CN102497860A

CN102497860A - 病毒感染的治疗

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Publication number: CN102497860A
Application number: CN2010800404927A
Authority: CN
Inventors: 约翰·布鲁; 罗宾·马克·班尼斯特; 格里戈里·艾伦·斯托洛夫; 威尔逊·卡帕罗斯·万德莱; 奥尔加·普莱格苏埃洛斯马泰奥
Original assignee: Biocopea Ltd
Current assignee: Biocopea Ltd
Priority date: 2009-08-10
Filing date: 2010-08-10
Publication date: 2012-06-13
Also published as: JP2013501770A; RU2012108048A; SG178345A1; US20120283334A1; WO2011018653A3; EP2464345A2; IN2012DN02123A; AU2010283583A1; WO2011018653A2

Abstract

本发明提供了治疗病毒感染的组合物、药物和方法，所述病毒感染尤其是由病毒感染引起的呼吸系统疾病。特别地，本发明涉及使用一系列相关的1-苯基-2-氨基乙醇、乙醛和乙烷衍生物来治疗急性病毒感染。

Description

病毒感染的治疗

本发明涉及病毒感染的治疗，尤其是病毒感染引起的呼吸系统疾病的治疗。特别地，本发明涉及使用一系列相关的1-苯基-2-氨基乙醇、乙醛和乙烷衍生物来治疗急性病毒感染，以及这些化合物在治疗方法中的用途。本发明特别涉及流感病毒株感染引起的呼吸系统疾病的治疗，所述流感病毒株不只包括现有的病毒，还包括未来从现有病毒突变产生的能导致流感大流行的病毒衍生株。

对疾病的防御对于所有动物的生存非常关键，为此目的所采取机制是动物免疫系统。免疫系统非常复杂，包括两个主要分支，(i)先天免疫，和(ii)获得性免疫。先天免疫系统包括通过以非特异性方式保护宿主免受入侵生物感染的细胞和机制。参与先天免疫系统的白细胞尤其包括吞噬细胞，例如巨噬细胞、中性粒细胞和树突细胞。在病原体进入宿主之前先天免疫系统发挥完全的功能。

相反，获得性免疫系统仅在病原体进入宿主之后才启动，此时它产生对该病原体的特异性防御。获得性免疫系统的细胞被称为淋巴细胞，其中两种主要的类型是B细胞和T细胞。B细胞参与中和抗体的产生，其在血浆和淋巴中循环并形成体液免疫应答的一部分。T细胞在体液免疫应答和细胞介导免疫两者中都发挥作用。有几种激活或效应T细胞亚类型，包括细胞毒T细胞(CD8+)和“辅助”T细胞(CD4+)，辅助T细胞包括称为1型辅助T细胞(Th1)和2型辅助T细胞(Th2)的两种主要类型。

Th1细胞促进细胞介导的获得性免疫应答，其包括应答于抗原的巨噬细胞活化和多种细胞因子(例如IFNγ、TNF-α和IL-12)释放的刺激。这些细胞因子影响获得性和先天免疫应答中其他细胞的功能，并且使得微生物被破坏。一般来说，Th1应答对细胞内病原体(例如宿主细胞内存在的病毒和细菌)更为有效。但是Th2应答的特征在于IL-4的释放，其使得B细胞活化以产生中和抗体，这导致体液免疫。Th2应答对细胞外病原体(例如宿主细胞外的寄生生物和毒素)更为有效。因此，体液和细胞介导应答对入侵病原体提供非常不同的机制。

本发明涉及治疗多种病毒感染(包括急性病毒感染，尤其是它们引起的呼吸系统疾病)的新疗法的开发。急性病毒感染的特征是疾病发作快、症状期相对短，以及通常在几天内改善。急性病毒感染通常伴随感染性病毒粒的早期产生和宿主免疫系统对感染的消除。对急性病毒感染通常观察到病原体，如流感病毒和鼻病毒。急性病毒感染可以是严重的，有名的例子是H1N1流感病毒，其导致了1918年西班牙流感大流行。

急性感染开始于潜伏期，在此期间病毒基因组复制并且宿主先天应答启动。感染早期产生的细胞因子导致急性感染的典型症状：疼痛、痛苦、发烧和恶心。一些潜伏期短至1天(流感、鼻病毒)，表明症状由进入部位附近的局部病毒复制产生。典型急性感染的例子是无并发症流感(uncomplicated influenza)。病毒颗粒在喷嚏或咳嗽产生的微粒中被吸入，并且在呼吸道的纤毛柱状上皮细胞中开始复制。随着新感染性病毒粒的产生，它们扩散到邻近细胞。在感染后1到7天内，可以从咽喉拭子或鼻分泌物中分离病毒。感染后48小时内症状出现，这些症状持续约3天，然后消退。感染通常在约7天内通过先天和获得性应答清除。但是，由于感染期间产生的细胞因子对呼吸系统上皮的伤害，患者通常在几个星期内感觉不佳。

急性病毒感染(例如流感和麻疹)使得每年波及数百万人的疾病流行。在不能获得疫苗时，急性感染很难控制。这使得在大量人群和拥挤区域中控制急性感染极其困难。典型急性感染诺罗病毒胃肠炎的频繁爆发使这个问题愈发突出。无法使用抗病毒治疗，因为其必须在感染早期给予才有效。因此用抗病毒药物治疗大部分的急性病毒感染的希望很小，除非可获得快速诊断测试。但是应注意，目前对于大部分常见急性病毒疾病没有抗病毒剂。因此，本领域显然需要用于病毒感染(特别是急性病毒感染)治疗的改进的药物。

本发明人证实一些相关的1-苯基-2-氨基乙烷衍生物具有用于治疗这些感染所需的特性。

因此，根据本发明的第一方面，提供了式I的化合物或者其可药用盐或溶剂化物，其用于治疗急性病毒感染：

其中：

X是CO、CHOH或CH₂；

R¹是H，或与R²组合；

R²是H，OH，卤素，取代或未取代的氨基，C_1-5烷基或烷氧基，任选地被一个或更多个O、OH、氨基和/或任选地被C_1-3烷基取代的苯基取代，或与R¹组合；

R³和R⁴每个独立地为H，OH，卤素，取代或未取代的氨基，或C_1-5烷基或烷氧基，任选地被一个或更多个O、OH、氨基和/或任选地被C_1-3烷基取代的苯基取代；

R⁵是H；

R⁶是H、C_1-5烷基，或与R⁸组合；

R⁷是H，或与R⁸组合；

R⁸与R⁶或R⁷组合，或是直链、支链或环状的C₁-C₉烷基和/或C_5-6芳基，所述C₁-C₉烷基在其碳骨架中任选地包含一个或更多个杂原子，而且其任选地被一个或更多个OH取代，所述C_5-6芳基任选地被一个或更多个OH或C_1-5烷氧基或烷基取代；

当组合时，R¹和R²与相连的环碳原子一起形成任选地被O取代的5或6个碳原子或者4或5个碳原子和杂原子的环烷基、环烯基、环杂烷基或环杂烯基；

当组合时，R⁶和R⁸与带有R⁸的氮原子和带有R⁶的碳原子一起形成5或6元环杂烷基；以及，

当组合时，R⁷和R⁸与带有它们的氮原子一起形成任选地被苄基取代的5或6元环杂烷基。

在本发明的第二方面，提供了预防、治疗和/或减轻急性病毒感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的对象施用治疗有效量的上述化合物。

R²可以是羟烷基，或包括羰氧基，而且优选是H、OH、HOCH₂-、O＝CHNH-、CH₃PhCOO-、NH₂COO-或卤素，优选氯。更优选R²是H、OH或Cl。优选R³是H、NH₂、OH或CH₃PhCOO-。更优选R³是H、NH₂或OH。优选R⁴是H、OH、NH₂COO-或卤素，优选氯。更优选R⁴是H或Cl。优选R⁶是甲基、乙基或H，更优选是甲基或乙基，最优选是甲基。优选R⁷是H。优选R⁸是直链或支链的C₂-C₆烷基，其任选地被OH、苯基、PhOH或PhOCH₃取代。更优选R⁸是叔丁基、异丙基、-C(CH₃)₂OH、-CH₂PhOCH₃、-(CH₂)₂PhOH、-CH(CH₃)CH₂CH₂Ph或-CH(CH₃)CH₂CH₂PhOH，最优选是叔丁基、-C(CH₃)₂OH、-(CH₂)₂PhOH、-CH(CH₃)CH₂CH₂Ph或-CH(CH₃)CH₂CH₂PhOH。R⁸还可以是：-

当组合时，R¹和R²优选形成基团：-

当R⁶和R⁸组合时，优选它们与带有R⁸的氮原子和带有R⁶的碳原子一起形成5个碳原子和1个氮原子的环杂烷基。当R⁷和R⁸组合时，优选它们形成基团：-

在上文中，Ph是指苯基，优选地，当被双取代时，任何这样的苯基都是1，4-取代。

在一些优选的实施方案中，本发明涉及式I的化合物或者其可药用盐或溶剂化物，其中：

X是CO、CHOH或CH₂；

R¹是H；

R²是H、OH或卤素；

R³是H、OH或NH₂；

R⁴是H，或卤素；

R⁵是H；

R⁶是H、甲基或乙基，或与R⁸组合；

R⁷是H，或与R⁸组合；

R⁸与R⁶或R⁷组合，或者是叔丁基、-C(CH₃)₂OH、-(CH₂)₂PhOH、-CH(CH₃)CH₂CH₂Ph，或-CH(CH₃)CH₂CH₂PhOH；

当组合时，R⁶和R⁸与带有R⁸的氮原子和带有R⁶的碳原子一起形成5个碳原子和1个氮原子的环杂烷基，以及

当R⁷和R⁸组合时，它们形成基团：-

在本发明所有R⁶不与R⁸组合的实施方案中，优选R⁶是甲基或乙基，优选甲基。在这些优选的实施方案中，还优选R¹、R⁴、R⁵和R⁷是H，R²是H或OH，R³是OH。在这些优选的实施方案中，R⁸可以是-(CH₂)₂PhOH或-CH(CH₃)CH₂CH₂PhOH。

已知在急性病毒感染(例如流感)期间，病毒主要对抗宿主的先天免疫系统和细胞介导的Th1应答，然后对抗体液免疫中抗体引导的Th2应答。此外，本发明人认为，在易感个体中(即，年轻、强壮和健康个体)，对流感病毒感染的Th1应答可非常强烈，可以导致所谓的“细胞因子风暴(cytokine storm)”，其涉及一些细胞因子(如IFN-γ和TNF-α)浓度的显著增加。这种“细胞因子风暴”可以导致被感染肺组织的严重炎症，体液渗入肺，并且严重损伤被感染个体的肺。最终结果可以是呼吸系统疾病，例如肺水肿或继发性细菌感染，它们(而不是病毒本身)可以最终导致被感染个体死亡。

Baumgarth和Kelso(J.Virol.，1996，70，4411-4418)报道，中和Th1细胞因子IFN-γ可以使感染后肺组织内细胞浸润程度显著降低，并且认为IFN-γ可参与增加发炎的肺中白细胞迁移的调节机制。他们还推测IFN-γ影响针对流感病毒感染的呼吸道局部细胞应答以及全身体液应答。基于此研究的发现，本发明人考虑抑制细胞因子IFN-γ和TNF-α是否可用于治疗流感。

如实施例所述，本发明人研究了两种相关的1-苯基-2-氨基乙烷衍生物(即多巴酚丁胺和利托君)对血细胞的作用，所述血细胞已经被刺激以使它们反映急性病毒感染。作为病毒感染模型，他们使用已用促细胞分裂素(脂多糖或伴刀豆球蛋白A)刺激的血细胞样品，这些化合物引发信号转导通路，从而刺激血液样品中存在的淋巴细胞开始有丝分裂。因此该模型近似地模仿病毒感染所引发的过程，使得在用测试化合物多巴酚丁胺和利托君处理后，可以直接评价淋巴细胞显示的免疫应答。

如实施例1至3所述，本发明人发现，使用此体外模型，他们测试的1-苯基-2-氨基乙烷衍生物有效并强力抑制细胞因子IFN-γ和TNF-α的产生。因此，本发明基于对Th1免疫系统的控制，Th1免疫系统由IFN-γ驱动并且引起在易感个体(例如，年轻、健康个体)中导致呼吸道受损的超免疫细胞介导之应答。

这些化合物是一个活性化合物家族中的代表，该活性化合物家族具有共同的1-苯基-2-氨基乙醇、乙醛或乙烷核心结构，并且已知显示类似的生理活性。该化合物家族由式I定义，因此，由于它们均具有相同的提供活性的基序，所以它们均可以有效用于在病毒感染后的“细胞因子风暴”中防止IFN-γ和TNF-α水平升高。

此外，如实施例4所述，本发明人还证明在小鼠体内模型中，这些化合物可以用于预防、治疗或减轻病毒感染引起的呼吸系统疾病。

因此本发明人认为，他们首次证明，所定义的1-苯基-2-氨基乙醇、乙醛和乙烷衍生物除共享其他特性外还可以用于调节TNF-α和IFN-γ，从而用于治疗急性和慢性病毒感染。特别地，这些化合物可以用于治疗急性病毒感染引起的呼吸系统疾病，其在一些情况下(例如，流感感染)可以导致死亡。

化合物(I)(即，任何式I的化合物)的多种代谢物也可以用于治疗病毒感染。用于本发明的化合物(I)可以是手性的。因此，化合物(I)可以包括任何(I)所示式的非对映体和对映体。认为(I)的非对映体和对映体显示强的细胞因子调节活性，该活性可以通过使用本领域技术人员公知的适当体外和体内分析测定。还应理解本发明所用化合物还可以包括药学活性盐，如盐酸盐。

利托君和多巴酚丁胺均为1-苯基-2-氨基乙烷衍生物，并且与很多β-肾上腺素能受体激动剂(也称为β-激动剂)共享该共同的结构基序。因此，在本发明的一些实施方案中，化合物(I)可以是β-肾上腺素能受体激动剂。所述激动剂可以是β1-或β2-激动剂。可用于本发明的适当的已知β2-肾上腺素能受体激动剂的例子包括沙丁胺醇、左沙丁胺醇、特布他林、吡布特罗、丙卡特罗、二羟苯基异丙氨基乙醇(或间羟异丙肾上腺素)、非诺特罗、甲磺酸比托特罗、沙美特罗、福莫特罗、班布特罗、克仑特罗、茚达特罗、异丙肾上腺素、利米特罗、艾芬地尔、布酚宁、多巴酚丁胺(dobutamine)或利托君(ritodrine)。

在另一实施方案中，式(I)所示化合物可以是已知的商品名为安非他酮药物。已知安非他酮在体内代谢为也用式(I)表示的几种不同代谢物。因此根据本发明，安非他酮或任何这些代谢物也可以用于治疗急性病毒感染。安非他酮无立体选择性地代谢成几种对映体，但是这些化合物占原型药物(parent drug)全部代谢的相对小的部分。因此式(I)定义的化合物可以包括外消旋形式或者成对非对映体或单个对映体形式的这些代谢物，包括苏式和赤式非对映体对和单个的苏式和赤式对映体。优选式(I)所定义的化合物包括赤式对映体。

示例性安非他酮代谢物包括2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇、2-(1，1-二甲基-2-羟乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-酮、(1S，2R)-赤-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇、(1R，2S)-赤-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇、(1S，2S)-苏-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇和(1R，2R)-苏-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇。

在另一实施方案中，化合物(I)可以是氢化安非他酮(hydrobupropion)(即2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇)。氢化安非他酮一个异构体可以是(+)-苏-氢化安非他酮，即(R，R-氢化安非他酮)，另一个异构体可以是赤-氢化安非他酮，即(R，S-氢化安非他酮)。

之前已表明安非他酮潜在地用于治疗HSV1和HSV2感染，并且仅证明某些安非他酮代谢物潜在地用于治疗炎性疾病。因此，总起来说现有技术中已证明安非他酮及其代谢物2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇、(1S，2R)-赤-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇和(1R，2S)-赤-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇潜在地用于治疗慢性病毒感染，即HSV1和HSV2感染。

因此，在本发明的第三方面中，提供了以上限定的通式I所示化合物，其用于治疗病毒感染，前提是该化合物不是任何形式的安非他酮或2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇。

此外，在本发明的第四方面中，提供了预防、治疗和/或减轻病毒感染的方法，该方法包括向需要该治疗的对象施用治疗有效量的以上限定的通式I所示化合物，前提是该化合物不是任何形式的安非他酮或2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇。

优选本发明任何方面中使用的安非他酮代谢物无论是在第一和/或第二位均为R对映体。

本发明人认为式(I)的化合物可以用于治疗多种急性或慢性病毒感染及其可引起的呼吸系统疾病中的任一种。化合物(I)可用作预防性药物(预防病毒感染发生)或可用于治疗已有的病毒感染。病毒可以是任何病毒，并且可以是包膜病毒。所述病毒可以是RNA病毒或逆转录病毒。

例如，可被治疗的病毒感染可以是副粘病毒或正粘病毒感染。导致感染的病毒可以是痘病毒、虹彩病毒、披膜病毒或环状病毒(torovirus)。导致感染的病毒可以是线状病毒、沙粒病毒、布尼亚病毒或弹状病毒。设想病毒可以是嗜肝DNA病毒、冠状病毒或黄病毒。本发明涵盖任何本文所公开病毒的衍生株感染的治疗。术语“病毒衍生株”可以指从现有病毒株突变的病毒株。

所述病毒可以选自如下病毒属：甲型流感病毒；乙型流感病毒；丙型流感病毒；贫血病毒(Isavirus)和托高土病毒(Thogotovirus)或任何上述病毒的衍生株。甲型至丙型流感病毒包括在脊椎动物(包括鸟类(即禽流感)、人和其他哺乳动物)中引起流感的病毒。甲型流感病毒引起所有大流行的流感并且感染人、其他哺乳动物和鸟类。乙型流感病毒感染人和海豹类，丙型流感病毒感染人和猪。贫血病毒感染鲑鱼，托高土病毒感染脊椎动物(包括人)和无脊椎动物。

因此，化合物(I)可以用于治疗任何甲、乙或丙型流感病毒或其衍生株引起的感染。优选地，化合物(I)可用于治疗甲型流感病毒或其衍生株的感染。甲型流感病毒基于病毒表面蛋白血凝素(HA或H)和神经氨酸酶(NA或N)进行分类。已鉴定出16种H亚型(或血清型)和9种N亚型的甲型流感病毒。因此，化合物(I)可用于治疗任何选自以下血清型的甲型流感病毒血清型的感染：H1N1；H1N2；H2N2；H3N1；H3N2；H3N8；H5N1；H5N2；H5N3；H5N8；H5N9；H7N1；H7N2；H7N3；H7N4；H7N7；H9N2；和H10N7或其衍生株。本发明人认为，化合物(I)可以特别用于治疗H1N1病毒或其衍生株的病毒感染。应理解猪流感病毒是H1N1病毒的一种毒株。

本发明人发现，病毒感染后，IFN-γ和TNF-α可以导致被感染对象的体液渗入肺，造成最终可导致死亡的呼吸系统疾病。尽管不希望被假说束缚，本发明人认为化合物(I)可以用于治疗病毒感染，因为其作为细胞因子(尤其是IFN-γ和TNF-α)产生的抑制剂发挥作用，从而其可以用于治疗病毒感染引起的呼吸系统疾病。

因此化合物(I)可以用于减轻病毒诱导之细胞因子产生的炎性症状。该抗炎化合物可以对任何细胞因子发挥作用。但是优选地，其调节IFN-γ和/或TNF-α。化合物(I)可以用于治疗初次感染对象的急性病毒感染中的炎症。术语“初次感染对象

可以指先前未被病毒感染过的个体。应理解一旦个体被病毒(例如疱疹)感染，该个体将保持被感染状态。

尤其考虑的是，化合物(I)可用于治疗病毒感染的末期，例如流感的末期。式I所示化合物还可以用于治疗病毒突发(viral flare-up)。“病毒突发”可以指疾病症状复发或者更严重症状的出现。

现有技术没有公开任何安非他酮代谢物(例如2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇或2-(1，1-二甲基-2-羟乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-酮)在治疗疱疹病毒家族的任何病毒(如HSV1或HSV2)中的用途。

因此，在另一方面，本发明提供了2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇或2-(1，1-二甲基-2-羟乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-酮用于治疗由疱疹病毒引起的病毒感染。

并且，在另一方面，提供了预防、治疗和/或减轻由疱疹病毒引起的病毒感染的方法，该方法包括向需要该治疗的对象施用治疗有效量的2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇或2-(1，1-二甲基-2-羟乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-酮。

病毒感染可由选自以下的疱疹病毒引起：带状疱疹、单纯疱疹病毒1型(HSV1)、单纯疱疹病毒2型(HSV2)、唇疱疹、人和鼠巨细胞病毒、水痘带状疱疹病毒、EB病毒(Epstein barr virus)和人疱疹病毒6型和8型。疱疹病毒可以是单纯疱疹病毒，并且可以是HSV1或HSV2。

可以使用(1S，2R)-赤-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇、(1R，2S)-赤-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇、(1S，2S)-苏-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇或(1R，2R)-苏-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇来治疗由疱疹病毒引起的病毒感染。

但是，优选使用(1S，2R)-赤-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇或(1R，2S)-赤-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇来治疗由疱疹病毒引起的病毒感染。

应理解式(I)化合物可以用于在单一疗法(即仅使用化合物(I))中治疗病毒感染。或者，化合物(I)可以作为抗病毒疗法所使用的已知治疗(例如阿昔洛韦、gangcylovir、病毒唑、干扰素、逆转录酶的核苷酸或非核苷抑制剂、蛋白酶抑制剂和融合抑制剂)的辅助或者与它们联合。

式(I)的化合物可以组合在具有多种不同形式的组合物中，所述不同形式尤其取决于组合物的使用方式。因此，例如，组合物可以以粉剂、片剂、胶囊、液体、软膏、乳膏、凝胶，水凝胶、气溶胶、喷雾、胶束溶液、透皮贴片、脂质体悬浮液或任何其他可施用给需要该治疗的人或动物的合适形式。应理解根据本发明，用于药物的载剂应是所给予对象良好耐受的载剂，优选能将药剂递送过血脑屏障，或直接递送到病毒感染部位，例如肺。

包含式(I)化合物的组合物可以多种方式使用。例如，可需要口服施用，此时化合物可以包含在例如可被口服消化的片剂、胶囊或液体形式的组合物中。或者，组合物可以通过注射入血流来施用。可以静脉内(推注或输注)或皮下(推注或输注)注射。或者，包含(I)的组合物可以通过吸入施用(例如，经鼻或经口)。

组合物还可以配制成表面使用的形式。例如，软膏可以施用于皮肤、口腔或生殖器内部和周围区域来治疗特定病毒感染。皮肤表面施用尤其适用于治疗皮肤的病毒感染或者作为透皮递送到其他组织的方式。

应理解所需的化合物(I)的量通过其生物学活性和生物利用度来确定，这取决于施用方式、化合物的物理化学性质以及化合物是否作为单一疗法或在联合治疗中使用。施用频率也受上述因素影响，特别是化合物(I)在所治疗对象中的半衰期。

施用的最佳剂量可以由本领域技术人员确定，并且随所使用的具体化合物(I)、制剂强度、施用方式和疾病状态进展而不同。取决于被治疗的具体对象的其他因素(包括对象年龄、体重、性别、饮食和施用时间)使得需要调整剂量。

应理解本领域技术人员能基于肽的药代动力学计算出所需剂量以及靶组织中的最佳化合物(I)浓度。可以使用已知的方法(如制药工业传统使用的那些方法(例如体内试验、临床试验等))建立化合物(I)的特定制剂和准确的治疗方案(例如化合物的日剂量和施用频率)。

一般来说，根据所使用的化合物，可使用0.001μg/kg体重至20mg/kg体重的化合物(I)的日剂量来预防和/或治疗病毒感染。适当地，日剂量为0.01μg/kg体重至10mg/kg体重，更适当地为0.01μg/kg体重至1mg/kg体重，或0.1μg/kg体重至100μg/kg体重，并且最适当为约0.1μg/kg体重至10μg/kg体重。

化合物(I)的日剂量可以以单次施用(例如，每天单次注射或单次吸入)给予。适当的日剂量可以是0.07μg至700mg(即假设体重为70kg)，或者为0.70μg至500mg，或10mg至450mg。药物可以在病毒感染之前或之后施用。药物可以在感染后2、4、6、8、10或12小时内施用。药物可以在感染后14、16、18、20、22或24小时内施用。药物可以在感染后1、2、3、4、5或6天内或期间的任何时间段施用。

无论流感是否是大流行性流感，对象为用包含化合物(I)的药物治疗的对象，他们出现呼吸困难症状和/或出现呼吸困难症状时细胞因子水平(任何上述细胞因子，但通常为IFN-α或TNF-γ)上升。更优选地，对象是从流感症状出现后的下列时间起出现呼吸困难症状和/或细胞因子水平上升的对象：从12、24、18或36小时或以上(更优选48小时或以上、60小时或以上或72小时或以上；最优选36～96小时、48～96小时、60～96小时或72～96小时)。或者，无论流感是否是流行性流感，对象是在获得性免疫系统被募集到感染肺开始时(或早期)出现呼吸困难症状和/或细胞因子水平上升的对象。

如实施例4的小鼠体内实验所述，本发明人已证明施用超过一个剂量的细胞因子抑制剂的小鼠显示流感病毒感染症状的改善。因此，预计可以多于一次地向需要治疗的对象施用包含化合物(I)的药物。该化合物可需要每天施用两次或更多次。例如，化合物(I)可以以两个(或更多个，取决于所治疗的病毒感染严重程度)0.07μg至700mg(即，假设体重为70kg)的日剂量施用。接受治疗的患者可以在睡醒后接受第一剂量，然后在晚上(如果按照两次给药方案)接受第二剂量，或者在之后间隔3或4小时等。预计该化合物可以在病毒感染后每天(如果需要则多于一次地施用)施用。

因此，化合物(I)优选适用于对上述对象的施用，优选适用于在流感症状发生后的上述时间点施用。

或者，可以使用缓慢释放装置对患者提供最佳剂量的本发明化合物，而无需施用重复剂量。

基于本发明人的发现，本文所述化合物可以用于降低细胞因子(如TNF-α和IFN-γ)的水平，本发明人认为这些化合物的作用可以被利用，并用于制造临床有效的组合物。

因此，在第五方面，提供了包含治疗有效量的以上限定的通式I所示化合物以及可药用载剂的药物组合物，其用于治疗病毒感染。

感染可以是急性或慢性的。

式(I)所示化合物的“治疗有效量”是当施用给对象时造成细胞因子(例如TNF-α和IFN-γ)水平降低，从而预防和/或治疗急性病毒感染的任意量。

例如，所用的治疗有效量的化合物(I)可以为约0.07μg至约700mg，优选为约0.7μg至约70mg。化合物(I)的量为约7μg至约7mg，或约7μg至约700μg。

“对象”可以是脊椎动物、哺乳动物或家养动物，优选为人。因此，本发明的药物可以用于治疗任何哺乳动物，例如人、牲畜、宠物，或可以用于其他兽用应用。

本文所述“可药用载剂”是本领域技术人员已知的用于配制药物组合物的已知化合物的任何组合。

在一个实施方案中，可药用载剂可以是固体，该组合物可以是粉剂或片剂的形式。固体可药用载剂可以包括一种或更多种物质，其还可以作为调味剂、润滑剂、增溶剂、助悬剂、染料、填料、助流剂、助压剂、惰性粘合剂、甜味剂、防腐剂、染料、包衣或片剂崩解剂发挥作用。载剂还可以是包封材料。在粉剂中，载剂是精细分割的固体，其与精细分割的活性试剂(即本发明的化合物(I))混合。在片剂中，活性试剂可以以适当比例与具有必要压缩特性的载剂相混合，并压缩成期望的形状和大小。粉剂和片剂优选含有高达99％的活性剂。合适的固体载剂包括，例如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点蜡和离子交换树脂。

在另一实施方案中，药物载剂可以是凝胶，并且组合物可采用乳膏等形式。在又一实施方案中，药物载剂可以是液体，并且药物组合物可采用溶液形式。液体载剂可以用于制备溶液、悬液、乳液、糖浆、酏剂和加压组合物。活性化合物(I)可以溶于或悬浮于可药用液体载剂(例如水、有机溶剂、两者的混合物或者可药用油或脂)中。液体载剂可以含有其他适当的药物添加剂，例如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、悬浮剂、增稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂或渗透调节剂。用于口服和肠胃外施用的适当液体载剂的例子包括水(部分含有上述添加剂，例如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠溶液)、醇(包括一元醇和多元醇，如二醇)及其衍生物，以及油(例如，分馏的椰子油和花生油)。对于肠胃外施用，载剂还可以是油性酯，例如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。无菌液体载剂可用在用于肠胃外施用的无菌液体形式组合物中。用于加压组合物的液体载剂可以是卤代烃或其他可药用抛射剂。

无菌溶液或悬液形式的液体药物组合物可以通过例如肌内、鞘内、硬膜外、腹膜内、静脉内并且尤其是皮下注射施用。本发明的化合物(I)可以制备成无菌固体组合物，其可以在施用时使用无菌水、盐水或其他适当的无菌注射介质溶解或悬浮。

化合物(I)可以以无菌溶液或悬液的形式口服施用，所述无菌溶液或悬液含有其他溶质或悬浮剂(例如足够的盐水或葡萄糖以使溶液等渗)、胆酸盐、阿拉伯胶、明胶、单油酸山梨糖酐酯、多山梨醇80(与环氧乙烷共聚合的山梨醇及其酸酐的油酸酯)等。化合物(I)还可以以液体或固体组合物形式口服施用。适用于口服施用的组合物包括固体形式(例如丸剂、胶囊、颗粒剂、片剂和粉剂)以及液体形式(例如溶液、糖浆、酏剂和悬液)。用于肠胃外施用的形式包括无菌溶液、乳液和悬液。

本文(包括任何从属权利要求、摘要和附图)所述所有特征和/或本文公开的任何方法或工艺的所有步骤可以与任何上述方面以任何组合方式组合(除至少一些这些特征和/或步骤互相排斥的组合外)。

本发明的实施方案将仅以示例的方式参照以下实施例和附图进一步描述，在附图中：

图1是显示小鼠体内攻击的结果图，其中小鼠被H1N1病毒感染，然后用式I所示化合物(即多巴酚丁胺(BC1021))处理。多巴酚丁胺在第3天作为单次剂量施用，以及在第3和第4天作为两次剂量施用，测量小鼠体重的减轻。对对照小鼠未加入多巴酚丁胺；

图2是显示与图1所述相关的小鼠体内攻击实验中小鼠存活率的图。在第3天作为单次剂量以及在第3和第4天对小鼠施用多巴酚丁胺，测量小鼠存活率百分比。对对照小鼠没有加入多巴酚丁胺；

图3是显示与图1所述相关的小鼠攻击体内实验中小鼠总发病率总和(非死亡率)的图。测量作为单次剂量(在第3天)和两次剂量(在第3和第4天)施用式I所示化合物(即多巴酚丁胺(BC1021)和利托君(BC1023))对发病率(即，小鼠健康的一般性测量)的影响。A行：对照(未加入药物)；B行：BC1021，第3天单次剂量；C行：BC1021，第3和第4天两次剂量；D行：BC1023，第3天单次剂量；E行：BC1023，第3和第4天两次剂量；

图4是显示了小鼠体内攻击的结果的图，其中小鼠被H1N1病毒感染，然后用式I所示化合物(即安非他酮代谢物(BC1053)的一个实施方案2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇)处理。安非他酮代谢物在第3天作为单次剂量施用，以及在第3和第4天作为两次剂量施用，测量小鼠的体重减轻。对对照小鼠没有加入代谢物；

图5是显示与图4所述相关的小鼠体内攻击实验中小鼠存活率的图。在第3天作为单次剂量以及在第3和第4天对小鼠施用安非他酮代谢物，测量存活率百分比。对对照小鼠没有加入代谢物；和

图6显示式I所示化合物的另一实施方案的一个化学结构实施方案(即，安非他酮代谢物，本文称为BC1053)。

实施例

本发明人进行了一系列体外和体内试验，以确定多种式I所示化合物对细胞因子IFN-γ和TNF-α的产生的作用。本发明人在下文描述的结果中证明利托君、多巴酚丁胺两者以及安非他酮代谢物(2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇，本文称为BC1053)出人意料地作为IFN-γ和TNF-α的抑制剂发挥作用。此外他们证明，在小鼠体内模型中施用利托君、多巴酚丁胺和安非他酮代谢物使小鼠病毒症状减轻(即体重减轻降低、存活率增加和总死亡率降低)。

材料与方法

1)外周血单核细胞(PBMC)的分离、培养和处理

将血液收集在6ml真空管中(绿盖)。收集2小时内处理血液。使用的材料为：

未凝固血液；FCS；补充有L-Gln和P/S的RPMI-1640培养基；PBS；无菌吸头和吸管；无菌15ml Falcon管；有盖无菌V底96孔板；Neubauer板；台盼蓝溶液；70％IPA溶液；Accuspin-Histopaque管(Sigma，A7054)。步骤：

1.用无菌PBS 1∶1稀释样品；

2.向Accuspin-Histopaque管(Sigma，A7054)中加入30ml稀释后的血液；

3.在室温(RT)下以800rcf离心15分钟；

4.离心后，红细胞保留在玻璃料(frit)下方的底部。单核细胞(PBMC)存在于玻璃料上方的层中，血浆在顶部；

5.用吸管将PBMC层收集到新15ml Falcon管中，用15ml PBS加满；

6.在RT下以250rcf离心10分钟；

7.弃去上清液，轻弹沉淀，再加入10ml PBS；

8.在RT下以250rcf离心10分钟；

9.重复步骤7和8；

10.弃去上清液，用1ml完全培养基(RPMI-164010％FCS)重悬沉淀；

11.计数细胞，并用完全培养基配制4×10⁶个细胞/ml的悬液。向V底96孔板的每孔中加入100μl细胞悬液。然后加入50μl完全培养基中的刺激剂或载剂，以及50μl完全培养基中的药物或载剂。细胞在37℃5％CO₂下孵育细胞24小时；

12.孵育后，取60μl细胞上清液根据制造商说明(BD Biosciences)通过ELISA(OptEIA人IFNγ，cat No.555142和人TNF，Cat No.555212)测量IFNγ和TNFα。

2)人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞接种方案

材料：

HUVEC(ECACC 200-05n)；M199培养基(Sigma M2154)；L-谷氨酰胺溶液200mM(Sigma G7513)；青霉素/链霉素(Sigma，P0781)；庆大霉素/两性霉素B(Invitrogen，LSGS试剂盒#S003K)；人表皮生长因子(hEGF)(Invitrogen，LSGS试剂盒#S003K)；碱性成纤维细胞生长因子(bHGF)(Invitrogen，LSGS试剂盒#S003K)；肝素(Invitrogen，LSGS试剂盒#S003K)；胰蛋白酶10×溶液(Sigma T4174)；无菌PBS(SigmaD8537)；EDTA 0.02％溶液(Sigma E8008)；胎牛血清(Sigma F9665)。

HUVEC完全生长培养基：

M199培养基含有10％胎牛血清、100U/ml青霉素/0.1mg/ml链霉素、2mM L-谷氨酰胺、10μg/ml庆大霉素、0.25μg/ml两性霉素B、10ng/ml人表皮生长因子(hEGF)、3ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bHGF)和10μg/ml肝素。

步骤：

1.细胞达到80％汇合度时通过胰酶消化收获细胞。

a.去除培养基；

b.用0.02％EDTA清洗细胞单层并去除(对于T75为4ml)；

c.吸取5ml 1×胰酶的PBS溶液，轻柔振摇以保证溶液覆盖所有细胞；

d.立即去除4.5ml的胰酶；

e.重新盖上培养瓶并在显微镜下监控胰酶消化情况；

f.当细胞变圆时用手掌拍击培养瓶侧壁直到细胞脱离以释放细胞；

g.向培养瓶中加入FCS并混合(对于T75为2ml)；

h.将细胞悬液收集到15ml Falcon瓶中，用10ml无血清培养基补满；

i.以250g离心5分钟；

j.弃去上清液，轻弹沉淀并悬浮在1ml完全培养基中；

k.使用血球计数板进行细胞计数，制备2.5×10⁴个细胞/ml的所需体积的细胞悬液。

2.向平底96孔板的每孔中加入200ul细胞悬液(＝5×10³个细胞/孔)以接种。在37℃和5％CO₂下孵育板4～5天，直至达到大于80％的汇合度，可能时每隔一天更换培养基。

3)HUVEC刺激/处理方案

材料：

M199培养基(Sigma M2154)；L-谷氨酰胺溶液200mM(SigmaG7513)；青霉素/链霉素(Sigma，P0781)；庆大霉素/两性霉素B(Invitrogen，LSGS试剂盒#S003K)；人表皮生长因子(hEGF)(Invitrogen，LSGS试剂盒#S003K)；碱性成纤维细胞生长因子(bHGF)(Invitrogen，LSGS试剂盒#S003K)；肝素(Invitrogen，LSGS试剂盒#S003K)；无菌PBS(Sigma D8537)；胎牛血清(Sigma F9665)；布洛芬(Sigma I110)；乙醇(Fisher E/0600/17)；DMSO(Sigma D4540)；人天然TNF-α(NIBSC88/786)；移液器和无菌吸头；无菌universals或Falcon管；无菌1.5ml螺盖管；70％异丙醇溶液；Virkon。

HUVEC完全生长培养基：

刺激/处理：

TNF-α(100U/ml)；含TNF-α(100U/ml)的测试化合物(100、10和1μM)；单独的测试化合物(100、10和1μM)；化合物载剂对照(0.5％DMSO和0.1％乙醇)；含TNF-α(100U/ml)的布洛芬对照(1mM)；单独的布洛芬对照(1mM)；单独的完全培养基。

步骤：

1.用完全HUVEC生长培养基配制100U/ml的TNF-α；

2.制备20mM的测试化合物的DMSO新鲜储液；

3.用完全HUVEC生长培养基制备含有或不含有TNF-α的测试浓度化合物(100、10和1μM)；

4.用乙醇制备1M的布洛芬对照储液；用含有或不含有TNF-α的完全HUVEC生长培养基稀释到1mM；

5.用完全HUVEC生长培养基制备药物载剂的对照(0.5％DMSO和0.1％乙醇)；

6.从孔中去除培养基，一式三份加入150μl测试物和对照；

7.在37℃和5％CO₂下孵育板18小时。

4)血管细胞粘附分子-1(V-CAM-1)ELISA方案

所使用试剂盒：DuoSet人VCAM-1ELISA Set(R&D Systems DY809)缓冲液：

清洗缓冲液-PBS/0.05％吐温20(Sigma P9416)

测定稀释液-PBS/1％BSA(Sigma A30590

底物溶液-TMB溶液(Sigma T0440)

终止溶液-2N H₂SO₄

捕获抗体-储液360μg/ml。稀释到工作浓度2μg/ml(1∶180)

检测抗体-储液36μg/ml。稀释到工作浓度200ng/ml(1∶180)

标准品-储液70ng/ml。最高标准1000pg/ml(1∶70)

链霉素-HRP 1∶200稀释

步骤：

1.在PBS中稀释捕获抗体；

2.以100μl/孔包被板；

3.将板密封并在室温下孵育过夜；

4.清空孔并用清洗缓冲液清洗3次；吸干；

5.加入180μl/孔测定稀释液以封闭板；将板密封并在室温下孵育1小时；

6.清空孔并用清洗缓冲液清洗3次。吸干；

7.以60μl/孔加入标准品(一式两份)、样品(一式三份)和对照(一式三份)；将板密封并在室温下孵育2小时；

8.清空孔并用清洗缓冲液清洗3次；吸干；

9.以60μl/孔加入检测抗体；将板密封并在室温下孵育2小时；

10.清空孔并用清洗缓冲液清洗5次，每次清洗之间将板浸泡至少30秒，吸干；

11.以60μl/孔加入链霉素-HRP。将板密封并在室温下孵育20分钟；

12.清空孔并用清洗缓冲液清洗5次，每次清洗之间将板浸泡至少30秒，吸干；

13.以60μl/孔加入TMB底物溶液；将板密封并在室温下孵育20分钟；

14.加入30μl/孔的终止溶液；

15.于450nm读取吸光度。

5)多巴酚丁胺的小鼠体内研究

步骤：

将五十只(50)C57BL/6雌性小鼠(6-7周龄)分到4个实验组中，每组含十只(10)动物。在第1天，用海罗芬诱导麻醉下动物经鼻接受致死剂量(总共50μl，每鼻孔25μl)的流感A/PR/8/34。在第3天，动物接受一次腹膜内注射的(100-150μl)测试化合物。在第4或5天，所有仍然存活的动物接受第二次腹膜内注射(100-150μl)的测试化合物。

从第1天到至少第6天，每天评价所有动物的发病率、体重减轻和存活率。根据以下严重度标准记录发病率变量(即，身体状况、姿势、活动状态、立毛、呼吸、发声、共济失调、眼鼻分泌物)：正常(0)，轻微(1)，困难(2)和严重/拣选点(Cull-point)(3)。

6)使用安非他酮代谢物的小鼠体内研究

将被称为2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇(BC1053)的安非他酮代谢物溶10％乙醇，按以下所述经口递送给流感病毒感染的小鼠。

用致死剂量的流感病毒(A/PR/8/34)经鼻攻击两组(n＝12)隔离饲养的C57BLK/6雌性小鼠(6-8周龄，体重15-18g)。在攻击后第3天，动物接受下列处理：

●A组接受口服管饲的100μl 10％乙醇水溶液；以及

●B组接受口服管饲100μl 540μg安非他酮代谢物的10％乙醇水溶液。

在拣选所有动物后，称重动物并每天监控发病率和死亡率直到第6天。计算每组的平均体重减轻和存活。

实施例1-使用促细胞分裂素、LPS和Con A的刺激实验

当遇到与其免疫球蛋白匹配的抗原时，血浆B细胞可以进入有丝分裂状态。促细胞分裂素(mitogen)是一种化学物质，其激发促细胞分裂素活化蛋白激酶参与的信号转导通路，从而促使细胞进行细胞分裂，导致有丝分裂。因此，可以有效的使用促细胞分裂素刺激淋巴细胞，从而发挥免疫功能。通过刺激淋巴细胞，促细胞分裂素可用于模仿病毒感染的效果。

本申请人用于刺激淋巴细胞并评价免疫功能的两种促细胞分裂素为脂多糖(LPS)和伴刀豆球蛋白A(Con A)。LPS作用于B细胞但不是T细胞，而Con A作用于T细胞而不是B细胞。在LPS和Con A刺激的测定中研究了式I所示化合物的两种实施方案(即多巴酚丁胺(表格中为BC1021)和利托君(BC1023))对IFN-γ和TNF-α水平的作用。对外周血单核细胞(PMBC)单独施用每种促细胞分裂素LPS和Con A，然后用多巴酚丁胺或利托君处理。对照实验中没有加入LPS和Con A，从而对IFN-γ和TNF-α水平的任何作用可以直接归因于测试化合物多巴酚丁胺或利托君的存在。

LPS刺激研究

LPS刺激实验的结果显示在表1和2中。表格中的数值表示为单独的LPS对照的百分比数值。因此，认定PMBC细胞在仅存在LPS的条件下表达的细胞因子IFN-γ或TNF-α的最大浓度为100％，存在(i)LPS和(ii)多巴酚丁胺或利托君条件下PMBC细胞表达的细胞因子的浓度表示为单独的LPS对照的百分比数值。每个IFN-γ表达水平数值下给出标准偏差值(s.d.)。

表1-LPS刺激下IFN-γ水平的测定(相比于LPS刺激下100％未处理细胞的IFN-γ水平的百分比)

根据表1所示数据，本发明人意外的观察到在LPS刺激的细胞中，IFN-γ浓度在多巴酚丁胺或利托君的存在下降低。

表2-LPS刺激下TNF-α水平的测定(相比于LPS刺激下100％未处理细胞的TNF-α水平的百分比)

根据表2所示数据，本发明人还意外的观察到在LPS刺激的细胞中，TNF-α浓度在多巴酚丁胺或利托君的存在下也降低。对照中的负值表明细胞因子水平增加。但是，由于在处理结束时细胞因子浓度很低，该增加是很小的。

Con A刺激研究

Con A实验的结果显示在表3和4中。

表3-Con A刺激下TNF-α水平的测定(相比于Con A刺激下100％未处理细胞的TNF-α水平的百分比)

根据表3所示数据，本发明人观察到在Con A刺激的细胞中，TNF-α浓度在多巴酚丁胺或利托君的存在下也降低。

表4-Con A刺激下IFN-γ水平的测定(相比于Con A刺激下100％未处理细胞的IFN-γ水平的百分比)

根据表4所示数据，本发明人非常意外的观察到在Con A刺激的细胞中，IFN-γ浓度在多巴酚丁胺或利托君的存在下降低。特别地，本发明人观察到100μM剂量的多巴酚丁胺使IFN-γ浓度显著降低。

实施例2-Con A刺激细胞的细胞存活率百分比的测定

本发明人测量了Con A刺激细胞的细胞存活率，结果显示在表5中。

表5-Con A刺激下，相比于100％未处理细胞的细胞存活百分比

在表5中可以看出，对于所有剂量水平的利托君和多巴酚丁胺，在存在利托君或多巴酚丁胺的条件下，细胞存活百分比均高于未处理的对照。因此，本发明人证明对Con A刺激的细胞施用任一化合物相比于未处理的对照均得到更高的存活率。

实施例3-在Con A刺激下暴露于毛地黄皂苷的细胞毒性的测定

毛地黄皂苷是从紫花毛地黄(Digitalis purpurea)中获得的糖苷，可作为去垢剂，在质膜中有效的促进脂质的水溶性。因此，毛地黄皂苷可用于渗透细胞膜。因此本发明人研究了Con A刺激的细胞中毛地黄皂苷的细胞膜渗透作用，以测定利托君或多巴酚丁胺的细胞毒作用。表6显示了结果。

表6-Con A刺激下相比于毛地黄皂苷的100％细胞毒性的百分比

根据表6，在绝大部分情况下，在用利托君或多巴酚丁胺处理的样品中细胞毒性率较低。仅有的例外是100μM剂量的多巴酚丁胺，但是本发明人认为此结果统计学不显著。

实施例4-使用多巴酚丁胺的小鼠体内研究

使用上述标准技术，小鼠被H1N1病毒感染(在每个对象中均允许建立该感染)。然后用多巴酚丁胺(BC1021)处理每只测试小鼠，或在感染病毒后第3天单剂量施用，或在感染后第3天(一次)和第4天(一次)作为两次剂量施用。在对照小鼠中，没有施用多巴酚丁胺。然后测定处理和未处理小鼠的体重减轻。

如图1所示，与对照小鼠相比，接受两次剂量(病毒感染后第3和4天)的小鼠显示的体重减轻至少低10％。因此，虽然本发明人不希望被假说所限制，他们认为在H1N1感染的小鼠中，暴露于多巴酚丁胺后细胞因子IFN-γ和TNF-α水平减少使小鼠保持体重。本发明人认为对小鼠单次剂量施用多巴酚丁胺几乎没有效果，因为其半衰期短。

在图2中，显示了多巴酚丁胺处理的小鼠的存活百分比结果。从图2可以看出，与对照未处理小鼠相比，在第3天(一次)和第4天(一次)用两次剂量的多巴酚丁胺处理的小鼠显示更高的存活率。本发明人又一次推测多巴酚丁胺的的短半衰期是单剂量的该化合物对小鼠几乎没有效果的原因。

本发明人还研究了多巴酚丁胺(单次剂量和两次剂量)和利托君(单次剂量和两次剂量)对测试小鼠总发病率总和(Sum Total Morbidity)的影响。图3显示了这些试验的数据。总发病率总和的值对应一般的小鼠“健康”的置信值，并且考虑了小鼠毛的质量和理毛行为，以及小鼠是否能进食和行走。本领域技术人员已知发病率值的测量。从图3可以看出，所有剂量水平的多巴酚丁胺和利托君(无论单次或两次剂量)均造成被处理小鼠的发病率值改善，明确表明病毒症状已减轻。但是，特别值得注意的是施用两次剂量的多巴酚丁胺和利托君的小鼠(即C和E组)显示最大的改善，而E组(即，在第3天和4天施用多巴酚丁胺)最为有效。

实施例5-使用安非他酮代谢物的小鼠体内研究

如上所述，小鼠被H1N1病毒感染(在每个对象中均允许建立该感染)。然后在病毒感染后第3天对每个测试小鼠施用单次剂量的2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇(即安非他酮代谢物，BC1053)。在对照小鼠中，没有施用代谢物。然后测定处理和未处理小鼠的体重减轻。

如图4所示，与对照小鼠相比，接受安非他酮代谢物给药(在病毒感染后第3天)的小鼠显示的体重减轻低至少30％。因此，虽然本发明人不希望被假说所限制，他们认为在H1N1感染的小鼠中暴露于安非他酮代谢物后细胞因子IFN-γ和TNF-α水平减少使得使小鼠维持其体重。

在图5中，显示了安非他酮代谢物处理小鼠的存活百分比结果。从图5可以看出，与对照未处理小鼠相比，用代谢物处理小鼠显示高得多(约30％)的存活率。

总述

总之，本发明人意外地观察到多巴酚丁胺和利托君作为细胞因子(即IFN-γ和TNF-α)抑制剂发挥作用，特别是考虑到这两种药物的药代动力学较弱。因此他们认为任何式(I)所示化合物可以用作IFN-γ和TNF-α抑制剂，其可用于治疗病毒感染，例如流感。实施例4所述的小鼠体内研究的令人兴奋的结果清楚证明，感染H1N1病毒的小鼠可以通过施用单次、但是特别是两次剂量的多巴酚丁胺或利托君而被有效治疗。因此，显而易见的是任何化合物(I)均可以用于治疗病毒感染。

Claims

1.式I的化合物或者其可药用盐或溶剂化物，其用于治疗急性病毒感染，

其中：

X是CO、CHOH或CH₂；

R¹是H，或与R²组合；

R²是H，OH，卤素，取代或未取代的氨基，C_1-5烷基或烷氧基，其任选地被一个或更多个O、OH、氨基和/或任选地被C_1-3烷基取代的苯基取代，或与R¹组合；

R³和R⁴每个独立地为H，OH，卤素，取代或未取代的氨基，或C_1-5烷基或烷氧基，其任选地被一个或更多个O、OH、氨基和/或任选地被C_1-3烷基取代的苯基取代；

R⁵是H；

R⁶是H、C_1-5烷基，或与R⁸组合；

R⁷是H，或与R⁸组合；

R⁸与R⁶或R⁷组合，或是直链、支链或环状的C₁-C₉烷基和/或C_5-6芳基，所述C₁-C₉烷基在其碳骨架中任选地包含一个或更多个杂原子，其任选地被一个或更多个OH取代，所述C_5-6芳基任选地被一个或更多个OH或C_1-5烷氧基或烷基取代；

2.权利要求1的化合物，其中R²是羟烷基或羰氧基，而且优选是H、OH、HOCH₂-、O＝CHNH-、CH₃PhCOO-、NH₂COO-或卤素，任选地其中R²是H、OH或Cl。

3.前述权利要求中任一项的化合物，其中R³是H、NH₂、OH或CH₃PhCOO-。

4.前述权利要求中任一项的化合物，其中R³是H、NH₂或OH。

5.前述权利要求中任一项的化合物，其中R⁴是H、OH、NH₂COO-或卤素，任选地其中R⁴是H或Cl。

6.前述权利要求中任一项的化合物，其中R⁶是甲基、乙基或H。

7.前述权利要求中任一项的化合物，其中R⁷是H。

8.前述权利要求中任一项的化合物，其中R⁸是直链或支链的C₂-C₆烷基，其任选地被OH、苯基、PhOH或PhOCH₃取代，任选地其中R⁸是叔丁基、异丙基、-C(CH₃)₂OH、-CH₂PhOCH₃、-(CH₂)₂PhOH、-CH(CH₃)CH₂CH₂Ph或-CH(CH₃)CH₂CH₂PhOH。

9.权利要求1至7中任一项的化合物，其中R⁸是：

10.前述权利要求中任一项的化合物，其中当组合时，R¹和R²形成基团：

11.前述权利要求中任一项的化合物，其中当R⁶和R⁸组合时，其与带有R⁸的氮原子和带有R⁶的碳原子一起形成5个碳原子和1个氮原子的环杂烷基。

12.前述权利要求中任一项的化合物，其中当R⁷和R⁸组合时，其形成基团：

13.前述权利要求中任一项的化合物，其中所述化合物(I)包括(I)所示式的任何非对映体和对映体。

14.前述权利要求中任一项的化合物，其中化合物(I)是β2-肾上腺素能受体激动剂。

15.权利要求14的化合物，其中所述β2-肾上腺素能受体激动剂是沙丁胺醇、左沙丁胺醇、特布他林、吡布特罗、丙卡特罗、二羟苯基异丙氨基乙醇(或间羟异丙肾上腺素)、非诺特罗、甲磺酸比托特罗、沙美特罗、福莫特罗、班布特罗、克仑特罗、茚达特罗、异丙肾上腺素、利米特罗、艾芬地尔、布酚宁、多巴酚丁胺或利托君。

16.权利要求1至14中任一项的化合物，其中化合物(I)是安非他酮或其代谢物。

17.权利要求16的化合物，其中所述安非他酮的代谢物是2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇、2-(1，1-二甲基-2-羟乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-酮、(1S，2R)-赤-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇、(1R，2S)-赤-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇、1S，2S)-苏-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇或(1R，2R)-苏-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇。

18.前述权利要求中任一项的化合物，其中所治疗的所述病毒感染为副粘病毒或正粘病毒感染。

19.前述权利要求中任一项的化合物，其中所述化合物(I)用于治疗任何甲型流感病毒、乙型流感病毒或丙型流感病毒或其衍生株的感染。

20.权利要求19的化合物，其中化合物(I)用于治疗选自以下血清型之任何甲型流感病毒血清型的感染：H1N1；H1N2；H2N2；H3N1；H3N2；H3N8；H5N1；H5N2；H5N3；H5N8；H5N9；H7N1；H7N2；H7N3；H7N4；H7N7；H9N2和H10N7，或其衍生株。

21.权利要求20的化合物，其中化合物(I)用于治疗H1N1病毒或其衍生株的病毒感染。

22.前述权利要求中任一项的化合物，其中所述化合物(I)用于改善病毒诱导之细胞因子产生的炎性症状。

23.权利要求22的化合物，其中化合物(I)调节IFN-γ和/或TNF-α。

24.前述权利要求中任一项的化合物，其中所述化合物(I)用于治疗初次感染对象的急性病毒感染中的炎症。

25.前述权利要求中任一项的化合物，其中所述化合物(I)用于治疗病毒突发。

26.预防、治疗和/或减轻急性病毒感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的对象施用治疗有效量的权利要求1至25中任一项所限定的化合物。

27.权利要求1至25中任一项所限定的通式I所示化合物，其用于治疗病毒感染，前提是所述化合物不是任何形式的安非他酮或2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇。

28.预防、治疗和/或减轻病毒感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的对象施用治疗有效量的权利要求1至24中任一项所限定的通式I所示化合物，前提是所述化合物不是任何形式的安非他酮或2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇。

29.用于治疗病毒感染的药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1至24中任一项所限定的通式I所示化合物以及可药用载剂。

30.2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇或2-(1，1-二甲基-2-羟乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-酮，其用于治疗由疱疹病毒引起的病毒感染。

31.权利要求30的2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇或2-(1，1-二甲基-2-羟乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-酮，其中所述疱疹病毒选自带状疱疹、单纯疱疹病毒1型(HSV1)、单纯疱疹病毒2型(HSV2)、唇疱疹、人和鼠巨细胞病毒、水痘带状疱疹病毒、EB病毒和人疱疹病毒6型和8型。

32.权利要求31或32的2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇或2-(1，1-二甲基-2-羟乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-酮，其中所述疱疹病毒是单纯疱疹病毒，例如HSV1或HSV2。

33.权利要求30至33中任一项的2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇或2-(1，1-二甲基-2-羟乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-酮，其中使用(1S，2R)-赤-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇或(1R，2S)-赤-2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇来治疗由疱疹病毒引起的病毒感染。

34.预防、治疗和/或减轻由疱疹病毒引起的病毒感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的对象施用治疗有效量的2-(1，1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-醇或2-(1，1-二甲基-2-羟乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙-1-酮。