CN102552147B - 一种布拉他辛醇质体凝胶剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种布拉他辛醇质体凝胶剂及其制备方法。该布拉他辛醇质体凝胶剂，其包括醇质体和凝胶体；所述醇质体和所述凝胶体以均匀混合的状态存在；所述醇质体是指含有布拉他辛、磷脂、低分子量醇、胆固醇、稳定剂、抗氧化剂和水的微粒；所述醇质体的粒径范围为30～400nm；所述凝胶体中含有凝胶基质、促渗透剂、保湿剂、防腐剂、pH调节剂和水；所述醇质体和凝胶体以一定的重量比例进行配合，并且醇质体和凝胶体分别具有特定的组成。根据本发明所提供的布拉他辛醇质体凝胶剂，可以降低对皮肤的刺激作用，而且经皮渗透效果好。

Description

一种布拉他辛醇质体凝胶剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种布拉他辛制剂及其制备方法，尤其涉及一种布拉他辛醇质体凝胶剂及其制备方法。

背景技术

番荔枝科(Annonaceae)植物属双子叶植物纲木兰亚纲，番荔枝内酯(Annonaceous acetogenins)是一类具有多种生物活性的药物，早在20世纪80年代由美国学者从番荔枝及其他番荔枝科植物中提取、分离、纯化得到，1982年Jolad等率先发现番荔枝内酯有抗白血病的活性。番荔枝内酯大多有不同程度的抗肿瘤、细胞毒、抗菌、免疫抑制等显著的活性，也是目前报道中体内外抗肿瘤活性最强的化合物之一。

布拉他辛(Bullatacin)是番荔枝内酯中抗肿瘤活性最强的一种内酯，其结构独特，抗肿瘤作用机制也不同于现有的大多数抗肿瘤药物。布拉他辛可能的作用机制为：特异性抑制肿瘤细胞线粒体NADH氧化还原酶，阻断电子传递，减少ATP生成，从而干扰细胞能量代谢。同时，布拉他辛可对多耐药性(multidrug resistentance，MDR)肿瘤细胞有显著的杀伤作用，MDR产生的原因十分复杂，但mdrl基因过度表达产生的可渗透性糖蛋白(P-gp)是MDR产生的最重要和最常见的原因。研究表明，番荔枝内酯是P-gp的底物或可影响P-gp的功能，从而逆转了肿瘤的多药耐药性。

CN 101292963A公开了一种布拉他辛抗肿瘤的外用贴剂，它包括背衬层、药物储库和防粘层，其特征在于：药物储库以高分子凝胶作为粘胶剂，含调配好的布拉他辛药液。该技术方案在一定程度上解决了布拉他辛注射给药毒副作用大和传统外用贴剂皮肤刺激性大的缺点。

但是现有技术仍然没有避免布拉他辛与皮肤的直接接触，而布拉他辛本身对皮肤存在较大的刺激作用，布拉他辛直接接触皮肤会对其造成一定的损伤。此外，现有技术经皮给药布拉他辛还存在普通外用制剂经皮渗透效果差的缺陷。因此，如何降低布拉他辛对皮肤的刺激性，以及如何提高布拉他辛的经皮渗透效果，成为本领域亟需解决的问题。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术布拉他辛经皮给药刺激性大且给药渗透效果差的缺点，提供一种布拉他辛醇质体凝胶剂及其制备方法。该布拉他辛醇质体凝胶剂可以降低对皮肤的刺激作用，而且经皮渗透效果好。该制备方法能够制备得到上述布拉他辛制剂。

本发明提供了一种布拉他辛醇质体凝胶剂，其包括醇质体和凝胶体；

所述醇质体和所述凝胶体以均匀混合的状态存在；

所述醇质体是指含有布拉他辛、磷脂、低分子量醇、胆固醇、稳定剂、抗氧化剂和水的微粒；

所述醇质体的粒径范围为30～400nm；

所述凝胶体中含有凝胶基质、促渗透剂、保湿剂、防腐剂、pH调节剂和水；

以所述醇质体的总重量为100％计，所述醇质体的组成为：

布拉他辛        0.10～0.40％；

磷脂            1.00～4.00％；

胆固醇          0.00～1.00％；

低分子量醇      25.0～45.0％；

稳定剂          0.10～0.30％；

抗氧化剂        0.10～0.40％；

水              48.9～73.7％；

以所述凝胶体的总重量为100％计，所述凝胶体的组成为：

凝胶基质        1.00～3.00％；

保湿剂          10.0～15.0％；

促渗透剂        0.00～6.00％；

防腐剂          0.10～0.50％；

pH调节剂        1.30～4.20％；

水              71.3～87.6％。

本发明还提供了上述的布拉他辛醇质体凝胶剂的制备方法，其中，以本发明上述的醇质体的组成为原料，制备布拉他辛醇质体混悬液，然后，在冰水浴条件下，进行分散匀质，将分散匀质后的醇质体依次过0.45μm、0.22μm微孔滤膜，得所需粒径分布的醇质体，最后，将醇质体和凝胶体混合研制均匀，得到布拉他辛醇质体凝胶剂。

本发明还提供了上述的布拉他辛醇质体凝胶剂的另一种制备方法，其中，以本发明上述的醇质体的组成为原料，制备布拉他辛醇质体混悬液，然后，在冰水浴条件下，进行超声整粒，将超声整粒后的醇质体依次通过挤出仪400nm、200nm的挤出滤膜，得所需粒径分布的醇质体，最后，将醇质体和凝胶体混合研制均匀，得到布拉他辛醇质体凝胶剂。

与现有技术布拉他辛的经皮给药制剂相比，在本发明中，醇质体和凝胶体相互穿插包围，在这样的构造下，布拉他辛与皮肤的接触较小，可以降低对皮肤的刺激作用，并且本发明的醇质体的粒径范围为30～400nm，可以获得较好的经皮渗透效果。醇质体(Ethosomes)主要由磷脂、低分子量醇和水组成，是一种新型的柔性脂质体。柔性脂质体双分子层膜的流动性良好，易于变形，皮肤透过性高；同时，醇质体中含有较高浓度低分子量的醇，一定程度上也促进了布拉他辛的经皮渗透效果。而且，醇质体生物相容性良好，醇质体可将布拉他辛包封于其所形成的膜囊内，降低了布拉他辛直接接触皮肤所导致的刺激性大的问题。

附图说明

图1为实施例1和对比例2-3累计经皮渗透量对比图；

图2为实施例1和实施例15-16累计经皮渗透量对比图；

图3为实施例1和实施例17累计经皮渗透量对比图。

具体实施方式

本发明提供了一种布拉他辛醇质体凝胶剂，其包括醇质体和凝胶体；

所述醇质体和所述凝胶体以均匀混合的状态存在，优选地，所述醇质体和所述凝胶体的混合比例为重量比1∶2至2∶1；更优选为所述醇质体和所述凝胶体的混合比例为重量比1∶1；

所述醇质体是指含有布拉他辛、磷脂、低分子量醇、胆固醇、稳定剂、抗氧化剂和水的微粒；

所述醇质体的粒径范围为30～400nm；

所述凝胶体中含有凝胶基质、促渗透剂、保湿剂、防腐剂、pH调节剂和水；

以所述醇质体的总重量为100％计，所述醇质体的组成为：

布拉他辛    0.10～0.40％；

磷脂        1.00～4.00％；

胆固醇      0.00～1.00％；

低分子量醇  25.0～45.0％；

稳定剂      0.10～0.30％；

抗氧化剂    0.10～0.40％；

水          48.9～73.7％，优选49.2～73.1％；

以所述凝胶体的总重量为100％计，所述凝胶体的组成为：

凝胶基质    1.00～3.00％；

保湿剂      10.0～15.0％；

促渗透剂    0.00～6.00％，优选3.00～6.00％；

防腐剂      0.10～0.50％；

pH调节剂    1.30～4.20％；

水          71.3～87.6％，优选71.3～83.6％。

所述磷脂优选选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂胆酰碱、磷脂酰乙醇胺、神经鞘磷脂、PEG化磷脂、磷脂酰肌醇、二鲸磷酸酯、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱中的至少一种。更优选大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂胆酰碱、磷脂酰乙醇胺、神经鞘磷脂、PEG化磷脂中的至少一种。最优选大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂中的至少一种。以所述醇质体的总重量为100％计，所述磷脂的含量优选为1.5-6.0％。

所述稳定剂选自二棕榈磷脂酰甘油(DPPG)、十八胺、磷酸二鲸蜡脂、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰丝氨酸和负荷电磷脂中的至少一种。更优选二棕榈磷脂酰甘油(DPPG)。

所述低分子量醇为碳原子数为5以下的醇，优选选自乙醇、丙二醇、异丙醇和正丁醇中的至少一种。更优选乙醇。以所述醇质体的总重量为100％计，乙醇的含量优选为25-30％，更优选所述乙醇的含量为30％。

所述抗氧化剂选自维生素E、维生素C、没食子酸丙酯、苹果酸、二叔丁基对甲酚、叔丁基对羟基茴香醚和β-胡萝卜素中的至少一种；优选羟丙甲基纤维素、卡波姆、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、吐温和泊洛沙姆中的至少一种。更优选维生素E。

所述凝胶基质选自羟丙甲基纤维素、卡波姆、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、吐温和泊洛沙姆中的至少一种。更优选卡波姆。

所述保湿剂选自丙三醇、丁二醇、己二醇、山梨醇、聚乙二醇、透明质酸和透明质酸钠中的至少一种。更优选丙三醇。

所述促渗透剂选自氮酮、冰片、薄荷醇、二甲基亚砜、丙二醇、樟脑油、枫香油、桉树脑、茴香酮、杜香萜烯、柠檬烯、尿素、癸基甲基亚砜和醋酸乙酯中的至少一种；优选丙三醇、丁二醇、己二醇、山梨醇、聚乙二醇、透明质酸和透明质酸钠中的至少一种。更优选氮酮、薄荷醇、二甲基亚砜、丙二醇、樟脑油、杜香萜烯、尿素和醋酸乙酯中的至少一种；优选丙三醇、丁二醇、己二醇、山梨醇、聚乙二醇、透明质酸和透明质酸钠。最优选氮酮。

所述防腐剂选自山梨酸、山梨酸钾、苯甲醇、三氯叔丁醇、苯甲酸钠、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯和苯扎溴铵中的至少一种。更优选山梨酸、苯甲醇、三氯叔丁醇、尼泊金甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯和苯扎溴铵中的至少一种。最优选羟苯乙酯。

所述pH调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾和三乙醇胺中的至少一种。优选所述pH调节剂为三乙醇胺。

优选地，所述醇质体中，布拉他辛的包封率为80％以上，更优选所述包封率为83％以上。

优选地，所述醇质体的D85粒径为40～220nm，优选为80～180nm(使用Malvern nano ZS90激光粒度分析仪测试)。

为了能够制备得到本发明的布拉他辛醇质体凝胶剂，本发明还提供以下两种制备方法：

第一种方法是：以本发明上述的醇质体的组成为原料，制备布拉他辛醇质体混悬液，然后，在冰水浴条件下，进行分散匀质，将分散匀质后的醇质体依次过0.45μm、0.22μm微孔滤膜，得所需粒径分布的醇质体，最后，将醇质体和凝胶体混合研制均匀，得到布拉他辛醇质体凝胶剂。优选地，采用注入法制备布拉他辛醇质体混悬液，制备所述混悬液的过程中温度为40～60℃，所述醇质体的组成中的水为蒸馏水，以所述醇质体的组成中的水的总重量为100％计，所述蒸馏水的注入速度为2～15％/分钟；采用数显高速分散匀质机结合微孔滤膜滤过的方法进行整粒，数显高速分散匀质机的搅拌速度为5000～16000转/分钟(rpm)。所述均质可以分1-5次，优选3次进行。持续均质的时间为10分钟以下，更优选持续均质的时间为3-5分钟。

第二种方法是：以本发明上述的醇质体的组成为原料，制备布拉他辛醇质体混悬液，然后，在冰水浴条件下，进行超声整粒，将超声整粒后的醇质体依次过挤出仪400nm、200nm的挤出滤膜，得所需粒径分布的醇质体，最后，将醇质体和凝胶体混合研制均匀，得到布拉他辛醇质体凝胶剂。优选地，采用注入法制备布拉他辛醇质体混悬液，制备所述混悬液的过程中温度为40～60℃，所述醇质体的组成中的水为蒸馏水，以所述醇质体的组成中的水的总重量为100％计，所述蒸馏水的注入速度为2～15％/分钟；采用超声结合挤出仪挤出的方法进行整粒，所述超声可以分1-5次，优选3次进行。超声时间为10分钟以下，更优选超声时间为3-5分钟。

另外，本发明的布拉他辛醇质体凝胶剂可以制成贴剂、糊剂、软膏剂或者巴布剂等外用制剂。本领域技术人员可以理解，通过对本发明的布拉他辛醇质体凝胶剂提供背衬层、粘合层等常规结构，可以制备以本发明的布拉他辛醇质体凝胶剂所形成的层直接接触受试者皮肤的所述贴剂、糊剂、软膏剂或者巴布剂等外用制剂。

下面说明本发明中的一些符号及术语：

μm代表微米，nm代表纳米。

关于D85粒径，详细说明如下：

D50粒径是指：一个样品的累计粒度分布百分数达到50％时所对应的粒径。它的物理意义是粒径大于它的颗粒占50％，小于它的颗粒也占50％，D50也叫中位径或中值粒径。D50常用来表示粉体的平均粒度。

D85粒径是指：一个样品的累计粒度分布百分数达到85％时所对应的粒径。结合本发明，D85粒径为80～180nm是指，有85％以上的醇质体的粒径在80～180nm的范围之内。

本发明中所述的粒径，可以使用本领域常用的仪器进行测定，例如使用Malvern nano ZS90激光粒度分析仪，按照其使用说明书记载的方法进行测定。

根据本发明所提供的布拉他辛醇质体凝胶剂，可以降低对皮肤的刺激作用，而且经皮渗透效果好。

另外，本发明的技术方案或者改进的技术方案中还具有如下的技术效果：

(1)本发明中，本发明的包含有布拉他辛的布拉他辛醇质体凝胶剂为外用经皮给药制剂，与口服或注射给药制剂相比，大大降低了其毒副作用，同时提高了其安全、可控与临床顺应性。

(2)本发明中，将布拉他辛包封于醇质体中；其次，再将醇质体与凝胶体混合制成药剂。把该药剂经皮给药，同直接将布拉他辛制成外用贴剂给药相比，降低了对皮肤的刺激性。

(3)本发明中，将布拉他辛与磷脂、低分子量醇等制备成凝胶型的药物制剂，醇质体的粒径为30nm～400nm，如果经皮给药，则能够改善传统外用制剂经皮渗透效果差的缺点。本发明的药物制剂经皮渗透效率明显提高。本发明所述的药物制剂是指本发明所提供的包含有布拉他辛的布拉他辛醇质体凝胶剂。

(4)本发明的药物制剂中，醇质体的粒径为30nm～400nm，优选为40～220nm，进一步优选为80～180nm，此粒径分布的醇质体经皮渗透效果最好。通常情况下，如果有85％以上的醇质体能够在80～180nm的范围内的情况下，即，如果醇质体的D85粒径为80～180nm，那么将能够取得最好的经皮渗透效果。实验表明，如果超过400nm以上，则不易于经皮渗透。如果小于30nm，则包封率较低，载药量上不去；另外，如果小于30nm，则工艺上也较难获得，也会引起醇质体一定程度上的重新聚集，导致粒径增大，稳定性欠佳。

(5)本发明中，醇质体中含有高浓度的低分子量醇，高浓度低分子量醇(10～50重量％的低分子量醇)的存在改变了角质层的致密结构，同时提高角质层和醇质体自身的柔韧性，易于醇质体穿过角质层到达皮肤深部，从而改善了药物的经皮渗透效果。

(6)本发明中，高浓度低分子量醇和稳定剂的存在提高了布拉他辛醇质体的稳定性。

(7)本发明中，含有一定的抗氧化剂，提高了醇质体中磷脂的抗氧化能力，更进一步提高了其储存、应用过程中的稳定性。

(8)本发明中，促渗透剂的使用进一步提高了所制布拉他辛醇质体凝胶剂的经皮渗透效果。

(9)本发明中，应用了一定的保湿剂，保湿剂的加入改善了给药皮肤表面的生理环境，从而有利于药物的经皮吸收。

(10)本发明中，采用注入法制备布拉他辛醇质体，工艺简单，重现性好，易放大生产。

为了使得本领域的技术人员能够更加清楚地了解本发明所提供的技术方案，下面提供实现本发明的技术方案的实施例以及对比实施例。

制备实施例1

本实施例用于说明本发明布拉他辛醇质体凝胶剂及其制备方法。

1、布拉他辛醇质体的制备

称取布拉他辛15.0mg(毫克)、氢化大豆卵磷脂0.30g(克)、稳定剂15.0mg和抗氧化剂10mg，溶于3.00g乙醇中，将上述乙醇溶液置于锥形瓶内，40～60℃、600rpm(转/分钟)磁力搅拌条件下匀速、缓慢(0.8ml/min)注入蒸馏水6.66g(此过程保证在密闭条件下进行，以防乙醇挥发)，待蒸馏水加入完毕后继续磁力搅拌10.0min(分钟)，即得布拉他辛醇质体混悬液。

将所得布拉他辛醇质体混悬液进行整粒，具体方法为：冰水浴条件下，数显高速分散匀质机(上海昂尼仪器仪表有限公司)16000rpm(转/分钟)，分散匀质3次，每次3分钟，将分散匀质后的醇质体依次过0.45μm、0.22μm微孔滤膜，即得所需粒径分布的布拉他辛醇质体。

2、空白凝胶的制备

称取卡波姆0.20g，室温条件下用8.21g蒸馏水充分溶胀，并加入保湿剂1.00g、促渗透剂0.3g、防腐剂20.0mg，搅拌条件下缓慢加入三乙醇胺(0.27g)调节其pH至中性，充分混合研制均匀，即得无色透明空白凝胶。

需要说明的是，所谓的空白凝胶(也就是本发明的凝胶体)是指不含有布拉他辛的凝胶体。“空白”指的是“布拉他辛”是空白的。

3、布拉他辛醇质体凝胶剂的制备

将步骤1得到的布拉他辛醇质体(即，经过整粒的布拉他辛醇质体)与步骤2得到的空白凝胶等重量份混合研制均匀，即得本发明的布拉他辛醇质体凝胶剂。

本实施例中磷脂为氢化大豆卵磷脂，低分子量醇为乙醇，稳定剂为二棕榈磷脂酰甘油(DPPG)，凝胶基质为卡波姆，抗氧化剂为维生素E，保湿剂为丙三醇，防腐剂为羟苯乙酯，促渗透剂为氮酮，pH调节剂为三乙醇胺。

因此，所得布拉他辛醇质体凝胶剂的处方为：醇质体(布拉他辛15.0mg、氢化大豆卵磷脂0.30g、二棕榈磷脂酰甘油(DPPG)15.0mg、维生素E 10mg、乙醇3.0g、水6.66g)和凝胶体(卡波姆0.2g，丙三醇1.0g、氮酮0.30g、羟苯乙酯20mg、三乙醇胺0.27g和水8.21g)。

制备实施例2

本实施例用于说明本发明布拉他辛醇质体凝胶剂及其制备方法。

1、布拉他辛醇质体的制备

称取布拉他辛20.0mg、大豆卵磷脂0.40g、胆固醇80.0mg、稳定剂20.0mg和抗氧化剂30mg，溶于4.00g乙醇中，将溶有脂质和布拉他辛的乙醇溶液置于锥形瓶内，45～55℃、500rpm磁力搅拌下匀速、缓慢(0.6ml/min)注入蒸馏水5.45g(此过程保证在密闭条件下进行，以防乙醇挥发)，待蒸馏水加入完毕后继续搅拌8.00min，即得布拉他辛醇质体混悬液。

将所得醇质体混悬液进行整粒，具体方法为：冰水浴条件下，探头超声仪(宁波新芝JY-922D)超声整粒，超声时间为3分钟，将超声后的醇质体依次过LF-50挤出仪(加拿大奥维斯汀(AVESTIN)公司)400nm、200nm的挤出滤膜，即得所需粒径分布的布拉他辛醇质体。

2、空白凝胶的制备

称取卡波姆0.20g，室温条件下用8.01g蒸馏水充分溶胀，并加入保湿剂1.00g、促渗透剂0.50g、防腐剂20.0mg，搅拌条件下缓慢加入三乙醇胺(0.27g)调节其pH至中性，充分混合研制均匀，即得无色透明空白凝胶。

3、布拉他辛醇质体凝胶剂的制备

将步骤1得到的布拉他辛醇质体(即，经过整粒的布拉他辛醇质体)与步骤2得到的空白凝胶等重量份混合研制均匀，即得本发明的布拉他辛醇质体凝胶剂。

本实施例中磷脂为大豆卵磷脂，低分子量醇为乙醇，稳定剂为二棕榈磷脂酰甘油(DPPG)，凝胶基质为卡波姆，抗氧化剂为维生素E，保湿剂为丙三醇，防腐剂为羟苯乙酯，促渗透剂为氮酮，pH调节剂为三乙醇胺。

因此，所得布拉他辛醇质体凝胶剂的处方为：醇质体(布拉他辛20.0mg、大豆卵磷脂0.40g、胆固醇80.0mg、二棕榈磷脂酰甘油(DPPG)20.0mg、维生素E 30mg、乙醇4.0g、水5.45g)和凝胶体(卡波姆0.2g，丙三醇1.0g、氮酮0.50g、羟苯乙酯20mg、三乙醇胺0.27g、水8.01g)。

实施例3-14

按照实施例1的方法制备实施例3-6，按照实施例2的方法制备实施例7-14，不同之处如表1所示。

表1

续表1

g表示克，mg表示毫克，是质量单位。

上表各实施例所制得的布拉他辛醇质体凝胶剂均为20g。

测试例1

本测试例说明使用低温超速离心法测定实施例1-14的步骤1所获得的布拉他辛醇质体的包封率。

分别精密移取实施例1-14的布拉他辛醇质体2.0mL置于离心管中，在4℃的低温、14000rpm条件下离心30min，移去上清液，并补足等量空白上清液(即配制的除不含布拉他辛外，所有成份组成均同移去的上清液)，同样条件下再离心30min，移去并合并上清液，HPLC(高效液相色谱法)测定上清液中布拉他辛的量记为M；将离心沉降得到的布拉他辛醇质体破乳后(0.2mL甲醇破乳)，用HPLC测定布拉他辛的量，即为包封于醇质体的布拉他辛的量，记为N；按下式计算布拉他辛醇质体的包封率EE％：

EE％＝N/(M+N)×100％。测试结果见表2。

测试例2

本测试例说明使用Malvern nano ZS90激光粒度分析仪测定实施例1-14的步骤1所获得的布拉他辛醇质体的平均粒径、粒径分布PDI及D85粒径，结果见表2。

表2

	平均粒径/nm	D85	PDI	包封率％
					实施例1	135	85～170nm	0.148	84.2
实施例2	136	90～160nm	0.195	85.2
					实施例3	125	80～175nm	0.164	82.4
实施例4	128	95～160nm	0.157	87.3
					实施例5	134	80～163nm	0.196	80.7
实施例6	125	84～174nm	0.172	83.5
					实施例7	123	80～159nm	0.184	81.6
实施例8	137	83～170nm	0.187	85.8
					实施例9	140	88～167nm	0.174	82.1
实施例10	128	93～178nm	0.153	86.3
					实施例11	136	80～180nm	0.180	81.7
实施例12	121	81～176nm	0.178	83.9
					实施例13	128	85～170nm	0.185	82.6
实施例14	120	83～172nm	0.176	83.5

本发明实施例所制备的布拉他辛醇质体的粒径范围落在30～400nm之内，由表2可知，本发明实施例所制备的布拉他辛醇质体粒径分布指数(PDI)均在0.200以下，D85粒径为80～180nm，包封率均在80％以上。可以看出，本发明制备得到的布拉他辛醇质体性能优良：粒径适宜，粒度分布均匀，包封率高，有利于经皮渗透吸收。

对比例1

本对比例用于说明本发明醇质体的稳定性。

采用逆相蒸发法制备布拉他辛脂质体，具体方法如下：

称取布拉他辛15.0mg，氢化大豆卵磷脂0.3g，DPPG15.0mg，溶于60.0mL乙醚中；其次，将溶有脂质和药物的乙醚溶液置于茄形瓶内，超声并不断振摇条件下缓慢将9.67g蒸馏水注入到茄形瓶内，形成均匀的水包油(W/O)型微乳(放置30min不分层)；最后，将茄形瓶置于旋转蒸发仪上，45℃条件下旋转蒸发充分挥除乙醚，即得布拉他辛脂质体。

测试例3

以对比例1制备的布拉他辛脂质体为对照，说明本发明布拉他辛醇质体的稳定性：将实施例1-14步骤1制备的布拉他辛醇质体和对比例1的布拉他辛脂质体分别置于4℃条件下避光保存，每两周取样考察一次，连续考察8周，主要考察指标为平均粒径、粒径分布指数(PDI)、渗漏率，结果如表3所示：

表3

其中，渗漏率＝第n周包封率-第0周包封率；所述第0周包封率为表2各实施例中测得的包封率。

由上表可知：八周内，本发明实施例1-14的布拉他辛醇质体的平均粒径、粒径分布指数(PDI)、渗漏率均无明显变化，而对比例1的布拉他辛脂质体的平均粒径增加了22nm、粒度分布增至0.249、药物渗漏率在5.0％以上。综合评价，本发明布拉他辛醇质体的稳定性远远优于现有技术布拉他辛脂质体。

对比例2

本对比例是关于包含有布拉他辛的凝胶体及其制备方法。

具体的制备方法具体为：

1)称取卡波姆0.20g，分散于乙醇/水等体积比的混合溶液中，充分溶胀；

2)称取保湿剂丙三醇1.00g、促渗透剂氮酮0.30g、防腐剂羟苯乙酯20.0mg加于充分溶胀后的卡波姆中，搅拌条件下缓慢加入三乙醇胺调节pH至中性，得无色透明空白凝胶；

3)取布拉他辛15.0mg，溶于适量乙醇/水等体积比的混合溶液中，再与空白凝胶混合，加等体积比的乙醇/水混合溶液至20.0g，充分研制均匀即得。

对比例3

本对比例用于说明布拉他辛脂质体凝胶剂，其通过将对比例2中的布拉他辛脂质体与空白凝胶混合而制备得到的。

按对比例2的制备布拉他辛脂质体；其次，按本发明实施例1步骤2中所述的方法制备空白凝胶；最后，将制备好的布拉他辛脂质体与空白凝胶等重量份混合研制均匀，即得布拉他辛脂质体凝胶。

测试例4

本测试例考察布拉他辛醇质体凝胶剂的离体经皮渗透特性，对照组为对比例2中的布拉他辛凝胶和对比例3中的布拉他辛脂质体凝胶，实验所用布拉他辛醇质体凝胶为实施例1-14所得。

具体测试方法如下：取合适大小(4cm²)的去除皮下组织的正常人体皮肤，用生理盐水洗净，将皮肤固定在TK-12D型(上海锴凯科技贸易有限公司)透皮扩散仪的扩散池上，在供给室内分别加入适量的制备好的实施例1-14以及对比例2-3的样品(每个样品以布拉他辛计为0.4mg)，接受介质为乙醇/PEG400/生理盐水的混合溶液(PEG400是指聚乙二醇400)；按照使用说明书设定透皮扩散仪的参数，分别于特定时间点(1、3、5、6、8、10、14、24小时)取样，并补充与样品取样量等量的空白接受介质。HPLC(高效液相色谱)测定各取样点接受介质中布拉他辛的含量，计算其24小时内各取样点累计经皮透过量。测试结果表明：本发明的布拉他辛醇质体凝胶的经皮渗透效果明显优于对比例3布拉他辛凝胶和对比例2布拉他辛脂质体凝胶，醇质体这一新型药物载体能够提高药物的经皮渗透效果，而对比例3布拉他辛凝胶和对比例2布拉他辛脂质体凝胶经皮渗透效果差别不大，结果见图1(仅显示实施例1的布拉他辛醇质体凝胶剂)和表4。

表4

实施例15

本实施例用于说明粒度D50在80-180nm的布拉他辛醇质体凝胶的制备。

采用与制备实施例1相同的方法制备布拉他辛醇质体凝胶，不同之处在于数显高速匀质机(上海昂尼仪器仪表有限公司)的工艺参数为10000rpm、分散匀质3次，每次2min。

实施例16

本实施例用于说明粒度D70在80-180nm的布拉他辛醇质体凝胶的制备。

采用与制备实施例1相同的方法制备布拉他辛醇质体凝胶，不同之处在于数显高速匀质机(上海昂尼仪器仪表有限公司)的工艺参数为14000rpm、分散匀质2次，每次3min。

测试例5

本测试例考察粒径对布拉他辛醇质体凝胶剂的离体经皮渗透特性的影响。本测试例采用测试例4的方法测试了实施例15和实施例16的布拉他辛醇质体凝胶。

结果表明：D85粒径在80～180nm的布拉他辛醇质体经皮渗透效果最优，D50粒径在80～180nm的布拉他辛醇质体经皮渗透效果较差，结果见图2(仅显示实施例1的布拉他辛醇质体凝胶剂和实施例15-16)。

实施例17

本实施例用于说明不加促渗透剂的布拉他辛醇质体凝胶的制备。

采用与实施例1相同的方法制备布拉他辛醇质体凝胶，不同之处在于未加促渗透剂。

测试例6

本测试例考察促渗透剂对布拉他辛醇质体凝胶剂的离体经皮渗透特性的影响。本测试例采用测试例3的方法测试了实施例17的布拉他辛醇质体凝胶。结果表明：促渗透剂的应用进一步提高了布拉他辛醇质体凝胶的经皮渗透效果，结果见图3(仅显示实施例1的布拉他辛醇质体凝胶剂和实施例17)。

测试例7

本测试例测定对比例2布拉他辛凝胶剂以及实施例1-17的布拉他辛醇质体凝胶剂对皮肤的刺激性。

选取家兔为受试动物，每组4只，雌雄各半，每个实施例/对比例平行试验3组，分别将受试动物进行脱毛处理，脱毛范围为3cm(厘米)×3cm，并确保脱毛处理未造成皮肤损伤；将均含有布拉他辛0.5mg的实施例1、实施例6和对比例2的受试样品分别均匀涂布于已去毛的家兔皮肤上，然后用二层纱布(2.5cm×2.5cm)和一层玻璃纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定，贴敷4小时；贴敷结束后，除去受试样品并用温水清洁给药部位，以皮肤出现红斑、水肿的程度为评价指标，按表5对实验结果进行评分，按表6进行刺激强度评价，结果见表7：

表5.皮肤刺激反应评分标准

刺激反应	分值
		红斑
无红斑	0
		轻度红斑(勉强可见)	1
中度红斑(明显可见)	2
		重度红斑	3
紫红色红斑到轻度焦痂形成	4
		水肿
无水肿	0
		轻度水肿(勉强可见)	1
中度水肿(明显隆起)	2
		重度水肿(皮肤隆起1mm，轮廓清楚)	3
严重水肿(皮肤隆起1mm以上并有扩大)	4
		最高总分值	8

表6.皮肤刺激强度评价标准

分值	评价
		0.00-0.49	无刺激性
0.50-2.99	轻度刺激性
		3.00-5.99	中度刺激性
6.00-8.00	强刺激性

表7.皮肤刺激性实验结果

由上表7可知：本发明的实施例1-17的布拉他辛醇质体凝胶对家兔皮肤均无刺激性；而对比例2的所制备的布拉他辛凝胶对家兔皮肤有轻度刺激性。从上表说明本发明将布拉他辛包封于醇质体后，再制备成凝胶剂，明显降低了其直接接触皮肤对皮肤造成的刺激性。

对比例4

本对比例说明现有技术布拉他辛外用贴剂的临床效果。

本对比例采用CN 101292963A实施例2记载的方法制备布拉他辛外用贴剂(规格：5×7cm)。

测试例8

本测试例测定对比例4布拉他辛外用贴剂以及实施例1-17的布拉他辛醇质体凝胶剂对皮肤的刺激性。

受试者选择：根据实验目的，优选确诊的原发性肺癌患者，且均无严重并发症，共180人，其中男性120人，女性60人，随机分为15组，每组男性8人，女性4人；另据研究发现，目前肺癌高峰发病年龄为51～60岁，因此，本实验选择受试者的平均年龄为54.6岁。

对比例4布拉他辛外用贴剂给药方案：外用，颈部以下皮肤及四肢给药，8贴/次，给药频率1次/日；

实施例1-17布拉他辛醇质体凝胶剂给药方案：外用，颈部以下皮肤及四肢给药，给药量以布拉他辛计(即0.24mg)同对比例4布拉他辛外用贴剂，给药频率1次/日。

实验结果：以受试者给药前后疼痛感、肿瘤细胞浓度、呼吸症状、精神状态为主要指标，对样品临床治疗效果进行综合评分，观察期不少于60天，得分越高说明临床治疗效果越好，实验结果如表8：

表8.

疼痛感评分标准：重度疼痛(0分)，中度疼痛(1分)，轻度疼痛(2分)，无疼痛症状(3分)

呼吸症状评分标准：无改善(0分)，略有改善(1分)，好转(2分)，明显好转(3分)

肿瘤细胞浓度评分标准：无下降(0分)，略有下降(1分)，下降(2分)，明显下降(3分)

精神状态评分标准：较差(0分)，差(1分)，基本良好(2分)，良好(3分)

由上表评分结果可知：60天内，以布拉他辛量计，给予相同载药量的对比例4布拉他辛贴剂和实施例1-17布拉他辛醇质体凝胶剂，布拉他辛醇质体凝胶剂的临床治疗效果优于现有技术，初步表明该醇质体凝胶剂有一定的临床应用优势。可以看出，这一优势与布拉他辛醇质体凝胶剂经皮渗透效果较现有布拉他辛贴剂好有关，给药量相同情况下，本发明布拉他辛醇质体凝胶剂组经皮渗透量较大。

Claims (13)

1.一种布拉他辛醇质体凝胶剂，其特征在于，其由醇质体和凝胶体组成；

所述醇质体和所述凝胶体以均匀混合的状态存在，且所述醇质体和所述凝胶体的混合比例为重量比1:2至2:1；

所述醇质体是指含有布拉他辛、磷脂、低分子量醇、胆固醇、稳定剂、抗氧化剂和水的微粒；

所述醇质体的粒径范围为30～400nm，且所述低分子量醇选自乙醇、丙二醇、异丙醇和正丁醇中的至少一种；

所述凝胶体中含有凝胶基质、促渗透剂、保湿剂、防腐剂、pH调节剂和水；

以所述醇质体的总重量为100%计，所述醇质体的组成为：

以所述凝胶体的总重量为100%计，所述凝胶体的组成为：

2.根据权利要求1所述的布拉他辛醇质体凝胶剂，其特征在于，所述磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、神经鞘磷脂、PEG化磷脂、磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱中的至少一种；所述稳定剂选自二棕榈磷脂酰甘油、十八胺、磷酸二鲸蜡酯、磷脂酰甘油和荷负电磷脂中的至少一种；所述凝胶基质选自羟丙甲基纤维素、卡波姆、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、吐温和泊洛沙姆中的至少一种；所述保湿剂选自丙三醇、丁二醇、己二醇、山梨醇、聚乙二醇、透明质酸和透明质酸钠中的至少一种；所述抗氧化剂选自维生素E、维生素C、没食子酸丙酯、苹果酸、二叔丁基对甲酚、叔丁基对羟基茴香醚和β-胡萝卜素中的至少一种；所述促渗透剂选自氮酮、冰片、薄荷醇、二甲基亚砜、丙二醇、樟脑油、枫香油、桉树脑、茴香酮、杜香萜烯、柠檬烯、尿素、癸基甲基亚砜和醋酸乙酯中的至少一种；所述防腐剂选自山梨酸、山梨酸钾、苯甲醇、三氯叔丁醇、苯甲酸钠、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯和苯扎溴铵中的至少一种；和/或所述pH调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾和三乙醇胺中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的布拉他辛醇质体凝胶剂，其特征在于，所述稳定剂是磷脂酸或磷脂酰丝氨酸。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的布拉他辛醇质体凝胶剂，其特征在于，在所述醇质体中，布拉他辛的包封率为80%以上。

5.根据权利要求1-3中任意一项所述的布拉他辛醇质体凝胶剂，其特征在于，所述醇质体的D85粒径为40~220nm。

6.根据权利要求5所述的布拉他辛醇质体凝胶剂，其特征在于，所述醇质体的D85粒径为80~1 80nm。

7.一种布拉他辛醇质体凝胶剂的制备方法，其特征在于，以权利要求1-5中任意一项所述的醇质体的组成为原料，制备布拉他辛醇质体混悬液，然后，在冰水浴条件下，进行分散匀质，将分散匀质后的醇质体依次过0.45 μm、0.22 μm微孔滤膜，得所需粒径分布的醇质体，最后，将醇质体和凝胶体混合研制均匀，得到布拉他辛醇质体凝胶剂。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，采用注入法制备布拉他辛醇质体混悬液，制备所述混悬液的过程中温度为40~60℃，所述醇质体的组成中的水为蒸馏水，以所述醇质体的组成中的水的总重量为100%计，所述蒸馏水的注入速度为2~15%/分钟；采用数显高速分散匀质机结合微孔滤膜滤过的方法进行整粒，数显高速分散匀质机的搅拌速度为5000~16000rpm，持续均质的时间为10分钟以下。

9.一种布拉他辛醇质体凝胶剂的制备方法，其特征在于，以权利要求1-3中任意一项所述的醇质体的组成为原料，制备布拉他辛醇质体混悬液，然后，在冰水浴条件下，进行超声整粒，将超声整粒后的醇质体依次通过挤出仪400nm、200nm的挤出滤膜，得所需粒径分布的醇质体，最后，将醇质体和凝胶体混合研制均匀，得到布拉他辛醇质体凝胶剂。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，采用注入法制备布拉他辛醇质体混悬液，制备所述混悬液的过程中温度为40~60℃，所述醇质体的组成中的水为蒸馏水，以所述醇质体的组成中的水的总重量为100%计，所述蒸馏水的注入速度为2~15%/分钟；采用超声结合挤出仪挤出的方法进行整粒，持续超声的时间为10分钟以下。

11.权利要求1-3、6中任意一项所述的布拉他辛醇质体凝胶剂，其特征在于，所述布拉他辛醇质体凝胶剂制成贴剂或者巴布剂。

12.权利要求4所述的布拉他辛醇质体凝胶剂，其特征在于，所述布拉他辛醇质体凝胶剂制成贴剂或者巴布剂。

13.权利要求5所述的布拉他辛醇质体凝胶剂，其特征在于，所述布拉他辛醇质体凝胶剂制成贴剂或者巴布剂。

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