CN1460467A - 注射用盐酸阿霉素脂质体 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种抗肿瘤药物注射用盐酸阿霉素脂质体，该脂质体由阿霉素或盐酸阿霉素，空白脂质体，缓冲系统，支持物制成。

Description

注射用盐酸阿霉素脂质体

技术领域：

本发明涉及一种抗肿瘤药物阿霉素的脂质体制剂。

背景技术：

盐酸阿霉素(以下简称DOX HCL)是临床常用的蒽环类抗恶性肿瘤抗生素，对机体可产生广泛的生物化学效应，具有强烈的细胞毒性作用，其作用机制主要是DOX分子嵌入DNA，抑制核酸的合成。抗瘤谱广、疗效好，可用于治疗急性白血病，非何杰金氏淋巴瘤，乳腺癌，小细胞型肺癌、胃癌、肝癌、卵巢癌以及肉瘤等多种恶性肿瘤。但是该药静脉注射后，毒副作用大，除骨髓抑制，胃肠道毒性及脱发外，还可引起严重的心脏毒性，表现为各种心率失常，累积量大时可发生不可逆的心肌损伤乃至充血性心力衰竭。  这些毒副作用使DOX HCL的临床应用受到了很大限制。多年来人们一直寻找降低DOX HCL毒性的有效方法，如调整给药方案，研制心脏毒性较低的DOX HCL类似物及通过合并用药来减轻其心脏毒性等。从70年代中期开始，就有人研究用脂质体作为蒽环类抗癌药的有效载体。80年代末期已开始进行临床实验，初步结果表明DOX HCL经脂质体包封后，剂量可以加大，毒性作用减少，半衰期明显延长，抗癌作用并不减弱反而增强。

脂质体(Iiposome)属微型胶囊(microcapsule)的新剂型。六十年代Bangham首先发现两性分子，如磷脂分子分散在水相中能形成由磷脂双分子层包裹水相溶液的封闭囊泡，即脂质体。由于制备方法不同，脂质体可以是只有一层磷脂双分子层(单片层囊泡)或由多层膜构成的具有同心球样结构的多层脂质体(多片层囊泡)。脂质体的主要成分是磷脂和胆固醇，二者都有亲水和疏水两种基团，其分子相互间隔，定向排列形成疏水基向内，亲水基向外的类脂质双分子层。在脂质体内部为水相，水溶性药物可以被包封在脂质体的内部。在磷脂双分子层中有一个疏水的微环境，疏水性物质或兼性分子可与脂质双层疏水基团结合而嵌入脂质体的膜内或插入脂质体膜中。脂质体的基本组分磷脂是生物体内固有的成分，无毒、无免疫原性，可以在体内降解，因此脂质体是作为药物载体的最佳选择之一。

美国脂质体公司(THE LIPOSOME COMPANY INC)将阿霉素制成了脂质体注射剂商品名：Myocet于2000年8月在欧洲上市，售价每2组4000马克。

盐酸阿霉素脂质体注射剂在1996年已经在美国批准上市，由美国Sequue制药公司生产，商品名“DOXIL”，规格为每支含阿霉素20mg/10ml的桔红色半透明液体，在2-8℃条件下保存，有效期半年，抛弃期一年，出厂价每支684美元。DOXIL是隐蔽型脂质体，即磷脂经聚乙二醇修饰后而不被巨噬细胞识别，在血液循环中存留时间较普通脂质体长，故又名“长循环性脂质体”。其主要成分为MPEG-DSPE(1，2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine sodiumsalt)。目前只有美国、日本等少数国家能够生产，据美国Sigma公司报价，1mgMPEG-DSPE为24.10美元，若进口此种原料制备阿霉素脂质体，一支阿霉素脂质体注射剂，约折合人民币近6000元，不适于我国国情，患者也无法承担如此昂贵的医药费用。

从文献报道来看，国内也有许多单位研制阿霉素脂质体，采用的工艺也不尽相同，但以“PH梯度调整法”包封率最好，可以稳定在90％以上。据北京协和医院冯碧波等报道，采用由国外进口的冻干空白脂质体，制备过程中需置液氮瓶内反复冻融，与TLC D-99一样，由三个安瓿组成，用前临时配置。北京医科大学药学院齐宪荣等报道，采用DPPC/SS和DPPC/SS/PEG逆相蒸发法制备空白脂质体，“PH梯度调整法”包封阿霉素，其原料全部需由国外进口。其他的文献报道，包封率均不高，且脂质体粒度及均匀度均不理想。

本发明在于提供一种新的方法和配方制成的阿霉素脂质体，

本发明由阿霉素和空白脂质体制成，所使用的空白脂质体，采用国产的注射用大豆磷脂及胆固醇，采用高压均浆器挤压制备均匀一致的无菌空白脂质体(5L/h)，平均粒度150nm，成本大为降低，可以大批量工业化生产。

国外的阿霉素脂质体制剂由三个安瓿(1.阿霉素粉剂；2.空白脂质体；3.碱性缓冲液)组成，用前临时配制(必需在8小时内使用)。

本发明的阿霉素脂质体制剂通过生产工艺的改进，在生产车间内包封阿霉素，即将盐酸阿霉素；空白脂质体及缓冲液在车间内批量包载后立即冻干，提高了稳定性，使用方便，避免了不同人操作带来的包载率的差异及减少了可能带来的药液污染，由于是冻干剂型因而提高了稳定性。

本发明的注射用阿霉素脂质体，不是隐蔽性脂质体，进入血循环后可被巨噬细胞识别吞噬，在巨噬细胞内经溶酶体消化，破膜释放药物，依其天然靶向性，容易聚积到肝、脾、淋巴结内，但骨髓中及心脏内分布量很少。因此对降低骨髓及心脏毒性方面并不比隐蔽性脂质体逊色。

本发明以国产注射用大豆磷脂及胆固醇为原料，制备单片层脂质体(平均直径150nm)包封率90％以上。在制备工艺上不仅进行了优化，而且探索出阿霉素脂质体冻干制剂的生产工艺，大大提高了制剂的稳定性，并使之便于工业化生产。

本发明具有工艺简单、包封率高、易消毒、适合于大规模生产等优点，不仅可提高盐酸阿霉素的临床疗效，且可减轻其毒性作用，为癌瘤患者提供了一个新的抗癌药物。由于是高科技的新剂型，也会给生产企业带来较好的经济效益。

发明内容：

本发明提供一种阿霉素或盐酸阿霉素脂质体制剂，该制剂由阿霉素或盐酸阿霉素和空白脂质体，缓冲系统，支持物制成，所使用的空白脂质体，采用国产的注射用大豆磷脂及胆固醇，采用高压均浆器挤压制备均匀一致的无菌空白脂质体，平均粒度150nm。所使用的缓冲系统是磷酸盐缓冲系统、柠檬酸盐缓冲系统、碳酸盐缓冲系统。所使用的支持物可以是海藻糖，蔗糖，葡萄糖等。

本发明提供的阿霉素脂质体制剂，其处方组成可以如下：

          盐酸阿霉素(或阿霉素)         5-20g

          大豆卵磷脂                   15-45g

          胆固醇                       5-20g

          维生素E                      20-80mg

          柠檬酸                       25-100g

          柠檬酸钠                     25-100g

          无水碳酸钠                   40-160g

          海藻糖                       400-1600g

          注射用水                     10000.0ml以上组成可制成1000瓶注射剂。优选的配方组成是：

            盐酸阿霉素(或阿霉素)       10g

            大豆卵磷脂                 33.0g

            胆固醇                     10.0g

            维生素E                    43.0mg

            柠檬酸                     54.5g

            柠檬酸钠                   53.0g

            无水碳酸钠                 80.0g

            海藻糖                     855.0g

            注射用水                   10000.0ml本发明提供的阿霉素脂质体制剂的制备工艺如下：

1、称取处方量的大豆卵磷脂，胆固醇，维生素E，用氯仿使其溶解，混合均匀。

2、将脂质溶液于薄膜蒸发器上，减压除去氯仿，制备脂质膜。

3、按处方配制0.3mol/L的柠檬酸缓冲液。

4、将溶液3倾入磷脂膜，待磷脂完全水化后，用高压均浆器制备脂质体，检查脂质体粒径合格后，微孔滤膜过滤除菌，用钼兰法测定磷脂量，以无菌水调至磷脂量不低于30mg/ml。

5、按处方配制0.3mol/L的无水碳酸钠溶液，经微孔滤膜过滤除菌后备用。

6、称取处方量的盐酸阿霉素，溶于注射用水，经微孔滤膜过滤除菌后，置于50℃水浴中保温。

7、将碳酸钠溶液5与脂质体4混合，得脂质体混悬液；加入预热的盐酸阿霉素溶液6中，加入处方量的海藻糖。

8、将混合液7置于50℃水浴中保温10分钟，并不时振摇。

9、检验合格，分瓶，分成1000瓶，每瓶含盐酸阿霉素10mg，封盖，冻干，即得成品。

本发明的盐酸阿霉素脂质体制剂为注射用冻干品，产品质量稳定，稳定性实验在25±2℃下进行，结果表明，本品25±2℃时稳定，各项指标均在质量标准规定的范围内；低温留样考察1年，各项指标均稳定。  稳定性实验研究提示本品在低温条件下贮存为好。以下通过药效实验说明本发明的有益效果：(一)与治疗作用有关的药效学资料

本发明的阿霉素脂质体(L-DOX)量为6.5mg/kg，该组1小时和24小时之间肿瘤组织中药量分别为2.6μg/g组织到5.5μg/g组织，L-DOX加量到13.0mg/kg肿瘤摄入量随之增加，1小时和24小时分别为5.7μg和10.2μg/g组织。每7天给F-DOX和L-DOX共3周导致肿瘤生长率剂量-依赖减少。但L-DOX注射6.5mg/kg与同等剂量F-DOX相比较，显示肿瘤生长抑制的增强。再则，由于较低毒性L-DOX有增加药量的可能，不仅仅可以增强肿瘤生长的抑制，而且也明显地使肿瘤重量减轻。经13mg/kg量L-DOX治疗后，肿瘤由原来的5克减少到小于0.5克。无直接死于L-DOX中毒，而该剂量F-DOX动物死亡率为70％，另外，在接受最高剂量L-DOX持续50天的研究中显示，有25％动物肿瘤完全消退。研究结果表明，所设计的L-DOX系统可明显增加药物向实体瘤内的进入量和增强药物的抗肿瘤治疗功能。(二)急性毒性试验

小鼠尾静脉注射普通盐酸阿霉素LD50为15.69mg/kg，95％置信限14.55-16.83mg/kg，注射阿霉素脂质体LD50为29.95mg/kg，95％置信限，31.46-28.51mg/kg与普通盐酸阿霉素比较LD50提高0.91倍。心脏、肾脏、胃肠道的毒性均明显减轻。

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明。

实施例1：制剂处方：    盐酸阿霉素    10g

          大豆卵磷脂    33.0g

          胆固醇        10.0g

          维生素E       43.0mg

          柠檬酸        54.5g

          柠檬酸钠      53.0g

          无水碳酸钠    80.0g

          海藻糖        855.0g

            阿霉素            10.0g

            注射用水          10000.0ml制剂工艺如下：

1、称取处方量的大豆卵磷脂，胆固醇，维生素E，用氯仿使其溶解，混合均匀。

2、将脂质溶液于薄膜蒸发器上，减压除去氯仿，制备脂质膜。

3、按处方配制0.3mol/L的柠檬酸缓冲液。

4、将溶液3倾入磷脂膜，待磷脂完全水化后，用高压均浆器制备脂质体，检查脂质体粒径合格后，微孔滤膜过滤除菌，用钼兰法测定磷脂量，以无菌水调至磷脂量不低于30mg/ml。

5、按处方配制0.3mol/L的无水碳酸钠溶液，经微孔滤膜过滤除菌后备用。

6、称取处方量的盐酸阿霉素，溶于注射用水，经微孔滤膜过滤除菌后，置于50℃水浴中保温。

7、将碳酸钠溶液5与脂质体4混合，得脂质体混悬液；加入预热的盐酸阿霉素溶液6中，加入处方量的海藻糖。

8、将混合液7置于50℃水浴中保温10分钟，并不时振摇。

9、检验合格，分瓶，分成1000瓶，每瓶含盐酸阿霉素10mg，封盖，冻干，即得成品。

实施例2制剂处方：    阿霉素        10g

          大豆卵磷脂    33.0g

          胆固醇        10.0g

          维生素E       43.0mg

          柠檬酸        54.5g

          柠檬酸钠      53.0g

          无水碳酸钠    80.0g

          海藻糖        855.0g

          注射用水      10000.0ml制剂工艺如下：

1、称取处方量的大豆卵磷脂，胆固醇，维生素E，用氯仿使其溶解，混合均匀。

2、将脂质溶液于薄膜蒸发器上，减压除去氯仿，制备脂质膜。

3、按处方配制0.3mol/L的柠檬酸缓冲液。

4、将溶液3倾入磷脂膜，待磷脂完全水化后，用高压均浆器制备脂质体，检查脂质体粒径合格后，微孔滤膜过滤除菌，用钼兰法测定磷脂量，以无菌水调至磷脂量不低于30mg/ml。

5、按处方配制0.3mol/L的无水碳酸钠溶液，经微孔滤膜过滤除菌后备用。

6、称取处方量的盐酸阿霉素，溶于注射用水，经微孔滤膜过滤除菌后，置于50℃水浴中保温。

7、将碳酸钠溶液5与脂质体4混合，得脂质体混悬液；加入预热的盐酸阿霉素溶液6中，加入处方量的海藻糖。

8、将混合液7置于50℃水浴中保温10分钟，并不时振摇。

9、检验合格，分瓶，分成1000瓶，每瓶含盐酸阿霉素10mg，封盖，冻干，即得成品。

Claims (10)

1.一种脂质体制剂。其特征在于，由阿霉素或盐酸阿霉素，空白脂质体，缓冲系统，支持物制成。

2.权利要求1的制剂，其特征在于，所述空白脂质体采用国产的注射用大豆磷脂及胆固醇，采用高压均浆器压制备均匀一致的无菌空白脂质体，平均粒度150nm。

3.权利要求1的制剂，其特征在于，所述缓冲系统选自磷酸盐缓冲系统、柠檬酸盐缓冲系统、碳酸盐缓冲系统

4.权利要求1的制剂，其特征在于，所述支持物选自海藻糖，蔗糖，葡萄糖。

5.权利要求1的制剂，其特征在于，由以下成分制成，

             盐酸阿霉素(或阿霉素)             5-20g

             大豆卵磷脂                      15-45g

             胆固醇                          5-20g

             维生素E                         20-80mg

             柠檬酸                          25-100g

             柠檬酸钠                        25-100g

             无水碳酸钠                      40-160g

             海藻糖                          400-1600g

             注射用水                        10000.0ml

6.权利要求1的制剂，其特征在于，由以下成分制成，

             盐酸阿霉素(或阿霉素)             10g

             大豆卵磷脂                      33.0g

             胆固醇                          10.0g

             维生素E                         43.0mg

             柠檬酸                          54.5g

             柠檬酸钠                        53.0g

             无水碳酸钠                      80.0g

             海藻糖                          855.0g

         注射用水              10000.0ml

7.权利要求1的制剂是注射剂。

8.权利要求1的制剂的制备方法，其特征在于，将阿霉素或盐酸阿霉素，空白脂质体，起缓冲作用的物质和支持物混合。

9.权利要求1的制剂的制备方法，其特征在于，如下组方的物质，

              盐酸阿霉素(或阿霉素)            5-20g

              大豆卵磷脂                     15-45g

              胆固醇                         5-20g

              维生素E                        20-80mg

              柠檬酸                         25-100g

              柠檬酸钠                       25-100g

              无水碳酸钠                     40-160g

              海藻糖                         400-1600g

              注射用水                       10000.0ml经如下步骤，

1)称取处方量的大豆卵磷脂，胆固醇，维生素E，用氯仿使其溶解，混合均匀。

2)将脂质溶液于薄腊蒸发器上，减压除去氯仿，制备脂质膜。

3)按处方配制0.3mol/L，pH为4.8的柠檬酸缓冲液。

4)将溶液3倾入磷脂膜，待磷脂完全水化后，用高压均浆器压制备脂质体，检查脂质体粒径合格后，微孔滤膜过滤除菌，用钼兰法测定磷脂量，以无菌水调至磷脂量不低于30mg/ml。

5)按处方配制0.3mol/L，pH为11.4的无水碳酸钠溶液，经微孔滤膜过滤除菌后备用。

6)称取处方量的盐酸阿霉素，溶于注射用水，经微孔滤膜过滤除菌后，置于50℃水浴中保温。

7)将碳酸钠溶液5与脂质体4混合，得脂质体混悬液；加入预热的盐酸阿霉素溶液6中，加入处方量的海藻糖。

8)将混合液7置于50℃水浴中保温10分钟，并不时振摇。

9)检验合格，分瓶，分成1000瓶，每瓶含盐酸阿霉素10mg，封盖，冻干，即得成品。

10.权利要求1的制剂的制备方法，其特征在于，如下组方的物质，

              盐酸阿霉素(或阿霉素)                10g

              大豆卵磷脂                         33.0g

              胆固醇                             10.0g

              维生素E                            43.0mg

              柠檬酸                             54.5g

              柠檬酸钠                           53.0g

              无水碳酸钠                         80.0g

              海藻糖                             855.0g

              注射用水                           10000.0ml经如下步骤，

1)称取处方量的大豆卵磷脂，胆固醇，维生素E，用氯仿使其溶解，混合均匀。

2)将脂质溶液于薄腊蒸发器上，减压除去氯仿，制备脂质膜。

3)按处方配制0.3mol/L，pH为4.8的柠檬酸缓冲液。

4)将溶液3倾入磷脂膜，待磷脂完全水化后，用高压均浆器压制备脂质体，检查脂质体粒径合格后，微孔滤膜过滤除菌，用钼兰法测定磷脂量，以无菌水调至磷脂量不低于30mg/ml。

5)按处方配制0.3mol/L，pH为11.4的无水碳酸钠溶液，经微孔滤膜过滤除菌后备用。

6)称取处方量的盐酸阿霉素，溶于注射用水，经微孔滤膜过滤除菌后，置于50℃水浴中保温。

7)将碳酸钠溶液5与脂质体4混合，得脂质体混悬液；加入预热的盐酸阿霉素溶液6中，加入处方量的海藻糖。

8)将混合液7置于50℃水浴中保温10分钟，并不时振摇。

9)检验合格，分瓶，分成1000瓶，每瓶含盐酸阿霉素10mg，封盖，冻干，即得成品。