CN102533723A - 一种同时提取花生rna和dna的通用方法 - Google Patents

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殷冬梅
张幸果
崔党群
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Abstract

本发明公开一种同时提取花生RNA和DNA的方法，适用于花生的根、茎、叶、花、种子等不同组织。该方法采用高盐做提取缓冲液，随后用LiCl分离出RNA和DNA。该方法具有经济、快捷、操作性强等特点，所提取的RNA和DNA质量好、纯度高、产量多，能满足后续反转录、文库构建、酶切、杂交等实验要求。

Description

一种同时提取花生RNA和DNA的通用方法
技术领域：本发明涉及一种同时提取花生RNA和DNA的方法，可有效避免花生中多糖、脂类、酚类等影响，提取纯度高、完整性好、得率高，尤其适用于少量样品的珍贵材料。
背景技术：从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA和DNA是进行分子生物学研究的必要前提和关键。因不同植物、不同发育时期的组织成分存在很大差异，所以针对不同来源的RNA和DNA的提取必须采取相应的方法技术。
花生富含多糖、油脂、蛋白、酚类及一些成分复杂的次级代谢产物，不同组织如根、茎、叶、花、种子的成分有很大差异，并且在不同发育时期，不同组织的RNA和DNA含量也不同，因此在提取过程中如何最大限度地抑制RNase和DNase的活性，并快速去除各种代谢产物对于保证提取样品的完整性和纯度至关重要。
目前提取植物总RNA和DNA的方法很多，但尚没有一种方法能同时提取花生RNA和DNA，并且适用于花生不同组织。
发明内容：本发明提供一种可同时高效提取花生RNA和DNA的通用方法，能有效去除多糖、脂类等代谢产物的影响，所提取的RNA和DNA纯度高、完整性好，产量高。
本发明的技术解决方案是：一种同时提取花生RNA和DNA的通用方法，其特征按如下步骤进行：
(1)取0.5g花生组织样品置液氮中冷冻，研磨成粉；
(2)加入5ml提取缓冲液，混匀，65℃温育20min；
(3)加入3ml氯仿，混匀，冰置5min；
(4)4℃8000rmp离心20min；
(5)取上清4ml，加入2.4ml氯仿，混匀，冰置5min；
(6)4℃8000rmp离心20min；
(7)取上清3ml，加入1ml浓度为8mol/L的LiCl，混匀后于4℃沉淀过夜或-20℃放置4h；
(8)4℃8000rmp离心20min；沉淀转入第(9)步，上清转入第(10)步；
(9)沉淀用1ml 75％乙醇漂洗后，4℃8000rmp离心10min，弃上清，真空抽干；沉淀溶于100μl RNase-Free dH2O中，-80℃保存；
(10)第(8)步上清4ml转入无菌离心管中，加入8ml无水乙醇，冰置30min；
(11)8000rmp离心10min，弃上清；
(12)沉淀用1ml 75％乙醇漂洗，8000rmp离心10min，弃上清，沉淀溶于100μl Dnase-FreedH2O，-20℃保存。
附图说明：
图1是本发明实施例提取并纯化出的花生总RNA的琼脂糖电泳图谱。其中1：根；2：茎；3：叶；4：花；5：幼嫩种子；6：成熟种子。
图2是本发明实施例提取并纯化出的花生总DNA的琼脂糖电泳图谱。其中1：根；2：茎；3：叶；4：花；5：幼嫩种子；6：成熟种子。
具体实施方式：
(1)分别取0.5g花生根、茎、叶、花、幼嫩种子和成熟种子置液氮中冷冻，研磨成粉，转入10ml RNase-Free离心管中；
(2)分别加入5ml提取缓冲液，混匀，65℃温育20min；
(3)分别加入3ml氯仿，混匀，冰置5min；
(4)4℃8000rmp离心20min；
(5)分别取上清4ml，加入2.4ml氯仿，混匀，冰置5min；
(6)4℃8000rmp离心20min；
(7)分别取上清3ml，加入1ml浓度为8mol/L的LiCl，混匀后于4℃沉淀过夜或-20℃放置4h；
(8)4℃8000rmp离心20min；沉淀转入第(9)步操作，上清转入第(10)步操作；
(9)沉淀分别用1ml 75％乙醇漂洗30sec后，4℃8000rmp离心10min，弃上清，真空抽干；沉淀溶于100μl RNase-Free dH2O中，-80℃保存；至此获得各组织总RNA。
(10)将第(8)步上清4ml分别转入无菌离心管中，加入8ml无水乙醇，冰置30min；
(11)8000rmp离心10min，弃上清；
(12)沉淀用1ml 75％乙醇漂洗30sec，8000rmp离心10min，弃上清，沉淀溶于100μlDnase-Free dH2O，-20℃保存，至此获得各组织DNA。
本发明提取并纯化出的花生不同组织总RNA的琼脂糖电泳如图1所示：有明显清晰的三条带，并且28S条带的亮度是18S的两倍，说明RNA的完整性好，纯度高。
本发明提取并纯化出的花生不同组织总DNA的琼脂糖电泳如图2所示：有明显清晰的一条带，说明DNA的完整性好，纯度高。

Claims (1)

1.一种同时提取花生RNA和DNA的方法，其特征是依次按如下步骤进行：
(1)取0.5g花生组织样品置液氮中冷冻，研磨成粉；
(2)加入5ml提取缓冲液，混匀，65℃温育20min；
(3)加入3ml氯仿，混匀，冰置5min；
(4)4℃8000rmp离心20min；
(5)取上清4ml，加入2.4ml氯仿，混匀，冰置5min；
(6)4℃8000rmp离心20min；
(7)取上清3ml，加入1ml浓度为8mol/L的LiCl，混匀后于4℃沉淀过夜或-20℃放置4h；
(8)4℃8000rmp离心20min；沉淀转入第(9)步，上清转入第(10)步；
(9)沉淀用1ml 75％乙醇漂洗后，4℃8000rmp离心10min，弃上清，真空抽干；沉淀溶于100μl RNase-Free dH20中，-80℃保存；
(10)第(8)步上清4ml转入无菌离心管中，加入8ml无水乙醇，冰置30min；
(11)8000rmp离心10min，弃上清；
(12)沉淀用1ml 75％乙醇漂洗，8000rmp离心10min，弃上清，沉淀溶于100μl Dnase-FreedH2O，-20℃保存。
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102776175A (zh) * 2012-08-28 2012-11-14 国家海洋局第一海洋研究所 一种有效快速提取海洋微藻rna的方法
CN107828783A (zh) * 2017-12-13 2018-03-23 中国农业科学院油料作物研究所 一种花生叶片dna的高效提取方法

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CN101486747A (zh) * 2009-02-20 2009-07-22 浙江省农业科学院 一种同时提取植物dna和rna的方法

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