CN102539601A - 一种动物或矿物中药中钙和磷含量的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料，具体涉及一种测定动物或矿物中药中钙和磷含量的分析方法，该方法包括以下步骤组成：取动物或矿物中药的灰粉，加入浓度为1mol/L盐酸溶液溶解配制成含药物0.200～0.300mg/ml待检进样液；将无水氯化钙与磷酸混合后用浓度为0.01mol/L盐酸溶液稀释，得到氯化钙浓度为0.100～0.300mg/ml和磷酸浓度为0.027～0.081mg/ml的一系列标准品进样液；然后将待检进样液和每一标准品进样液分别进行高效液相色谱检测，获得待检动物或矿物中药高效液相色谱图和一系列标准品的高效液相色谱图；再将待检动物或矿物中药进样液的高效相液相图谱与所得每一标准品进样液的高效相液图谱比较确定特征峰；最后根据峰面积以随行标准曲线计算动物或矿物中药中钙和磷的含量。

Description

一种动物或矿物中药中钙和磷含量的测定方法

技术领域

本发明涉及借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料，具体涉及柱色谱法来测试或分析材料。 

背景技术

动物药饮片或矿物药饮片是经过加工炮制后的可直接用于中医临床的中药，动物药或矿物药配方颗粒是将单味动物药或矿物药根据一定制备工艺制备的制剂。很多动物药饮片或矿物药饮片中存在钙和磷，如，醋龟甲、鹿角霜、钟乳石。现代研究表明，钙和磷是构成骨骼、牙齿的重要成分，维护神经与肌肉正常活动，促进身体内各种酶的活动。它既是身体的构造者，又是身体的调节者，对人体生命活动有十分重要的作用。如果机体缺乏这些元素，将会引起一系列疾病，例儿童佝偻病、成年人软骨病、中老年人骨质疏松等。由于动物药或矿物药的质量受来源、产地等的影响较大，因此，应选择合适的方法，以控制其质量，对建立饮片及其制剂的质量控制方法有重要意义。 

在动物药及矿物药中，钙和磷的主要存在形式为碳酸钙、氧化钙或磷酸钙等。在现有技术中，对于钙的测定多采用EDTA-钙黄绿素法和原子发射光谱法；磷的测定多采用磷钼蓝光度法和等离子发射光谱法。但是，EDTA-钙黄绿素法，磷钼蓝光度法步骤繁琐，且准确性不高，原子发射光谱法前处理步骤多，排除干扰困难。现有的技术多采用分别测定钙和磷的含量，控制动物药饮片和矿物药饮片的质量，工作周期较长。 

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种使用同一色谱条件同时定量检测动物或矿物中药中钙和磷含量的高效液相色谱-蒸发光散射法。 

本发明解决上述技术问题的技术方案是： 

一种动物或矿物中药中钙和磷含量的测定方法，该方法包括以下步骤： 

(1)配制待检动物或矿物中药的进样液：取动物或矿物中药的灰粉，加入浓度为1mol/L盐酸溶液溶解配制成含药物0.200～0.300mg/ml待检进样液； 

配制标准品进样液：将无水氯化钙(CaCl₂)与磷酸(H₃PO₄)混合后用浓度为0.01mol/L盐酸溶液稀释，得到氯化钙浓度为0.100～0.300mg/ml和磷酸浓度为0.027～0.081mg/ml的一系列标准品进样液； 

将待检动物或矿物中药进样液和每一标准品进样液分别按以下方法进行高效液相色谱检测： 

按进样量为10μl，对规格为250mm×4.6mm i.d.，5μm的液相色谱柱Prevail C18进样，控制柱温度为15～40℃，接着用由体积配比为A相95～100％和B相0～5％组成的流动相以0.3～0.8ml/min的流速进行洗脱，同时采用蒸发光散射检测洗脱液，控制蒸发光散射检器的漂移管温度为110℃～120℃，氮气流速为2.0～3.5L/min，获得待检动物或矿物中药的高效液相色谱图和一系列标准品的高效液相色谱图； 

(2)将待检动物或矿物中药进样液的高效相液相图谱与所得每一标准品进样液的高效相液图谱比较，与标准品进样液的高效相液图谱中保留时间相同的相应成分的特征峰即是与该成分相同物质的特征峰；根据峰面积以随行标准曲线计算动物或矿物中药中钙和磷的含量； 

上述步骤中，所述的流动相的A相是浓度为0.7％的三氟乙酸溶液、浓度为1％的三氯乙酸溶液或浓度为2％的甲酸溶液；所述的流动相的B相是甲醇或乙腈。 

本发明所述的测定方法，其中所述的动物或矿物中药是各种动物或矿物药材加工炮制后的饮片，如，醋鳖甲、醋龟甲、鹿角霜、生龙骨、牡蛎、石决明、煅瓦楞子、珍珠母、海蛤壳、紫贝齿等，或者是所述饮片制成的配方颗粒。 

本发明所述的测定方法，其中所述的动物或矿物中药的灰粉采用以下方法制备：先精密称取样品粉末，置800℃马弗炉中灰化6h，取灰分即得。本发明所述的测定方法，其中所述的配制待检动物或矿物中药进样液的步骤还包括加入所述的盐酸溶液稀释后的过滤步骤。 

本发明所述的测定方法，其中，所述的流动相的体积配比最好是A相98％，B相2％；所述的流动相A相的pH值为1～2，最好是pH值为1；所述的流动相B相最好是乙腈；所述的流动相的流速最好是0.5ml/min。 

本发明所述的测定方法，其中，所述的液相色谱柱的温度最好控制为25℃，所述的蒸发光散射检测器的漂移管温度最好是115℃，所述的氮气流量最好是2.5L/min。 

本发明所述的测定方法，其中所述的根据应峰面积以随行标准曲线计算动物或矿物中药中钙和磷含量的方法是本领域普通技术人员所熟知的方法，具体计算过程如下： 

(1)分别计算标准品进样液的高效液相色谱图中氯化钙和磷酸的峰面积，然后分别取自然对数并进行线性回归得到y＝ax+b的线性方程，其中，y为进样浓度的自然对数，x为峰面积的自然对数，a和b为常数； 

(2)分别计算待检动物或矿物中药进样液的高相液相图谱中与标准品进样液的高效液相色谱图中相应成分的保留时间相同的特征峰的峰面积并分别取自然对数，然后分别代入步骤(1)所得到的方程y＝ax+b中，分别算出待检动物或矿物中药进样液中氯化钙和磷酸的浓度； 

(3)根据无水氯化钙和磷酸的化学分子式，利用下述公式(Ⅰ)分别算出钙与磷的含量： 

$W\%=\frac{C\×V\×N}{m\×M}\×100\%---\left(I\right)$

式中，W为钙或磷的质量百分数，C为待检动物或矿物中药进样液中氯化钙或磷酸的浓度；V为待检动物或矿物中药溶液的体积，N为钙或磷的原子量，m为待检动物或矿物中药的质量，M为无水氯化钙或磷酸的分子量。 

本发明根据动物或矿物中药以及钙和磷的特性，选择相宜的流动相和合适的色谱条件，采用高效液相色谱-蒸发光散射法一次准确地测出动物或矿物中药中的钙和磷的含量，因此较现有技术具有简便、稳定、精密度高和重现性好的显著效果。 

附图说明

图1为下述实施例1中混合标准品的色谱图，图中，磷酸色谱峰的保留时间为5.486分钟，无水氯化钙色谱峰的保留时间为8.396分钟。 

图2为下述实施例1中醋龟甲溶液的色谱图，图中，磷酸色谱峰的保留时间为5.500分钟，无水氯化钙色谱峰的保留时间为8.410分钟。 

图3为下述实施例2中龙骨溶液的色谱图，图中，磷酸色谱峰的保留时间为5.039分钟，无水氯化钙色谱峰的保留时间为4.569分钟。 

图4为下述实施例3中鹿角霜溶液的色谱图，图中，磷酸色谱峰的保留时间为6.731分钟，无水氯化钙色谱峰的保留时间为12.729分钟。 

图5为下述实施例4中钟乳石溶液的色谱图，图中，无水氯化钙色谱峰的保留时间为5.057分钟。 

图6为下述实施例5中牡蛎溶液的色谱图，图中，无水氯化钙色谱峰的保留时间为8.581分钟。 

图7为下述实施例6中紫贝齿溶液的色谱图，图中，无水氯化钙色谱峰的保留时间为8.476分钟。 

图8为下述实施例7中鹿角霜配方颗粒溶液的色谱图，图中，磷酸色谱峰的保留时间为5.387分钟，无水氯化钙色谱峰的保留时间为7.046分钟。 

图9为下述实施例8中牡蛎配方颗粒溶液的色谱图，图中，无水氯化钙色谱峰的保留时间为8.543分钟。 

具体实施方式

例1 

1.仪器、试剂与试药 

1.1.仪器：高效液相色谱仪为Agilent1100系列；蒸发光散射检测器为Alltech 2000型；AB250D十万分之一天平； 

1.2.试剂：乙腈为色谱纯；三氟乙酸、七氟丁酸 

1.3.试药：醋龟甲，广东省药材公司中药饮片厂批号20090701，产地为广东； 

标准品：无水氯化钙，天津市大茂化学制剂厂，批号20080918；磷酸：广东省化学试剂工程技术研究开发中心，批号20090812。 

2.方法 

2.1.色谱条件：Prevail C18(250mm×4.6mm i.d.，5μm)，柱温25℃，以pH＝1的流动相A∶B(体积比)＝98∶2为流动相，流动相A为0.7％三氟乙酸溶液(含5.0mmol·L^-1七氟丁酸)，流动相B为乙腈，流速：0.5ml·min^-1。蒸发光散射条件：漂移管温度：115℃，气流速度：2.5L·min^-1。 

2.2.流动相A：取200ml双蒸水置500ml的容量瓶中，然后精密加入3.50ml三氟乙酸与326μl七氟丁酸，加双蒸水定容至500ml，pH＝1。 

2.3.标准品进样液储备液：将无水氯化钙125.00mg，磷酸20μl，用0.01mol·L^-1盐酸定容至250ml，配制成含无水氯化钙0.5mg·mL^-1、含磷酸0.1352mg·mL^-1的混合标准品液。 

精密吸标准品进样液储备液2、3、4、5、6mL，分别置于10mL容量瓶中，用0.01mol·L^-1HCl稀释至刻度，制备成含氯化钙分别为0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mg·mL^-1、含磷酸分别为0.027、0.041、0.054、0.068、0.081mg·mL^-1的标准品进样液。 

2.4.醋龟甲溶液：醋龟甲粉末25.01mg，置800℃马弗炉中灰化6h，加1mol·L^-1盐酸5ml溶解，过滤，加水定容至100ml，过0.45μm微孔滤膜，备用。 

2.5.测试与数据处理：系统平衡后，取醋龟甲溶液、一系列浓度的标准品溶液，分别进样10μl，记录标准品和样品的色谱图分别如图1、图2所示。数据见表1。 

表1 

将不同浓度的标准品峰面积及对应的浓度均取自然对数，作标准曲线，根据标准曲线计算醋龟甲溶液中磷酸和氯化钙的浓度。 

磷酸的标准曲线：y＝1.4289x+9.074(r＝0.9997)，将醋龟甲磷酸峰面积的自然对数4.65，代入方程，求得磷酸浓度的自然对数-3.10，则磷酸浓度C＝e^-3.10＝0.045。 

无水氯化钙标准曲线：y＝1.206x+8.4458(r＝0.9998)，将醋龟甲无水氯化钙峰面积的自然对数6.56，代入方程，求得无水氯化钙浓度的自然对数-1.56，则无水氯化钙浓度C＝e^-1.56＝0.209。 

按照方法中公式(Ⅰ)，计算醋龟甲中钙及磷的含量。 

3.结果 醋龟甲中钙的含量30.15％，磷的含量5.70％。 

例2 

1.仪器、标准品：同例1。 

1.1.试剂：乙腈为色谱纯；甲酸、七氟丁酸 

1.2.试药：龙骨：广州健泽药业有限公司，批号090501，产地：山西。 

2.方法： 

2.1.色谱柱条件：Prevail C18(250mm×4.6mm i.d.，5μm)，柱温20℃，以pH＝1.3的流动相A∶B(体积比)＝95∶5为流动相，为流动相，流动相A为2％甲酸(含5.0mmol·L^-1七氟丁酸)，流动相B为乙腈，流速：0.8ml·min^-1。蒸发光散射条件：漂移管温度：110℃，气流速度：2.8L·min^-1。 

2.2.流动相A：取200ml双蒸水置500ml的容量瓶中，然后精密加入10ml甲酸与326μl七氟丁酸，加双蒸水定容至500ml，pH＝1.3。 

2.3.标准品进样液：采用例1中制备的标准品溶液。 

2.4.龙骨溶液：龙骨粉末30.17mg，置800℃马弗炉中灰化6h，加1mol·L^-1盐酸5ml溶解，过滤，加水定容至100ml，过0.45μm微孔滤膜，备用。 

2.5.测试与数据处理：系统平衡后，取龙骨溶液、一系列浓度的标准品溶液，分别进样10μl，记录色谱图如图3所示。结果见表2。 

表2 

将不同浓度的标准品峰面积及对应的浓度均取自然对数，作标准曲线，根据标准曲线计算龙骨溶液中磷酸和氯化钙的浓度。 

磷酸的标准曲线y＝1.4885x+9.1804(r＝0.9995)，将龙骨磷酸峰面积的自然对数4.09，代入方程，求得浓度的自然对数-3.42，则浓度C＝e^-3.42＝0.033。 

无水氯化钙的标准曲线y＝1.3169x+8.5829(r＝0.9996)，将龙骨无水氯化钙峰面积的自然对数6.95，代入方程，求得浓度的自然对数-1.24，则浓度C＝e^-1.24＝0.290。 

按照方法中公式(Ⅰ)，计算龙骨中钙及磷的含量。 

3.结果 龙骨中钙的含量30.37％，磷的含量3.43％。 

例3 

1.仪器、标准品：同例1。 

1.1.试剂：甲醇为色谱纯；三氯乙酸、七氟丁酸 

1.2.试药：鹿角霜：广东省药材公司中药饮片厂，批号20081201，产地：广东。 

2.方法： 

2.1.色谱柱条件：Prevail C18(250mm×4.6mm i.d.，5μm)，柱温15℃，以pH＝1的流动相A∶B(体积比)＝95∶5为流动相，流动相A为1.0％三氯乙酸溶液(含5.0mmol·L^-1七氟丁酸)，流动相B为甲醇，流速：0.3ml·min^-1。蒸发光散射条件：漂移管温度为120℃，气流速度为2.0L·min^-1。 

2.2.流动相A：取200ml双蒸水置500ml的容量瓶中，然后精密加入5ml三氯乙酸与326μl七氟丁酸，加水定容至500ml，pH＝1。 

2.3.标准品进样液：采用例1中制备的标准品溶液。 

2.4.鹿角霜溶液：鹿角霜粉末25.03mg，置800℃马弗炉中灰化6h，加1mol·L^-1盐酸5ml溶解，过滤，加水定容至100ml，过0.45μm微孔滤膜，备用。 

2.5.测试与数据处理：系统平衡后，取鹿角霜溶液、一系列浓度的标准品溶液，分别进样10ul，记录色谱图如图4所示。结果见表3。 

表3 

将不同浓度的标准品峰面积及对应的浓度均取自然对数，作标准曲线，根据标准曲线计算鹿角霜溶液中磷酸和氯化钙的浓度。 

磷酸的标准曲线y＝1.4328x+9.025(r＝0.9994)，将鹿角霜磷酸峰面积的自然对数4.61，代入方程，求得浓度的自然对数-3.08，则浓度C＝e^-3.08＝0.046。 

无水氯化钙的标准曲线y＝1.3136x+8.5668(r＝0.9995)，将鹿角霜无水氯化钙峰面积的自然对数6.46，代入方程，求得浓度的自然对数-1.60，则浓度C＝e^-1.60＝0.202。 

按照方法中公式(Ⅰ)，计算鹿角霜中钙及磷的含量。 

3.结果：鹿角霜中钙的含量29.06％，磷的含量5.78％。 

例4 

1.仪器、标准品：同例1。 

1.1.试剂：乙腈为色谱纯；三氟乙酸。 

1.2.试药：钟乳石：广东省药材公司中药饮片厂，批号20080801，产地：广西。 

2.方法： 

2.1.色谱柱条件：Prevail C18(250mm×4.6mm i.d.，5μm)，柱温30℃，以pH＝1.5 的流动相A∶B(体积比)＝98∶2为流动相，流动相A为0.7％三氟乙酸溶液，流动相B为乙腈，流速：0.8ml·min^-1。蒸发光散射条件：漂移管温度：120℃，气流速度：2.0L·min^-1。 

2.2.流动相A：取200ml双蒸水置500ml的容量瓶中，然后精密加入5ml三氟乙酸，加水定容至500ml，pH＝1.5。 

2.3.标准品进样液：采用例1中制备的标准品溶液。 

2.4.钟乳石溶液：钟乳石粉末20.20mg，加1mol·L^-1盐酸5ml溶解，过滤，滤液加水定容至100ml，过0.45μm微孔滤膜，备用。 

2.5.测试与数据处理：系统平衡后，取钟乳石溶液、一系列浓度的标准品溶液，分别进样10ul，记录色谱图如图5所示。结果见表4。 

表4 

将不同浓度的标准品峰面积及对应的浓度均取自然对数，作标准曲线，根据标准曲线计算钟乳石溶液中氯化钙的浓度。 

磷酸未检测出。 

无水氯化钙的标准曲线y＝1.188x+8.4388(r＝0.9997)，将钟乳石无水氯化钙峰面积的自然对数6.65，代入方程，求得浓度的自然对数-1.52，则浓度C＝e^-1.52＝0.220。 

按照方法中公式(Ⅰ)，计算钟乳石中钙的含量。 

3.结果 钟乳石中钙的含量39.17％。 

例5 

1.仪器、标准品：同例1。 

1.1.试剂：三氟乙酸。 

1.2.试药：牡蛎：广东省药材公司中药饮片厂，批号20081201，产地：广东。 

2.方法： 

2.1.色谱柱条件：Prevail C18(250mm×4.6mm i.d.，5μm)，柱温40℃，以pH＝1.8 的流动相A为流动相，流动相A为1.0％三氯乙酸溶液，流速：0.5ml·min^-1。蒸发光散射条件：漂移管温度：115℃，气流速度：3.5L·min^-1。 

2.2.流动相A：取200ml双蒸水置500ml的容量瓶中，然后精密加入5ml三氯乙酸，加水定容至500ml，pH＝1.8。 

2.3.标准品进样液：采用例1中制备的标准品溶液。 

2.4.牡蛎溶液：牡蛎粉末20.14mg，置800℃马弗炉中灰化6h，加1mol·L^-1盐酸5ml溶解，过滤，加水定容至100ml，过0.45μm微孔滤膜，备用。 

2.5.测试与数据处理：系统平衡后，取牡蛎溶液、一系列浓度的标准品溶液，分别进样10ul，记录色谱图如图6所示。结果见表5。 

表5 

将不同浓度的标准品峰面积及对应的浓度均取自然对数，作标准曲线，根据标准曲线计算牡蛎溶液中氯化钙的浓度。 

磷酸未检测出。 

无水氯化钙的标准曲线y＝1.2404x+8.4824(r＝0.9995)，将牡蛎中无水氯化钙峰面积的自然对数6.59，代入方程，求得浓度的自然对数-1.55，则浓度C＝e^-1.55＝0.212。 

按照方法中公式(Ⅰ)，计算牡蛎中钙的含量。 

3.结果 牡蛎中钙的含量37.89％。 

例6 

1.仪器、标准品：同例1。 

1.1.试剂：甲酸。 

1.2.试药：紫贝齿：亳州市中药饮片厂，批号0550301，产地：云南。 

2.方法： 

2.1.色谱柱条件：Prevail C18(250mm×4.6mm i.d.，5μm)，柱温35℃，以pH＝2 的流动相A为流动相，流动相A为2％甲酸，流速：0.5ml·min^-1。蒸发光散射条件：漂移管温度：110℃，气流速度：2.5L·min^-1。 

2.2.流动相A：取200ml双蒸水置500ml的容量瓶中，然后精密加入10ml甲酸，加双蒸水定容至500ml，pH＝2。 

2.3.标准品进样液：采用例1中制备的标准品溶液。 

2.4.紫贝齿进样液：紫贝齿粉末20.26mg，置800℃马弗炉中灰化6h，加1mol·L^-1盐酸5ml溶解，过滤，加水定容至100ml，过0.45μm微孔滤膜，备用。 

2.5.测试与数据处理：系统平衡后，取紫贝齿溶液、一系列浓度的标准品溶液，分别进样10ul，记录色谱图如图7所示。结果见表6。 

表6 

将不同浓度的标准品峰面积及对应的浓度均取自然对数，作标准曲线，根据标准曲线计算紫贝齿溶液中无水氯化钙的浓度。 

磷酸未检测出。 

无水氯化钙的标准曲线y＝1.2777x+8.4947(r＝0.9994)，将紫贝齿中无水氯化钙峰面积的自然对数6.49，代入方程，求得浓度的自然对数-1.57，则浓度C＝e^-1.57＝0.208。 

按照方法中公式(Ⅰ)，计算紫贝齿中钙的含量。 

3.结果 紫贝齿中钙的含量36.94％。 

例7 

1.仪器、标准品：同例1。 

1.1.试剂：甲醇为色谱纯；三氯乙酸、七氟丁酸 

1.2.试药：鹿角霜配方颗粒：南方医科大学中药新药实验室制备，批号：090802-5。 

2.方法： 

2.1.色谱条件：Prevail C18(250mm×4.6mm i.d.，5μm)，柱温25℃，以pH＝1的 流动相A∶B(体积比)＝98∶2为流动相，流动相A为0.7％三氟乙酸溶液(含5.0mmol·L^-1七氟丁酸)，流动相B为乙腈，流速：0.6ml·min^-1。蒸发光散射条件：漂移管温度：115℃，气流速度：2.5L·min^-1。 

2.2.流动相A：取200ml双蒸水置500ml的容量瓶中，然后精密加入3.50ml三氟乙酸与326μl七氟丁酸，加双蒸水定容至500ml，pH＝1。 

2.3.标准品进样液：采用例1中制备的标准品溶液。 

2.4.鹿角霜配方颗粒溶液：鹿角霜配方颗粒250.01mg，置800℃马弗炉中灰化6h，加1mol·L^-1盐酸5ml溶解，过滤，加水定容至100ml，过0.45μm微孔滤膜，备用。 

2.5.测试与数据处理：系统平衡后，取鹿角霜配方颗粒溶液、一系列浓度的标准品溶液，分别进样10ul，记录色谱图如图8所示。结果见表7。 

表7 

将不同浓度的标准品峰面积及对应的浓度均取自然对数，作标准曲线，根据标准曲线计算鹿角霜配方颗粒溶液中磷酸和氯化钙的浓度。 

磷酸的标准曲线y＝1.4419x+9.0521(r＝0.9992)，将鹿角霜配方颗粒磷酸峰面积的自然对数4.07，代入方程，求得浓度的自然对数-3.45，则浓度C＝e^-3.45＝0.032。 

无水氯化钙的标准曲线y＝1.3051x+8.5185(r＝0.9991)，将鹿角霜配方颗粒中无水氯化钙峰面积的自然对数6.206，代入方程，求得浓度的自然对数-1.78，则浓度C＝e^-1.78＝0.169。 

按照方法中公式(Ⅰ)，计算鹿角霜配方颗粒中钙及磷的含量。 

3.结果：鹿角霜配方颗粒中钙的含量2.44％，磷的含量0.40％。 

例8 

1.仪器、标准品：同例1。 

1.1.试剂：三氟乙酸。 

1.2.试药：牡蛎配方颗粒由南方医科大学中药新药实验室制备，批号：090409-4。 

2.方法： 

2.1.色谱柱条件：Prevail C18(250mm×4.6mm i.d.，5μm)，柱温40℃，以pH＝1.8的流动相A为流动相，流动相A为1.0％三氯乙酸溶液，流速：0.5ml·min^-1。蒸发光散射条件：漂移管温度：110℃，气流速度：2.8L·min^-1。 

2.2.流动相A：取200ml双蒸水置500ml的容量瓶中，然后精密加入5ml三氯乙酸，加水定容至500ml，pH＝1.8。 

2.3.标准品进样液：采用例1中制备的标准品溶液。 

2.4.牡蛎配方颗粒溶液：牡蛎配方颗粒粉末250.13mg，置800℃马弗炉中灰化6h，加1mol·L^-1盐酸5ml溶解，过滤，加水定容至100ml，过0.45μm微孔滤膜，备用。 

2.5.测试与数据处理：系统平衡后，取牡蛎配方颗粒溶液、一系列浓度的标准品溶液，分别进样10ul，记录色谱图如图6所示。结果见表5。 

表5 

将不同浓度的标准品峰面积及对应的浓度均取自然对数，作标准曲线，根据标准曲线计算牡蛎配方颗粒溶液中氯化钙的浓度。 

磷酸未检测出。 

无水氯化钙的标准曲线y＝1.2808x+8.532(r＝0.999)，将牡蛎配方颗粒中无水氯化钙峰面积的自然对数6.77，代入方程，求得浓度的自然对数-1.36，则浓度C＝e^-1.36＝0.257。 

按照方法中公式(Ⅰ)，计算牡蛎配方颗粒中钙的含量。 

3.结果 牡蛎配方颗粒中钙的含量3.71％。 

例9 

采用同例1的方法，对醋鳖甲进行测定，结果见表8。 

例10 

采用同例2的方法，对石决明进行测定，结果见表8。 

例11 

采用同例3的方法，对煅瓦楞子进行测定，结果见表8。 

例12 

采用同例4的方法，对珍珠母进行测定，结果见表8。 

例13 

采用同例5的方法，对海蛤壳进行测定，结果见表8。 

例14 

采用同例6的方法，对煅牡蛎配方颗粒进行测定，结果见表8。 

例15 

采用同例7的方法，对醋龟甲配方颗粒进行测定，结果见表8。 

例16 

采用同例8的方法，对龙骨配方颗粒进行测定，结果见表8。 

例17 

采用同例1的方法，对珍珠母配方颗粒进行测定，结果见表8。 

例18 

采用同例2的方法，对海蛤壳配方颗粒进行测定，结果见表8。 

表8 

。

Claims (4)

1.一种动物或矿物中药中钙和磷含量的测定方法，该方法包括以下步骤组成：

(1)配制待检动物或矿物中药进样液：取动物或矿物中药的灰粉，加入浓度为1mol/L盐酸溶液溶解配制成含药物0.200～0.300mg/ml待检动物或矿物中药进样液；

配制标准品进样液：将无水氯化钙与磷酸混合后用浓度为0.01mol/L盐酸溶液稀释，得到氯化钙浓度为0.100～0.300mg/ml和磷酸浓度为0.027～0.081mg/ml的一系列标准品进样液；

将待检动物或矿物中药进样液和每一标准品进样液分别按以下方法进行高效液相色谱检测：

按进样量为10μl，对规格为250mm×4.6mm i.d.，5μm的液相色谱柱Prevail C18进样，控制柱温度为15～40℃，接着用由体积配比为A相95～100％和B相0～5％组成的流动相以0.3～0.8ml/min的流速进行洗脱，同时采用蒸发光散射检测洗脱液，控制蒸发光散射检器的漂移管温度为110℃～120℃，氮气流速为2.0～3.5L/min，获得待检动物或矿物中药的高效液相色谱图和一系列标准品的高效液相色谱图；

(2)将待检动物或矿物中药进样液的高效相液相图谱与所得每一标准品进样液的高效相液图谱比较，与标准品进样液的高效相液图谱中保留时间相同的相应成分的特征峰即是与该成分相同物质的特征峰；根据峰面积以随行标准曲线计算动物或矿物中药中钙和磷的含量；

上述步骤中，所述的流动相的A相是浓度为0.7％的三氟乙酸溶液、浓度为1％的三氯乙酸溶液或浓度为2％的甲酸溶液；所述的流动相的B相是甲醇或乙腈。

2.根据权利要求1所述的一种动物或矿物中药中钙和磷含量的测定方法，其特征在于，所述的配制待检样品进样液的步骤还包括加入所述的盐酸溶液稀释后的过滤步骤。

3.根据权利要求1或2所述的一种动物或矿物中药中钙和磷含量的测定方法，其特征在于，所述的动物或矿物中药的灰粉由以下方法制得：先精密称取样品的粉末，置800℃马弗炉中灰化6h，取灰分即得。

4.根据权利要求3所述的一种动物或矿物中药中钙和磷含量的测定方法，其特征在于所述的动物或矿物中药为配方颗粒。

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