CN104396760A

CN104396760A - 一种毛枝柳组培快繁的方法

Info

Publication number: CN104396760A
Application number: CN201410768029.4A
Authority: CN
Inventors: 孙振元; 李振坚; 季萍倩; 韩蕾; 钱永强; 刘俊祥
Original assignee: Research Institute of Forestry of Chinese Academy of Forestry
Current assignee: Research Institute of Forestry of Chinese Academy of Forestry
Priority date: 2014-12-15
Filing date: 2014-12-15
Publication date: 2015-03-11

Abstract

本发明属于植物组培领域，公开了一种毛枝柳组培快繁的方法。主要步骤包括：春季采取毛枝柳当年生茎段为外植体，依次进行1)外植体在升汞中消毒，2)转接到诱导培养基DKW+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L中培养，3)后换入增殖培养基DKW+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L中培养，4)换入生根培养基2/3DKW+IBA0.2mg/L中培养，5)炼苗移栽，得到毛枝柳组培苗。本发明提供的一种毛枝柳组培快繁方法，可以在最短时间内达到繁殖系数的最大化，有利于经济木本植物的快速育苗，缩短苗期和生长周期，达到繁殖速度快、节约生产成本并适用于规模育苗的目的。使用的植物材料极少，生长快，周期短，重复性强，可周年试验或生产。

Description

一种毛枝柳组培快繁的方法

技术领域

本发明属于属于农业生物技术领域，涉及的是一种毛枝柳的组培快繁方法。

背景技术

毛枝柳(Salix dasyclados)为灌木或小乔木，高5～8m。叶片大，呈卵圆形，属春季观芽的银芽柳类型。产自我国东北三省和西北部等省份。花序先叶开放，较大。雄花序较长，长达2.5～4cm，粗约1.8cm；花药黄色，雌花序较长，粗圆柱形，长4～5.5cm，粗1.2cm。花期4月，果期5月。冬季一年生枝条红色。

毛枝柳花序于春季展叶前开放，如同枯枝生花，是很好的春季观花树种；喜耐水湿，可作为河岸的绿化树种；枝条柔韧性好，可做编织用材。随着能源利用技术的发展，毛枝柳以其优良的表现，成为世界公认的能源树种。

毛枝柳为瑞典重要的一种发电用的能源林树种。柳树幼年生长量明显高于杨树等其它常见能源树种，适合于做超短期轮伐矮林作业系统树种，给生物质发电提供生产原材料。短的轮伐期容易保证生产原材料供应的频率，从而提高生物质发电设备的利用率。其栽植密度为每公顷1.5～2万株，轮伐期为3～5年，可达到最高产量。有研究普遍认为，柳树能源林造林，为了机械采伐的方便可采用双行栽植，株距为0.75m，行距为0.9m，双行间距为1.5m。

目前文献中尚无关于毛枝柳的组培快繁的报道。该方法为毛枝柳的快速繁殖提供了一种新的方法，为毛枝柳作为能源林和观赏柳的产业化提供了一种繁殖的新方法。

发明内容

为了改变目前毛枝柳繁殖、栽培不良的状况，本发明的目的在于加快毛枝柳的栽培和开发力度，提高毛枝柳的繁殖效率，加快毛枝柳种苗的规模化繁育，有利于毛枝柳作为能源木本植物和观赏银芽柳系列的生产和开发。本发明方法特别适用于春季生产初期采集嫩枝进行诱导丛生芽。

本发明提供一种毛枝柳组培快繁的方法，包括如下步骤：

采集毛枝柳当年生嫩茎，依次进行1)外植体消毒、2)丛生芽诱导培养、3)丛生芽增殖培养、4)丛生芽生根培养、5)炼苗移栽，得到毛枝柳组培苗。

所述采集毛枝柳当年生嫩枝，是在春天采集毛枝柳芽萌发形成的未封顶的枝条，要求枝条木质化程度低，要求每个茎段都长有1～2个腋芽。

所述1)外植体消毒，是流水冲洗嫩茎2～3h，在超净台上用75％酒精处理30～40s，无菌水漂洗3～4次，再用0.3％升汞(二氯化汞，Mercury chloride)中消毒7min，之后无菌水漂洗3～4次，并用无菌滤纸吸去多余水分。

所述2)丛生芽诱导培养：将毛枝柳当年生嫩枝去掉叶片，剪成3cm茎段，每个茎段留1～2个芽，接种在诱导培养基上，萌发新的丛生芽，培养42d后，叶片展开；

所述的诱导培养基是以DKW为基本培养基，含有1.0mg/L(终浓度，下同)的6-BA(6-苄基氨基嘌呤，benzylaminmopurine)、0.1mg/L的NAA(萘乙酸，1-Naphthaleneacetic acid)、5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基，即DKW+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂粉5g/L。

所述萌发新的丛生芽，时间为接种到丛生芽诱导培养基上18d后。

所述叶片展开，时间为接种到丛生芽诱导培养基上42d后。

所述2)丛生芽增殖继代：将丛生芽接入丛生芽增殖继代培养基上，置于温度25±1℃的培养室内，每30～40d继代转瓶一次，继代3次生成生长健壮的组培苗；

所述的丛生芽增殖继代培养基是以DKW为基本培养基，含有2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、4.5g/L的琼脂、20g/L葡萄糖的培养基，即2/3DKW+IBA0.2mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂粉5g/L。

所述3)壮苗生根：将继代后大量形成的丛生芽，转入生根培养基进行生根诱导，促进生根，38d后长成带根的幼苗；

所述长成带根的幼苗，时间为接种到生根培养基上38天后。

所述生根培养基是以2/3DKW为基本培养基，含有0.2mg/L的IBA、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基，即2/3DKW+IBA 0.2mg/L。

所述4)炼苗移栽：将带根的毛枝柳幼苗进行炼苗，移栽入基质，即培养成毛枝柳组培苗。

所述基质为草炭土：珍珠岩按体积比3∶1混合所得的基质。

所述丛生芽诱导培养基、丛生芽增殖培养基、生根培养基的pH值优选为5.80。

所述的培养，培养条件为每天光照10h～12h，温度为25℃±2℃、光照12h/d、光照强度2000～3000lx。

本发明的创新之处是公开了毛枝柳生芽诱导、增殖、生根的配方及其组培快繁的种苗规模化繁育的一种方法。目前国内外未见同类报道。

本发明有利于加快作为优良能源柳和观赏柳的毛枝柳的繁殖，加快其种苗基数，有益于后期能源柳建设和观赏柳的园林普及和生产。

附图说明

图1：本发明所述毛枝柳组培及炼苗情况

其中：a：丛生芽诱导，b：丛生芽增殖，c：毛枝柳生根，d：毛枝柳出瓶炼苗后定植的组培苗

具体实施方式

一种毛枝柳组培快繁方法，该方法包括以下步骤：(下面实施例用于对本发明的进一步说明，但不用来限制本发明的范围。)

实施例1：以本发明的方法筛选毛枝柳诱导培养基

1)选取外植体：选取当年生生长健壮无病虫害的毛枝柳枝条嫩茎为外植体，剪成3cm茎段，每个茎段留1～2个芽，用洗涤剂清洗10min，然后用用自来水冲洗3h，最后晾干材料表面水分备用；

2)嫩茎诱导培养：将处理好的毛枝柳茎段，在超净工作台上用质量浓度为75％酒精浸泡30s，再用质量浓度为0.3％升汞消毒7min，最后用无菌水冲洗3次，再将嫩茎置于无菌滤纸上吸干表面多余水分，接种在茎段诱导培养基上，将接种的外植体置于温度22±1℃、光照12h/d、光照强度1500～2000lx的培养室内，培养20d后芽萌发，待第42d叶片展开，将芽取下，转接到丛生芽增殖培养基上，置于培养室内，40d后愈伤组织上分化丛生芽(通过40d培养诱导单芽平均诱导丛生芽增殖系数达到2.6)，毛枝柳组培苗开始形成。

实施例2：以本发明的方法进行毛枝柳丛生芽增殖继代

将丛生芽接入丛生芽增殖继代培养基上，置于温度25±2℃、光照12h/d、光照强度2000～30001x的培养室内，每30～40d继代一次，继代3次生成生长健壮的组培苗(在继代第3次时其丛生芽增殖系数平均达到5.3)；

3)壮苗生根：将生长健壮的试管苗采用2/3DKW培养基进行生根培养，30d后长成带根的毛枝柳幼苗；

4)炼苗移栽：将带根的毛枝柳幼苗进行炼苗移栽，即培养成毛枝柳组培苗。

该发明方法诱导丛生芽分化达到快速增殖，进而诱导丛生芽生根，本发明可以使繁殖效率可达到9.0，生根率达到97％，炼苗成活率95％。每株毛枝柳在规模化的育苗条件下，一年能繁育几十万株苗木，大大提高毛枝柳的苗木繁育效率。

以上所述实施举例仅是本发明之优选实施方式，是对本发明的进一步说明，但不用来限制本发明的范围。同时指出，对于本专业领域的普通技术人员来说，在不脱离该发明技术原理的前提下，还可做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视作本发明的保护范围。

Claims

1.一种毛枝柳组培快繁方法，包括如下几个步骤：

采毛枝柳嫩茎为外植体，依次进行1)嫩茎消毒、2)嫩茎诱导培养、3)丛生芽增殖培养、4)丛生芽生根培养、5)炼苗移栽，组培苗出瓶上盆。

2.根据权利要求1所述毛枝柳的组培快繁方法，其特征在于：所述1)嫩茎消毒，为剪取毛枝柳植株的当年生嫩茎，流水冲洗2～3h，在超净台上用75％酒精处理30～40s，无菌水漂洗3～4次，再用0.3％升汞(二氯化汞，Mercurychloride)中消毒7min，之后无菌水漂洗3～4次，并用无菌滤纸吸去多余水分。

3.根据权利要求1所述毛枝柳组培快繁方法，其特征在于：所述2)丛生芽诱导的方法是：在无菌条件下将获得的嫩茎接种于诱导培养基上，在25±2℃，光照14～16h，pH值为5.8～6.0，光强3000lx条件下培养，接种20d后新芽开始萌发，20～30d，获得丛生芽；42d后叶片展开。

4.根据权利要求3所述的毛枝柳茎段组培快繁的方法，其特征在于，所述丛生芽诱导培养基是以DKW培养基为基本培养基，含有1.0mg/L的6-BA(6-苄基氨基嘌呤，benzylaminmopurine)、0.1mg/L的NAA(萘乙酸，1-Naphthaleneacetic acid)、5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基。

5.根据权利要求1所述毛枝柳组培快繁方法，其特征在于：所述3)丛生芽增殖培养，为将经过诱导培养萌发的丛生芽，接种到增殖培养基上进行继代培养，扩大丛生芽数量，并使丛生芽继续生长。

6.根据权利要求5所述的毛枝柳茎段组培快繁的方法，其特征在于，所述丛生芽增殖培养基是以DKW培养基为基本培养基，含有0.5mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基。

7.根据权利要求1所述毛枝柳组培快繁方法，其特征在于：所述4)丛生芽生根培养基，为将经过充分继代的无根丛生芽接种到生根培养基上，使丛生芽长出不定根，并使苗继续生长。培养10d后，基部产生白色根系、培养30d毛根明显，根系发达，形成完整植株。

8.根据权利要求7所述的毛枝柳茎段生根组培快繁的方法，其特征在于：所述丛生芽生根培养基是以2/3DKW培养基为基本培养基，含有0.2mg/L的IBA(吲哚丁酸，Indole-3-Butytric acid)、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基。

9.根据权利要求1所述毛枝柳组培快繁方法，其特征在于：所述5)炼苗移栽，为将形成完整根系的组培苗连瓶放入温室中炼苗2～4d，增加光照，后出瓶洗净放入干净基质中栽培，保持较高湿度。

10.权利要求1-9任一项所述的毛枝柳茎段组培快繁的方法在毛枝柳繁殖中的应用。