成的复合物、磷脂和类脂，所述蒽环类抗肿瘤抗生素与脂肪酸、磷脂、类脂的重量比为1∶2～4∶2～4∶1～20；

其中所述蒽环类抗肿瘤抗生素选自阿霉素盐酸盐、柔红霉素盐酸盐、表阿霉素盐酸盐、吡喃阿霉素盐酸盐、阿克拉霉素盐酸盐中的一种或多种的混合物；

所述脂肪酸选自油酸、亚油酸、亚麻酸、硬脂酸、软脂酸中的一种或多种的混合物；所述磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化磷脂及聚乙二醇化磷脂的一种或多种的混合物；

所述类脂选自固体类脂或液体类脂；固体类脂选自高熔点的三硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、棕榈酸十六酯、山嵛酸甘油酯；液体类脂选自大豆油、红花油、芝麻油、棉子油、鱼油、玉米油、中链脂肪酸酯。

2.根据权利要求1所述的脂质纳米粒制剂，其中所述蒽环类抗肿瘤抗生素选自阿霉素盐酸盐；其中所述脂肪酸选自油酸。

3.根据上述权利要求任一项所述的脂质纳米粒制剂，其中所述磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂的一种或其两种的混合物；

其中所述类脂选自上述各种类脂中的一种或两种的混合物。

4.根据权利要求3所述的脂质纳米粒制剂，其特征在于所述脂质纳米粒的粒径分布范围在40～800nm，平均粒径为50～300nm。

5.根据权利要求3所述的脂质纳米粒制剂，其特征在于其制成用于注射给药或口服给药或外用给药的药学上可接受的剂型。

6.一种制备权利要求1所述的蒽环类抗肿瘤抗生素的脂肪酸复合物脂质纳米粒制剂的方法，其特征在于包括下述步骤：

(1)取蒽环类抗肿瘤抗生素溶解于适量水中，加入适量碱性溶液，搅拌混匀；

(2)加入脂肪酸，超声或搅拌至水层无色；

(3)离心，取沉淀，得蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物；

(4)将蒽环类抗肿瘤抗生素脂肪酸复合物、磷脂、类脂用药用有机溶剂溶解，混匀；

(5)减压浓缩除去有机溶剂；

(7)将(6)所得混悬液经过高压乳匀，形成脂质纳米粒制剂。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述碱性溶液选自氢氧化钠水溶液、碳酸钠水溶液、碳酸氢钠水溶液、氢氧化钾水溶液、碳酸钾水溶液、碳酸氢钾水溶液、三乙胺水溶液、氨水溶液，或是多种碱性溶液的混合液。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述碱性溶液是选自碳酸氢钠水溶液。

9.根据如权利要求6-8任一项所述的方法，其特征在于步骤(7)所得脂质纳米粒混悬液中加入药用的冷冻干燥赋形剂和其它药学上接受的赋形剂，制成冻干粉末。

10.根据权利要求1所述的蒽环类抗肿瘤抗生素的脂肪酸复合物的脂质纳米粒制剂在制备治疗抗肿瘤的药物中的应用。