CN102524067A - 一种太子参脱毒组培繁育方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种太子参脱毒组培繁育的方法，包含如下步骤：外植体选择、诱导培养、病毒检测、增殖培养、生根培养、大量繁殖脱毒组培苗、炼苗移栽、生产脱毒太子参（原种）、一代种、二代扩繁种（生产种）。本发明具有接种操作简易，接种污染率低，成活率高；脱毒简便、快捷而彻底；繁殖系数达10~15倍，速度快，脱毒组培苗适于工厂化生产；脱毒苗生产的块根抗逆性、产量和品质较未脱毒苗品质增强，可商品化生产。

Description

一种太子参脱毒组培繁育方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种太子参脱毒组培繁育方法。

 

背景技术

太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla (Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.的块根。在夏季茎叶大部分枯萎时采挖，洗净，除去须根，置沸水中略烫后晒干或直接晒干。太子参历版《中华人民共和国药典》均予收载。太子参具有益气健脾，生津润肺的功能；临床用于脾虚体倦，食欲不振，病后虚弱，气阴不足，自汗日渴，肺燥干咳等症。太子参用量逐年递增，市场前景广阔。太子参是贵州省上世纪90年代从福建引种的药材之一，历年来在黔东南地区广泛种植。由于长期以太子参块根进行无性繁殖，太子参病毒病普遍发生,病害严重。经调查，该区域的太子参花叶病发病面积曾高达40%~50%；部分种植区发病率尚高达60%以上，这导致其产量逐年下降。目前报道太子参受侵染的病毒种类主要有：芜菁花叶病毒(Turnipmosaicvirus，TuMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)， 蚕豆萎蔫病毒(Broad beanwill virus，BBWV)和烟草花叶病毒(Tobacco mosaic uirus，TMV) 。

目前，获得无病毒植株的方法有多种，其相关技术已有许多专利，如CN100382679C（2008年4月23日授权《一种半夏脱毒组培快繁的方法》等披露了采用茎尖作为外植体，经茎尖组培后得到脱毒苗的方法。《福建农林大学学报》（自然科学版）2006年3月第35卷第2期报道了《太子参茎尖脱毒培养及增产效果》、《福建农业科技》2006年第5期报道了《脱毒太子参标准化高产栽培技术及其推广应用》。上述报道未揭示脱毒太子参的生产过程、接种污染力高、移栽成活率低，未提出解决病毒再次侵染的途径等问题。

 

发明内容

本发明的目的在于克服上述缺点而提供了一种具有接种污染率低，成活率高，脱毒简便、快捷、彻底；繁殖系数高，块根抗逆性、产量和品质均增强的太子参脱毒组培繁育方法。

本发明的一种太子参脱毒组培繁育方法，包括如下步骤：

（1）单株的选择：在太子参生长旺盛期的4~5月选择株高10~20㎝；茎直立，近方形，分枝5~8个，略呈紫色；叶对生，色深绿，叶片宽卵形或卵状菱形，顶端渐尖，基部渐狭，上面无毛，下面沿叶脉疏生柔毛，顶部有2对大叶，形成十字形，无病害表现；花腋生或呈聚伞花序；蒴果宽卵形，具种子6~19粒的优良单株；

（2）外植体的选择：

块根芽头：在传统采收期采收优良单株中块根最大部位的直径在0.45㎝以上、数量在10粒以上的植株长出的芽头作为外植体；

种子：在传统采收期采收优良单株中块根最大部位的直径在0.45㎝以上、数量在10粒以上的植株收获的未成熟或成熟种子作为外植体；

（3）微茎尖：

块根芽头经洗涤消毒后，在无菌条件下培养，待芽长至2~3个节时在无菌环境下切取0.3~0.5㎜茎尖即得；

种子经洗涤消毒后，在无菌条件下培养，待芽长至2~3个节时在无菌环境下切取0.3~0.5㎜茎尖即得；

（4）增殖培养：

所需材料：经病毒检测后不含芫菁花叶病毒（Turnipmosaicvirus，TuMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、烟草花叶病毒（Broad beanwill virus，BBWV）、蚕豆萎蔫病毒（Tobacco mosaic uirus，TMV）的微茎尖；

微茎尖增殖培养分为初代培养和继代培养，初代培养基配方为MS+BA0.5~2.0mg.L^-1+NAA0.1~0.5 mg.L^-1；继代培养基配方为MS+BA1.0~5.0 mg.L^-1+NAA0.1~0.5 mg.L^-1;

（5）生根培养：

微茎尖经增殖培养后进行生根培养，其培养基配方为1/2MS +NAA0.1~3.0 mg.L^-1；

（6）原种的生产： 

a、大棚内生产过程中所需移栽基质由黄土∶珍珠岩∶腐殖土按体积比3∶1∶2配制而成，基质厚度为15~20㎝；移栽基质配制好后需进行基质消毒，具体操作为先将基质翻松，每平方米用98％~100％必速灭微粒剂10~15g加水3L稀释后喷洒，然后翻搅基质7~10㎝，使药剂与基质充分混合，覆盖塑料薄膜，2周后翻松基质2次后即可移栽；移栽后至采收期间需进行防虫处理，其具体操作为搭设防虫网；移栽地200m范围内禁止种植烟草、黄瓜、油菜、蚕豆等作物;

b、棚外炼苗移栽后至采收期间需进行防虫处理，其具体操作为搭设防虫网和遮阳网；移栽地200m范围内禁止种植烟草、黄瓜、油菜、蚕豆等作物;

（7）脱毒太子参一代种、二代种（生产种）扩繁地需进行土壤处理，消除芫菁花叶病毒（Turnipmosaicvirus，TuMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、烟草花叶病毒（Broad beanwill virus，BBWV）、蚕豆萎蔫病毒（Tobacco mosaic uirus，TMV）经土壤侵染的途径，设置杀灭蚜虫的装置或设备，种植地200m范围内禁止种植烟草、黄瓜、油菜、蚕豆等作物。

本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：首先在于筛选优良太子参单株，收集块根芽头或种子，选择微茎尖，生产出组培苗经检测确认脱除病毒后进行增殖培养，生产出脱毒种苗，在大棚或大田进行炼苗移栽，开展太子参原种、一代种、二代种（生产种）的生产。本发明增加了原种生产的繁殖场所及土壤处理方法、一代种生产、二代种（生产种）种植地选择、土壤处理、新增防治病毒再次侵染的措施等，确保生产的太子参种参为脱毒太子参，能为生产提供脱毒种苗；本发明接种操作简易；接种污染率低，成活率高；脱毒简便、快捷而彻底；繁殖系数达10~15倍，速度快，脱毒组培苗适于工厂化生产；脱毒苗生产的块根抗逆性、产量和品质较未脱毒苗品质增强，可商品化生产。运用本发明生产的原种块根平均单粒重0.36g, 一代扩繁种平均单粒重0.54g,二代扩繁种（生产种）块根平均单粒重0.58g。本发明能为太子参大田生产提供优良种参，运用本发明繁育的种参，667㎡生产面积可生产符合《中华人民共和国药典》（2010年版一部）太子参质量标准规定的太子参115㎏（干品）以上，较常规产量102.5㎏/667㎡高11.4%以上；较贵州省太子参产区的平均产量高20%以上。

 

具体实施方式

实施例1：

一种太子参脱毒组培繁育方法，包括如下步骤：

（1）单株的选择：2006年4~5月，在贵州昌昊中药发展有限公司施秉牛大场镇太子参生产基地进行田间观察选择，选择植株高10~20㎝；茎直立，近方形，分枝5~8个，略呈紫色；叶对生，色深绿，叶片宽卵形或卵状菱形，顶端渐尖，基部渐狭，上面无毛，下面沿叶脉疏生柔毛，顶部有2对大叶，形成十字形，无病害表现；花腋生或呈聚伞花序；蒴果宽卵形，具种子6~19粒的优良单株，做好套袋及标记。

（2）外植体的选择：

块根芽头：将上述套袋及标记的单株在2006年8月采收，采收时选择块根最大部位直径在0.45~0.60㎝、数量在15粒的植株作为优良单株，以此收集的块根长出的芽头作为外植体；

（3）微茎尖：

在上述收集的带芽头的块根，经洗涤消毒后，在无菌条件下培养，待芽长至2~3个节时在无菌环境下切取0.3~0.5㎜茎尖即得。

（4）增殖培养：

将上述得到的茎尖经增殖后送云南省农业生物技术重点实验室开展病害检测，结果显示该材料未被芫菁花叶病毒（Turnipmosaicvirus，TuMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、烟草花叶病毒（Broad beanwill virus，BBWV）、蚕豆萎蔫病毒（Tobacco mosaic uirus，TMV）侵染。

增殖培养分为初代培养和继代培养：初代培养基配方为MS+BA0.6mg.L^-1+NAA0.4mg.L^-1，继代培养基配方为MS+BA1.8 mg.L^-1+NAA0.3 mg.L^-1。

（5）生根培养：

微茎尖经增殖培养后进行生根培养，其所需的培养基配方为1/2MS +NAA1.0 mg.L^-1。

（6）原种的生产：

a、原种大棚内生产在2007年3~10月进行，实施地点位于贵州昌昊中药发展有限公司智能化温室大棚中进行，所需移栽基质由黄土∶珍珠岩∶腐殖土按体积比3∶1∶2配制而成，基质厚度为15㎝；移栽基质配制好后需进行基质消毒，具体操作为先将基质翻松，每平方米用98％必速灭微粒剂12g加水3L稀释后喷洒，然后翻搅基质7~10㎝，使药剂与基质充分混合，覆盖塑料薄膜，2周后翻松基质2次后即可移栽；移栽后至采收期间需进行防虫处理，其具体操作为：搭设防虫网，在大棚200m范围内禁止种植烟草、黄瓜、油菜、蚕豆等作物。

b、原种棚外生产和棚内同时进行，实施时间为2007年2~9月，实施地点位于贵州昌昊中药发展有限公司大棚外试验地，该区域200m范围内未种植烟草、黄瓜、油菜、蚕豆等作物，移栽后至采收期间需进行防虫处理，其具体操作为：搭设防虫网和遮阳网。

（7）脱毒太子参一代种在2007年12月至2008年9月进行，实施地点位于贵州昌昊中药发展有限公司施秉牛大场镇太子参生产基地。种植前需进行土壤处理，消除步骤4中所述的4种病毒的经土壤侵染途径；设置杀灭蚜虫的装置或设备；200m范围内禁止种植烟草、黄瓜、油菜、蚕豆等作物；

脱毒太子参二代种（生产种）在2008年12月至2009年9月进行，实施地点位于贵州昌昊中药发展有限公司施秉牛大场镇太子参生产基地。种植前需进行土壤处理，消除步骤4中所述的4种病毒的经土壤侵染途径；设置杀灭蚜虫的装置或设备；200m范围内禁止种植烟草、黄瓜、油菜、蚕豆等作物。

（8）运用步骤8中生产的脱毒太子参二代种（生产种）2009年12月分别在贵州省施秉县、黄平县、赫章县进行大田生产，经2010年8月测产，得到符合《中华人民共和国药典》（2010年版一部）太子参质量标准规定的太子参（干品）产量分别为125.2㎏/667㎡、121.5㎏/667㎡、116.4㎏/667㎡。 

Claims (2)

1.一种太子参脱毒组培繁育方法，包括如下步骤：

（1）单株的选择：在太子参生长旺盛期的4~5月选择株高10~20㎝；茎直立，近方形，分枝5~8个，略呈紫色；叶对生，色深绿，叶片宽卵形或卵状菱形，顶端渐尖，基部渐狭，上面无毛，下面沿叶脉疏生柔毛，顶部有2对大叶，形成十字形，无病害表现；花腋生或呈聚伞花序；蒴果宽卵形，具种子6~19粒的优良单株；

（2）外植体的选择：

块根芽头：在传统采收期采收优良单株中块根最大部位的直径在0.45㎝以上、数量在10粒以上的植株长出的芽头作为外植体；

种子：在传统采收期采收优良单株中块根最大部位的直径在0.45㎝以上、数量在10粒以上的植株收获的未成熟或成熟种子作为外植体；

（3）微茎尖：

块根芽头经洗涤消毒后，在无菌条件下培养，待芽长至2~3个节时在无菌环境下切取0.3~0.5㎜茎尖即得；

种子经洗涤消毒后，在无菌条件下培养，待芽长至2~3个节时在无菌环境下切取0.3~0.5㎜茎尖即得；

（4）增殖培养：

所需材料：经病毒检测后不含芫菁花叶病毒（Turnipmosaicvirus，TuMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、烟草花叶病毒（Broad beanwill virus，BBWV）、蚕豆萎蔫病毒（Tobacco mosaic uirus，TMV）的微茎尖；

微茎尖增殖培养分为初代培养和继代培养，初代培养基配方为MS+BA0.5~2.0mg.L^-1+NAA0.1~0.5 mg.L^-1；继代培养基配方为MS+BA1.0~5.0 mg.L^-1+NAA0.1~0.5 mg.L^-1;

（5）生根培养：

微茎尖经增殖培养后进行生根培养，其培养基配方为1/2MS +NAA0.1~3.0 mg.L^-1；

（6）原种的生产： 

a、大棚内生产过程中所需移栽基质由黄土∶珍珠岩∶腐殖土按体积比3∶1∶2配制而成，基质厚度为15~20㎝；移栽基质配制好后需进行基质消毒，具体操作为先将基质翻松，每平方米用98％~100％必速灭微粒剂10~15g加水3L稀释后喷洒，然后翻搅基质7~10㎝，使药剂与基质充分混合，覆盖塑料薄膜，2周后翻松基质2次后即可移栽；移栽后至采收期间需进行防虫处理；

 b、棚外炼苗移栽后至采收期间需进行防虫处理，其具体操作为搭设防虫网和遮阳网；移栽地200m范围内禁止种植烟草、黄瓜、油菜、蚕豆等作物;

（7）脱毒太子参一代种、二代种扩繁地需进行土壤处理，消除芫菁花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒、蚕豆萎蔫病毒经土壤侵染的途径，设置杀灭蚜虫的装置或设备，种植地200m范围内禁止种植烟草、黄瓜、油菜、蚕豆。

2.如权利要求1所述的太子参脱毒组培繁育方法，其中：第（6）步a中防虫处理的具体操作为搭设防虫网；移栽地200m范围内禁止种植烟草、黄瓜、油菜、蚕豆等作物。