CN102531881A - 一种栎瘿酸单体的分离纯化方法 - Google Patents
一种栎瘿酸单体的分离纯化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102531881A CN102531881A CN2011104201059A CN201110420105A CN102531881A CN 102531881 A CN102531881 A CN 102531881A CN 2011104201059 A CN2011104201059 A CN 2011104201059A CN 201110420105 A CN201110420105 A CN 201110420105A CN 102531881 A CN102531881 A CN 102531881A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- silica gel
- extraction
- goitre
- oak
- acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种栎瘿酸的分离纯化方法，属于中药活性成分的分离纯化技术领域。该方法是以秦艽为原料通过采用95%的乙醇溶液提取，乙酸乙酯萃取，以二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶柱分离，氯仿溶解、过滤、冷却结晶得到栎瘿酸单体。本发明操作简便，生产周期短，工艺稳定，分离效果高，可实现栎瘿酸的高纯度分离，可作为秦艽药材鉴别对照品使用。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物化合物单体的制备方法，具体涉及从秦艽中提取分离栎瘿酸单体的方法，属于中药活性成分的分离纯化技术领域。
背景技术
秦艽是龙胆科多年生草本植物，是治风湿关节痛、结核病潮热、黄疸等症的主药之一。在青海尤以黄南产的秦艽质量最佳，是中国重要的传统中药之一，始载于《神农本草经》，列为中品，“秦艽主寒热邪气，寒湿风痹，肢节痛、下水、利小便。”
栎瘿酸是秦艽中特征性化学成分之一，英文名称：Roburic acid; 3,4-Secoursa-4(23),12-dien-3-oic acid。化学名称为：1-Chrysenepropanoic acid1,2,3,4,4a,4b,5,6,6a,7,8,9,10,10a,12,12a-hexadecahydro-1,4a,4b,6a,9,10-hexamethyl-2-(1-methylethenyl)-,(1S,2S,4aR,4bS,6aR,9R,10S,10aR,12aR)，分子量为440.70,其结构式为：
由于栎瘿酸是秦艽的特征性化学成分之一，因此以栎瘿酸作为该药材及其相关制剂的质量评价指标，既能较真实地反映其质量又具有专属性，可对秦艽药材及其制剂的质量控制起到重要作用。
但是，通过检索大量文献发现，目前只有关于秦艽中苦苷类的提取分离纯化报道，未见与栎瘿酸单体分离工艺的相关专利报道。究其原因，与栎瘿酸的性质和其它含量较高的苦苷和糖类成分干扰有关，本发明优化了针对栎瘿酸成分提取分离后的一系列方法，从中得到含量较高的单体栎瘿酸成分。
发明内容
本发明的目的在于提供一种栎瘿酸单体的分离纯化方法。该方法操作简便，分离效率高，工艺稳定，成本低廉，可实现栎瘿酸单体的高纯度分离制备，得到的栎瘿酸单体纯度高，可作为鉴别对照品使用。
为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一种栎瘿酸的分离纯化方法，其特征在于：以秦艽为原料通过提取、萃取、柱分离和结晶得到栎瘿酸单体，具体包括下述主要步骤：
A、提取：
将干燥的秦艽粉碎成粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液，其加入量按照药材重量:乙醇溶液体积=Kg:(8～10)L计算，回流提取3次，每次2～3小时，提取液过滤，合并过滤液，浓缩回收乙醇，得浓浸膏待进行下一步萃取处理；
B、萃取：
将步骤A所得的浓浸膏加入1倍量80℃的水，稀释后的浸膏水溶液再加入1倍量的乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合并萃取后乙酸乙酯层，用真空旋蒸55℃浓缩至流浸膏，加入5倍重量的60～80目硅胶拌样，55℃干燥，所得干燥后的拌样硅胶备硅胶柱分离；
C、硅胶柱分离：
根据步骤B所得拌样硅胶重量，称取10倍量柱硅胶用二氯甲烷装入备好的玻璃层析柱中，用二氯甲烷作为洗脱剂洗脱沉降，直至流速恒定；将步骤B中干燥后的拌样硅胶，按照柱硅胶：拌样硅胶10:1装入层析柱中，用二氯甲烷洗脱，根据TLC检测收集栎瘿酸产品段，回收二氯甲烷，得白色固体，待下一步结晶；
D、结晶：
按照白色固体:氯仿（1g:20ml）计算，将步骤C得到的白色固体用氯仿溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，得到氯仿滤液体积，加入2倍体积的甲醇冷藏结晶，根据晶体具体纯度，重复结晶2～3次，直至纯度≥98.5%，即可得到栎瘿酸单体产品。
步骤B所述柱硅胶为200～300目。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明方法是将栎瘿酸从秦艽浓乙醇提取液中分离出来，经浓缩萃取，再分离纯化而得；由于减少了较大极性物质的提取，可大大简化工艺、缩短生产周期、降低生产成本；而通过萃取、硅胶柱分离、结晶过程，通过最适宜的工艺及参数条件，使产品中栎瘿酸的含量达到98%以上；整个工艺过程操作简便、工艺稳定、成本低廉，且分离效率高、产品纯度高，即可实现栎瘿酸单体的高纯度分离制备。
附图说明
图1是本发明实施例1所得栎瘿酸单体产品的HPLC图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。
但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。
下述各实施例中，终产品栎瘿酸单体的纯度复检均采用反相分析型液相色谱（HPLC-ELSD）法，色谱条件如下：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈:乙酸（100:0.6）为流动相；柱温30℃；流速1.0ml/min；蒸发光散射检测器。
实施例1
一种栎瘿酸单体的分离纯化方法，以秦艽为原料进行提取、浓缩、萃取、柱分离和结晶而得到栎瘿酸单体，具体包括下述主要步骤：
A、提取：
将干燥的秦艽2kg粉碎成粗粉，装入体积20L的回流提取罐中，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液16L，加热回流提取3次，每次2小时，提取液过滤，合并过滤液，浓缩回收乙醇，得浓浸膏约2L待进行下一步萃取处理。
B、萃取：
将步骤A所得的浓浸膏加1倍量80℃水稀释，共得溶液约4L，按体积加入约4L的乙酸乙酯萃取，萃取3次，收集合并乙酸乙酯层，55℃减压浓缩；得到浓缩后浸膏40克，加入60～80目硅胶200克浓缩拌样干燥得拌样硅胶。
C、硅胶柱分离：
称取200～300目硅胶2.4Kg用纯二氯甲烷装入备好的15CM玻璃层析柱中，加入二氯甲烷洗脱沉降，直至流速恒定；将步骤B中干燥好的硅胶样品240克，装入层析柱中，用二氯甲烷匀速洗脱，根据TLC检测收集栎瘿酸产品段，回收二氯甲烷，得白色固体1.1克，待下一步结晶。
D、结晶：
于步骤C得到的1.1克白色固体物中加入氯仿溶液22ml，超声使充分溶解，过滤除去不溶性杂质，将滤液加入2倍量甲醇密封放置冰箱冷却结晶12小时；过滤干燥，得晶体0.9克；将0.9克晶体用20ml氯仿溶液复溶，加入约40ml甲醇溶液，密封放置冰箱冷却结晶12小时。过滤晶体，50℃烘干，得白色结晶0.8克。经HPLC检测，产品纯度为99.13%。
整个生产流程历时约5天，能大大缩短生产周期，节约生产成本。
产品收率为（0.8/2000）×100%=0.04%。
实施例2
一种栎瘿酸单体的分离纯化方法，以秦艽为原料进行提取、萃取、硅胶柱分离和结晶而得到栎瘿酸单体，具体包括下述主要步骤：
A、提取：
将干燥的秦艽20kg粉碎成粗粉，装入体积500L的提取罐中，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液200L，回流提取3次，每次3小时，提取液过滤，合并过滤液，浓缩回收乙醇，得浓浸膏约18L待进行下一步萃取处理。
B、萃取：
将步骤A所得的浸膏加入1倍量（18L）的80℃水稀释，按照稀释后浸膏水溶液体积加入36L的乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，共萃取3次，合并乙酸乙酯层，55℃减压浓缩乙酸乙酯层，得到浓缩浸膏400克，加入2000克60～80目硅胶干燥拌样，干燥后得拌样硅胶2400g。
C、硅胶柱分离：
称取200～300目硅胶24Kg，用二氯甲烷装入备好的4根20cm×120cm玻璃层析柱中，加入二氯甲烷洗脱沉降，直至流速恒定。将步骤B中干燥好的硅胶样品2400克，装入层析柱中，用二氯甲烷匀速洗脱，根据TLC检测收集栎瘿酸产品段，回收二氯甲烷，得白色固体15克，待下一步结晶。
D、结晶：
于步骤C得到的15克白色固体物中加入氯仿溶液150ml使其充分溶解，有机膜过滤除去不溶性杂质，将滤液加入2倍量甲醇300ml密封放置冰箱冷却结晶12小时；过滤析出晶体，50℃干燥，干燥后得晶体12克；将12克晶体用120ml氯仿溶液复溶，过滤后加入约240ml甲醇溶液，密封放置冰箱冷却结晶12小时。过滤析出晶体，50℃烘干，得白色结晶9.8克。
经HPLC检测，产品纯度为99.05%。
整个生产流程历时约14天，能大大缩短生产周期，节约生产成本。
产品收率为（9.8/20000）×100%=0.049%。
Claims (2)
1.一种栎瘿酸的分离纯化方法，其特征在于：以秦艽为原料通过提取、萃取、柱分离和结晶得到栎瘿酸单体，具体包括下述主要步骤：
A、提取：
将干燥的秦艽粉碎成粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液，其加入量按照药材重量:乙醇溶液体积=1Kg:(8～10)L计算，加热回流提取3次，每次2～3小时，提取液过滤，合并过滤液，浓缩回收乙醇，得浓浸膏待进行下一步萃取处理；
B、萃取：
将步骤A所得的浓浸膏加入1倍量80℃的水稀释，稀释后的浸膏水溶液再加入1倍量的乙酸乙酯萃取3次，合并萃取后的乙酸乙酯层，用旋转蒸发器55℃浓缩至流浸膏，加入流浸膏5倍重量的60～80目硅胶55℃干燥拌样，干燥后的拌样硅胶备硅胶柱分离；
C、硅胶柱分离：
根据步骤B所得拌样硅胶重量，称取10倍量的柱硅胶用二氯甲烷拌匀装入备好的玻璃层析柱中，用二氯甲烷作为洗脱剂洗脱沉降，直至流速恒定；将步骤B中干燥好的拌样硅胶，按照柱硅胶：拌样硅胶10:1装入层析柱中，用二氯甲烷洗脱，根据TLC检测收集栎瘿酸产品段，回收二氯甲烷，得白色固体，待下一步结晶；
D、结晶：
按照步骤C所得的白色固体:氯仿=1g:20mL计算，将步骤C得到的白色固体用氯仿溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，得到氯仿滤液体积，然后加入2倍体积的甲醇冷藏结晶，根据晶体具体纯度，重复结晶2～3次，直至纯度≥98.5%，即可得到栎瘿酸单体产品。
2.如权利要求1所述栎瘿酸的分离纯化方法，其特征在于：步骤B所述柱硅胶为200～300目。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011104201059A CN102531881A (zh) | 2011-12-15 | 2011-12-15 | 一种栎瘿酸单体的分离纯化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011104201059A CN102531881A (zh) | 2011-12-15 | 2011-12-15 | 一种栎瘿酸单体的分离纯化方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102531881A true CN102531881A (zh) | 2012-07-04 |
Family
ID=46340069
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2011104201059A Pending CN102531881A (zh) | 2011-12-15 | 2011-12-15 | 一种栎瘿酸单体的分离纯化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102531881A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014237611A (ja) * | 2013-06-07 | 2014-12-18 | 花王株式会社 | セラミド産生促進剤 |
| CN109172633A (zh) * | 2018-10-19 | 2019-01-11 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 一种秦艽提取物及其制备方法与应用 |
-
2011
- 2011-12-15 CN CN2011104201059A patent/CN102531881A/zh active Pending
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 郑姜彬: "HPLC-ELSD法测定麻花秦艽中四种脂溶性成分的含量", 《药物分析杂质》 * |
| 陈千良等: "小秦艽化学成分研究", 《中药材》 * |
| 陈千良等: "陕西产秦艽的化学成分研究", 《中国医药杂志》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014237611A (ja) * | 2013-06-07 | 2014-12-18 | 花王株式会社 | セラミド産生促進剤 |
| CN109172633A (zh) * | 2018-10-19 | 2019-01-11 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 一种秦艽提取物及其制备方法与应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101838200A (zh) | 一种从金银花中提取分离绿原酸的方法 | |
| CN101037467B (zh) | 从枇杷叶中分离纯化熊果酸的方法 | |
| CN101891781A (zh) | 一种制备高纯度栀子苷的方法 | |
| CN101812098B (zh) | 一种从巴戟天药材中提取分离水晶兰苷单体的方法 | |
| CN101343297B (zh) | 一种利用活性炭提取纯化栀子苷的方法 | |
| CN105294628A (zh) | 一种从野菊花中分离制备黄酮类成分的方法 | |
| CN101037460A (zh) | 栀子苷的分离纯化方法 | |
| CN102146083A (zh) | 一种千金藤素的分离提取方法 | |
| CN101143887B (zh) | 从枇杷叶中分离制备科罗索酸的方法 | |
| CN107721967A (zh) | 一种高egcg含量的绿茶提取物生产工艺 | |
| CN110818585A (zh) | 一种从九香虫中同时制备五种多巴胺类化合物的分离方法 | |
| CN101314597A (zh) | 从红豆杉细胞悬浮培养液分离紫杉醇的方法 | |
| CN102311435A (zh) | 一种高纯度钩藤碱的制备方法 | |
| CN102228515A (zh) | 一种分离和富集莲子心总黄酮和总生物碱的方法 | |
| CN104311616B (zh) | 一种从秦皮中提取高纯度秦皮甲素和秦皮苷的方法 | |
| CN104193758B (zh) | 一种从墨旱莲中提取蟛蜞菊内酯类单体化合物的制备方法 | |
| CN101250104A (zh) | 从大红八角果中提取高纯度莽草酸的方法 | |
| CN102531881A (zh) | 一种栎瘿酸单体的分离纯化方法 | |
| CN107573255A (zh) | 一种从辣椒果实中分离纯化辣椒碱和二氢辣椒碱的方法 | |
| CN101941908A (zh) | 一种从金银花露加工残液中制备及半合成绿原酸的方法 | |
| CN103142474B (zh) | 以高纯度银杏内酯b为活性成分的组合物及其制备方法 | |
| CN101353294A (zh) | 高含量白藜芦醇分离纯化的方法 | |
| CN107722080A (zh) | 一种从岩白菜叶中提取熊果苷的方法 | |
| CN107721857A (zh) | 一种从平卧菊三七中制备高纯度绿原酸的方法 | |
| CN102503998A (zh) | 一种从合欢花中快速分离槲皮苷的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20120704 |