CN106342684A - 一种玄参组培体系的建立方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种玄参组培体系的建立方法，玄参具有清热泻火，滋阴生津，热痛阴伤，湿毒生斑，津伤便秘，目亦咽痛，白喉，痛肿疮毒的作用。为此，种植玄参具有良好的发展前景，是一种很好的经济型植物。利用植物组织培养技术提高其繁殖速度和规模,从而实现玄参种苗的工厂化生产。本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤成功地获得了玄参组织培养再生植株,建立了系统的玄参组织培养植株再生体系。具有工艺方法简单，操作容易，生材快等特点。

Description

一种玄参组培体系的建立方法
技术领域
本发明玄参种植领域，尤其是一种玄参组培体系的建立方法。
背景技术
玄参为科植物，玄参Scrophularia ningpoensis Hemsl的干燥根，主产浙江，四川、陕西、贵州、湖北、湖南等省区亦产。冬季茎叶枯萎时采挖，除去茎叶、根芽、泥沙，晒或烘至半干时，剪去芦头及须根，堆放4~6天后，再晒干或烘干。药性：根呈类圆柱形，中间略粗或上粗下细，有的微弯曲，长6~20cm,直径1~3cm，表面灰黄色或灰褐色，有不规的纵沟，横向皮孔及稀疏的横裂纹和须根痕。果坚实，不易折断，断面黑色，微有光泽。气特导似焦糖，味甘而微苦。主要成份：含环稀醚萜苷类成份：哈帕苷、反-肉桂酰-哈帕苷，另含L-天冬酰胺、氨基酸、葡萄糖等。功用：清热泻火，滋阴生津。用于热病伤阴，烦渴，温毒发斑，津伤便秘，目赤，咽痛。我国科学家对于玄参的进一步研究己取得一定的成绩,但是仍然存在着优良品种引进与驯化的相关问题,对于适宜我国大部分地区环境生长的品种开发以及玄参的大量快速繁殖的报道仍然较少。玄参繁殖较为困难,其主要繁殖方式包括种子繁殖、扦插繁殖以及压条繁殖等。利用种子繁殖时,其种子存在发芽难和发芽率低的问题,大大减少了成活率及成苗率，成本较高,收益少；利用扦插和压条的方式进行繁殖时,其扦插的枝条不易生根或者较为缓慢,不容易成活,也造成了玄参成苗率低的问题。因此，急需建立一套系统的玄参组织培养植株再生体系，以提高其繁殖速度和规模,从而实现玄参种苗的工厂化生产。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种玄参组培体系的建立方法，本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤成功地获得了玄参组织培养再生植株,建立了系统的玄参组织培养植株再生体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的技术解决方案是这样的，一种玄参组培体系的建立方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤（1）外植体消毒：采集回来的茎段以淸水冲洗30min后并用毛刷轻轻刷去上面的杂质,在超净工作台中用70%乙醇溶液中消毒35s，后用无菌水洗6次，再用15%安替富民溶液漂洗15min，用无菌水冲洗8次后用无菌滤纸吸去水分后备用;
步骤（2）诱导培养：将步骤（1）消毒好的茎段按成对芽为一个单位切成约5cm长的茎段，剪去茎段底部处理过程中褐化部分，接种到诱导培养基中进行芽诱导培养,接种后先在29℃条件下全暗培养15天，然后每天光照18小时，光照强度为3500lx，培养温度为29℃的条件下培养直至形成不定芽;
步骤（3）增殖培养：将步骤（2）培养得到的芽苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在29℃条件下全暗培养6天，然后每天光照18小时，光照强度为3500lx，培养温度为29℃的条件下培养，35天继代一次;
（4）生根培养：将步骤（2）或（3）的芽苗长至5cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在29℃条件下全暗培养6天，然后每天光照18小时，光照强度为5500lx，培养温度为29℃的条件下培养至生根;
步骤（5）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由泥炭土:蛭石＝1：2混合成的基质中于每天光照16小时，光照强度为5500lx，培养温度为29℃，空气湿度为95%的培养箱中培养8天，然后移栽定植于大田中。
步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+1.5mg/L 6-BA+35g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+0.3mg/L NAA+2.5mg/L 6-BA+35g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（4）所述的生根培养基为：MS+3.5mg/L IBA+35g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
本发明的优点是：玄参具有清热泻火，滋阴生津的功用。用于热病伤阴，烦渴，温毒发斑，津伤便秘，目赤，咽痛，痈肿疮毒等。玄参具有良好的发展前景，是一种很好的经济型植物。目前玄参主要以种子繁殖、扦插、压条等方式进行种苗繁育，存在繁殖系数低、成苗率低、成本高、收益少等缺点，严重制约了玄参产业的发展。利用植物组织培养技术提高其繁殖速度和规模,从而实现玄参种苗的工厂化生产。本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤成功地获得了玄参组织培养再生植株,建立了系统的玄参组织培养植株再生体系。具有工艺方法简单，操作容易，生材快等特点。
具体实施方式
下面实施例是对本发明的进一步说明。
实施例1
（1）外植体消毒：采集回来的茎段以淸水冲洗15min后并用毛刷轻轻刷去上面的杂质,在超净工作台中用75%乙醇溶液中消毒15s，后用无菌水洗8次，再用5%安替富民溶液漂洗8min，用无菌水冲洗8次后用无菌滤纸吸去水分后备用。
（2）诱导培养：将步骤（1）消毒好的茎段按成对芽为一个单位切成约6cm长的茎段，剪去茎段底部处理过程中褐化部分，接种到诱导培养基中进行芽诱导培养。接种后先在26℃条件下全暗培养6天，然后每天光照15小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为26℃的条件下培养直至形成不定芽，诱导率为92%。所述的诱导培养基为：MS+1.0mg/L 6-BA+20g/L蔗糖+4.2g/L琼脂，pH为5.6。
（3）增殖培养：将步骤（2）培养得到的芽苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在26℃条件下全暗培养5天，然后每天光照15小时，光照强度为3200lx，置于培养温度为26℃的条件下培养，35天继代一次，增殖系数为5.9。所述的增殖培养基为：MS+0.5mg/L NAA+1.6mg/L 6-BA+25g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.6。
（4）生根培养：将步骤（2）或（3）的芽苗长至6cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照18小时，光照强度为3500lx，培养温度为26℃的条件下培养至生根。所述的生根培养基为：MS+3.0mg/LIBA+28g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.6。
（5）炼苗移栽：将长至6cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由泥炭土:蛭石＝1：2混合成的基质中于每天光照15小时，光照强度为2500lx，培养温度为26℃，空气湿度为80%的培养箱中培养8天，然后移栽定植于大田中，移栽成活率为95%。
实施例2
（1）外植体消毒：采集回来的茎段以淸水冲洗12min后并用毛刷轻轻刷去上面的杂质,在超净工作台中用75%乙醇溶液中消毒25s，后用无菌水洗8次，再用6%安替富民溶液漂洗10min，用无菌水冲洗8次后用无菌滤纸吸去水分后备用。
（2）诱导培养：将步骤（1）消毒好的茎段按成对芽为一个单位切成约8cm长的茎段，剪去茎段底部处理过程中褐化部分，接种到诱导培养基中进行芽诱导培养。接种后先在29℃条件下全暗培养6天，然后每天光照15小时，光照强度为3000lx，培养温度为29℃的条件下培养直至形成不定芽，诱导率为94%。所述的诱导培养基为：MS+1.2mg/L6-BA+25g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.9。
（3）增殖培养：将步骤（2）培养得到的芽苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在29℃条件下全暗培养6天，然后每天光照18小时，光照强度为3500lx，培养温度为29℃的条件下培养，35天继代一次，增殖系数为5.5。所述的增殖培养基为：MS+0.8mg/L NAA+1.8mg/L 6-BA+28g/L蔗糖+5.2g/L琼脂，pH为5.9。
（4）生根培养：将步骤（2）或（3）的芽苗长至8cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在29℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照18小时，光照强度为3500lx，培养温度为26℃的条件下培养至生根。所述的生根培养基为：MS+3.5mg/LIBA+25g/L蔗糖+4.8g/L琼脂，pH为5.6。
（5）炼苗移栽：将长至8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由泥炭土:蛭石＝1：2混合成的基质中于每天光照15小时，光照强度为3500lx，培养温度为26℃，空气湿度为75%的培养箱中培养8天，然后移栽定植于大田中，移栽成活率为96%。

Claims (4)

1.一种玄参组培体系的建立方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤（1）外植体消毒：采集回来的茎段以淸水冲洗30min后并用毛刷轻轻刷去上面的杂质,在超净工作台中用70%乙醇溶液中消毒35s，后用无菌水洗6次，再用15%安替富民溶液漂洗15min，用无菌水冲洗8次后用无菌滤纸吸去水分后备用;
步骤（2）诱导培养：将步骤（1）消毒好的茎段按成对芽为一个单位切成约5cm长的茎段，剪去茎段底部处理过程中褐化部分，接种到诱导培养基中进行芽诱导培养,接种后先在29℃条件下全暗培养15天，然后每天光照18小时，光照强度为3500lx，培养温度为29℃的条件下培养直至形成不定芽;
步骤（3）增殖培养：将步骤（2）培养得到的芽苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在29℃条件下全暗培养6天，然后每天光照18小时，光照强度为3500lx，培养温度为29℃的条件下培养，35天继代一次;
步骤 （4）生根培养：将步骤（2）或（3）的芽苗长至5cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在29℃条件下全暗培养6天，然后每天光照18小时，光照强度为5500lx，培养温度为29℃的条件下培养至生根;
步骤（5）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由泥炭土:蛭石＝1：2混合成的基质中于每天光照16小时，光照强度为5500lx，培养温度为29℃，空气湿度为95%的培养箱中培养8天，然后移栽定植于大田中。
2.根据权利要求1所述的一种玄参组培体系的建立方法，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+1.5mg/L 6-BA+35g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
3.根据权利要求1所述的一种玄参组培体系的建立方法，其特征在于步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+0.3mg/L NAA+2.5mg/L 6-BA+35g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
4.根据权利要求1所述的一种玄参组培体系的建立方法，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：MS+3.5mg/L IBA+35g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
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