CN112107600B - 一种治疗色素沉着性疾病的纳米制剂及其制备方法 - Google Patents
一种治疗色素沉着性疾病的纳米制剂及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112107600B CN112107600B CN202011157867.XA CN202011157867A CN112107600B CN 112107600 B CN112107600 B CN 112107600B CN 202011157867 A CN202011157867 A CN 202011157867A CN 112107600 B CN112107600 B CN 112107600B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fetal kidney
- preparation
- cell suspension
- animal
- nano
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 57
- 208000012641 Pigmentation disease Diseases 0.000 title abstract description 21
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 50
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims abstract description 40
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 38
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims abstract description 35
- 208000003351 Melanosis Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 206010008570 Chloasma Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims description 93
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 67
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 23
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 19
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000002159 nanocrystal Substances 0.000 claims description 17
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 17
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 15
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 13
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 claims description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 11
- 229940049638 carbomer homopolymer type c Drugs 0.000 claims description 10
- 229940043234 carbomer-940 Drugs 0.000 claims description 10
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 9
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 9
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 9
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 claims description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 6
- AXTGDCSMTYGJND-UHFFFAOYSA-N 1-dodecylazepan-2-one Chemical compound CCCCCCCCCCCCN1CCCCCC1=O AXTGDCSMTYGJND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 claims description 5
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 claims description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 5
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 5
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 claims description 5
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 claims description 5
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 claims description 5
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 claims description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 4
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 3
- 238000010008 shearing Methods 0.000 claims description 3
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 claims description 3
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 24
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 9
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000008030 elimination Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 abstract description 2
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 21
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 21
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 20
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 17
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 12
- PXQLVRUNWNTZOS-UHFFFAOYSA-N sulfanyl Chemical compound [SH] PXQLVRUNWNTZOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 10
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 10
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 description 10
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 10
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 10
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 8
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 6
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 4
- -1 Lipid Peroxide Chemical class 0.000 description 4
- 208000019255 Menstrual disease Diseases 0.000 description 4
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 4
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 4
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 4
- 238000013077 scoring method Methods 0.000 description 4
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 4
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 4
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 3
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 3
- 206010040844 Skin exfoliation Diseases 0.000 description 3
- 241000212749 Zesius chrysomallus Species 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000035618 desquamation Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000036561 sun exposure Effects 0.000 description 3
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010027145 Melanocytic naevus Diseases 0.000 description 2
- 208000007256 Nevus Diseases 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 2
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 description 2
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 2
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 101150053046 MYD88 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102100024134 Myeloid differentiation primary response protein MyD88 Human genes 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 210000001061 forehead Anatomy 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004279 orbit Anatomy 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 208000037922 refractory disease Diseases 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
- A61K8/0216—Solid or semisolid forms
- A61K8/022—Powders; Compacted Powders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
- A61K8/04—Dispersions; Emulsions
- A61K8/042—Gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
- A61K8/981—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of mammals or bird
- A61K8/982—Reproductive organs; Embryos, Eggs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0002—Galenical forms characterised by the drug release technique; Application systems commanded by energy
- A61K9/0009—Galenical forms characterised by the drug release technique; Application systems commanded by energy involving or responsive to electricity, magnetism or acoustic waves; Galenical aspects of sonophoresis, iontophoresis, electroporation or electroosmosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/82—Preparation or application process involves sonication or ultrasonication
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/84—Products or compounds obtained by lyophilisation, freeze-drying
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Birds (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
Abstract
本发明提供了一种治疗色素沉着性疾病的纳米制剂及其制备方法，解决现有色斑治疗效果甚微的问题。本发明充分利用的色斑发病机制，以及动物胎肾细胞悬液特有的药理作用制备了对色素沉着性疾病可有效治疗的纳米制剂，能明显提升体内SOD含量，降低MDA含量，具有抑制脂质过氧化、加速清除体内自由基的作用；临床试验表明，本发明纳米制剂，具有很好的色斑治疗作用，可用于黄褐斑等色素沉着性疾病的治疗。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种治疗色素沉着性疾病的纳米制剂及其制备方法。
背景技术
色斑是一种色素沉着性、损容性皮肤病，多发于眼眶、两颊、额头、口角等处，包括黄褐斑、雀斑、老年斑等。患者虽无明显不适，但对患者的容貌、生活质量等有较大影响。色斑发病率目前呈逐年上升趋势，虽疗法多样，仍欠缺有效手段，即便是被广泛应用于临床的超声波治疗手段，目前也是无明确疗效的超声导入药物，效果甚微，因此，该病被认为是典型的易诊难治性疾病。
发明内容
本发明目的在于解决现有色斑治疗效果甚微的问题，对该类疾病的发明机制进行了深入研究，并结合研究结果提供一种治疗色素沉着性疾病的纳米制剂及其制备方法。
本发明的发明构思：
一、前期基础研究
胎肾是指动物胚胎时期已经发育完全的肾脏，具有丰富的药理作用，课题组前期对胎肾细胞悬液的药理作用进行了一系列实验研究，证实其具有抗衰老，增强机体免疫力、改善骨质疏松症、延缓肾脏功能衰竭、纠正贫血等一系列作用。但是，胎肾细胞悬液对色素沉着性疾病是否有治疗作用未见明确报道。
二、研究色素沉着性疾病的发病机制
色素沉着性疾病的病因、发病机制尚不明确，目前认为主要与遗传、内分泌因素及紫外线照射有关，此外，本申请认为氧化应激也参与了色斑的发病，即自由基增加及其代谢产物参与色斑的发病。
抗氧化系统中，超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)是细胞内的主要抗氧化酶，巯基(-SH)是还原型谷胱甘肽(GSH)的活性基团，这些物质的含量常用来评价氧化/抗氧化系统的功能。细胞膜上的脂质过氧化物(LPO)容易分解产生MDA，促进脂褐素即色素的生成，当LPO、自由基增多，SOD、CAT、GSH-Px、(-SH)等抗氧化剂含量或活性降低，不能有效发挥协同作用清除MDA等氧化产物，自由基堆积，氧化/抗氧化系统失衡，导致酪氨酸酶活化，黑素细胞功能活跃，黑素生成增加，引起皮肤色素沉着。
Havva等检测55例黄褐斑患者血清Cu/Zn-SOD和GSH-Px的酶活性、MDA、NO、蛋白羰基水平，结果显示患者Cu/Zn-SOD和GSH-Px酶活性增高，但明显低于正常对照组、MDA、NO高于对照组，蛋白羰基水平低于对照组；张慧等检测90例黄褐斑患者血清SOD、MDA、GSH-Px、晚期氧化蛋白产物(AOPP)，结果显示黄褐斑患者氧自由基和TLRs/MYD88水平与患者病情和治疗效果密切相关，以上研究均表明黄褐斑患者体内存在氧化应激损伤。
有学者对黄褐斑患者及正常对照组血清SOD、MDA、总(-SH)含量进行检测，SOD、总(-SH)含量明显低于正常对照组，MDA含量显著高于正常对照组，表明黄褐斑患者体内存在氧化/抗氧化失衡，与上述研究结果相符，提示皮肤色素代谢障碍与氧化应激损伤有关。
本申请拟将胎肾细胞悬液作为治疗色素沉着性疾病的有效成分，并对其效果进行临床试验验证。
为实现上述目的，本发明所提供的技术解决方案是：
一种用于治疗色素沉着性疾病的纳米制剂，其特殊之处在于，其有效成分为动物胎肾细胞悬液，有效浓度为5×103cells/ml～5×107cells/ml。
进一步地，其制剂类型为冻干粉、凝胶、贴片、喷雾或口服制剂。
进一步地，动物胎肾细胞悬液的有效浓度为5×105cells/ml。
本发明还提供了上述纳米制剂(冻干粉和凝胶制剂类型)的制备方法，其特殊之处在于，包括以下步骤：
1)制备动物胎肾细胞悬液
1.1)在无菌环境下取出动物胎肾，去肾包膜、肾蒂，剪碎胎肾组织；
1.2)将剪碎后的胎肾组织置于100～230目的尼龙网上，用注射器针芯研磨，边研磨边用生理盐水缓慢冲洗，收集细胞悬液，调整细胞数至目标浓度，制得动物胎肾细胞悬液；
所述目标浓度为5×103cells/ml-5×107cells/ml；
2)制备胎肾纳米晶体混悬液
2.1)取步骤1)制得的动物胎肾细胞悬液溶于甲醇中，摇匀后搅拌预处理，得到胎肾溶液；其中，甲醇可替代为其他能够破坏细胞壁的溶剂，搅拌可采用超声搅拌或磁力搅拌；
2.2)室温下，将步骤2.1)得到的胎肾溶液加到由聚醚F-68与蒸馏水混匀的溶液中，得到粗混悬液；
2.3)采用乳化机对步骤2.2)得到的粗混悬液进行乳化分散，得到混合液；
2.4)采用高压均质机对步骤2.3)得到的混合液进行高压均质，得到胎肾纳米晶体混悬液；
3)制备胎肾纳米冻干粉
将步骤2)得到的胎肾纳米晶体混悬液与甘露醇混合，并进行低温预冻，再移入冷冻干燥机中进行冷冻干燥，即得胎肾纳米冻干粉。
进一步地，还包括以下步骤：
步骤4)制备胎肾纳米凝胶剂
4.1)将卡波姆-940溶于蒸馏水中，搅拌静置使其充分溶胀，得到凝胶基质I相；
4.2)在搅拌条件下，将丙二醇和甘油加入至步骤4.1)得到的I相中，充分混匀得到II相；
4.3)将步骤3)得到的胎肾纳米冻干粉溶解在无水乙醇中，并加入至步骤4.2)得到的II相中，充分混匀得到Ⅲ相；
4.4)将氮酮和山梨酸钾加入至步骤4.3)得到的Ⅲ相中，充分混匀并采用酒石酸调节pH值为5.5～6.5，加蒸馏水搅拌均匀，即得胎肾纳米凝胶剂。
进一步地，步骤1.2)的具体步骤为将剪碎后的胎肾组织置于200目的尼龙网上，用5毫升注射器针芯研磨，边研磨边用生理盐水缓慢冲洗，收集细胞悬液，调整细胞数至5×105cells/ml浓度，制得动物胎肾细胞悬液。
步骤2.1)中，所述动物胎肾细胞悬液与甲醇的体积比为1∶2～5；所述超声搅拌时间为5～20min；
步骤2.2)中，所述聚醚F-68与蒸馏水的质量比为5～30∶1；
步骤2.3)中，所述乳化分散的时间为1～10min；
步骤2.4)中，所述高压均质分两次进行，第一次在25MPa压强下循环5～25次，第二次在55MPa压强下循环10～30次；
步骤3)的具体步骤为：将步骤2)得到的胎肾纳米晶体混悬液与甘露醇混合，置于袋盖的塑料烧杯中，将杯口盖住，旋转杯口不要盖严，置于-80℃超低温冰箱中预冻12～36h，再移入冷冻干燥机中冷冻干燥24～72h，即得胎肾纳米冻干粉；所述胎肾纳米晶体混悬液与甘露醇的体积比为1～10∶1，其中，所述甘露醇的浓度为4％，W/V，g·mL-1；
步骤4)中，所述卡波姆-940、丙二醇、甘油、胎肾纳米冻干粉、氮酮、山梨酸钾的质量比为1～10∶20～50∶10～30∶5～25∶1～20∶1；
步骤4.1)中，所述卡波姆-940与蒸馏水的质量比为45～60∶1；
步骤4.3)中，每3g步骤3)得到的胎肾纳米冻干粉溶解在15ml无水乙醇中。
另一方面，本发明还提供了动物胎肾细胞悬液在制备用于治疗色素沉着性疾病纳米制剂方面的用途。
进一步地，所述纳米制剂为药品或化妆品或保健食品。
进一步地，动物胎肾细胞悬液结合不同的赋形剂，使制备的纳米制剂类型更加丰富多样，比如冻干粉、凝胶、贴片、喷雾或口服制剂。
进一步地，所述色素沉着性疾病为黄褐斑；所述冻干粉作为离子渗透药物；所述凝胶作为超声导入药物。
本发明的优点是：
1.本发明充分利用的色斑发病机制，以及动物胎肾细胞悬液特有的药理作用制备了对色素沉着性疾病可有效治疗的纳米制剂，能明显提升体内SOD含量，降低MDA含量，具有抑制脂质过氧化、加速清除体内自由基的作用；临床试验表明，本发明纳米制剂，具有很好的色斑治疗作用，可用于黄褐斑等色素沉着性疾病的治疗。
2.本发明根据不同的治疗方式可通过赋形剂将动物胎肾细胞悬液制作成不同剂型的纳米制剂；可制作成胎肾纳米冻干粉作为离子渗透剂用于离子渗透治疗，或者进一步制作成胎肾纳米凝胶剂作为超声导入药物用于超声治疗，亦或是贴片、喷雾或口服制剂；其中超声治疗方式安全且具有价格低廉、操作简便等优点，较其他方式更被广泛应用于临床。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的内容作进一步的详细描述：
一、纳米制剂制备
本发明治疗色素沉着性疾病的纳米制剂中有效成分为动物胎肾细胞悬液，实施例中利用不同的赋形剂将其制作成胎肾纳米冻干粉和胎肾纳米凝胶剂，具体制作方法包括以下步骤：
1)制备动物胎肾细胞悬液
1.1)在无菌环境下取出动物胎肾，去肾包膜、肾蒂，剪碎胎肾组织；
1.2)将剪碎后的胎肾组织置于200目的尼龙网上，用5毫升注射器针芯研磨，边研磨边用生理盐水缓慢冲洗，收集细胞悬液，调整细胞数至5×105cells/ml浓度，制得动物胎肾细胞悬液；
2)制备胎肾纳米晶体混悬液
2.1)取5ml步骤1)制得的动物胎肾细胞悬液溶于15ml甲醇中，摇匀后超声搅拌预处理10min，得到胎肾溶液；
2.2)室温下，将步骤2.1)得到的胎肾溶液加到由600mg聚醚F-68与60ml蒸馏水混匀的溶液中，得到粗混悬液；
2.3)采用乳化机对步骤2.2)得到的粗混悬液进行乳化分散3min，得到混合液；
2.4)将步骤2.3)得到的混合液放入高压均质机，在25MPa压强下循环15次，55MPa压强下循环25次，得到胎肾纳米晶体混悬液；
3)制备胎肾纳米冻干粉
将20ml步骤2)得到的胎肾纳米晶体混悬液与4ml甘露醇(4％，W/V，g·mL-1)混合，放入带盖的塑料烧杯，将杯口盖住，旋转杯口不要盖严，置-80℃超低温冰箱中预冻24h，再移入冷冻干燥机中进行冷冻干燥36h，即得胎肾纳米冻干粉；
步骤4)制得胎肾纳米凝胶剂
4.1)将0.8g卡波姆-940溶于15ml蒸馏水中，轻微搅拌静置使其充分溶胀，得到凝胶基质I相；
4.2)在磁力搅拌器搅拌条件下，将9g丙二醇和5g甘油加入至步骤4.1)得到的I相中，充分混匀得到II相；
4.3)将3g步骤3)得到的胎肾纳米冻干粉溶解在15ml无水乙醇中，并加入至步骤4.2)得到的II相中，充分混匀得到Ⅲ相；
4.4)将2g氮酮和0.2g山梨酸钾加入至步骤4.3)得到的Ⅲ相中，充分混匀并采用酒石酸调节pH值为5.5～6.5，加蒸馏水至足量，使用磁力搅拌器拌均匀，即得胎肾纳米凝胶剂。
在使用应用时，也可制作成其他剂型，比如：贴片、喷雾或口服制剂。
二、纳米制剂药效鉴定
采用临床试验对上述步骤3)制备的胎肾纳米冻干粉和步骤4)制备的胎肾纳米凝胶剂分别进行药效鉴定。
A胎肾纳米冻干粉的临床试验：
1.资料与方法
1.1一般资料
全部200例均为西安交通大学第一附属医院皮肤科门诊女性黄褐斑患者，随机分为2组。
治疗组100例，年龄23～51岁，平均(35.80±3.96)岁；病程0.5～21年，平均(6.32±2.93)年；根据皮损部位进行分型：蝶型69例，面上型20例，泛发型11例。致病因素：妊娠21例，月经紊乱53例，日晒20例，其他因素6例。
对照组100例，年龄25～50岁，平均(36.28±6.11)岁；病程0.5～20年，平均(7.31±2.56)年；根据皮损部位进行分型：蝶型71例，面上型18例，泛发型11例。致病因素：妊娠23例，月经紊乱55例，日晒20例，其他因素2例。
2组一般资料比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。
1.2诊断标准
(1)面部淡褐色至深褐色、界限清楚的斑片，通常对称性分布，无炎症表现及鳞屑；
(2)无明显自觉症状；
(3)女性多发，主要发生于青春期后；
(4)病情可有季节性，常夏重冬轻；
(5)排除其他疾病(如颧部褐青色痣、Riehl黑变病及色素性光化性扁平苔藓等)引起的色素沉着。
1.3治疗方法
中医定向透入治疗仪设置为电压：13.5V、温度：40℃、1周3次，每次20min，此为1疗程，连续4个疗程。治疗组离子渗透导入药物为胎肾纳米冻干粉，对照组为维生素C。
1.4疗效标准
评分方法：
0分，无皮损，正常肤色；
1分，皮损面积＜2cm2，淡褐色；
2分，皮损面积2～4cm2，褐色；
3分，皮损面积＞4cm2，深褐色。
下降指数＝(治疗前总积分－治疗后总积分)/治疗前总积分。
基本治愈：肉眼视色斑面积消退＞90％，颜色基本消失；评分法计算治疗后下降指数≥0.8。
显效：肉眼视色斑面积消退＞60％，颜色明显变淡；评分法计算治疗后下降指数≥0.5。
好转：肉眼视色斑面积消退＞30％，颜色变淡；评分法计算治疗后下降指数≥0.3。
无效：肉眼视色斑面积消退＜30％，颜色变化不明显；评分法计算治疗后下降指数≤0。
1.5观察指标血清SOD、MDA、(-SH)含量检测，清晨采集两组患者治疗前后及正常对照组空腹静脉血2mL，于离心机3000r/min离心10min，取上层血清1mL置于-20℃冰箱保存待测。
1.6统计学方法应用SPSS 22.0进行统计分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义，P＜0.01为差异有显著统计学意义。
2.治疗效果
2.1两组血SOD、MDA、总(-SH)含量比较
与对照组相比，治疗组患者SOD、总(-SH)含量明显升高，MDA显著降低(P均＜0.01)，见表1。
表1两组血SOD、MDA、总(-SH)含量比较
注：与对照组相比，*P＜0.01。
2.2两组治疗有效率比较
与对照组相比，治疗组患者总有效率明显升高(P＜0.01)，治疗组疗效优于对照组。见表2。
表2两组治疗有效率比较
注：表内括号内的数值为该组占总例数的有效率。
3.不良反应
两组患者治疗期间均未出现严重不良反应。
B胎肾纳米凝胶剂的临床试验：
1.资料与方法
1.1一般资料
全部100例均为西安交通大学第一附属医院皮肤科门诊女性黄褐斑患者，随机分为2组。
治疗组50例，年龄25～50岁，平均(36.30±3.99)岁；病程0.6～20年，平均(5.17±3.28)年；根据皮损部位进行分型：蝶型38例，面上型9例，泛发型3例。致病因素：妊娠11例，月经紊乱25例，日晒11例，其他因素3例。
对照组50例，年龄23～49岁，平均(37.79±5.26)岁；病程0.3～20年，平均(6.01±3.93)年；根据皮损部位进行分型：蝶型39例，面上型8例，泛发型3例。致病因素：妊娠15例，月经紊乱26例，日晒8例，其他因素1例。
2组一般资料比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。
1.2诊断标准
(1)面部淡褐色至深褐色、界限清楚的斑片，通常对称性分布，无炎症表现及鳞屑；
(2)无明显自觉症状；
(3)女性多发，主要发生于青春期后；
(4)病情可有季节性，常夏重冬轻；
(5)排除其他疾病(如颧部褐青色痣、Riehl黑变病及色素性光化性扁平苔藓等)引起的色素沉着。
1.3治疗方法
超声治疗仪参数设置为强度：0.5mW/cm2、频率：1MHz、1周3次，每次20min，此为1疗程，连续4个疗程。治疗组超声导入药物为胎肾纳米凝胶剂，对照组为维生素C。
1.4疗效标准
评分方法：
0分，无皮损，正常肤色；
1分，皮损面积＜2cm2，淡褐色；
2分，皮损面积2～4cm2，褐色；
3分，皮损面积＞4cm2，深褐色。
下降指数＝(治疗前总积分－治疗后总积分)/治疗前总积分。
基本治愈：肉眼视色斑面积消退＞90％，颜色基本消失；评分法计算治疗后下降指数≥0.8。
显效：肉眼视色斑面积消退＞60％，颜色明显变淡；评分法计算治疗后下降指数≥0.5。
好转：肉眼视色斑面积消退＞30％，颜色变淡；评分法计算治疗后下降指数≥0.3。
无效：肉眼视色斑面积消退＜30％，颜色变化不明显；评分法计算治疗后下降指数≤0。
1.5观察指标血清SOD、MDA、(-SH)含量检测，清晨采集两组患者治疗前后及正常对照组空腹静脉血2mL，于离心机3000r/min离心10min，取上层血清1mL置于-20℃冰箱保存待测。
1.6统计学方法应用SPSS 22.0进行统计分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义，P＜0.01为差异有显著统计学意义。
2.治疗效果
2.1两组血SOD、MDA、总(-SH)含量比较
与对照组相比，治疗组患者SOD、总(-SH)含量明显升高，MDA显著降低(P均＜0.01)，见表3。
表3两组血SOD、MDA、总(-SH)含量比较
注：与对照组相比，*P＜0.01。
2.2两组治疗有效率比较
与对照组相比，治疗组患者总有效率明显升高(P＜0.01)，治疗组疗效优于对照组。见表4。
表4两组治疗有效率比较
注：表内括号内的数值为该组占总例数的有效率。
3.不良反应
两组患者治疗期间均未出现严重不良反应。
三、口服胎肾细胞悬液的动物实验
1材料与方法
1.1实验动物
由西安交通大学医学院动物实验中心提供健康成年清洁级SD大鼠40只(合格证号：SCXK(陕)2015-003)，雌性，体重在220-250g之间，9周龄。饲养于西安交通大学医学院病理实验室动物房，普通饲料饲养，自由摄取饮食和水，室温在20-25℃范围之间，保证空气流通，自然光。随机分为空白组、模型组、维生素C组、胎肾细胞悬液组。
1.2模型制备
除空白组外，各组大鼠肌肉注射黄体酮注射液2mL/(kg·d)，连续注射28天，同时用中波紫外线(320nm)照射大鼠背部脱毛处皮肤，光源的距离为15cm，每次照射30min，每天1次，连续28天。
1.3给药方法
照射期间除空白组及模型组外，维生素C组按0.3g/kg剂量灌服维生素C溶液，胎肾组按2ml/kg给予胎肾细胞悬液灌胃给药，每天1次，连续灌胃28天。
1.4实验指标检测
28天后，取大鼠背部紫外线照射部位的皮肤及肝脏适量，在冰浴中制成5％组织悬液，检测皮肤及肝脏SOD、MDA含量。
1.5统计学方法SPSS 22.0进行统计分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义，P＜0.01为差异有显著统计学意义。
2结果
2.1各组大鼠一般情况
实验前所有大鼠饮食、活动等基本状态均良好。造模1-2周后，模型组大鼠背部紫外线照射处皮肤明显发红，胎肾组及维生素C组较模型组照射处皮肤发红程度轻微；造模3-4周后，模型组大鼠背部紫外线照射处皮肤出现深红色斑、增厚、脱屑的症状，但均未见水泡、溃烂等改变，维生素C组照射处皮肤也出现深红色斑、增厚、脱屑的症状，但均未见水泡、溃烂等改变，而胎肾组照射处皮肤出现轻微红斑、无明显增厚，无水泡、溃烂。
2.2各组大鼠肝脏及皮肤SOD、MDA检测结果比较见表5。
与空白组比较，模型组大鼠肝脏及皮肤SOD活性明显降低(P＜0.05)，MDA含量增加(P＜0.05)；与模型组比较，维生素C组大鼠肝脏及皮肤SOD活性、MDA含量差异无统计学意义(P＞0.05)；与维生素C组比较，胎肾组小鼠肝大脏及皮肤SOD活性明显升高(P＜0.05)，MDA含量明显降低(P＜0.05)。
表5各组大鼠肝脏与皮肤SOD、MDA检测结果比较
注：与空白组对比，*P<0.05；与模型组对比，△P＞0.05；与维生素C组比较，▲P<0.05。
由上述两组临床试验以及动物试验的结果可知，本发明的纳米制剂对治疗色素沉着性疾病(尤其黄褐斑)具有很好的治疗效果，可根据行业标准将其应用在化妆品或保健食品行业中，制作成贴片、喷雾、口服制剂或者其他制剂形式。
按照上述制备方法调整有效浓度(5×103cells/ml～5×107cells/ml)、物料配比、搅拌、乳化时间等参数制备的纳米制剂，在治疗色素沉着性疾病上均有较显著的效果。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明公开的技术范围内，可轻易想到各种等效的修改或替换，这些修改或替换都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种动物胎肾细胞悬液在制备治疗黄褐斑纳米制剂的用途；
所述纳米制剂采用以下步骤制备：
1）制备动物胎肾细胞悬液
1.1）在无菌环境下取出动物胎肾，去肾包膜、肾蒂，剪碎胎肾组织；
1.2）将剪碎后的胎肾组织置于100~230目的尼龙网上，用注射器针芯研磨，边研磨边用生理盐水缓慢冲洗，收集细胞悬液，调整细胞数至目标浓度，制得动物胎肾细胞悬液；所述动物胎肾细胞悬液的有效浓度为5×103cells/ml-5×107cells/ml；
2）制备胎肾纳米晶体混悬液
2.1）取步骤1）制得的动物胎肾细胞悬液溶于甲醇中，摇匀后搅拌预处理，得到胎肾溶液；所述动物胎肾细胞悬液与甲醇的体积比为1∶2~5；超声搅拌时间为5~20min；
2.2）室温下，将步骤2.1）得到的胎肾溶液加到由聚醚F-68与蒸馏水混匀的溶液中，得到粗混悬液；所述聚醚F-68与蒸馏水的质量比为5~30∶1；
2.3）采用乳化机对步骤2.2）得到的粗混悬液进行乳化分散，得到混合液；所述乳化分散的时间为1~10 min；
2.4）采用高压均质机对步骤2.3）得到的混合液进行高压均质，得到胎肾纳米晶体混悬液；所述高压均质分两次进行，第一次在25MPa压强下循环5~25次，第二次在55MPa 压强下循环10~30次；
3）制备胎肾纳米冻干粉
将步骤2）得到的胎肾纳米晶体混悬液与甘露醇混合，并进行低温预冻，再移入冷冻干燥机中进行冷冻干燥，即得胎肾纳米冻干粉；
步骤4）制备胎肾纳米凝胶剂
4.1）将卡波姆-940溶于蒸馏水中，搅拌静置使其充分溶胀，得到凝胶基质 I相；
4.2）在搅拌条件下，将丙二醇和甘油加入至步骤4.1）得到的I相中，充分混匀得到II相；
4.3）将步骤3）得到的胎肾纳米冻干粉溶解在无水乙醇中，并加入至步骤4.2）得到的II相中，充分混匀得到Ⅲ相；
4.4）将氮酮和山梨酸钾加入至步骤4.3）得到的Ⅲ相中，充分混匀并采用酒石酸调节pH值为5.5~6.5，加蒸馏水搅拌均匀，即得胎肾纳米凝胶剂。
2.根据权利要求1所述的一种动物胎肾细胞悬液在制备治疗黄褐斑纳米制剂的用途，其特征在于：
步骤1）中，所述动物胎肾细胞悬液的有效浓度为5×105cells/ml。
3.根据权利要求2所述的一种动物胎肾细胞悬液在制备治疗黄褐斑纳米制剂的用途，其特征在于：
步骤1.2）的具体步骤为将剪碎后的胎肾组织置于200目的尼龙网上，用5毫升注射器针芯研磨，边研磨边用生理盐水缓慢冲洗，收集细胞悬液，调整细胞数至5×105 cells /ml浓度，制得动物胎肾细胞悬液；
步骤3）的具体步骤为：将步骤2）得到的胎肾纳米晶体混悬液与甘露醇混合，置于袋盖的塑料烧杯中，将杯口盖住，旋转杯口不要盖严，置于-80℃超低温冰箱中预冻12~36h，再移入冷冻干燥机中冷冻干燥24~72h，即得胎肾纳米冻干粉；所述胎肾纳米晶体混悬液与甘露醇的体积比为1~10∶1，其中，所述甘露醇的浓度为4%，W/V，g·mL-1；
步骤4）中，所述卡波姆-940、丙二醇、甘油、胎肾纳米冻干粉、氮酮、山梨酸钾的质量比为1~10∶20~50∶10~30∶5~25∶1~20∶1；
步骤4.1）中，所述卡波姆-940与蒸馏水的质量比为45~60∶1；
步骤4.3）中，每3g步骤3）得到的胎肾纳米冻干粉溶解在15ml无水乙醇中。
4.根据权利要求3所述的一种动物胎肾细胞悬液在制备治疗黄褐斑纳米制剂的用途，其特征在于：所述纳米制剂为药品。
5.根据权利要求4所述的一种动物胎肾细胞悬液在制备治疗黄褐斑纳米制剂的用途，其特征在于：所述冻干粉作为离子渗透药物；所述凝胶作为超声导入药物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011157867.XA CN112107600B (zh) | 2020-10-26 | 2020-10-26 | 一种治疗色素沉着性疾病的纳米制剂及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011157867.XA CN112107600B (zh) | 2020-10-26 | 2020-10-26 | 一种治疗色素沉着性疾病的纳米制剂及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112107600A CN112107600A (zh) | 2020-12-22 |
| CN112107600B true CN112107600B (zh) | 2024-04-05 |
Family
ID=73794985
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011157867.XA Active CN112107600B (zh) | 2020-10-26 | 2020-10-26 | 一种治疗色素沉着性疾病的纳米制剂及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112107600B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117797185A (zh) * | 2023-12-29 | 2024-04-02 | 河南中医药大学 | 一种白芷纳米制剂及其制备方法和应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102552147A (zh) * | 2011-02-11 | 2012-07-11 | 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 | 一种布拉他辛醇质体凝胶剂及其制备方法 |
| CN102579373A (zh) * | 2012-03-26 | 2012-07-18 | 山东大学 | 一种阿霉酮衍生物纳米结晶制剂及其制备方法 |
| CN107137587A (zh) * | 2017-05-22 | 2017-09-08 | 西安交通大学医学院第附属医院 | 一种利用动物肾脏的补肾药及其制备方法 |
| CN111214477A (zh) * | 2020-02-12 | 2020-06-02 | 中国药科大学 | 一种芦丁纳米晶体、芦丁纳米晶经皮给药凝胶剂及其制备方法 |
| CN111374898A (zh) * | 2018-12-28 | 2020-07-07 | 西安臻瑞生物科技有限公司 | 一种淡化黄褐斑的护肤霜及其制备方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ593207A (en) * | 2008-11-12 | 2012-10-26 | Tengion Inc | Isolated renal cells and uses thereof |
-
2020
- 2020-10-26 CN CN202011157867.XA patent/CN112107600B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102552147A (zh) * | 2011-02-11 | 2012-07-11 | 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 | 一种布拉他辛醇质体凝胶剂及其制备方法 |
| CN102579373A (zh) * | 2012-03-26 | 2012-07-18 | 山东大学 | 一种阿霉酮衍生物纳米结晶制剂及其制备方法 |
| CN107137587A (zh) * | 2017-05-22 | 2017-09-08 | 西安交通大学医学院第附属医院 | 一种利用动物肾脏的补肾药及其制备方法 |
| CN111374898A (zh) * | 2018-12-28 | 2020-07-07 | 西安臻瑞生物科技有限公司 | 一种淡化黄褐斑的护肤霜及其制备方法 |
| CN111214477A (zh) * | 2020-02-12 | 2020-06-02 | 中国药科大学 | 一种芦丁纳米晶体、芦丁纳米晶经皮给药凝胶剂及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 龚伟等主编.春申医萃（第三辑）.第二军医大学出版社,2011,参见公知证据1第154页第2、5段、第155页第1段. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112107600A (zh) | 2020-12-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Halder et al. | Vitiligo update | |
| US8709511B2 (en) | External preparation composition for skin comprising ginseng flower or ginseng seed extracts | |
| US20220296650A1 (en) | Fat extract without added ingredients, preparation method therefor and use thereof for generating droplet array on microfluidic chip | |
| AU2002317053B2 (en) | Dermal therapy using phosphate derivatives of electron transfer agents | |
| AU2002317053A1 (en) | Dermal therapy using phosphate derivatives of electron transfer agents | |
| CN109125107B (zh) | 一种有效改善和修复面部激素依赖性皮炎的多肽组合物 | |
| WO2013050959A1 (en) | Composition for the treatment of skin lesions | |
| CN112107600B (zh) | 一种治疗色素沉着性疾病的纳米制剂及其制备方法 | |
| RU2491022C1 (ru) | Способ коррекции дегидрированной инволюционно измененной кожи лица у женщин | |
| Bruckner-Tuderman et al. | Acitretin in the symptomatic therapy for severe recessive x-linked ichthyosis | |
| CN110448519B (zh) | 人成纤维细胞调节培养液柔性脂质体及其制备方法和应用 | |
| CN113876626B (zh) | 一种对蓝光诱导皮肤细胞损伤具有保护作用的组合物及其在化妆品中的应用 | |
| KR101698410B1 (ko) | 기린초 발효 추출물을 유효성분으로 하는 피부개선용 조성물 및 증식성 피부질환 예방 또는 치료용 조성물 | |
| CN115844796B (zh) | 具有祛痘、焕肤、缓释功效的油包水组合物及应用 | |
| CN115154360B (zh) | 一种具有美白祛斑及保湿功效的组合物及其应用 | |
| CN105982882A (zh) | 一种光学活性原料组合物组方治疗痔疮的外用药及制备工艺 | |
| JP2002128702A (ja) | 局所活性成分の効力のモノ−アシル−（リゾ）−グリセロリン脂質による増強方法およびその用途 | |
| JPH09255546A (ja) | 皮膚外用剤 | |
| CN114886794B (zh) | 一种具有抗炎和抗氧化作用的组合物及其应用 | |
| Patel et al. | A Comprehensive Review On Current Treatments Of Vitiligo | |
| WO2010137335A1 (ja) | α－リポ酸ナノ粒子を含有する、ターンオーバー促進用組成物 | |
| Xiao et al. | Topical tacrolimus reduces the severe pain of tufted angioma: Case report. | |
| CN114632108B (zh) | 一种组合物膏剂、制备方法及其应用 | |
| Lestari et al. | A rare case of porokeratosis mibelli in 3-year-old boy | |
| JP2018193329A (ja) | トランスグルタミナーゼ発現促進剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240524 Address after: 710061 No. 277, Yanta West Road, Shaanxi, Xi'an Patentee after: THE FIRST AFFILIATED HOSPITAL OF MEDICAL COLLEGE OF XI'AN JIAOTONG University Country or region after: China Address before: 710000 Zhuque Yuntian community, No.21, middle section of Zhuque street, Xi'an City, Shaanxi Province Patentee before: Zhang Zhe Country or region before: China |
|
| TR01 | Transfer of patent right |